TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC & MÔI TRƯỜNG ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC MỘT SỐ CÁCH LẤY MẪU MỚI VÀ ẢNH HƯỞNG CỦA CHÚNG LÊN SỰ TÁI SINH CỦA MỘT SỐ LOÀI CÂY CÓ GIÁ TRỊ KINH TẾ Giáo viên hướng dẫn: TS. DƯƠNG TẤN NHỰT CN. NGUYỄN BÁ NAM Sinh viên thực hiện: HOÀNG VĂN THƯỞNG Lớp : 47 CNSH NHA TRANG, 2009 Click to buy NOW! P D F - X C h a n g e V i e w e r w w w . d o c u - t r a c k . c o m Click to buy NOW! P D F - X C h a n g e V i e w e r w w w . d o c u - t r a c k . c o m ðồ án tốt nghiệp Hoàng Văn Thưởng Lớp 47 Công Nghệ Sinh Học – ðai học Nha Trang 1 1 Phần 1 Tổng quan tài liệu Click to buy NOW! P D F - X C h a n g e V i e w e r w w w . d o c u - t r a c k . c o m Click to buy NOW! P D F - X C h a n g e V i e w e r w w w . d o c u - t r a c k . c o m ðồ án tốt nghiệp Hoàng Văn Thưởng Lớp 47 Công Nghệ Sinh Học – ðai học Nha Trang 2 2 1.1. Tái sinh cơ quan 1.1.1. Sự tái sinh bất ñịnh Những cơ quan như chồi hay rễ có thể ñược hình thành từ bất cứ loại mô nào của cây, những cơ quan ñược khởi tạo như vậy ñược gọi là cơ quan bất ñịnh. Quá trình tái sinh các cơ quan bất ñịnh gọi là sự phát sinh cơ quan bất ñịnh. Ở ñây, chồi hay rễ có thể hình thành từ một tế bào ñơn, hay một nhóm tế bào. Các tế bào này ñược kích thích bởi ñiều kiện môi trường ñể trở thành trung tâm của sự phân chia tích cực các tế bào (mô phân sinh bất ñịnh). Sự tái sinh ñã ñược nghiên cứu in vitro trên số lượng lớn cây trồng của nhiều loài khác nhau, nhưng không phải khả năng tái sinh của cây nào cũng như nhau. Thậm chí trong cùng một giống cây trồng vẫn có sự khác nhau, ñó có thể là do tính ñáp ứng in vitro kém (recalcitrant) hay không có khả năng tái tạo cơ quan từ mẫu cấy ban ñầu. Hơn nữa, ở một số loài khả năng tái sinh có thể bị mất sau quá trình chuyển gene. Khả năng tái sinh của tế bào thông qua các biến ñổi phát sinh hình thái là kết quả của sự phản phân hóa ñể trở nên tiềm năng trước các hướng kích thích khác nhau. Theo sau quá trình này là sự hình thành các chương trình phát triển của tế bào và cuối cùng là sự phát triển thành cơ quan bất ñịnh (Nhựt và cộng sự, 2003). Người ta vẫn còn chưa biết rõ tại sao một số cây trải qua quá trình phát sinh cơ quan và một số khác lại không. Một số giả thuyết ñược ñề nghị bởi Christianson và Warnick (1984) giải thích một chuỗi các quá trình của sự phát sinh cơ quan theo thời gian. Click to buy NOW! P D F - X C h a n g e V i e w e r w w w . d o c u - t r a c k . c o m Click to buy NOW! P D F - X C h a n g e V i e w e r w w w . d o c u - t r a c k . c o m ðồ án tốt nghiệp Hoàng Văn Thưởng Lớp 47 Công Nghệ Sinh Học – ðai học Nha Trang 3 3 Hình 1. Giả thuyết về các giai ñoạn phát sinh cơ quan bất ñịnh. Theo ñó thì sự phát sinh cơ quan phải trải qua hai giai ñoạn cơ bản sau: • Giai ñoạn một: ñể cho các mô hình thành cơ quan, tế bào của mô ñó phải có tiềm năng bao gồm khả năng cảm ứng ñược với môi trường và có những phản ứng biến ñổi trong bản thân nó. • Giai ñoạn hai: là quá trình xác ñịnh hướng phát triển của tế bào tiềm năng ñể sau ñó tế bào bước vào giai ñoạn biệt hóa. Các giai ñoạn này ñều cần ñến sự tác ñộng của hormone. Chỉ có khi bước vào giai ñoạn biệt hóa thì tế bào không cần ñến tác ñộng của hormone nữa. 1.1.1.1. Tính khả biến Tế bào thực vật nào cũng mang tính toàn năng nghĩa là khả năng trẻ hóa và hình thành một cây hoàn chỉnh từ một tế bào thông qua quá trình nuôi cấy in vitro. Tuy nhiên, khả năng phản phân hóa (bao gồm sự trẻ hóa và tái xác ñịnh con ñường phát triển mới của mô) không phải lúc nào cũng như nhau trên mọi tế bào. Có những tế bào dường như không thể tái tạo cơ quan, chúng ñược cho rằng ñã mất khả năng tái sinh. Nếu tế bào thuộc mô cấy nào chưa sẵn sàng cho quá trình cảm ứng ngay tại thời ñiểm cắt mẫu thì chúng cũng có thể vẫn không cảm ứng suốt quá trình nuôi cấy in vitro. ðây gọi là tính khó ñáp ứng in vitro. Trái lại, có những tế bào tỏ ra thích ứng với sự phân chia và duy trì ñược khả năng phát sinh hình thái trước các kích thích tố thích hợp. Khả năng này ñược gọi là tiềm năng tế bào, chúng chỉ ra rằng mỗi tế bào có tất cả các thông tin cần thiết ñể tái sinh Tế bào có tiềm năng thích ứng G iai ñoạn khởi ñầu Giai ñoạn cảm ứng Giai ñoạn xác ñịnh Giai ñoạn phản phân hóa Hormone Hormone K hông cần hormone tác ñộng Click to buy NOW! P D F - X C h a n g e V i e w e r w w w . d o c u - t r a c k . c o m Click to buy NOW! P D F - X C h a n g e V i e w e r w w w . d o c u - t r a c k . c o m ðồ án tốt nghiệp Hoàng Văn Thưởng Lớp 47 Công Nghệ Sinh Học – ðai học Nha Trang 4 4 thành một cây mới. Giai ñoạn các tế bào tiềm năng tiếp xúc với môi trường nuôi cấy ñược gọi là giai ñoạn cảm ứng của tế bào. Có rất nhiều giả thuyết ñã ñược các nhà khoa học ñề cập liên quan ñến chức năng của mô phân sinh trong quá trình cảm ứng của tế bào. Nhiều người cho rằng chỉ các mô trong vùng phân sinh mới chứa các tế bào tiềm năng. Trong khi một giả thuyết khác ñược ñặt ra bởi Street (1977) thì cho rằng mặc dù tế bào nào cũng có tính tiềm năng nhưng các tế bào mới ñược tạo ra ở mô phân sinh lại có ưu thế hơn các tế bào xung quanh khi bước vào các cơ chế phân chia. Thêm một nhận ñịnh khác của Cassells (1979) cho rằng các mô phân sinh mới thường bị ức chế phát triển bởi một loại chất tiết ra từ các mô phân sinh ñã tạo trước nó. Vậy rõ ràng các tế bào cấu thành nên các mô phân sinh có tiềm năng cảm ứng cao hơn các loại tế bào khác bởi vì chúng ñã ñược kích thích chuyển sang giai ñoạn biệt hoá mức ñộ thấp trước khi ñi vào con ñường biệt hoá. 1.1.1.2. Tính xác ñịnh Các tế bào tiềm năng dưới tác ñộng tích cực của hormone, bắt ñầu ñược lập trình theo các hướng xác ñịnh ñể trở thành các tế bào chuyên hóa. Tuy nhiên, có một số tế bào ñã ñược tiền xác ñịnh phát sinh kiểu hình thái cho nên chúng chỉ cần những kích thích nhỏ trong môi trường ñể hình thành các mô phân sinh thay vì trải qua quá trình phân hoá tế bào. Hướng phát triển ñịnh trước của tế bào tiềm năng cũng như tế bào mới ñược sinh ra ñều có thể biến ñổi và phát sinh theo mục ñích nuôi cấy, ví dụ các tế bào trong vùng mô phân sinh rễ có thể biến ñổi khi thêm cytokinin ñể thành mô phân sinh chồi. Tuy nhiên, khi tế bào ñã có tính xác ñịnh thì chúng bước vào con ñường ñã ñược lập trình của hệ gene và khi ñó chúng ta không thể ñảo ngược tiến trình này nữa. Có thể nói, tính tiềm năng cũng như tính xác ñịnh của tế bào trong các môi trường in vitro ñặc biệt chịu ảnh hưởng bởi chất ñiều hòa sinh trưởng thực vật ngoại sinh (loại và nồng ñộ), và cả lượng chất ñiều hòa sinh trưởng nội sinh có trong mẫu. 1.1.2. Các hình thức tái sinh 1.1.2.1. Tái sinh trực tiếp Click to buy NOW! P D F - X C h a n g e V i e w e r w w w . d o c u - t r a c k . c o m Click to buy NOW! P D F - X C h a n g e V i e w e r w w w . d o c u - t r a c k . c o m ðồ án tốt nghiệp Hoàng Văn Thưởng Lớp 47 Công Nghệ Sinh Học – ðai học Nha Trang 5 5 Mô phân sinh chồi hình thành trực tiếp từ mẫu cấy thường ñược khởi tạo bằng sự phân bào sơ cấp sau 48 giờ nuôi cấy. Kế tiếp mỗi quá trình phân bào sơ cấp là một quá trình phân bào dài và phức tạp hơn, kết quả hình thành nên các mầm chồi bất ñịnh, mỗi mầm chồi bao gồm nhiều tế bào. Sự hình thành trực tiếp này thường bắt nguồn từ một hay một nhóm các tế bào sinh dưỡng chưa phân hoá. Broertjes và cộng sự (1976), cho rằng trong suốt quá trình phát sinh cơ quan trực tiếp, các mầm chồi bất ñịnh không phải lúc nào cũng ñược hình thành từ nhiều tế bào của mô. Một tế bào biểu bì ñôi khi lại khởi ñiểm cho quá trình phát triển của vùng phân sinh trung tâm là nguồn gốc của 1 cho tới 22 chồi giống nhau. Các nghiên cứu khác trên một số cây trồng khác cũng khẳng ñịnh giả thuyết vùng mô phân sinh có nguồn gốc từ một tế bào. Bảng 1. Các cây trồng phát sinh chồi bất ñịnh từ một tế bào biểu bì Loài Tham khảo Achimenes Broertjes (1972) Begonia Mikkelsen và Sink (1978) Chrysanthemum Roest (1977) Kalanchoe Broertjes và Leffring (1972) Lilium Broertjes và cộng sự (1976) Sự phát sinh chồi bất ñịnh trực tiếp thường bắt ñầu từ các tế bào nhu mô nằm ở trong biểu bì (Broertjes và Van Harte, 1978). Từ một nghiên cứu tái sinh chồi từ thể khảm của lá cây Saintpaulia. Norris và Smith (1981) kết luận rằng sự khởi tạo vùng mô phân sinh trên ñỉnh liên quan tới sự kết hợp của các tế bào dưới lớp biểu bì. Chồi trên môi trường nuôi cấy lá Nicotiana tabacum phát sinh trực tiếp từ các tế bào mô giậu thịt lá quanh rìa lá (Attfield và Evans, 1991). Thể khảm cũng thấy ở nhiều ñối tượng cây trồng tái sinh khác (Broertjes và Van Harte, 1978) càng chứng tỏ nguồn gốc ña bào của sự phát sinh chồi. Click to buy NOW! P D F - X C h a n g e V i e w e r w w w . d o c u - t r a c k . c o m Click to buy NOW! P D F - X C h a n g e V i e w e r w w w . d o c u - t r a c k . c o m ðồ án tốt nghiệp Hoàng Văn Thưởng Lớp 47 Công Nghệ Sinh Học – ðai học Nha Trang 6 6 Attfield và Evans (1991) trong các nghiên cứu từ lá cây Nicotiana tabacum thấy rằng rễ bất ñịnh hình thành trực tiếp từ ba bó mạch và các mạch của nhu mô. Sự hình thành rễ bất ñịnh này tương tự như sự khởi tạo rễ có nguồn gốc ña bào từ các mẫu cấy chồi cây Pisum sativum, rễ ñược phát sinh từ các tế bào nhu mô và các mô mạch ñã có trước ñó (Gahan và Doré, 1984). Có những biểu hiện tác ñộng trực tiếp từ trên những tế bào xuất phát từ mô mạch và có thể là IAA hay chất ñiều hòa sinh trưởng thực vật khác ñã khuếch tán vào các tế bào và khởi ñộng cho quá trình phân bố mạch và tạo rễ. 1.1.2.2. Tái sinh gián tiếp Sự hình thành các khối mô sẹo từ mẫu cấy ban ñầu sau khoảng thời gian nuôi cấy nhất ñịnh ñể hình thành các chồi bất ñịnh. Các chồi này phát triển từ ngoại vi mô sẹo và không có quan hệ ban ñầu với các mô có mạch dẫn của mẫu cấy. Sự hình thành cơ quan như thế ñược gọi là quá trình tái sinh gián tiếp. Sự phát sinh gián tiếp các cơ quan bất ñịnh cũng tương tự như sự phát sinh trực tiếp, bắt ñầu bằng sự phân chia nhanh các tế bào ñể dẫn tới sự hình thành vùng phân sinh. Tiếp theo là sự xuất hiện các mầm chồi và cuối cùng là chồi (Torrey, 1966). Vì vậy, rất khó phân biệt hai hình thức phát sinh cơ quan này. Thường ñể sự phát sinh cơ quan gián tiếp xảy ra, các mô sẹo hình thành từ mẫu cấy phải ñược cấy chuyền sang môi trường chứa chất ñiều hòa sinh trưởng thực vật thích hợp cho quá trình biệt hóa mô sẹo. ðối với mục ñích nhân giống in vitro, nếu cây tái sinh trực tiếp từ mẫu cấy ban ñầu thì không những nhanh chóng thu ñược cây, mà các cây này cũng khá ñồng nhất về mặt di truyền. Tế bào mô sẹo sau khi cấy chuyền nhiều lần sẽ không ổn ñịnh về mặt di truyền. ðể tránh tình trạng ñó nhất thiết phải sử dụng loại mô sẹo vừa phát sinh, tức là mô sẹo sơ cấp ñể tái sinh cây thì hy vọng sẽ thu ñược cây tái sinh ñồng nhất. 1.1.3. Vết thương Quá trình tạo vết thương bằng các tác ñộng cơ học vào mẫu cấy như cắt, tỉa thường kích thích sự tái sinh. Tất cả các mẫu cấy khi ñược nuôi cấy in vitro ñều phải qua quá trình xử lý với kéo, dao cấy hoặc các dụng cụ khác vì thế mẫu luôn bị tổn thương. Mẫu cấy càng nhỏ thì tỷ lệ bề mặt vết cắt càng lớn. Trong nhiều Click to buy NOW! P D F - X C h a n g e V i e w e r w w w . d o c u - t r a c k . c o m Click to buy NOW! P D F - X C h a n g e V i e w e r w w w . d o c u - t r a c k . c o m ðồ án tốt nghiệp Hoàng Văn Thưởng Lớp 47 Công Nghệ Sinh Học – ðai học Nha Trang 7 7 trường hợp, vết thương có thể tiết ra các chất cản trở sự phát triển của mẫu cấy nhưng cũng có khi nó giải phóng ethylene, loại hormone này thường kích thích sự hình thành mô sẹo hay các cơ quan bất ñịnh (chồi hoặc rễ). 1.1.3.1. Vết thương tạo thành khi xử lý mẫu Sự tái sinh thường diễn ra ở bề mặt của vết cắt do ñó việc tạo vết thương cho mẫu cấy sẽ kích thích quá trình tái sinh diễn ra nhanh và ñạt hiệu quả hơn. Lá mầm của cây Pyrus malus ñược cắt ñôi, tạo ra nhiều chồi bất ñịnh từ các mô sẹo có kích thước nhỏ ở gần vết cắt (Browning và cộng sự, 1987). Mặc dù rìa vết cắt của lá cây Ipomoea batatas không hình thành những khối mô sẹo tiền phôi, nhưng quá trình tạo phôi lại diễn ra ngay trên vết cắt thân và những mẫu cấy lá cắt nhỏ (Liu và Cantcliffe, 1984). Cắt nhỏ lá non cây Malus thành 14 mảnh sẽ kích thích khả năng mô lá hình thành các chồi bất ñịnh và các cấu trúc tiền phôi (Welander, 1988). Nếu nuôi cấy nguyên vẹn thể phôi của giống táo ‘Delicious’ và giống ‘Winesap’ thì chỉ hình thành mô sẹo lần lượt là với các tỷ lệ là 100% và 55%, nhưng khi cắt thành 3 phần bằng nhau thì tỷ lệ tạo chồi bất ñịnh của các ñoạn cắt lá mầm và chồi mầm khá cao. Tỷ lệ tạo chồi từ các mẫu cấy rễ mầm của ‘Delicious’ và ‘Winesap’ lần lượt là 0% và 11%. Korban và Skirvin (1985) cho rằng các tác ñộng trong quá trình phân chia mẫu cấy phôi làm loại bỏ tác nhân tái sinh ñã từng tồn tại trước ñó ở vùng rễ mầm hoặc tăng hoạt tính của một số chất ức chế ở vùng này. Trong một số trường hợp, mẫu cấy không cảm ứng ñược kích thích của các chất ñiều hòa sinh trưởng thực vật nếu chúng không ñược tạo vết thương, ñiển hình như mầm chồi của cây xương rồng Opuntia polycantha, nó không phản ứng với auxin hay cytokinin trong môi trường nếu như không bị tổn thương. Các mẫu cấy này sau ñó hình thành rễ bất ñịnh trên môi trường có 10 mg/l NAA và chồi bất ñịnh trên môi trường có 10 mg/l IBA (Mauseth và Halperin, 1975). 1.1.3.2. Vết thương phụ Ngoài những vết thương bắt buộc phải có khi tách mẫu ra khỏi cây ban ñầu ñem vào nuôi cấy, những vết thương tạo thêm nhằm làm tăng diện tích tiếp xúc của mẫu cấy và khả năng tái sinh mẫu ñược gọi là vết thương phụ. Click to buy NOW! P D F - X C h a n g e V i e w e r w w w . d o c u - t r a c k . c o m Click to buy NOW! P D F - X C h a n g e V i e w e r w w w . d o c u - t r a c k . c o m ðồ án tốt nghiệp Hoàng Văn Thưởng Lớp 47 Công Nghệ Sinh Học – ðai học Nha Trang 8 8 Sự tái sinh thường xảy ra ngay tại ñiểm tạo vết thương. Park và Son (1988) cho rằng sự tái sinh các cơ quan bất ñịnh chỉ xảy ra ở vùng ngoại vi hay rìa vết thương của các lá cây Populus nigra và P. maximowiczii. Tuy nhiên, khi các mẫu lá bị ñâm thủng trên bề mặt (khoảng 5 lỗ) thì sự tái sinh có thể quan sát ñược ngay trên cả mép các vết thương mới tạo. Các nhà khoa học cho rằng sự làm tổn thương mẫu cấy ñã kích thích sự di chuyển của hormone nội sinh tới vết thương, hoặc làm hàm lượng hormone ở chính các vị trí ñó dồi dào hơn hoặc tiết bớt một phần hormone ra môi trường nuôi cấy, tạo nên tỷ lệ cân bằng chất ñiều hòa sinh trưởng thực vật trong mẫu cấy do ñó làm thúc ñẩy quá trình tái sinh. Giả thuyết này trùng hợp với kết quả mà Norizaku và cộng sự (1985) ñã nghiên cứu trên Torenia fournieri, sự hấp thụ của BA qua các vết thương của mẫu cấy không hề tăng nhưng lượng chồi bất ñịnh hình thành lại tăng ñáng kể. 1.1.4. Tác ñộng của kiểu di truyền tới sự tái sinh cơ quan Sự phát triển của các mô hay cơ quan trong nuôi cấy và sự tái sinh in vitro bị tác ñộng rất nhiều bởi kiểu di truyền. Có nhiều kết quả thu ñược trong quá trình nuôi cấy mô chứng tỏ sự tái sinh khác nhau giữa các giống cùng loài. Các gene trong nhân ñược coi là liên quan trực tiếp tới quá trình tái sinh thể hiện ở khả năng tương tác của chúng (Keyes và Bingham, 1974), trạng thái lặn (Frankenberger và cộng sự, 1981) miên trạng, miên trạng một phần (Reisch và Bingham, 1980) hay tính cộng hợp (Buiatti và cộng sự, 1974). Nhiều công bố cho rằng có sự tương tác giữa kiểu gene của cây trồng và môi trường nuôi cấy. Thứ A có thể trải qua sự tái sinh và cảm ứng với môi trường chứa loại chất ñiều hòa nào ñó trong khi thứ B thì không có biểu hiện nào trong môi trường nuôi cấy cho ñến khi cấy chuyền nó sang môi trường chứa chất ñiều hòa khác. Nhiều biến ñổi hình thái của cây trồng chỉ phát sinh trong những ñiều kiện môi trường ñặc hiệu. Chính vì tính ñặc trưng của hệ gene mà môi trường nuôi cấy thường khác nhau từ các chi hay loài thậm chí các thứ trong cùng một họ. Không có môi trường nào chuyên biệt cho cây trồng nào mà phải qua hàng loạt các nghiên cứu thử nghiệm ñể xác ñịnh môi trường tốt nhất cho cây trồng ñó. Nếu như sự tương tác giữa môi trường – kiểu gene là tính ñặc hiệu duy nhất của hệ gene, thì chúng ta có thể nuôi cấy tất cả các cây trong cùng khu sản xuất, có ñặc ñiểm y như nhau với kết quả thu ñược là như nhau. Tuy nhiên, sự biểu Click to buy NOW! P D F - X C h a n g e V i e w e r w w w . d o c u - t r a c k . c o m Click to buy NOW! P D F - X C h a n g e V i e w e r w w w . d o c u - t r a c k . c o m ðồ án tốt nghiệp Hoàng Văn Thưởng Lớp 47 Công Nghệ Sinh Học – ðai học Nha Trang 9 9 hiện khác nhau của cây trồng thông qua quá trình nuôi cấy in vitro như sự hình thành và phát triển của mô sẹo, sự tái sinh cơ quan ñều chịu sự ñiều khiển của hệ gene, kèm theo những tác nhân thứ yếu khác ngoài môi trường nuôi cấy. Ví dụ như ở cây Medicago, các cây mới thu ñược từ nuôi cấy phôi soma nhiều hơn là từ quá trình tái sinh chồi, bất kể thành phần của môi trường nuôi cấy (Brown và Atanassov, 1985). Tương tự ở cây Lúa mì, chỉ có một số giống cho kết quả khi nuôi cấy trên các môi trường khác nhau trong khi thu ñược kết quả không ñáng kể khi nuôi cấy các giống khác trên môi trường tương tự (Lazar và cộng sự, 1983). 1.1.2. Các ảnh hưởng tới sự tái sinh cơ quan 1.1.2.1. Tuổi của mẫu cấy Nhìn chung, các mẫu cấy lấy từ các cơ quan mới ñược hình thành (mẫu cấy non) có khả năng phát triển và phát sinh cơ quan in vitro tốt hơn mẫu cấy già. Trong các thí nghiệm của Takayama và Misawa (1982), hầu hết các mẫu cấy có nguồn gốc từ các cây trưởng thành ñều chết. Pierick (1969) nhận ra rằng khuynh hướng tạo rễ của mẫu cấy thân cây Rhododendron giảm với tuổi của chồi, cảm ứng rễ qua cấy chuyền và quá trình tạo rễ là chắc chắn với các mẫu cấy thân non. Tuy nhiên, các mô non không phải lúc nào cũng tái sinh cao. Mô sẹo hình thành trên tất cả các dạng mẫu cấy từ cây trưởng thành Parthenium hysterophorus hơn là các hạt và các lá mầm (Wickham và cộng sự, 1980). Tương tự, sự hình thành và phát triển của mô sẹo diễn ra nhanh trên các mẫu cấy của Solanum laciniatum trưởng thành khi lá của nó ñã mở rộng hoàn toàn. 1.2.2. 2. Loại mẫu cấy Chọn ñúng mẫu cấy là công ñoạn rất quan trọng khi nhân giống dựa trên nền tảng tái sinh cơ quan (trực tiếp hay gián tiếp). Trong vài trường hợp, ñể sử dụng tái sinh ñạt ñược hiệu quả cao, phải tiến hành chọn loại mẫu cấy có khả năng tái sinh cao nhất, như ở Brassica carinata, 86% mẫu cấy lá mầm tạo chồi, 74% mẫu từ thân mầm tạo chồi, và chỉ có 26% tạo ở rễ (Jaiswal và cộng sự, 1987). Rõ ràng mẫu cấy lá thích hợp nhất cho sự tái sinh chồi bất ñịnh. 1.2.2.3. Kích thước và vị trí mẫu cấy Click to buy NOW! P D F - X C h a n g e V i e w e r w w w . d o c u - t r a c k . c o m Click to buy NOW! P D F - X C h a n g e V i e w e r w w w . d o c u - t r a c k . c o m [...]... …) ñ n s tái sinh mà chưa ñi sâu vào nghiên c u t i v trí, kích c và phương pháp l y m u có như th nào t i s tái sinh c a m u c y Chúng tôi ti n hành ñ tài này nh m tìm ra kích thư c, v trí và phương pháp l y m u t t nh t cho quá trình tái sinh in vitro c a m t s loài cây có giá tr kinh t như: cây Torenia, Thu H i ðư ng và cây Sâm Ng c Linh Qua ñó chúng tôi mong mu n tìm ñư c v trí, kích c và phương... t nh t nh hư ng lên kh năng tái sinh t các b ph n c a cây, t o ñư c m t quy trình nhân gi ng v i s lư ng l n cây con trong th i gian ng n góp ph n nâng cao hi u qu kinh t cho ngành tr ng tr t c a nư c nhà Ngoài ra chúng tôi còn th c hi n thí nghi m so sánh kh năng tái sinh m u in vitro và ex vitro c a cây sâm Ng c Linh nh m tìm ra phương pháp tái sinh t i ưu cho loài cây có giá tr kinh t này Hoàng... 3.1.1.3 Giá tr kinh t c a cây hoa Thu H i ðư ng R t nhi u loài Thu H i ðư ng ñư c tr ng làm c nh vì có lá và hoa r t ñ p v i nhi u màu s c s c s như: ñ , tr ng, vàng, cam, h ng… nư c ta có 45 loài cây m c t nhiên và nh p n i ñư c phân b c ba mi n Ngoài ra, loài hoa này còn là ngu n th c ph m và dư c ph m: trong loài cây này có hàm lư ng fructose cao nên ñư c s d ng như ngu n gia v Philippines và Brazil... liên k t này có th chi m trên 90% lư ng auxin có trong cây IAA có th liên k t v i r t nhi u các h p ch t khác nhau nên chúng không có ho t tính sinh h c ho c có ho t tính sinh h c r t th p Tuy nhiên, ch c năng c a auxin liên k t trong cây h t s c quan tr ng Chúng là ngu n d tr auxin trong cây và cũng là d ng auxin v n chuy n ch y u trong cây Vì v y, s bi n ñ i thu n ngh ch c a IAA t do và IAA liên k... kh i b ng k thu t nuôi c y l c và bình nuôi c y ð ñ t ñư c m c ñích tái sinh ch i m t cách hi u qu , m u c y ñư c c t t lá non có ñư ng kính 3 – 4 cm và c t thành t ng m u có kích thư c 7 x 7 mm và sau ñó c y vào môi trư ng MS có b sung 1 mg/l NAA, 3 mg/l BA, 30 g/l sucrose và 8 g/l agar Có kho ng 150 – 200 ch i trên m t m u cây sau 30 ngày nuôi c y nhưng kích thư c c a chúng tương ñ i nh vì v y ngư... trư ng MS có b sung 0,1 mg/l NAA và 1 mg/l BA Có th nhân nhanh ch i m t cách hi u qu b ng phương pháp nuôi c y l c trên môi trư ng t o ch i có b sung 0,1 mg/l NAA và 1 mg/l BA Các ch i ra r trên môi trư ng 1/2MS có 0,1 mg/l NAA và 8 g/l agar có th t o cây hoàn ch nh M u c y có ngu n g c t cu ng lá cũng ñư c xem là ngu n v t li u t t tương ñương v i m u có ngu n g c t lá (Bigot, 1981) Mikkelsen và Sink... ng MS có b sung 0,05 mg/l NAA, 1,8 mg/l BA, 90 g/l sucrose và 8 g/l agar ñ tái sinh s lư ng l n các cây trong vòng 16 tu n Bigot (1981) ñã nuôi c y lá (7 mm), cu ng lá (10 mm), ño n thân (10 mm), c m hoa trên môi trư ng MS có b sung t 0,54 – 2,2 mg/l NAA, 4,9 – 14,7 mg/l 2-iP, 90 g/l sucrose và 8 g/l agar cho th y r ng m u lá và cu ng lá có s tái sinh t t nh t Imelda (1983) ñã ñ t ñư c s tái sinh ch... (Schraudolf và Reinert, 1959) S tương tác gi a ch t ñi u hòa sinh trư ng th c v t và tính có c c t nhiên c a m u c y r t ph c t p Trong các nghiên c u c a Bigot và c ng s (1977), các m u c y t tr dư i lá m m cây Cà chua có xu hư ng t o thành lư ng l n ch i hơn khi chúng ñư c l y càng g n ph n r Vùng tr dư i lá m m th hi n kh năng tái sinh cao nh t, khác nhau tùy thu c gi ng cây và lo i ch t ñi u hòa sinh. .. màu m i có th k là: tr ng, ñ , h ng, màu kép, vàng Hoa thư ng có 4 cánh (ñôi khi có nhi u hơn) v i hai môi Môi trên: l n nh t trong các cánh, b che khu t m t ph n, thư ng có d ng xoăn ho c g p n p Môi dư i: nh hơn, thùy tròn, thư ng có m t ch m vàng ñ c trưng Tuy nhiên, vài loài m i, ch m này có th b m t ñi, toàn b bông hoa ch có m t màu m t Torenia fournier là m t loài hoa xinh x n, d thương và ña d... fournieri còn có tên thông thư ng là Wishbone Flower xu t phát t hình d ng c a nh hoa Nhìn t ngoài vào, hai nh hoa t o nên m t hình d ng như chi c xương ñòn c a chim, còn có tên khác r t hay là Bluewings có l là do v ñ p c a nh ng cánh hoa và màu s c truy n th ng c a loài hoa này ðây là loài cây khá d tr ng, có th ch u nhi t, m ñ và bóng râm (internet 1) 3.1.2.3 Giá tr kinh t c a Torenia Torenia có v như . NGHỆ SINH HỌC & MÔI TRƯỜNG ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC MỘT SỐ CÁCH LẤY MẪU MỚI VÀ ẢNH HƯỞNG CỦA CHÚNG LÊN SỰ TÁI SINH CỦA MỘT SỐ LOÀI CÂY CÓ GIÁ TRỊ KINH TẾ . có khả năng tái tạo cơ quan từ mẫu cấy ban ñầu. Hơn nữa, ở một số loài khả năng tái sinh có thể bị mất sau quá trình chuyển gene. Khả năng tái sinh của tế bào thông qua các biến ñổi phát sinh. tự (Lazar và cộng sự, 1983). 1.1.2. Các ảnh hưởng tới sự tái sinh cơ quan 1.1.2.1. Tuổi của mẫu cấy Nhìn chung, các mẫu cấy lấy từ các cơ quan mới ñược hình thành (mẫu cấy non) có khả năng