-1- Đại học Thái Ngu yên Trƣờng đạ i học Nơng Lâm Lê Thị Hồi Xác định vai trị gây bệ nh v i khuẩn E coli, C perfringens hộ i ng tiêu chảy lợn từ sơ sinh đến 60 ngà y tuổ i tỉnh Hƣng Yên thử ng hiệm phác đồ điề u trị Luậ n văn t hạc sĩ khoa học nô ng nghiệ p Thá i Ng uyên – 2008 -2- Đại học Thái Ngu yên Trƣờng đạ i học Nông Lâm Lê Thị Hồi Xác định vai trị gây bệ nh vi khuẩn E coli, C perfringens hội chứng tiêu chảy lợn từ sơ sinh đến 60 ngày tuổi tỉnh Hƣng Yên t nghiệm phác đồ điều t rị Chuyên ngà nh: Thú y Mã số: 60 62 50 Luậ n văn t hạc sĩ khoa học nô ng nghiệ p Ngƣời hƣớng dẫ n khoa học: T.S Phạm Đức Chƣơng T.S Đỗ Ngọc Thuý Thá i Ng uyên 2008 -3- LỜ I CA M Đ OA N Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi trực tiếp thực với cộng tác giúp đỡ T.S Phạm Đức Chương T.S Đỗ Ngọc Thuý Viện Thú y Quốc gia Các số liệu, hình ảnh kết luận văn trung thực chưa công bố công trình khác Tơi xin đảm bảo thơng tin, trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Tác giả luận văn LÊ THỊ HOÀI -4- LỜI CẢM ƠN Tôi xin chân thành cảm ơn Trường Đại Học Nông Lâm Thái Nguyên, Viện Thú Y Quốc Gia, Trường trung học KTKT - Tô Hiệu Hưng Yên cho phép tạo điều kiện giúp đỡ tạo đ iều kiện cho chúng tơi hồn thành luận văn Xin bày tỏ lòng biết ơn PGS TS Cù Hữu Phú;TS Phạm Đức Chương; TS Đỗ Ngọc Thuý tận tình hướng dẫn, bảo, giúp đỡ tơi hồn thành luận văn Tơi xin cảm ơn Khoa sau Đại Học - Trường Đại Học Nông Lâm Thái Nguyên; Bộ môn vi trùng - Viện Thú Y Quốc Gia, toàn thể bạn bè đồng nghiệp tận tình giúp đỡ tơi hồn thành luận văn Để góp phần thực thành công luận văn này, tô i nhận giúp đỡ động viên đáng kể gia đình đồng nghiệp Nhân d ịp này, tơ i xin bày tỏ lịng b iết ơn chân thành mọ i giúp đỡ quí báu Xin trân trọng cảm ơn ! Thái Nguyên, tháng năm 2008 Lê Thị Hoài -5- MỤC LỤC Lời cam đoan Lời cảm ơn Mục lục Danh mục bảng Danh mục biểu đồ, đồ thị Danh mục ảnh tư liệu đề tài Danh mục ký hiệu, chữ viết tắt MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu nghiên cứu Ý nghĩa khoa học thực tiễn Chƣơng 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Một số hiểu biết chung hộ i chứng tiêu chảy 1.1.1 Khái niệm hộ i chứng tiêu chảy 1.1.2 Một số nguyên nhân gây tiêu chảy 1.1.3 Bệnh lý, lâm sàng hội chứng tiêu chảy 1.1.4 Một số đặc điểm dịch tễ hội chứng tiêu chảy 10 1.1.5 Biện pháp phòng trị tiêu chảy cho lợn 11 1.2 Một số nghiên cứu vi khuẩn E coli gây bệnh đường tiêu hoá 14 1.2.1 Đặc điểm hình thái cấu trúc 14 1.2.2 Đặc tính ni cấy sinh vật hố học 16 1.2.3 Đặc tính gây bệnh vi khuẩn E Coli 18 1.2.4 Khả kháng kháng s inh vi khuẩn E Coli 23 1.2.5 Vai trò vi khuẩn E coli hội chứng tiêu chảy 25 1.3 Những nghiên cứu vi khuẩn C perfringens gây bệnh đường tiêu hoá 26 -61.3.1 Đặc điểm hình thái cấu trúc 27 1.3.2 Đặc tính ni cấy sinh vật hoá học 29 1.4 Tình hình gây dịch bệnh đàn lợn tỉnh Hưng Yên 33 1.4.1 Một số đặc điểm tụ nhiên ảnh hưởng đến bệnh tiêu chảy 33 1.4.2 Tình hình dịch bệnh đàn lợn 33 Chƣơng ĐỐI TƢỢNG, VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 35 2.1 Đối tượng, địa điểm, thời gian nghiên cứu 35 2.2 Nội dung nghiên cứu 35 2.3 Nguyên liệu dùng cho nghiên cứu 36 2.4 Phương pháp nghiên cứu 37 2.4.1 Phương pháp nghiên cứu dịch tễ 37 2.4.2 Phương pháp thu thập mẫu phân lập vi khuẩn 38 2.4.3 Phương pháp xác định số lượng vi khuẩn 40 2.4.4 Phương pháp xác định serotyp kháng nguyên vi khuẩn phân lập 40 2.4.5 Phương pháp xác định yếu tố gây bệnh vi khuẩn phân lập 41 2.4.6 Phương pháp kiểm tra độc lực vi khuẩn phân lập chuột bạch 43 2.4.7 Phương pháp xác định khả mẫn cảm với kháng sinh chủng vi khuẩn phân lập 44 2.4.8 Thử nghiệm số phác đồ điều trị tiêu chảy cho lợn 45 2.4.9 Phương pháp sử lý số liệu 45 Chƣơng KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 47 3.1 Một số đặc điểm dịch tễ hội chứng tiêu chảy lợn từ s sinh đến 60 ngày tuổi Hưng Yên 47 3.1.1 Tỷ lệ lợn tiêu chảy chết tiêu chảy số huyện thuộc tỉnh Hưng Yên 47 3.1.2 Tỷ lệ lợn tiêu chảy chết tiêu chảy theo mùa vụ 49 3.1.3 Tỷ lệ lợn tiêu chảy chết tiêu chảy theo phương thức chăn nuôi 52 -73.1.4 Tỷ lệ lợn tiêu chảy chết tiêu chảy theo lứa tuổi lợn 55 3.1.5 Các triệu chứng lợn tiêu chảy 58 3.2 Nghiên cứu xác định vai trò vi khuẩn E coli C perfringens hội chứng tiêu chảy lợn từ sơ sinh đến 60 ngày tuổ i 60 3.2.1 Kết phân lập vi khuẩn E.coli C perfringen từ phân lợn bình thường phân lợn tiêu chảy theo lứa tuổ i 60 3.2.2 Kết phân lập vi khuẩn E coli C perfringens từ mẫu bệnh phẩm 63 3.2.3 Mức độ biến động vi khuẩn E coli C perfringens phân lợn khoẻ phân lợn tiêu chảy 65 3.2.4 Kết giám định đặc tính sinh hoá chủng vi khuẩn E coli C perfringens phân lập 69 3.2.5 Kết xác định serotyp kháng nguyên O chủng vi khuẩn E coli phân lập từ lợn bệnh 71 3.2.6 Tỷ lệ chủng vi khuẩn E.coli mang yếu tố gây bệnh 73 3.2.7 Kết xác định độc lực chuột bạch số chủng E coli phân lập từ lợn bệnh 75 3.2.8 Kết xác định khả mẫn cảm kháng sinh với số chủng vi khuẩn E coli C perfringens phân lập từ lợn bệnh 78 3.3 Kết thử nghiệm phác đồ điều trị bệnh tiêu chảy cho lợn 81 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 85 Kết luận 85 Đề nghị 87 TÀI LIỆU THAM KHẢO 88 PHỤ LỤC -8- DANH MỤC CÁC BẢNG SỐ LIỆU Bảng Trang 3.1 Tỷ lệ lợn tiêu chảy chết tiêu chảy số huyện 48 3.2 Tỷ lệ lợn mắc tiêu chảy chết tiêu chảy theo mùa vụ 50 3.3 Tỷ lệ lợn tiêu chảy chết tiêu chảy theo phương thức chăn nuôi 53 3.4 Tỷ lệ lợn mắc tiêu chảy chết tiêu chảy theo lứa tuổ i 55 3.5 Tổng hợp triệu chứng lợn mắc tiêu chảy 59 3.6 Kết phân lập vi khuẩn E.coli C perfringen từ phân lợn bình thường phân lợn tiêu chảy theo lứa tuổ i 61 3.7 Kết phân lập vi khuẩn E coli C perfringens từ mẫu bệnh phẩm 64 3.8 Mức độ biến động vi khuẩn E coli C perfringens phân lợn khoẻ phân lợn tiêu chảy 66 3.9 Kết giám định đặc tính sinh hố chủng vi khuẩn E coli C perfringens phân lập 70 3.10 Kết xác định serotyp kháng nguyên O chủng vi khuẩn E coli phân lập từ lợn bệnh 71 3.11 Tỷ lệ chủng vi khuẩn E.coli mang yếu tố gây bệnh 74 3.12 Kết xác định độc lực chuột bạch số chủng E coli phân lập từ lợn bệnh 76 3.13 Kết xác định khả mẫn cảm kháng sinh với số chủng vi khuẩn E coli C perfringens phân lập từ lợn bệnh 79 3.14 Kết điều trị thực nghiệm số phác đồ điều trị bệnh tiêu chảy cho lợn từ sơ sinh đến 60 ngày tuổi 83 -9- DANH MỤC CÁC B IỂU ĐỒ 3.1 Tỷ lệ lợn tiêu chảy chết tiêu chảy số huyện 48 3.2 Tỷ lệ lợn mắc tiêu chảy chết theo mùa vụ 50 3.3 Tỷ lệ lợn tiêu chảy chết tiêu chảy theo phương thức chăn nuôi 53 3.4 Tỷ lệ lợn mắc tiêu chảy chết tiêu chảy theo lứa tuổ i 56 DANH MỤC CÁC S Ơ ĐỒ Qui trình phân lập vi khuẩn đường ruột (Bộ môn Vi trùng - Viện Thú 39 thành tựu nghiên cứu phịng chống bệnh vật ni, tài liệu giảng dạy sau đại học cho bác sĩ thú y kỹ sư chăn nuôi, Viện thú y quốc gia, Hà nội, tr 207- 210 49 Lê Văn Tạo (1997b), Bệnh vi khuẩn Salmonella gây lợn Những thành tựu nghiên cứu phòng chống bệnh vật nuôi, tài liệu giảng dạy sau đại học cho bác sĩ thú y kỹ sư chăn nuôi, Viện Thú y Quốc gia, Hà nội, tr 213 - 217 50 Lê Văn Tạo, Nguyễn Ngũ, Nguyễn Thiên Thu, Đặng Văn Tuấn (2003), “ Độc lực số yếu tố gây bệnh vi khuẩn E.coli phân lập từ bê tiêu chảy tỉnh Nam trung bộ”, Tạp chí Khoa học kỹ thuật Thú Y, tập X, (số 3) 51 Phạm Ngọc Thạch (1996), Một số tiêu phi lâm sàng trâu viêm ruột ỉa chảy biện pháp phịng trị Luận án tiến sĩ Nơng Nghiệp, tr 20 – 32 52 Phạm Ngọc Thạch (2005), Hội chứng tiêu chảy gia súc, Trường Đại học Nông nghiệp I Hà Nội - Khoa Chăn nuôi thú y , Hà Nội, Tr -3 53 Nguyễn Như Thanh, Nguyễn Bá Hiên, Trần Thị Lan Hương (1997), Vi sinh vật thú y, NXB Nông nghiệp, Hà Nội, tr 81 -84 54 Trịnh Văn Thịnh (1985a), Bệnh nội khoa ký sinh trùng thú y, NXB Nông nghiệp, Hà Nội, tr 78 - 82 55 Trịnh Văn Thịnh (1985b), Bệnh lợn Việt Nam, NXB Khoa học kỹ thuật, Hà Nội, tr 90-95 56 Nguyễn Phước Tương (1994), Thuốc biệt dược thú y, NXB Nông nghiệp, Hà Nộ i, tr 363 – 364 57 Đỗ Ngọc Thuý, Darren Trot, Alan Frost, Kirsty Townsend, Cù Hữu Phú, Nguyễn Ngọc Nhiên, Nguyễn Xuân Huyên, Âu Xuân Tuấn, Văn Thị Hường Vũ Ngọc Quý (2002), ”Tính kháng kháng sinh chủng Escherichia coli phân lập từ lợn tiêu chảy số tỉnh miền Bắc Việt Nam“, Tạp chí Khoa học kỹ thuật Thú y, Tập IX, (số 2), tr 21 27 58 Nguyễn Văn Thiện, Nguyễn Khánh Quắc, Nguyễn Duy Hoan (2002), Giáo trình phương pháp nghiên cứu chăn ni, NXB Nơng nghiệp , Hà Nội 59 Hồng Văn Tuấn, Lê Văn Tạo, Trần Thị Hạnh (1998), “ Kết điều tra tình hình tiêu chảy lợn trại giống hướng nạc“, Tạp chí Khoa học kỹ thuật Thú Y , Tập V, (số4) 60 Bùi Trung Trực, Nguyễn Việt Nga, Thái Quốc Hiếu, Lê Thanh Hiếu, Nguyễn Ngọc Tuân, Trần Thị Dân (2004), “ Phân lập định typ kháng nguyên vi khuẩn E Coli phân heo nái, heo tỉnh Tiền Giang“, Tạp chí Khoa học kỹ thuật Thú y, (số 1), tr 12 - 19 61 Tạ Thị Vịnh, Đặng Thị Hoè (2002), Một số kết sử dụng chế phẩm sinh học để phòng trị bệnh tiêu chảy lợn con“, chí Tạp Khoa học kỹ thuật Thú y, tập IX, (số 4), tr 5456 62 Nguyễn Hữu Vũ, Nguyễn Đức Lưu (2000), Thuốc thú y cách sử dụng, NXB Nông nghiệp, Hà Nộ i, tr 326 – 328 Tiếng anh 63 Becht J.L (1986), Fluid therapy in large animal patients, proceeding of applications of intestive care therap ies and parenteral nutrition in large animal med icine, p 26-30 64 Bergeland M.E (1986), clostridium Infection Disease of Swine, Sixth Edition IOWA- USA p 549 – 557 65 Blackwell T.E (1989), Enteritid is and diarrhoea, veterynary d ima North America large animals pract, p, 547 - 575 66 Bertchinger H.U, Faibrother J.M, Nielsen N.O, Pohlenz J.F, Escherichia coli infection University Diseases of swine, IOWA State press / AMES, IOWA U.S.A 7th Edition 1992, p 487 - 488 67 Casey, T A., Nagy, B & Moon, H W (1992), Pathogenicity of porcine enterotoxigenic Escherichia coli that not express K88, K99, F41, or 987P adhesins, American Journal of Veterinary Research 53, 14881492 68 Carter G.R, Chengapa, M.M, Rober T.S.A.W (1995), Essentials of veterinary Microbiology, A warerly Company, 1995, p.45-49 69 Dean E A, Whipp S C & Moon H W (1989), Agespecific colonization of porcine intestinal ep ithelium by 987P -piliated enterotoxigenic Escherichia coli, Infection and Immunity 57, 82-87 70 Dean-Nystrom E A & Samuel, J E (1994), Age-related resistance to 987P fimbria-mediated colonization correlates with specific glycolipid receptors in intestinal mucus in swine, Infection and Immunity 62, 4789-4794 71 DO T N, Cu H.P, Van H.T, Tran N.P.T& Trott.D.J (2006), Vulence factors of E coli isolates obtained from pigs with post- weaning diarhoea or oedema d isease in Viet Nam In IPVS, pp336 Copenhagen, Denmark 72 Eisenstein T.K, Angeman C.R, Odonell S, Specter S, Fiedman H, (1980), and E.coli Relationship between protective immunity, minogenic activation by Salmonella vaccines, Plenum publis ing coporadiol, p 39 - 50 73 Falkow, S (1975), P lasmid which contribute to pathogenity, In infection multip le drug res istance Pion Ltd London 74 Fairbrother.J.M (1992), Enteric colibacillos is Diseases of swine, IOWA State Univers ity Press/AMES, IOWA U.S.A 7th Ed ition, 1992, p.489 - 497 75 Giannella, R.A (1976), Suckling mouse model for detection of heat stable Escherichia model, coli enterotoxin: characteristics of the Infection and Immunity 23, 700 - 705 76 Guinee, P A M & Jansen, W H (1979), Bihaviour of Escherichia coli K antigen K88ab, K88ac, and K88ad in immunoelectrophoresis, double diffusion, and haemagglutination, Infection and Immunity 23, 700 - 705 77 Hogh P.( 1974), Porcine infection necrotizing enteritis due to C perfringens, Theses copenhagen, p 287 – 289 78 IsaaCSon, R E., Nagy, B & Moon, H W (1977), Colonization of porcine small intestine by Escherichia coli: Colonization and adhesion factors of pig enteropathogens that lack K88, Journal of Infectious Diseases 135, 531-539 79 Ketyle I Emodyl, Kentrohrt (1975), Mouse lang Oedema caused by a toxin substance of Escherichia coli strains , Acta Microbiol, A cadSci Hung-25, P.307-317 80 Konowalchuk, J., Speirs, J I & Stavric , S (1977) ,Vero response to a cytotoxin of Escherichia coli, Infection and Immunity 18, 775-779 81 Links, I., Love, R & Greenwood, P (1985), Colibaccillois in newborn piglets associates with class enterotoxigenic E coli In Infectious diarrhoea of the young: strategies for control in humans and animals , pp 281 - 287 editer by S Tzipori Gêlong, Autralia: Elsevier Science Publishers 82 Nagy, B., Arp, L H., Moon, H W & Casey, T A (1992), Colonization of the small intestine of weaned pigs by enterotoxigenic Escherichia coli that lack known colonization factors , Veterinary Pathology 29, 239-246 83 Nagy, B., Awad-Masalmed, M., Bodoky, T., Munch, P & Szekrenyi, M T (1996), Association of shiga-like toxin type II (SLTII) and heat stable enterotoxins with F18ab, F18ac, K88 and F41 fimbriae of Escherichia coli from weaned pigs, In Proceedings of 14th Congress International Pigs Veterinary Society, pp 264 Bologna Italy 84 Nagy, B & Fekete, P Z (1999), Enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) in farm animals, Veterinary Research 30, 259284 85 Orskov, I Orskov, Sojka, W.J Wittig, W (1964), K antigens K88ab (L) and K88ac (L) in E.coli A new O antigen: O147 and a new K antigen K89 (B), Acta Pathologica et Microbiologica Scandinavica sect, B62, P 439 - 447 86 Orskov, F (1978), Vilurence Factor of the bacterial cell surface, J Infect., P 630 87 Quin P J, Carter M.E, Mackey B K, Carter G R (1994), Clinical Verterynary Microbio logy, P 190 206 88 Radostits O.M, Blood D Cand Gay C (1994), Veterinary med icine, the textbook of the cattle, sheep, pig, goats and horrses, Diseases caused by Escherichia coli London, Philadenphia, Sydney, Tokyo, Toronto, p 703 - 730 89 Roeder B.L, Chengapa M.M end Nagaraja T.G (1987), Isolation of CL.perfringens from neonatal calves with ruminal and abomas tympamy, abomsitis and abomasuucretion, Tam Vet.Med Assoc, p.1150 - 1155 90 Rippinger.P., Bertschinger H U., Imberechts.H., Nagy.B., Sorg.I., Stamm.M., Wild P & Wittig W (1995), Des ignations F18ab and F18ac for the related fimbrial types F107, 2134P and 8813 of Escherichia coli isolated from porcine postweaning d iarrhoea and from oedema disease, Veterinary Microbiology 45, 281295 91 Smith H.W & Halls.S (1967), Observations by the ligated segment and oral inoculation methods on Escherichia coli infections in pigs, calves, lambs and rabbits, Journal of Pathology and Bacteriology 93, 499 92 Taylor D.J, Bergelan M.E (1986), Clostridial infection diseases of swine, IOWA state University Press/ AMES U.S.Ath Edition, p 454 - 468 HÌNH ẢNH MINH HỌA ảnh 1: Đàn lợn sau cai sữa bị tiêu chảy ảnh 2: Mổ khám kiểm tra bệnh tích lợn sau cai sữa bị tiêu chảy ảnh 3: Khuẩn lạc vi khuẩn E coli môi trƣờng thạch MacConkey ảnh 4: Hình thái vi khuẩn E.coli kính hiĨn vi 102 ảnh 4: Kiểm tra hình thái vi khuẩn E coli kính hiển vi điện tử Ảnh 5: Khuẩn lạc C perfringens môi trƣờng thạch yếm khí Số h óa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên edu.vn http://www.lrc-tnu 103 Ảnh 6: Hình thái vi khuẩn C perfringens dƣới kính hiển vi thƣờng (độ phóng đại x7000 lần) ảnh 7: Phản ứng lên men đƣờng xác định vi khuẩn E.coli Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc -tnu.e d u.vn ... perfringens hội chứng tiêu chảy lợn từ sơ sinh đến 60 ngày tuổi tỉnh Hƣng Yên thử nghiệm phác đồ điều trị? ?? MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU - Xác định số đặc điểm d ịch tễ bệnh tiêu chảy lợn từ s sinh đến 60 ngày. .. Thái Ngu yên Trƣờng đạ i học Nơng Lâm Lê Thị Hồi Xác định vai trị gây bệ nh vi khuẩn E coli, C perfringens hội chứng tiêu chảy lợn từ sơ sinh đến 60 ngày tuổi tỉnh Hƣng Yên t nghiệm phác đồ điều. .. lập từ lợn bệnh 79 3.14 Kết điều trị thực nghiệm số phác đồ điều trị bệnh tiêu chảy cho lợn từ sơ sinh đến 60 ngày tuổi 83 -9- DANH MỤC CÁC B IỂU ĐỒ 3.1 Tỷ lệ lợn tiêu chảy chết tiêu chảy