DANH MỤC VÀ KÍ HIỆU VIẾT TẮT Kí hiệu CPU E.coli MIC MP h ppm S paratyphy S typhy S Typhimurium VSV Tên đầy đủ Colony Forming Unit Escherichia coli Minimum Inhibitory Concentration Môi trường thạch thịt peptone Giờ Part per million(phần triệu) Salmonella paratyphy Salmonella typhy Salmonella Typhimurium vi sinh vật MỤC LỤC PHẦN MỞ ĐẦU 1.1.Đặt vấn đề .1 1.2 Mục tiêu yêu cầu đề tài .2 1.2.1 Mục tiêu đề tài 1.2.2 Yêu cầu đề tài 1.3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài .2 PHẦN TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3 2.1 Tổng quan nano bạc 2.1.1 Giới thiệu chung công nghệ nano .3 2.1.2 Tính chất lý học hạt nano bạc 2.1.3 Tính kháng khuẩn nano bạc .7 2.1.4 Ảnh hưởng hạt nano bạc đến sức khỏe người 2.1.5 Ứng dụng hạt nano bạc đời sống 2.2 Tổng quan vi khuẩn gram âm .13 2.3 Tình hình nghiên cứu nước nước 24 2.3.1 Tình hình nghiên cứu giới 24 2.3.2 Tình hình nghiên cứu nước 25 PHẦN VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .27 3.1 Vật liệu nghiên cứu .27 3.1.1 Vi khuẩn .27 3.1.2 Hóa chất mơi trường .27 3.1.3 Dụng cụ thiết bị .27 3.1.4 Địa điểm thời gian nghiên cứu 28 3.2 Nội dung nghiên cứu 28 3.3 Phương pháp nghiêu cứu .28 3.3.1 Phương pháp xác định số đặc điểm vi khuẩn nghiên cứu 28 3.3.2 .Phương pháp xác định khả kháng khuẩn gram âm nano bạc 30 3.3.3 Phương pháp xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) nano bạc vi khuẩn gam âm 32 3.3.4 Phương pháp theo dõi khả kháng khuẩn gram âm nano bạc theo thời gian .33 3.3.5 Phương pháp bảo quản giống vi sinh vật .33 3.3.6 Phương pháp xử lý số liệu 33 33 PHẦN KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .34 4.2 Lựa chọn phương pháp thích hợp để xác định khả kháng khuẩn 34 4.3 Xác định nồng độ ức chế tối thiểu nano bạc vi khuẩn gram âm .38 4.3.1 Xác định nồng độ ức chế tối thiệu nano bạc vi khuẩn E.coli 39 4.3.2 Xác định nồng độ ức chế tối thiệu nano bạc vi khuẩn S Typhimurium 40 4.4 Khả kháng E.coli S Typhimurium nano bạc theo thời gian 42 4.4.1 Khả kháng E.coli nano bạc theo thời gian .42 4.4.2 Khả kháng S Typhimurium nano bạc theo thời gian 43 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 45 5.1 Kết luận 45 5.2 Kiến nghị .45 TÀI LIỆU THAM KHẢO 46 DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1: Số nguyên tử lượng bề mặt hạt nano bạc Bảng 4.2 Phương pháp xác định khả kháng khuẩn .37 Bảng 4.3a Ảnh hưởng nồng độ nano bạc đến hoạt tính kháng 39 Bảng 4.3b Ảnh hưởng nồng độ nano bạc đến hoạt tính kháng .40 S Typhimurium 40 Bảng 4.4 Nồng độ ức chế tối thiểu nano bạc E.coli S Typhimurium 41 DANH MỤC HÌNH Hình 2.1: Hiện tượng cộng hưởng plasmon hạt hình cầu Hình 2.2: Ion bạc vơ hiệu hóa enzym chuyển hóa oxy vi khuẩn Hình 2.3: Bình sữa làm nhựa có pha thêm nano bạc (vi.wikipedia.org/wiki/Bạc) .10 Hình 2.4: Tất trang chứa nano bạc 11 Hình 2.5: Nước rửa trái kháng khuẩn (vi.wikipedia.org/wiki/Giỏ_trái_cây) .12 Hình 2.6: Vi khuẩn Escherichia coli (http://vi.wikipedia.org/wiki/Escherichia_coli) 16 Hình 2.7: Vi khuẩn Salmonella 19 Hình 3.1 Sơ đồ phương pháp khuếch tán sử dụng đĩa giấy 30 Hình 3.2 Sơ đồ phương pháp đục lỗ thạch 31 Hình 3.3 Sơ đồ phương pháp nhỏ dịch kháng khuẩn lên bề mặt thạch .32 Hình 3.4 Sơ đồ phương pháp đối kháng dịch nuôi cấy lỏng 32 Hình 4.1a Xác định khả kháng E.coli nano bạc phương pháp khác 36 Hình 4.1b Xác định khả kháng Salmonella nano bạc phương pháp khác 37 Hình 4.2a Khả kháng E.coli nano bạc nồng độ khác 40 Hình 4.2b Khả kháng S Typhimurium nano bạc nồng độ khác .41 Hình 4.3 Khả kháng E.coli nano bạc theo thời gian 42 Hình 4.4 Khả kháng S Typhimurium nano bạc theo thời gian 43 PHẦN MỞ ĐẦU 1.1.Đặt vấn đề Trong năm gần đây, vấn đề ngộ độc thực phẩm ngày trở nên cấp thiết Đã có nhiều cảnh báo, tình trang ngộ độc thực phẩm leo thang ngày nghiêm trọng Theo thống kê tổ chức giới ( Word Health Organization-Who), năm Việt Nam có khoảng triệu người bị ngộ độc thực phẩm liên quan đến thực phẩm với 10 đến 20 ca tử vong [13] Từ xa xưa, người sử dụng bạc làm dụng cụ chứa đồ ăn, nước uống để trị bệnh Trong chiến tranh giới thứ nhất, người ta chí cịn sử dụng sản phẩm từ bạc để điều trị nhiễm trùng trước thuốc kháng sinh đời [1] Bạc biết đến nguyên tố có khả khử trùng mạnh tồn tự nhiên Các 200 năm nhà khoa học xem huyết người dịch keo, keo bạc sử dụng làm chất kháng khuẩn thể người Kể từ keo bạc sử dụng rộng rãi để chữa bệnh nấm da, điều trị vết thương, vết bỏng, bệnh miệng, làm thuốc nhỏ mắt Tuy nhiên, sau thuốc kháng sinh phát minh (giữa kỉ 20) với hiệu lực khử trùng mạnh hơn, keo bạc bị thay dần Nhưng 30 năm sau người ta nhận có nhiều lồi vi khuẩn có khả chống lại tác dụng thuốc kháng sinh vấn đề ngày trở nên đáng lo ngại Lúc tính kháng khuẩn bạc lại ý có phổ tác dụng rộng không bị hạn chế hiệu ứng kháng thuốc [27,23] Ngày nay, việc tạo vật thể kích thước nano trở nên phổ biến, kích thước hạt vật chất thể nhiều tính chất lý-hóa khác thường so với vật chất trạng thái khối, khả kháng khuẩn cao 20-60 ngàn lần so với ion Ag + [10] Các hạt nano bạc với lượng bề mặt lớn có khả giải phóng từ từ ion bạc vào dung dịch, nhờ nano bạc có hiệu lực khử khuẩn mạnh nhiều lần kéo dài so với bạc dạng keo, dạng ion hay dạng rắn [27,28] Chính tính chất lượng tử đặc biệt nên nano bạc bị biến thể gian bảo quản, để ổn định cần phải có phương pháp chế tạo đặc biệt giúp cho khả sử dụng triệt để Vi khuẩn Escherichia coli Salmonella hai loài vi khuẩn phân bố rộng rãi tự nhiên (Đất, nước, thể người, động vật …), loài vi khuẩn tồn phổ biến nơng sản thực phẩm Chính phổ biến tác hại nguy hiểm người nên tơi tập trung tồn thời gian làm khóa luận “Nghiên cứu khả kháng khuẩn gram âm nano bạc” 1.2 Mục tiêu yêu cầu đề tài 1.2.1 Mục tiêu đề tài - Xác định khả kháng khuẩn gram âm nano bạc 1.2.2 Yêu cầu đề tài - Xác định phương pháp thích hợp để xác định khả kháng khuẩn gram âm nano bạc - Xác định nồng độ ức chế tối thiểu nano bạc vi khuẩn gram âm - Xác định khả kháng khuẩn gram âm nano bạc theo thời gian 1.3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài - Ý nghĩa khoa học + Kiểm tra nhận định khả kháng khuẩn gram âm nano bạc + Kết luận án sở khoa học cho nghiên cứu hiệu lực kháng khuẩn hạt nano kim loại vi khuẩn Các kết luận án sở cho nghiên cứu ứng dụng nano bạc chế tạo hạt nano bạc sử dụng y tế, mơi trường thực phẩm, xúc tác hóa học, chất trừ nấm bệnh nơng nghiệp + Giúp sinh viên có hội tiếp cận với quy trình, thao tác kỹ thuật thực tế Qua kết hợp với kiến thức lý thuyết học sinh viên có hiểu biết chuyên sâu nhìn tổng quát - Ý nghĩa thực tiễn + Biết khả kháng khuẩn mạnh nano bạc để ứng dụng bảo quản thực phẩm hạn chế ảnh hưởng đến sức khỏe người + Ứng dụng đặc tính kháng khuẩn nano bạc vào cơng nghiệp thực phẩm nhằm nâng cao chất lượng, đảm bảo an toàn vệ sinh, nâng cao hiệu sử dụng thực phẩm PHẦN TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan nano bạc 2.1.1 Giới thiệu chung công nghệ nano 2.1.1.1 Vật liệu nano Vật liệu nano vật liệu chiều có kích thước cỡ nano mét (1nm = 10-9 m) Đây đối tượng nghiên cứu khoa học nano cơng nghệ nano, liên kết hai lĩnh vực với Tính chất vật liệu nano bắt nguồn từ kích thước chúng, vào cỡ nanơmét, đạt tới kích thước tới hạn nhiều tính chất hóa lý vật liệu thơng thường Kích thước vật liệu nano trải khoảng từ vài nm đến vài trăm nm phụ thuộc vào chất vật liệu tính chất cần nghiên cứu 2.1.1.2 Phân loại vật liệu nano Có nhiều cách phân loại vật liệu nano Sau cách phân loại dựa vào hình dáng vật liệu [4]: - Vật liệu không chiều vật liệu mà ba chiều có kích thước nano, ví dụ: chấm lượng tử - Vật liệu chiều vật liệu hai chiều có kích thước nano, ví dụ: dây nano,ống nano,… - Vật liệu hai chiều vật liệu chiều có kích thước nano, ví dụ: màng mỏng,…(Chiều có nghĩa chiều chuyển động khơng bị hạn chế kích thước phần tử tải điện) Ngồi cịn có vật liệu có cấu trúc nano hay nanocomposite có phần vật liệu có kích thước nm, cấu trúc có phần khơng chiều, chiều, hai chiều đan xen lẫn 2.1.1.3 Cơ sở khoa học công nghệ nano Công nghệ nano dựa ba sở khoa học [19]: a Chuyển tiếp từ tính chất cổ điển đến tính chất lượng tử: Khác với vật liệu khối, kích thước nano tính chất lượng tử thể rõ ràng Vì nghiên cứu vật liệu nano cần tính tới thăng giáng ngẫu nhiên Càng kích thước nhỏ tính chất lượng tử thể cách rõ ràng Ví dụ chấm lượng tử coi đại nguyên tử, có mức lượng giống nguyên tử b Hiệu ứng bề mặt: Cùng khối lượng kích thước nano chúng có diện tích bề mặt lớn nhiều so với chúng dạng khối Điều này, có ý nghĩa quan trọng ứng dụng vật liệu nano có liên quan tới khả tiếp xúc bề mặt vật liệu, ứng dụng vật liệu nano làm chất diệt khuẩn Đây tính chất quan trọng làm nên khác biệt vật liệu có kích thước nanomet so với vật liệu dạng khối [1] c Kích thước tới hạn: Kích thước tới hạn kích thước mà vật giữ ngun tính chất vật lý, hóa học dạng khối Nếu kích thước vật liệu mà nhỏ kích thước tính chất hồn tồn bị thay đổi Nếu ta giảm kích thước vật liệu đến kích cỡ nhỏ bước sóng vùng ánh sáng thấy (400-700 nm), theo Mie tượng "cộng hưởng plasmon bề mặt" xảy ánh sáng quan sát thay đổi phụ thuộc vào bước sóng ánh sáng xảy tượng cộng hưởng Hay tính dẫn điện vật liệu tới kích thước tới hạn khơng tn theo định luật Ohm Mà lúc điện trở chúng tuân theo quy tắc lượng tử Mỗi vật liệu có kích thước tới hạn khác bạn thân vật liệu có nhiều kích thước tới hạn ứng với tính chất khác chúng Bởi nghiên cứu vật liệu nano cần xác định rõ tính chất nghiên cứu Chính nhờ tính chất lý thú vật liệu kích thước tới hạn nên cơng nghệ nano có ý nghĩa quan trọng thu hút ý đặc biệt nhà nghiên cứu 2.1.2 Tính chất lý học hạt nano bạc 2.1.2.1 Tính chất quang a Phổ hấp thụ hạt nano bạc Phổ hấp thụ hạt nano bạc nằm khoảng từ 400 - 460 nm [29] Phổ hấp thụ hạt nano bạc phụ thuộc vào kích thước hạt nano bạc Khi kích thước hạt tăng cường độ đỉnh tăng dịch phía bước sóng dài 35 kháng khuẩn gặp nhiều khó khăn Chúng tơi tiến hành nghiên cứu lựa chọn phương pháp thích hợp để xác định khả kháng khuẩn Escherichia coli vi khuẩn S.Typhimurium Kết nghiên cứu thể hình 4.2a bảng 4.2a a) c) b) d) 36 Hình 4.1a Xác định khả kháng E.coli nano bạc phương pháp khác a) Phương pháp nhỏ dịch kháng khuẩn lên bề mặt thạch b) Phương pháp đối kháng dịch nuôi cấy lỏng c) Phương pháp khuếch tán sử dụng đĩa giấy d) Phương pháp đục lỗ thạch a) a) b) 37 c) d) Hình 4.1b Xác định khả kháng Salmonella nano bạc phương pháp khác a) Phương pháp nhỏ dịch kháng khuẩn lên bề mặt thạch b) Phương pháp đối kháng dịch nuôi cấy lỏng c) Phương pháp khuếch tán sử dụng đĩa giấy d) Phương pháp đục lỗ thạch Bảng 4.2 Phương pháp xác định khả kháng khuẩn Phương pháp Đặc điểm 38 Phương pháp nhỏ dịch kháng khuẩn lên bề mặt thạch Trên mặt thạch có vết dịch kháng khuẩn Phương pháp đối kháng dịch nuôi cấy lỏng Dịch nuôi cấy bị đục, định lượng vi sinh vật sau kháng Phương pháp khuyếch tán sử dụng đĩa giấy Xuất vòng kháng khuẩn xung quanh đĩa giấy Phương pháp đực lỗ thạch Xuất vòng kháng khuẩn xung quanh lỗ thạch Qua kết hình 4.1a, 4.1b bảng 4.2 cho thấy phương pháp xác định khả kháng khuẩn nano bạc, nhiên dù điều kiện phòng thí nghiệm, điều kiện thiết bị thời gian hạn chế nên việc thực quan sát phương pháp khuếch tán sử dụng đĩa giấy, phương pháp đục lỗ thạch khó quan sát vịng kháng khuẩn nano bạc E.coli S Typhimurium Nguyên nhân hạt nano bạc có kích thước nhỏ khả diệt khuẩn chúng mạnh Tuy nhiên hạt có kích thước nhỏ lại có khuynh hướng liên kết với q trình lưu trữ tạo thành hạt lớn gây ảnh hưởng tới khả diệt khuẩn, khó khuếch tán môi trường thạch Phương pháp nhỏ dịch kháng khuẩn lên bề mặt thạch cho thấy kháng khuẩn nano bạc Tuy nhiên phương pháp khó quan sát thí nghiệm định lượng nồng độ ức chế nhỏ (MIC) nên dùng để xác định sơ khả kháng khuẩn Từ kết thử nghiệm trên, với điều kiện thí ngiệm, chúng tơi lựa chọn phương pháp đối kháng dịch nuôi cấy lỏng để tiến hành thí nghiệm xác định nồng độ ức chế hay tiêu diệt nano bạc E.coli S Typhimurium 4.3 Xác định nồng độ ức chế tối thiểu nano bạc vi khuẩn gram âm Nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) chất kháng khuẩn định nghĩa nồng độ nhỏ chất kháng khuẩn ức chế phát triển 10 CFU/ml vi sinh vật so với kiểm chứng 39 4.3.1 Xác định nồng độ ức chế tối thiệu nano bạc vi khuẩn E.coli Để xác định nồng độ ức chế tối thiểu nano bạc E.coli, tiến hành khảo sát khả kháng E.coli nano bạc nồng độ 50; 25; 12,5; 6,25; 3,125; 1,5625; 0,7813ppm, kiểm chứng nước deion Quá trình tiến hành theo phương pháp mục 3.4.4 Kết kháng E.coli trình bày qua bảng 4.3a hình 4.2a Bảng 4.3a Ảnh hưởng nồng độ nano bạc đến hoạt tính kháng Escherichia coli Nồng độ nano bạc (ppm) Hiệu kháng Escherichia coli C1 (50ppm) - C2 (25ppm) - C3 (12,5ppm) - C4 (6.25ppm) + C5 (12,5ppm) + C6 (1,5625ppm) + C7 (0,7813ppm) + Đ (Nước deion) + (-):Không xuất khuẩn lạc (+): Có xuất khuẩn lạc Xuất khuẩn lạc Khơng xuất khuẩn lạc 40 Hình 4.2a Khả kháng E.coli nano bạc nồng độ khác 4.3.2 Xác định nồng độ ức chế tối thiệu nano bạc vi khuẩn S Typhimurium Để xác định nồng độ ức chế tối thiểu nano bạc S Typhimurium, tiến hành khảo sát khả kháng S Typhimurium, nano bạc nồng độ 50; 25; 12,5; 6,25; 3,125; 1,5625; 0,7813ppm, kiểm chứng nước deion Quá trình tiến hành theo phương pháp mục 3.4.4 Kết kháng S Typhimurium trình bày qua bảng 4.3b hình 2b Bảng 4.3b Ảnh hưởng nồng độ nano bạc đến hoạt tính kháng S Typhimurium Nồng độ nano bạc (%) Hiệu kháng S Typhimurium C1 (50ppm) - C2 (25ppm) - C3 (12,5ppm) - C4 (6.25ppm) + C5 (12,5ppm) + C6 (1,5625ppm) + C7 (0,7813ppm) + Đ ( Nước deion) (-):Khơng xuất khuẩn lạc (+): Có xuất khuẩn lạc + 41 Xuất khuẩn lạc Khơng xuất khuẩn lạc Hình 4.2b Khả kháng S Typhimurium nano bạc nồng độ khác Dựa theo kết trình bày bảng 4.3a hình 4.2a, chúng tơi nhận thấy nồng độ 50ppm, 25ppm, 12.5ppm khơng có xuất khuẩn lạc E.coli tiếp tục sinh trưởng môi trường kiểm chứng nước deion, nồng độ 6,25; 3,125; 1,5625; 0,7813ppm Số lượng khuẩn lạc giảm dần từ nồng độ 6,25ppm tới nồng độ 0,7813ppm Qua bảng 4.3b hình 4.3b cho thấy mẫu kiểm chứng nồng độ 50ppm, 25ppm, 12,5ppm khơng có xuất khuẩn lạc S Typhimurium Trong nồng độ 6,25; 3,125; 1,5625; 0,7813ppm xuất khuẩn lạc môi trường kiểm chứng nước deion Kết thí nghiệm cho thấy nano bạc có khả kháng E.coli, S Typhimurium nồng độ ức chế tối thiểu nano bạc với E.coli S Typphimurium xác định ghi bảng 4.4 Bảng 4.4 Nồng độ ức chế tối thiểu nano bạc E.coli S Typhimurium 42 Vi khuẩn Nồng độ ức chế tối thiểu (ppm) E.coli 12,5 S Typhimurium 12,5 Từ bảng 4.4 ta thấy nồng độ ức tối thiểu nano bạc E.coli 12.5ppm nano bạc đối S Typhimurium với 12.5ppm 4.4 Khả kháng E.coli S Typhimurium nano bạc theo thời gian 4.4.1 Khả kháng E.coli nano bạc theo thời gian Để theo dõi khả kháng E.coli theo thời gian chúng tơi tiến hành thí nghiệm theo phương pháp mục 3.4.4 với nồng độ nano bạc là6,25; 12,5; 25; 50ppm, đối chứng nước deion Kết thể hình 4.3 bảng 4.5 Hình 4.3 Khả kháng E.coli nano bạc theo thời gian Kết thí nghiệm thể hình 4.3 bảng 4.5 cho thấy tế bào E.coli tiếp tục sinh trưởng môi trường kiểm chứng nước deion Trong môi trường chứa nano bạc nồng độ ức chế tối thiểu 12,5ppm, E.coli bị ức 43 chế khoảng 8h đầu sau lại tiếp tục phát triển trở lại Với nồng độ 25ppm, số lượng tế bào sống sót giảm dần theo thời gian, đến 24h E.coli bị tiêu diệt hoàn toàn, E.coli bị tiêu diệt hồn tồn khơng phát triển lại sau 72h coi nồng độ diệt khuẩn nano bạc với E.coli 4.4.2 Khả kháng S Typhimurium nano bạc theo thời gian Để theo dõi khả kháng S Typhimurium theo thời gian tiến hành thí nghiệm theo phương pháp mục 3.4.4 với nồng độ nano bạc 6,25; 12,5; 25; 50ppm, đối chứng nước deion Kết thể hình 4.4 bảng 4.6 Hình 4.4 Khả kháng S Typhimurium nano bạc theo thời gian Kết thí nghiệm thể hình 4.4 bảng 4.6 cho thấy tế bào S Typhimurium tiếp tục sinh trưởng môi trường kiểm chứng nước deion Trong môi trường chứa nano bạc nồng độ ức chế tối thiểu 12.5ppm, S Typhimurium bị ức chế khoảng 8h đầu sau lại tiếp tục phát triển trở lại Với nồng độ 25ppm, số lượng tế bào sống sót giảm dần theo thời gian, đến 24h S Typhimurium bị tiêu diệt hoàn toàn, S Typhimurium bị tiêu diệt 44 hồn tồn khơng phát triển lại sau 72h coi nồng độ diệt khuẩn nano bạc với S Typhimurium Nhận xét: Như nồng độ ức chế tối thiểu nano bạc E.coli S Typhimurium, E.coli S Typhimurium phát triển trở lại sau khoảng – 8h Với nồng độ lớn 25ppm nano bạc, E.coli S Typhimurium bị tiêu diệt sau 24h 45 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Qua trình thực đề tài chúng tơi đưa số kết luận sau: - Xác định số đặc điểm vi khuẩn nghiên cứu - Lựa chọn phương pháp thích hợp để xác định khả kháng khuẩn nano bạc nghiên cứu phương pháp đối kháng dịch nuôi cấy lỏng - Xác định nồng độ ức chế tối thiểu nano bạc E.coli S Typhimurium : + Nồng độ ức chế tối thiểu nano bạc E.coli 12,5ppm + Nồng độ ức chế tối thiểu nano bạc S Typhimurium 12,5ppm - Theo dõi khả kháng E.coli S Typhimurium theo thời gian 5.2 Kiến nghị Do hạn chế mặt thời gian thiết bị nên đề tài nghiên cứu cịn số hạn chế, chúng tơi đưa số kiến nghị: - Tiếp tục nghiên cứu khả kháng khuẩn nano bạc vi sinh vật có hại khác, tìm nồng độ nano bạc thích hợp sử dụng thiết thực chế biến bảo quản thực phẩm - Tiếp tục nghiên cứu để ứng dụng đề tài thực tiễn - Nghiên cứu điều kiện, yếu tố định đến khả kháng khuẩn nano bạc để sản xuất loại nano bạc có chất lượng tốt 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tài liệu Tiếng Việt Vũ Đình Cự, Nguyễn Xn Chánh (2004), Cơng nghệ nano điều khiển đến nguyên tử, phân tử, Nhà xuất khoa học kĩ thuật Nguyễn Văn Dán (2003), Công nghệ vật liệu mới, NXB Đại Học Quốc Gia TP Hồ Chí Minh Đào Trọng Đạt (1996), Bệnh lợn ỉa phân trắng, NXB Nông nghiệp, Hà Nội Nguyễn Hoàng Hải.“Các hạt nano kim loại (metallic nanoparticles)” Trung tâm Khoa học Vật liệu, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội Nguyễn Như Thanh, Nguyễn Bá Hiên, Trần Thị Lan Hương (2001), Vi sinh vật thú y, NXB Nông nghiệp, Hà Nội PGS.TS Lê Thanh Mai (2008), Phân tích vi sinh vật thực phẩm, Đại học Bách Khoa Hà Nội Nguyễn Quang Minh (2005), Hóa học chất rắn, NXB Đại học quấc gia TP Hồ Chí Minh Nguyễn Đức Nghĩa (2007), Cơng nghệ hóa học Nano, nhà xuất Khoa học tự nhiên công nghệ Hà Nội Trần Linh Phước (2009), Phương pháp phân tích vi sinh vật nước, thực phẩm mĩ phẩm, Nhà xuất Giáo Dục 10 Đặng Văn Phú, Bùi Duy Du, Nguyễn Triệu, Võ Thị Kim Lăng, Nguyễn Quốc Hiến, Bùi Duy Cam “Chế tạo keo nano bạc nano phương pháp chiếu xạ sử dụng Polyvinyl Pyrolidon/Chitosan làm chất ổn định” Tạp chí khoa học cơng nghệ, tập 46, số 3, 2008 Tr 81-86 11 Lê Ngọc Tú (2000), Hóa sinh thực phẩm, Nhà xuất khoa học kỹ thuật Hà Nội 12 Nguyễn Ngọc Tú Nghiên cứu gel nước thông minh nhạy pH lai nano bạc Khóa luận tốt nghiệp đại học quy 2009 Trang 8-9 13 Nguyễn Quang Tuyên (1996), Nghiên cứu đặc tính mọt số chủng Salmonella gây bệnh tiêu chảy bê nghé biện pháp phòng trị Luận án PTS Khoa học Nông nghiệp, Viện thú y quốc gia Hà Nội 47 14 Nguyễn Xuân Thành (chủ biên), Vũ Thị Hồn Nguyễn Thế Bình, Đinh Hồng Dun (2007), Giáo trình thực tập vi sinh vật chuyên ngành, Đại học Nông Nghiệp Hà Nội 15 Liễu Như Ý (2010), “ Ngộ độc thực phẩm vi sinh vật”, Tạp chí Thơng tin Khoa học Cơng Nghệ Tỉnh Sóc Trăng, trang 29-33 II Tài liệu Tiếng Anh 16 A.Ahmad, P Mukherjee, S.Senapati, D Mandal, M.IKhan, R.Kumar and M.Sastry, Extracellular biosynthesis of silver nanoparticles using the fungus Fusarium oxysporrum, Colloids and Surfaces: Biointerfaces 28 (2003) 313 -318 -7217 Dewu Long, Guozhong Wu and Shimou Chen, Preparation of oligochitosan stabilized silver nanoparticle by gamma irradiation, Radiation Physics and Chemistry 76 (2007) 1126 – 1131 18 Inui Hiroshi Application Biology Science., 1997; Vol 2, N02, p 55 – 65 19 Jiang K Moon, Z Zhang, S Pothukuchi, C.P Wong, Variable Frequency Microwave Synthesis of Silver Nanopraticles, Journal of Nanopraticle Research, Vol.8, (2006) 117 – 124 20 Kendall M Hurst, 2006 Characteristics and Applications of Antibacterial nano – Silver, Department of Chemical Engineering Auburn University 21 Mukherjee, A.Ahmad, D.Mandal, S.Senapati, SR.Sainkar, M.I.Khan, R.Parishcha, P.V.Ajatkumar, M.Alam, R.Kuma and M.Sastry, Fungus – Mediated Synthetic of Silver Nanoparticles and Their Immobilization in the Mycelial Matrix: A Novel Biological Approach to Nanoparticle synthesis, Nano lett (2001)515 22 Nanoscience and nanotechnologies: opportunities and uncertainties, The Royal Society & The Royal Academy of Engineering, London (2004) 23 Nikolaj L.Kildeby, Ole z.andersen, Ramus E.roge, Tomlarsen, Rene Petrsen, Jacob F.Riis, Silver Nanopraticle, (2005) 4,14, 15,16 24 Quin P.J, Carter M.E, Makay B, Carter G.R (2002), Clinical veterinary microbiology Wokfe Pulushing, London WC1 H9LB, England, p 209-236 48 25 Sondi Salopek-Sondi - Silver nanoparticles as antimicrobial agent: "a case smdy on E.coli as a model for gram-negative bacteria" J.Colloid Interface Science 275 (2004) 177-182 26 Sucdeb Pal, Yu K T., Joon M S ''Does the antibacterial activity of silver nanoparticles depend on theshape of the nanoparticle'' Application & Environement, Microbiology 73 (6) (2007) 1712-1720 27 Weinstein D.L, Carsiotis M, Lissner CH.R, Osrien A.D (1984), Flagella Help Salmonella typhimurium survie within murine macrophages Infection and Immuniti, p 819-825 28 Sondi Salopek-Sondi - Silver nanoparticles as antimicrobial agent: "a case smdy on E.coli as a model for gram-negative bacteria" J.Colloid Interface Science 275 (2004) 177-182 PHỤ LỤC Bảng 4.5 Khả kháng E.coli nano bạc theo thời gian Mật độ E.coli (logCFU/ml) Nồng độ (ppm) 6,25 12.5 25 50 Thờigian (h) Đ 7,12±0.4 7,12±0.05 7,12±0.04 7,12±0.04 7,12±0.04 6,8±0.05 4,96±0.04 3,1±0.04 2,4±0.04 7,21±0.05 5,76±0.06 4,53±0.05 2,27±0.03 8,4±0.04 12 7,02±0.04 5,74±0.06 2,18±0.04 8,24±0.04 16 7,17±0.05 5,96±0.04 1,6±0.05 8,34±0.04 20 7,26±0.04 6,28±0.04 1,54±0.04 8,37±0.03 24 7,39±0.04 6,99±0.05 0 8,36±0.03 36 7,43±0.04 7,15±0.05 0 8,22±0.04 48 7,38±0.05 7,17±0.04 0 8,35±0.05 60 7,28±0.05 7,09±0.03 0 8,34±0.03 72 7,18±0.05 7,07±0.03 0 8,13±0.04 ... phương pháp thích hợp để xác định khả kháng khuẩn gram âm nano bạc - Xác định nồng độ ức chế tối thiểu nano bạc vi khuẩn gram âm - Xác định khả kháng khuẩn gram âm nano bạc theo thời gian 1.3 Ý nghĩa... định khả kháng khuẩn gram âm nano bạc + Kết luận án sở khoa học cho nghiên cứu hiệu lực kháng khuẩn hạt nano kim loại vi khuẩn Các kết luận án sở cho nghiên cứu ứng dụng nano bạc chế tạo hạt nano. .. 82,2 2.1.3 Tính kháng khuẩn nano bạc 2.1.3.1 Cơ chế kháng khuẩn nano bạc Nano bạc nghiên cứu ứng dụng vào việc kháng khuẩn bạc kháng sinh tự nhiên không gây tác dụng phụ Nano bạc không gây phản