i LỜI CẢM ƠN Tôi xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu, khoa Nuôi trồng thủy sản, phòng Đào tạo Đại học và sau đại học Trường Đại học Nha Trang. Phòng công nghệ sinh học - Trung tâm Quốc gia giống Hải sản miền Trung - Viện nghiên cứu Nuôi trồng thủy Sản 3 đã tổ chức giảng dạy, quan tâm giúp đỡ và tạo mọi điều kiện cho tôi trong suốt thời gian học tập và nghiên cứu. Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS. Hoàng Thị Bích Mai đã dìu dắt tôi trên con đường nghiên cứu khoa học, trực tiếp hướng dẫn tận tình, chu đáo trong suốt quá trình thực hiện đề tài và viết luận văn. Xin cảm ơn Ths Nguyễn Văn Hùng đã nhiệt tình hướng dẫn và đóng góp ý kiến trong quá trình thực hiện đề tài và viết luận văn. Xin gửi lời cảm ơn gia đình, bạn bè, đồng nghiệp đã động viên, khích lệ tôi trong suốt quá trình học tập và thực hiện đề tài. ii LỜI CAM ĐOAN Các số liệu và kết quả của luận án tốt nghiệp cao học là một phần trong nội dung nghiên cứu của đề tài nhánh thuộc đề tài Khoa học Công nghệ Trọng điểm cấp Nhà nước Mã số KC.06.05/06-10, giai đoạn 2007 – 2010 do Viện Hải dương học chủ trì. Được sự đồng ý của chủ nhiệm đề tài, học viên đã cùng tham gia thực hiện đề tài và cùng sử dụng số liệu của đề tài trên. Tôi xin cam đoan các số liệu, các kết quả trình bày trong luận văn hoàn toàn trung thực và học viên đã trực tiếp tham gia thực hiện nghiên cứu. Chưa từng ai công bố trong bất kỳ công trình khoa học nào trước đây. Người cam đoan Nguyễn Thị Thu Hằng iii MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN i LỜI CAM ĐOAN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CÁC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC CÁC BẢNG vii DANH MỤC CÁC HÌNH viii MỞ ĐẦU 1 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 3 1.1. HỆ THỐNG PHÂN LOẠI CÁ THIA ĐỒNG TIỀN BA CHẤM 3 1.2. MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA CÁ THIA ĐỒNG TIỀN BA CHẤM 3 1.2.1. Đặc điểm hình thái, màu sắc, kích thước 3 1.2.1.1. Hình thái 3 1.2.1.2. Màu sắc 4 1.2.1.3. Kích thước 4 1.2.2. Phân bố môi trường sống 4 1.2.3. Đặc điểm dinh dưỡng 5 1.2.4. Đặc điểm sinh trưởng. 5 1.2.5. Đặc điểm sinh học sinh sản 6 1.2.5.1. Giới tính 6 1.2.5.2. Tuổi và kích thước tham gia sinh sản lần đầu 6 1.2.5.3. Mùa vụ và tập tính sinh sản 7 1.2.5.4. Sức sinh sản 8 1.2.5.5. Quá trình phát triển của phôi 8 1.3. TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU CÁ CẢNH 9 1.3.1.Trên thế giới 9 1.3.1.1. Những nghiên cứu về sinh sản 10 1.3.1.2. Nghiên cứu sử dụng kích dục tố trong sinh sản cá biển 12 1.3.2.Tại Việt Nam 14 1.4. NGHIÊN CỨU VỀ BỆNH 17 iv CHƯƠNG 2: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1. ĐỐI TƯỢNG, THỜI GIAN, ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU 19 2.2. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.2.1. Dụng cụ thí nghiệm: gồm kính hiển vi quang học, bộ giải phẫu cá, nhiệt kế, khúc xạ kế, máy đo pH, bộ Test-kit của các yếu tố môi trường: ammonia, nitrite 19 2.2.2. Nguồn nước thí nghiệm 20 2.2.3. Nguồn cá thí nghiệm 21 2.2.4. Thí nghiệm nuôi phát dục thành thục cá bố mẹ 21 2.2.4.1. Thí nghiệm nuôi phát dục cá bố mẹ bằng các loại thức ăn khác nhau. 21 2.2.4.2. Nuôi vỗ cá bố mẹ 23 2.2.5. Thử nghiệm sinh sản nhân tạo cá thia đồng tiền ba chấm 24 2.2.5.1. Ảnh hưởng của các loại kích dục tố đến khả năng sinh sản của cá thia đồng tiền ba chấm 24 2.2.5.2.Ảnh hưởng của liều lượng kích dục tố (chọn từ kết quả mục 2.2.5.1) lên khả năng sinh sản của cá thia đồng tiền ba chấm 27 2.2.5.3. Cho cá đẻ 28 2.2.5.4.Phương pháp ấp trứng và sự phát triển của phôi 28 2.2.6. Bệnh 30 2.3. PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH CÁC YẾU TỐ MÔI TRƯỜNG 31 2.4. PHƯƠNG PHÁP TÍNH TOÁN VÀ XỬ LÝ SỐ LIỆU 31 2.4.1. Công thức tính toán 31 2.4.2. Xử lý số liệu 31 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 33 3.1. NUÔI PHÁT DỤC THÀNH THỤC CÁ BỐ MẸ 33 3.1.1. Một số yếu tố môi trường trong hệ thống bể nuôi phát dục thành thục cá bố mẹ. 33 3.1.2. Ảnh hưởng của thức ăn đến tỷ lệ sống của cá bố mẹ 33 3.1.3. Ảnh hưởng của thức ăn đến tỷ lệ thành thục và hệ số thành thục của cá 35 3.1.3.1. Ảnh hưởng của thức ăn đến tỷ lệ thành thục của cá 35 3.1.3.2. Ảnh hưởng của thức ăn đến hệ số thành thục 36 v 3.1.4. Ảnh hưởng của các loại thức ăn đến sức sinh sản tuỵêt đối (F) và tương đối (SSSTĐ) của cá thia đồng tiền ba chấm 37 3.1.5. Kết quả nuôi vỗ cá thia đồng tiền ba chấm 38 3.1.5.1. Các yếu tố môi trường 38 3.1.5.2. Kết quả nuôi vỗ cá thia đồng tiền ba chấm bố mẹ 38 3.1.6. Một số bệnh thường gặp trong quá trình nuôi phát dục 39 3.2. THỬ NGHIỆM SINH SẢN CÁ THIA ĐỒNG TIỀN BA CHẤM 40 3.2.1. Kích thước cá bố mẹ tham gia sinh sản 40 3.2.2. Ảnh hưởng của các loại kích dục tố đến một số chỉ tiêu sinh sản nhân tạo cá thia 40 3.2.3. Ảnh hưởng của liều lượng kích dục tố LHRHa đến một số chỉ số sinh sản của cá thia 42 3.2.4. Cho cá đẻ 44 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Ý KIẾN 49 4.1. Kết luận 49 4.2. Đề xuất ý kiến 49 TÀI LIỆU THAM KHẢO 51 PHỤ LỤC vi DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CÁC CHỮ VIẾT TẮT ppt : phần nghìn o C : nhiệt độ %: phần trăm DO: hàm lượng oxy hòa tan (mg/l) HSTT: hệ số thành thục F: sức sinh sản tuyệt đối SSTĐ: sức sinh sản tương đối TLS: tỷ lệ sống TLTT: tỷ lệ thành thục TLN: tỷ lệ nở CĐCN: cường độ cảm nhiễm TLCN: tỷ lệ cảm nhiễm KDT: kích dục tố HCG : Human chorionic gonadotropin LHRHa: Luteinising hormone-releasing hormone analogue vii DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1: Các giai đoạn phát triển phôi 9 Bảng 2.1: Các loại thức ăn sử dụng và phương pháp cho ăn trong các lô thí nghiệm 22 Bảng 3.1: Một số yếu tố môi trường trong hệ thống bể nuôi phát dục cá thia đồng tiền ba chấm 33 Bảng 3.2: Tỷ lệ sống của cá thia đồng tiền ba chấm ở các lô thí nghiệm nuôi phát dục bằng các loại thức ăn khác nhau 34 Bảng 3.3: Tỷ lệ (%) thành thục cá thia đồng tiền ba chấm ở các lô thí nghiệm 35 Bảng 3.4: Hệ số thành thục của cá thia đồng tiền ba chấm ở các lô thí nghiệm 36 Bảng 3.5: Sức sinh sản của cá thia đồng tiền ba chấm trong các nghiệm thức 37 Bảng 3.6 : Một số yếu tố môi trường trong bể nuôi vỗ 38 Bảng 3.7: Kết quả nuôi vỗ cá thia đồng tiền ba chấm 39 Bảng 3.9: Ảnh hưởng của các loại kích dục tố đến các chỉ số sinh sản của cá thia đồng tiền ba chấm 41 Bảng 3.10: Các yếu tố môi trường trong bể cho cá đẻ 42 Bảng 3.11: Thời gian hiệu ứng của các liều lượng khác nhau trong sinh sản nhân tạo cá thia đồng tiền ba chấm 42 Bảng 3.12: Sức sinh sản, tỷ lệ thụ tinh, tỷ lệ nở của cá thia đồng tiền ba chấm kích thích bằng liều lượng kích dục tố khác nhau. 43 Bảng 3.13: Các yếu tố môi trường trong bể ấp trứng 44 Bảng 3.14: Các giai đoạn phát triển phôi của cá thia đồng tiền ba chấm 45 Bảng 3.15: Kết quả cho cá đẻ 48 viii DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 1.1: Cá thia đồng tiền ba chấm (Dascyllus trimaculatus) 4 Hình 1.2: Bản đồ phân bố địa lý trên thế giới của cá thia đồng tiền ba chấm 5 Hình 2.1: Sơ đồ khối nội nghiên cứu của đề tài 19 Hình 2.2: Hệ thống bể thí nghiệm 20 Hình 2.3: Sơ đồ xử lý nguồn nước cung cấp cho tất cả thí nghiệm. 20 Hình 2.4: Sơ đồ mô tả thí nghiệm nuôi phát dục cá bố mẹ bằng các loại thức ăn khác nhau. 21 Hình 2.5: Sơ đồ thí nghiệm các loại kích dục tố HCG, Surfagon, LHRH-a. 24 Hình 2.6: Kỹ thuật vuốt trứng và lấy sẹ 26 Hình 2.7: Thụ tinh nhân tạo 27 Hình 2.8: Sơ đồ thí nghiệm các liều lượng kích dục tố LHRH-a 27 Hình 2.9: Thiết bị cho cá đẻ 29 Hình 2.10: Thiết bị ấp trứng 29 Hình 3.1: Tuyến sinh dục cái (a) và đực (b) của cá thia đồng tiền ba chấm 37 Hình 3.2: Một số hình ảnh cá thia đồng tiền ba chấm bệnh 39 Hình 3.3: Các giai đoạn phát triển phôi của cá thia đồng tiền ba chấm 47 1 MỞ ĐẦU Trong những năm gần đây, bên cạnh những loài cá biển có giá trị kinh tế được nghiên cứu sản xuất phục vụ nhu cầu thực phẩm tiêu thụ nội địa và xuất khẩu (cá chẽm, cá mú, cá giò…) thì các loài cá cảnh biển cũng đang được quan tâm của các nhà nghiên cứu khoa học và người dân nuôi giải trí. Do chúng đa dạng về màu sắc, hình dạng và tập tính sống nên ngày càng thu hút nhiều người nuôi làm cảnh, trưng bày ở các khu du lịch và giải trí. Bên cạnh đó, cá cảnh biển còn có giá trị kinh tế cao. Hàng năm trên thế giới tiêu thụ khoảng 35 triệu con cá cảnh biển, doanh thu đạt hơn 200 triệu USD với nhiều nhóm cá có giá trị như: cá thia, cá bác sĩ, cá bướm, cá ngựa (30 - 40 USD/con), cá hoàng đế (50 - 100 USD/con), cá rồng biển (5000 USD/con) [ 75]. Một trong những loài hiện nay đang được yêu thích là cá thia đồng tiền ba chấm (Dascyllus trimaculatus) hay còn gọi cá Domino. Đây là nhóm cá rạn san hô, phân bố rộng, kích thước nhỏ với ba chấm trắng trên thân đen mượt mà (một chấm trên đầu và hai chấm ở hai bên hông) và đang được nhiều người nuôi cá quan tâm, trên thị trường thế giới chúng được bán với giá khá cao 2,5 — 4,99 USD/con. Tuy nhiên cũng như nhiều loài khác, chúng chủ yếu được khai thác ngoài tự nhiên đặc biệt là ở nước ta. Như vậy, nếu chỉ khai thác chúng từ tự nhiên thì không những không đáp ứng đủ nhu cầu thị trường mà còn làm cạn kiệt nguồn lợi (Wabnitz, 2003) [65]. Ở nước ta, cá cảnh biển được khai thác ở các vùng biển ven bờ Khánh Hòa, Phú Quốc, Hà Tiên Các loài cá cảnh biển đều có sức sinh sản thấp, phần lớn loài quí hiếm không đẻ được trong điều kiện nuôi nhốt, khi nhu cầu tăng thì nguồn lợi các loài cá này giảm nhanh chóng. Khả năng tự phục hồi của chúng rất chậm, do vậy không ít loài cá cảnh biển nằm trong danh mục sách đỏ hoặc CITES (Công ước quốc tế về kinh doanh các loài có nguy cơ bị đe dọa). Biện pháp bảo vệ nguồn lợi cá cảnh biển nói riêng và sinh vật biển nói chung là thành lập các khu bảo tồn biển (MPA) hoặc phát triển nuôi trồng nhằm giảm áp lực khai thác ngoài tự nhiên. Khu bảo tồn biển ở nước ta mới được thành lập trong những năm gần đây, kết quả của nó chưa cao cả về nâng cao nhận thức môi trường của cộng đồng lẫn bảo vệ sinh cảnh. Các nghiên cứu nuôi sinh vật biển (cá ngựa, cá hải quì ) chỉ 2 thành công ở qui mô nhỏ hoặc chỉ mang tính lý thuyết, cho nên để phục hồi nguồn lợi thì chưa thật sự hiệu quả. Vì thế việc phát triển nghề nuôi cá cảnh vừa để tạo sản phẩm, vừa nhằm giảm áp lực khai thác tự nhiên, góp phần bảo vệ nguồn lợi là điều hết sức cần thiết. Xuất phát từ nhu cầu trên, cá thia đồng tiền ba chấm là một trong ba loài cá cảnh biển đã được Bộ Khoa học và Công nghệ đưa vào danh sách các loài cá cảnh cần nghiên cứu sản xuất giống nhân tạo phục vụ xuất khẩu thực hiện từ năm 2007 đến 2010. Được sự phân công của Khoa Nuôi trồng thủy sản và sự thống nhất của giáo viên hướng dẫn và chủ nhiệm đề tài “Nghiên cứu công nghệ sản xuất cá thia đồng tiền ba chấm Dascyllus trimaculatus phục vụ xuất khẩu.Tôi thực hiện đề tài: "Thử nghiệm sinh sản nhân tạo cá thia đồng tiền ba chấm Dascyllus trimaculatus ". Luận án tốt nghiệp cao học là một phần nội dung nghiên cứu Khoa học Công nghệ Trọng điểm cấp Nhà nước Mã số KC.06.05/06-10, giai đoạn 2007 - 2010 và học viên là người cùng tham gia thực hiện đề tài. Mục tiêu của luận án: Xác định được các chỉ tiêu, kỹ thuật cơ bản trong sinh sản nhân tạo cá thia đồng tiền ba chấm. Nội dung nghiên cứu:  Thử nghiệm nuôi phát dục thành thục cá bố mẹ bằng các loại thức ăn khác nhau trong điều kiện nuôi nhốt.  Thử nghiệm sinh sản nhân tạo cá thia đồng tiền ba chấm. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn Kết quả của đề tài góp phần cung cấp các dẫn liệu khoa học phục vụ sản xuất giống nhân tạo cá thia đồng tiền ba chấm, góp phần thúc đẩy sự phát triển nghề nuôi cá cảnh biển Việt Nam đúng với tiềm năng của mình. [...]... 14 h - Kiểm tra sự thành thục của cá giống như phần 2.2.4 2.2.5 Thử nghiệm sinh sản nhân tạo cá thia đồng tiền ba chấm 2.2.5.1 Ảnh hưởng của các loại kích dục tố đến khả năng sinh sản của cá thia đồng tiền ba chấm - Tuyển chọn cá Cá thia đồng tiền ba chấm được nuôi vỗ đến giai đoạn thành thục được tuyển chọn và cho đẻ tại Trung tâm Quốc gia giống Hải sản miển Trung Cá có kích thước chiều dài từ 10 –... Vược: Perciformes Phân bộ cá Vược: Percoidei Họ cá Thia: Pomacentridae Giống cá thia đồng tiền: Dascyllus Loài cá thia đồng tiền ba chấm: Dascyllus trimaculatus (Rüppell, 1829) Tên tiếng Anh: Three Spot Damselfish 1.2 MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA CÁ THIA ĐỒNG TIỀN BA CHẤM 1.2.1 Đặc điểm hình thái, màu sắc, kích thước 1.2.1.1 Hình thái Cá thia đồng tiền ba chấm (Dascyllus trimaculatus) có thân hình... và xây xước Số lượng cá cho mỗi nghiệm thức là 20 con Sơ đồ thí nghiệm Thử nghiệm các loại kích dục tố trong sinh sản nhân tạo (thụ tinh tự nhiên, thụ tinh nhân tạo) Tuyển chọn cá Kích thích cá dòng chảy Liều sơ bộ HCG 10UI/kg cá Chọn cá trứng tốt, sẹ đặc cho đẻ LHRH-a 10µg/kg cá Surfagon 10µg/kg cá Liều quyết định HCG 20UI/kg cá LHRH-a 20µg/kg cá Surfagon 20µg/kg cá Kiểm tra các chỉ tiêu: Thời gian... (giờ), sức sinh sản thực tế, tỷ lệ thụ tinh (%), tỷ lệ nở (%) Chọn loại kích dục tố thích hợp cho sinh sản nhân tạo cá thia Hình 2.5: Sơ đồ thí nghiệm các loại kích dục tố HCG, Surfagon, LHRH-a 24 Cá thia đồng tiền ba chấm sau khi đã được kiểm tra, tiến hành tiêm cá bằng các loại kích dục tố khác nhau và đưa vào bể cho đẻ, trong quá trình thử nghiệm chúng tôi sử dụng phương pháp cho đẻ nhân tạo thụ tinh... thụ tinh tự nhiên và thụ tinh nhân tạo Thử nghiệm đánh giá ảnh hưởng của của các loại kích dục tố khác nhau đến các chỉ tiêu sinh sản của cá thia đồng tiền ba chấm (Dascyllatus trimaculatus) Lặp lại 3 lần cho mỗi nghiệm thức - Phương pháp kích thích cho đẻ nhân tạo thụ tinh tự nhiên Kiểm tra mức độ thành thục của tất cả cá bố mẹ trước khi kích thích sinh sản, bố trí vào các bể kính 100 lít và bể composite... của cá thia đồng tiền ba chấm [73] 1.2.3 Đặc điểm dinh dưỡng Cá thia đồng tiền ba chấm là loài cá ăn tạp, phổ thức ăn rộng: giai đoạn nhỏ ăn sinh vật phù du sống và phù hợp với kích cỡ miệng Đối với cá con và một số cá lười vận động chúng ăn sinh vật nổi xung quanh cá rạn san hô, rong tảo cộng sinh với san hô, chất mùn bã hữu cơ, khi trưởng thành thức ăn của chúng là các loài giáp xác, mảnh vụn thịt cá. .. 75.000 trứng /cá cái Đường kính trung bình 0,7 mm Đối với loài Dascyllus abisella sức sinh sản dao động trong khoảng 23.100 – 52.800 trứng /cá cái, lớn hơn so với loài D trimaculatus Trong khi đó loài cá thia đồng tiền ba chấm có kích thước lớn ở vùng biển Hawaii có sức sinh sản 10.000 trứng /cá cái (Thresher, 1984) [64] Tuy nhiên, theo tài liệu nghiên cứu của Wilkerson (1998) sức sinh sản của cá thia từ 1.000... tinh nhân tạo Các yếu tố môi trường được theo dõi chặt chẽ hàng ngày 2.2.5.2.Ảnh hưởng của liều lượng kích dục tố (chọn từ kết quả mục 2.2.5.1) lên khả năng sinh sản của cá thia đồng tiền ba chấm Sơ đồ thí nghiệm Ảnh hưởng các liều lượng kích dục tố trong sinh sản nhân tạo Tuyển chọn cá Kích thích dòng chảy Liều sơ bộ 5µgLHRHa + 2,5mg Dom/kg cá Chọn cá thể tsd tốt cho đẻ 10µgLHRHa + 2,5mg Dom/kg cá 15µgLHRHa... cá khoang cổ, cá ngựa và thia đồng tiền có thể sinh trưởng và sinh sản như trong tự nhiên Theo thống kê của GMAD (Global Marine Aquariun Database), cá thia đồng tiền chiếm tỷ lệ 39 % trong tổng số cá cảnh được nhập vào thị trường Mỹ [65] Những năm gần đây, ở Nhật Bản đã có một số nghiên cứu về loài cá thia đồng tiền ba chấm như nghiên cứu của Makoto và Ryozo (2001) về cấu tạo, vị trí khác nhau của... đông lạnh (như tôm, cá cơm, cá nục, cá ngân đông lạnh) Đây là loài cá rất dễ thích nghi với môi trường sống mới, đặc biệt là môi trường nuôi nhân tạo Ngoài ra, còn tìm thấy trong dạ dày cá có cả trứng cá thia đồng tiền [11] 1.2.4 Đặc điểm sinh trưởng Cá thia đồng tiền ba chấm có tốc độ tăng trưởng tương đối chậm Giai đoạn trưởng thành loài cá này đạt chiều dài khoảng 11 - 13 cm, cá bố mẹ có chiều dài . thia đồng tiền ba chấm ở các lô thí nghiệm 35 Bảng 3.4: Hệ số thành thục của cá thia đồng tiền ba chấm ở các lô thí nghiệm 36 Bảng 3.5: Sức sinh sản của cá thia đồng tiền ba chấm trong các nghiệm. cá bố mẹ 23 2.2.5. Thử nghiệm sinh sản nhân tạo cá thia đồng tiền ba chấm 24 2.2.5.1. Ảnh hưởng của các loại kích dục tố đến khả năng sinh sản của cá thia đồng tiền ba chấm 24 2.2.5.2.Ảnh. 3.2. THỬ NGHIỆM SINH SẢN CÁ THIA ĐỒNG TIỀN BA CHẤM 40 3.2.1. Kích thước cá bố mẹ tham gia sinh sản 40 3.2.2. Ảnh hưởng của các loại kích dục tố đến một số chỉ tiêu sinh sản nhân tạo cá thia