LỜI CÁM ƠN Sau tháng nghiên cứu làm đề tài: “Nghiên cứu tách chiết khảo sát hoạt tính chống oxy hóa dịch chiết từ vỏ long” đến hoàn thành Để đạt kết nghiên cứu ngày hôm em nhận giúp đỡ quý thầy, cô gia đình bạn bè Lời em xin gửi tới Ban Giám hiệu phòng ban trường Đại học Nha Trang, cán giảng viên công tác trường lời chúc sức khỏe niềm tự hào sống học tập trường Đặc biệt em xin gửi lời cám ơn chân thành sâu sắc tới T.S Huỳnh Nguyễn Duy Bảo tận tình hướng dẫn, đơn đốc, bảo tạo điều kiện cho em hoàn thành đề tài Em xin chân thành cám ơn quý thầy, cô khoa Công nghệ Thực phẩm truyền đạt cho em kiến thức quý báu tận tình giải đáp thắc mắc khó khăn em q trình học tập thực đề tài Xin cám ơn cán phịng thí nghiệm: Cơng nghệ Thực phẩm, Cơng nghệ Chế biến, phịng Hóa sinh – Vi sinh, Viện Công nghệ Sinh học môi trường tạo điều kiện thuận lợi cho em hoàn thành đề tài Cuối em xin chân thành cám ơn gia đình, bạn bè anh chị khóa trước động viên góp ý kiến giúp em hồn thành đề tài Nha Trang, ngày 11 tháng 07 năm 2012 Sinh viên thực Nguyễn Thị Mỹ Nương -i- MỤC LỤC LỜI CÁM ƠN MỤC LỤC i DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT iv DANH MỤC CÁC BẢNG v DANH MỤC CÁC HÌNH vi MỞ ĐẦU 1 Lý thực đề tài .1 Mục đích ý nghĩa đề tài Chương TỔNG QUAN 1.1.TỔNG QUAN VỀ THANH LONG 1.1.1 Tên gọi 1.1.2 Đặc điểm hình thái - sinh trưởng 1.1.3 Phân loại long 1.1.4 Tình hình sản xuất tiêu thụ long Việt Nam giới .6 1.2.TỔNG QUAN VỀ CHẤT CHỐNG OXY HÓA TRONG RAU QUẢ 1.2.1 Giới thiệu chất chống oxy hóa .8 1.2.2 Một số chất chống oxy hóa điển hình .10 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP .17 2.1.NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ HÓA CHẤT 17 2.1.1 Nguyên liệu .17 2.1.2 Hóa chất 17 2.2.PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.2.1 Bố trí thí nghiệm tách chiết chất chống oxy hóa từ vỏ long .18 2.2.1.1 Quy trình dự kiến chiết tách chất chống oxy hóa từ vỏ long .18 2.2.1.2 Bố trí thí nghiệm nghiên cứu ảnh hưởng dung môi chiết đến khả chống oxy hóa dịch chiết từ vỏ long (TN1) 19 2.2.1.3 Bố trí thí nghiệm nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ dung môi chiết đến khả chống oxy hóa dịch chiết từ vỏ long (TN2) 21 - ii 2.2.1.4 Bố trí thí nghiệm nghiên cứu ảnh hưởng tỷ lệ dung môi/nguyên liệu đến khả chống oxy hóa dịch chiết từ vỏ long (TN3) 23 2.2.1.5 Bố trí thí nghiệm nghiên cứu ảnh hưởng thời gian ngâm chiết đến khả chống oxy hóa dịch chiết từ vỏ long (TN4) 24 2.2.1.6 Bố trí thí nghiệm nghiên cứu ảnh hưởng nhiệt độ ngâm chiết đến khả chống oxy hóa dịch chiết từ vỏ long (TN5) 26 2.2.1.7 Bố trí thí nghiệm ảnh hưởng số lần chiết đến khả chống oxy hóa dịch chiết từ vỏ long (TN6) 27 2.2.2 PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH 29 2.2.2.1 Xác định thành phần khối lượng long 29 2.2.2.2 Xác định số thành phần hóa học vỏ long 29 2.2.2.3 Phân tích khả khử gốc tự 1,1-diphenyl-2pycrylhydrazyl (DPPH) 30 2.2.2.4 Phân tích tổng lực khử 30 2.2.2.5 Xác định độ ẩm nguyên liệu 30 2.3.PHƯƠNG PHÁP XỬ LÝ SỐ LIỆU 30 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 31 3.1.Thành phần khối lượng long 31 3.2.Hàm lượng nước, betacyanin Vitamin C vỏ long 32 3.3.Ảnh hưởng dung môi chiết đến khả chống oxy hóa dịch chiết từ vỏ long .32 3.4 Ảnh hưởng nồng độ dung môi đến khả chống oxy hóa dịch chiết từ vỏ long 35 3.5.Ảnh hưởng tỷ lệ dung mơi/ngun liệu đến hoạt tính chống oxy hóa dịch chiết từ vỏ long 37 3.6 Ảnh hưởng thời gian ngâm chiết đến khả chống oxy hóa dịch chiết từ vỏ long 40 3.7.Ảnh hưởng nhiệt độ ngâm chiết đến hoạt tính chống oxy hóa dịch chiết từ vỏ long 42 3.8.Ảnh hưởng số lần chiết đến khả chống oxy hóa dịch chiết từ vỏ long 45 - iii 3.9.Đề xuất quy trình tách chiết chất chống oxy hóa từ vỏ long 47 KẾT LUẬN .51 ĐỀ XUẤT Ý KIẾN 52 TÀI LIỆU THAM KHẢO 53 PHẦN PHỤ LỤC - iv - DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT MĐC: Mẫu đối chứng UV – Vis (Ultraviolet – Visite): Tử ngoại-khả kiến v/v (Volume/volume): thể tích/thể tích v/w (Volume/weight): thể tích/khối lượng TN: Thí nghiệm DMôi: Dung môi N.Liệu: Nguyên liệu -v- DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Thành phần sinh hóa long 100g phần ăn Bảng 3.1 Thành phần khối lượng long 31 Bảng 3.2 Hàm lượng nước, betacyanin Vitamin C vỏ long trình bày bảng 3.2 32 Bảng 3.3 Kết xác định hàm lượng betacyanin lần chiết dịch chiết từ vỏ long .50 - vi - DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Hình ảnh long Hình 1.2 Hình ảnh loại long Hình 1.3 Nguồn chứa nhiều betaxanthin 10 Hình 1.4 Nguồn chứa nhiều betacyanin 10 Hình 1.5 Cấu trúc phân tử acid betalamic vài betacyanin thường gặp 11 Hình 1.6 Thực phẩm chứa Vitamin E công thức cấu tạo Vitamin E .14 Hình 1.7 Cơng thức cấu tạo vitamin C 15 Hình 2.1 Hình ảnh nguyên liệu vỏ long sau xử lý 17 Hình 2.2 Sơ đồ quy trình dự kiến tách chiết chất chống oxy hóa từ vỏ .18 Hình 2.3 Sơ đồ bố trí thí nghiệm nghiên cứu ảnh hưởng dung môi chiết đến khả chống oxy hóa dịch chiết từ vỏ long 20 Hình 2.4 Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định nồng độ dung mơi chiết chất có khả chống oxy hóa cao .22 Hình 2.5 Sơ đồ bố trí thí nghiệm nghiên cứu ảnh hưởng tỷ lệ dung môi/nguyên liệu đến khả chống oxy hóa dịch chiết từ vỏ long 23 Hình 2.6 Sơ đồ bố trí thí nghiệm nghiên cứu ảnh hưởng thời gian ngâm chiết đến khả chống oxy hóa dịch chiết từ vỏ long 25 Hình 2.7 Sơ đồ bố trí thí nghiệm nghiên cứu ảnh hưởng nhiệt độ chiết đến khả chống oxy hóa dịch chiết từ vỏ long .26 Hình 2.8 Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định số lần chiết chất cho dịch chiết cịn hoạt tính chống oxy hóa từ vỏ long 28 Hình 3.1 Dịch chiết từ vỏ long ethanol, methanol, nước cất 33 Hình 3.2 Ảnh hưởng dung môi chiết đến khả khử gốc tự DPPH dịch chiết từ vỏ long 34 Hình 3.3 Ảnh hưởng dung mơi chiết đến tổng lực khử dịch chiết từ vỏ long 34 Hình 3.4 Dịch chiết từ vỏ long với nồng độ dung mơi khác 36 Hình 3.5 Ảnh hưởng nồng độ ethanol đến khả khử gốc tự DPPH dịch chiết từ vỏ long .36 - vii Hình 3.6 Ảnh hưởng nồng độ ethanol đến tổng lực khử dịch chiết từ vỏ long 37 Hình 3.7 Dịch chiết từ vỏ long với tỷ lệ dung môi/nguyên liệu (v/w) khác 38 Hình 3.8 Ảnh hưởng tỷ lệ dung môi/nguyên liệu đến khả khử gốc tự DPPH dịch chiết từ vỏ long 38 Hình 3.9 Ảnh hưởng tỷ lệ dung môi/nguyên liệu (v/w) đến tổng lực khử dịch chiết từ vỏ long 39 Hình 3.10 Dịch chiết từ vỏ long với thời gian ngâm chiết 40 Hình 3.11 Ảnh hưởng thời gian chiết đến khả khử gốc tự DPPH dịch chiết từ vỏ long 41 Hình 3.12 Ảnh hưởng thời gian chiết đến tổng lực khử dịch chiết từ vỏ long 41 Hình 3.13 Dịch chiết từ vỏ long nhiệt độ khác 43 Hình 3.14 Ảnh hưởng nhiệt độ chiết đến khả khử gốc tự DPPH dịch chiết từ vỏ long 43 Hình 3.15 Ảnh hưởng nhiệt độ chiết đến tổng lực khử dịch chiết từ vỏ long 44 Hình 3.16 Dịch chiết vỏ long với lần chiết khác 45 Hình 3.17 Ảnh hưởng số lần chiết đến khả khử gốc tự DPPH dịch chiết từ vỏ long 46 Hình 3.18 Ảnh hưởng số lần chiết đến tổng lực khử dịch chiết từ vỏ long 46 Hình 3.19 Sơ đồ quy trình tách chiết chất chống oxy hóa từ vỏ long .48 Hình 3.20 Sản phẩm dịch chiết chất chống oxy hóa thu từ vỏ 49 -1- MỞ ĐẦU Lý thực đề tài Ngày xã hội tiến dần vào hội nhập kinh tế thị trường, đời sống người ngày tăng cao kéo theo yêu cầu cao lúc trước Cụ thể yêu cầu sử dụng thực phẩm, ngày thực phẩm không đơn đáp ứng nhu cầu ăn uống ngày mà cịn phải có khả chữa bệnh, làm đẹp số chức khác… Đặc biệt hợp chất chiết xuất từ tự nhiên có ưu điểm định đáp ứng yêu cầu người Hiện nay, bệnh ung thư, tim mạch, đau khớp, lão hóa sớm, đục thủy tinh thể… xuất ngày nhiều Vì vậy, nhu cầu sử dụng hợp chất có hoạt tính sinh học từ tự nhiên loại vitamin C, vitamin E, lycopene, betacyanin, betacarotene… ngày cao Trong năm gần đây, bên cạnh loại đặc sản người tiêu dùng nước biết đến từ lâu cà phê Đaklak, bưởi Phúc Trạch, nước mắm Phú Quốc, vải thiều Lục Ngạn, long Bình Thuận trở thành mặt hàng nhà nước bảo hộ nhãn hiệu độc quyền phạm vi nước giới Hiện nay, Việt Nam bốn quốc gia có sản lượng long nhiều giới Mà phần lớn Bình Thuận, tổng sản lượng long đạt 300 nghìn tấn/năm với diện tích trồng long lên đến gần 13.400 hecta Lượng long phần lớn xuất để cung ứng cho thị trường châu Á, châu Âu Ngoài việc xuất long tươi, long cấp đông (Nhật), tỉnh Bình Thuận xây dựng dự án sản xuất long đóng hộp xuất với công suất khoảng 7000 tấn/năm Khi dây chuyền vào hoạt động thải khối lượng lớn vỏ long (trên 2000 tấn/năm) Nếu không xử lý hay tận dụng, lượng phế thải không gây nhiễm mơi trường mà cịn lãng phí lớn vỏ long nguồn chất chống oxy hóa tự nhiên quý giá, đặc biệt chứa hàm lượng betacyanin cao ứng dụng cơng nghiệp màu thực phẩm nói chung bảo quản thực phẩm nói riêng Xuất phát từ điều kiện thực tế với hướng dẫn T.S Huỳnh Nguyễn Duy Bảo em thực đề tài “Nghiên cứu tách chiết khảo sát hoạt -2tính chống oxy hóa dịch chiết từ vỏ long” nhằm tìm điều kiện chiết chất chống oxy hóa từ vỏ long hiệu nhất, từ mở hướng sau việc ứng dụng để bảo quản thực phẩm Mục đích ý nghĩa đề tài  Mục đích đề tài: - Nghiên cứu điều kiện (dung môi, thời gian, nhiệt độ…) ảnh hưởng đến khả chống oxy hóa dịch chiết từ vỏ long - Đề xuất quy trình tách chiết chất chống oxy hóa từ vỏ long  Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn: - Là sở cho việc áp dụng vào việc nghiên cứu tách chiết chất chống oxy hóa từ phế liệu nông sản - Thành công đề tài tạo chất chống oxy hóa đem ứng dụng ngành cơng nghiệp thực phẩm Trong q trình thực đề tài cố gắng hết mình, tìm hiểu kỹ song bước đầu làm quen với công tác nghiên cứu khoa học kiến thức cịn hạn chế, khó khăn điều kiện thực nghiệm nên đề tài không tránh khỏi thiếu sót kính mong bảo q thầy góp ý kiến bạn sinh viên để đề tài hồn thiện Xin chân thành cảm ơn quý thầy cô bạn! - 47 Từ đồ thị hình 3.17 hình 3.18 cho thấy: - Khả chống oxy hóa dịch chiết giảm dần theo số lần chiết - Chiết lần khả khử gốc tự DPPH thấp - Chiết lần lần trích ly gần hồn tồn chất chống oxy hóa từ vỏ long Nên đến lần hoạt tính chống oxy hóa khơng thể Khi tăng số lần chiết (cụ thể lần) hiệu suất chiết giảm dần Xét đến tính hiệu trích ly phải tiêu tốn lượng dung mơi mà cho dịch chiết có hoạt tính chống oxy hóa thấp Vì vậy, chọn số lần chiết để hiệu chiết chất chống oxy hóa từ vỏ long đạt giá trị cao Tóm lại, điều kiện thích hợp để chiết chất chống oxy hóa từ vỏ long sau: - Dung môi chiết: Ethanol - Nồng độ dung môi: Ethanol 96% - Tỷ lệ dung môi/nguyên liệu: 5/1 (v/w) - Thời gian chiết: 60 phút - Nhiệt độ chiết: 50oC - Số lần chiết: lần 3.9 Đề xuất quy trình tách chiết chất chống oxy hóa từ vỏ long Từ kết nghiên cứu đây, đề xuất quy trình tách chiết chất chống oxy hóa từ vỏ long sau: - 48 - Vỏ long phế thải - Dung môi: Ethanol Xử lý thích hợp - Nồng độ dung mơi: 96% (v/v) - Dmôi/N.Liệu: 5/1 (v/w) - Thời gian: 60 phút - Nhiệt độ: 500C Chiết lần Chiết lần Lọc Dịch chiết có hoạt tính chống oxy hóa Hình 3.19 Sơ đồ quy trình tách chiết chất chống oxy hóa từ vỏ long  Thuyết minh quy trình  Vỏ long sau xử lý đem cắt bỏ phần cuống nạo bỏ phần nhầy trắng bên Sau đó, cắt thành miếng nhỏ, mỏng đem xay nhuyễn, định lượng với đơn vị khối lượng nhỏ đem bảo quản lạnh (-180C) đến chiết  Khi chiết, lấy lượng mẫu cần dùng đem rã đông ngâm dung môi Ethanol 96% với tỷ lệ dung môi/ nguyên liệu 5/1 500C ủ sẵn trước bể điều chỉnh nhiệt độ với thời gian 60 phút  Dịch chiết lần nhập chung lại thu dịch chiết có hoạt tính chống oxy hóa - 49  Màu sắc, hoạt tính chống oxy hóa hàm lượng betacyanin dịch chiết từ vỏ long theo quy trình đề xuất Màu sắc, hoạt tính chống oxy hóa dịch chiết từ vỏ long thể hình 3.20 Lần Lần Hình 3.20 Sản phẩm dịch chiết chất chống oxy hóa thu từ vỏ long Từ hình 3.20 cho thấy: Dịch chiết lần điều kiện chọn cho dịch chiết có màu đỏ sẫm, màu chủ yếu betacyanin lượng nhỏ chất khác betaxanthin, vitamin… nên Dịch chiết lần điều kiện tương tự lần cho dịch chiết có màu vàng nhạt, lúc hàm lượng betacyanin cịn thấp nên khơng thể màu lượng nhỏ Màu vàng màu chủ yếu betaxanthin thành phần khác vỏ long Từ cho ta biết dịch chiết vỏ long chứa chất chống oxy hóa chủ yếu betacyanin lượng nhỏ chất khác như: betaxanthin, vitamin… Hoạt tính chống oxy hóa dịch chiết lần thể cao nhiều so với dịch chiết lần - 50 Sau tiến hành phân tích xác định hàm lượng betacyanin dịch chiết Ta thu kết sau: Bảng 3.3 Kết xác định hàm lượng betacyanin lần chiết dịch chiết từ vỏ long Mẫu Nồng độ Betacyanin (mg/L) Chiết lần 18,6 ± 0,2 Chiết lần 2,7 ± 0,2 - 51 - KẾT LUẬN Qua kết nghiên cứu tách chiết xác định hoạt tính chống oxy hóa dịch chiết từ vỏ long thu kết sau: Vỏ long nguồn chứa chất chống oxy hóa tự nhiên cần thiết cho Điều kiện thích hợp để chiết chất chống oxy hóa cao từ vỏ long quy mô nhỏ phương pháp ngâm chiết là: - Dung môi chiết: Ethanol - Nồng độ Ethanol: 96% (v/v) - Tỷ lệ dung môi/nguyên liệu: 5/1 (v/w) - Thời gian: 60 phút - Nhiệt độ: 50oC - Số lần chiết: lần Theo thông số chọn sản phẩm dịch chiết chất chống oxy hóa với hàm lượng betacyanin 21,3mg/L Tuy hàm lượng betacyanin dịch chiết thấp dịch chiết thể hoạt tính chống oxy hóa cao dịch chiết cịn số chất khác có khả chống oxy hóa betaxanthin, vitamin, phenolic Chúng hỗ trợ hoạt động chống oxy hóa nên cần thiết cho - 52 - ĐỀ XUẤT Ý KIẾN Sau tháng thực tập hồn thành đề tài phịng thí nghiệm trường Đại Học Nha Trang thời gian thực tập điều kiện máy móc, thiết bị dụng cụ cịn hạn chế, đồng thời q trình sản xuất sản phẩm quy mơ phịng thí nghiệm nên hiệu thấp, chưa ổn định Do đó, có số kiến nghị sau: - Chất chống oxy hóa chất có vai trị quan trọng sức khỏe chưa nhiều người thực quan tâm tìm hiểu chúng, chưa có nhiều đề tài nghiên cứu Do đó, tơi xin đề nghị cần có nghiên cứu rộng hơn, sâu tách chiết chất chống oxy hóa từ tự nhiên - Vỏ long nguồn chứa nhiều chất chống oxy hóa tốt cho sức khỏe Vì vậy, tác giả nghiên cứu sau cần tận dụng loại nguyên liệu phế thải để tạo cung cấp chất chống oxy hóa từ tự nhiên cho ngành thực phẩm đồng thời làm giảm lượng phế thải, tránh ô nhiễm môi trường công ty chế biến thực phẩm - Do thời gian thực tập ngắn nên chưa nghiên cứu tách chất chống oxy hóa có dịch chiết từ vỏ long Các tác giả sau cần có nghiên cứu sâu vấn đề Với kết nghiên cứu thu từ trính tách chiết khảo sát hoạt tính chống oxy hóa dịch chiết từ vỏ long ta biết khả chống oxy hóa dịch chiết từ vỏ long Qua tơi xin đề nghị có nghiên cứu tương tự nguyên liệu khác nhằm tạo nguồn chất chống oxy hóa phong phú hơn, đồng thời cải thiện môi trường xung quanh - 53 - TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng việt Hồng Minh Châu (2003), Cơ sở hóa học phân tích, nhà xuất KHKT Nguyễn Thị Dâu (2010), Nghiên cứu chiết xuất chất màu betacyanin từ vỏ long (Hylocereus spp), luận văn tốt nghiệp trường Đại Học Nha Trang Nguyễn Thị Phương Thảo (2011), Nghiên cứu khả chống oxy hóa hỗn hợp nước cà rốt – nấm rơm thử nghiệm sản xuất đồ hộp nước cà rốt – nấm rơm, luận văn tốt nghiệp trường Đại Học Nha Trang Vũ Đăng Đơ (1998), Cơ sở lý thuyết q trình hóa học, nhà xuất giáo dục Tiếng Anh Fu, H., Shieh, D., Ho, C., 2002 Antioxydant and free radical scavenging activitives of edible mushroom J Foof Lipids 9, 35-46 Nurliyana, R., Syed Zahir, I., Mustapha Suleiman, K., 3’Aisyah, M.R and 1,4 Kamarul Rahim, K Antioxidant study of pulps and peels of dragon fruits: a comparative study International Food Research Journal 17: 367-375 (2010) Harivandaran, K.V., Rebecca, O.P.S; Chandran, S (2008), Study of optimal temperature, pH and stability of dragon fruit (Hylocereus polyrhizus) peel for use as potential natural colorant, Pakistan J Bio Sci., 11 (18), 2259 – 2263 Vaillant F, Perez A, Davila I, Dornier M, Reynes M (2005) Colorant and antioxidant properties of red pitahaya (Hylocereus sp.) Fruits, 60: 1-7 Website www.rauquavietnam.vn 10 www.suckhoe&doisong.vn 11 www.soconhthuong.binhthuan.gov.vn/Detail_project.asp?ProId=3 12 www.wikipedia.org 13 www.tin247.com/nhung_dieu_can_biet_ve_chat_chong_oxy_hoa-1021417439.html 14 www.tin247.com/dung_chat_chong_oxy_hoa_co_the_ngua_ung_thu-1021696885.html PHẦN PHỤ LỤC PHỤ LỤC PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG NƯỚC CỦA VỎ THANH LONG a Nguyên tắc: Dùng nhiệt độ cao để làm bay nước hết mẫu phân tích Dựa vào hiệu khối lượng mẫu trước sấy để tính hàm lượng nước có mẫu phân tích b Tiến hành: - Chuẩn bị cốc sấy: đem cốc rửa để Sau đó, sấy 105 ÷1100C vịng 30 phút Để nguội bình hút ẩm đem cân - Chuẩn bị mẫu: Nguyên liệu băm nhỏ cân xác khoảng 2g cho vào cốc sấy (đã xác định khối lượng trên) Dùng đũa thủy tinh nhỏ trộn mẫu với Na2SO4 khan đến lúc thấy thành dạng bột rời Cân cốc có chứa mẫu đũa (khối lượng G1) Đưa cốc có chứa mẫu đũa sấy 60÷700C vịng 2h, sau nâng nhiệt độ lên 105÷1100C sấy vịng 2h (thỉnh thoảng trộn đều) Lấy mẫu ra, để nguội bình hút ẩm đem cân (khối lượng G2) Lặp lại trình sấy vài lần đến chênh lệch khối lượng lần cân liên tiếp không 0.2 mg Ghi khối lượng cuối (G2) Hàm lượng nước ngun liệu tính theo cơng thức: %H2O = 100% G: khối lượng mẫu; G1: khối lượng mẫu trướcs sấy; G2: khối lượng mẫu sau sấy PHỤ LỤC XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG BETACYANIN TỔNG SỐ TỪ VỎ THANH LONG a Nguyên tắc: Chiết betacyanin từ mẫu phân tích dung mơi thích hợp Đo độ hấp thụ dịch chiết betacyanin ethanol 538nm xác định hàm lượng betacyanin định luật Lambert-Beer b Tiến hành Mẫu rắn: Cân xác khoảng 1-2g mẫu phân tích cắt nhỏ Thêm 20 ml nước cất Siêu âm phút, nhiệt độ phòng Lọc lấy dịch chiết, phần bã tiếp tục chiết đến lúc dịch chiết khơng có màu Gộp dịch chiết lại cho vào bình định mức thể tích D ml, thêm nước cất đến vạch Đo độ hấp thụ dung dịch 538nm, cuvet 1cm quang kế UV- Vis, dùng nước cất làm dung dịch so sánh (Nếu dung dịch đặc q pha lỗng với hệ số F) Hàm lượng betacyanin tổng số mẫu phân tích tính theo cơng thức: Betacyanin (mg/kg) = Mẫu dung dịch: Lấy xác V ml mẫu dịch chiết cho vào bình định mức D ml Định mức đến vạch nước cất Đo độ hấp thụ dung dịch 538 nm, cuvet 1cm quang kế UV- Vis, dùng nước cất làm dung dịch so sánh Nồng độ betacyanin dung dịch phân tích tính theo cơng thức: Betacyanin (mg/L) = đó: A: độ hấp thụ; D: thể tích bình định mức (ml) F: độ pha lỗng; M: phân tử lượng betacyanin (M = 550 g/mol) ε: hệ số hấp thụ betacyanin nước ( ε = 6000 L/mol.cm) d: bề dày cuvet (d = 1cm); G: khối lượng mẫu (g) PHỤ LỤC XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG VITAMIN C I Mục đích: xác định hàm lượng Vitamin C mẫu thử II Quy trình thực Chuẩn bị dung dịch:  Dung dịch thị 1% tinh bột Cho 0.5g tinh bột hòa tan vào 50 ml nước cất nóng gần sơi Hịa tan hồn tồn để nguội trước sử dụng (có thể dung dịch 0,5%)  Dung dịch I2 Hòa tan g KI vào 0,268 g KIO3 200 ml nước cất Thêm 30 ml H2SO4 3M Cho dung dịch vào ống đong 500 ml pha loãng dung dịch nước cất đến vạch định mức 500 ml Hòa tan dung dịch hồn tồn Cho dung dịch vào bình 600 ml dán nhãn dung dịch Iôt  Dung dịch Vitamin C Hòa tan 0,250 g Vitamin C 100 ml nước cất Dùng nước cất pha loãng thành 250 ml bình định mức, sau cho vào lọ dán nhãn dung dịch Vitamin C chuẩn  Tiêu chuẩn hóa dung dịch Thêm 25 ml dung dịch chuẩn Vitamin C vào bình 125 ml Thêm 10 giọt dung dịch hồ tinh bột 1% Rửa buret với lượng nhỏ dung dịch Iơt sau cho dung dịch Iơt vào buret Ghi lại vạch thể tích dung dịch ban đầu buret Chuẩn độ dung dịch điểm dừng phản ứng, thấy dấu hiệu màu xanh dương bền 20 s lắc dung dịch Ghi nhận vạch thể tích dung dịch Iơt buret Lượng Iơt dùng cho chuẩn độ thể tích ban đầu trừ thể tích cịn lại sau chuẩn độ Làm lại thí nghiệm chuẩn độ lần Chấp nhận sai khác 0,1 ml PHỤ LỤC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH HOẠT TÍNH CHỐNG OXY HĨA a Xác định hoạt tính khử gốc tự DPPH - Nguyên tắc: chất nguyên cứu có tác dụng chống oxy hóa theo chế dập tắt gốc tự làm giảm màu dd DPPH - Xác định khả cách đo độ hấp thụ bước sóng có hấp thụ cực tím bước sóng 517 nm - Mơ tả: Dùng 0.1-0.2 ml cần đo cho vào 1.8-1.9 ml nước cất cho vào ml cồn Cuối thêm 1ml dd DPPH (nồng độ 0.1 nM pha ethanol) Hỗn hợp lắc để nhiệt độ phịng 30 phút bóng tối Mỗi lần đo mẫu lấy giá trị trung bình Mẫu trắng tiến hành điều kiện không sử dụng flavanoid Sau đem mẫu đo máy UV-Vis bước sóng 517 nm - Tính kết - Xác định khả bắt gốc tự DPPH dung dịch phương pháp dựa vào đường chuẩn - Xây dựng đường chuẩn: Pha 50 ml DPPH 0.1 nm cách cân 0.00917 g DPPH pha vào 50 ml Ethanol  ml DPPH + ml nước cất + ml Ethanol  0.8 ml DPPH + 2.2 ml nước cất + ml Ethanol  0.6 ml DPPH + 2.4 ml nước cất + ml Ethanol  0.4 ml DPPH + 2.6 ml nước cất + ml Ethanol  0.2 ml DPPH + 2.8 ml nước cất + ml Ethanol Hỗn hợp đo bước sóng 517 nm máy UV- Vis ta kết quả: b Xác định tổng lực khử Mô tả: Cho vào ống nghiệm 0.1 – 0.2 ml mẫu cần đo tiếp cho 0.5 ml K3Fe(CN)6 1% bổ sung tiếp 0.8 – 0.9 ml dung dịch đệm (pH = 6.6) cho đủ 1.5ml Hỗn hợp đem ủ 500C 20 phút Sau ta bổ sung vào ống nghiệm 0.5 ml CH3COOCl 10% Tiếp tục bổ sung từ từ ml nước cất 0.4 ml FeCl3 0.1% Tương tự đo khử gốc tự DPPH ta tiến hành làm mẫu đối chứng không cho mẫu đo mà thay dung dịch đệm Khả khử hỗn hợp đo bước sóng 700 nm sử dụng máy đo quang phổ PHỤ LỤC BẢNG SỐ LIỆU THÍ NGHIỆM Bảng PL5.1 Kết đo khả khử gốc tự DPPH dung môi khác Mẫu Kết đo Nồng độ DPPH Nồng độ DPPH bị khử giá trị trung bình MĐC 0.214 0.090 0 Ethanol 0.091; 0.102; 0.091 0.038; 0.04; 0.038 0.052; 0.050; 0.052 0.052 Methanol 0.107; 0.108; 0.09 0.039; 0.041; 0.035 0.051; 0.049; 0.055 0.052 Nước cất 0.135; 0.140; 0.146 0.058; 0.061; 0.069 0.032; 0.029; 0.021 0.024 Bảng PL5.2 Kết đo tổng lực khử dung môi khác Mẫu Đo lần Đo lần Đo lần Giá trị trung bình MĐC 0 0 Ethanol 0.909 0.916 0.904 0.910 Methanol 0.898 0.895 0.900 0.900 Nước cất 0.321 0.324 0.316 0.320 Bảng PL5.3 Kết đo khả khử gốc tự DPPH nồng độ dung môi khác Mẫu Kết đo Nồng độ DPPH Nồng độ DPPH bị khử giá trị trung bình MĐC 0.299 0.125 0 70% 0.276; 0.279; 0.280 0.1153; 0.1165; 0.1169 0.0094; 0.0082; 0.0078 0.008 80% 0.268; 0.269; 0.270 0.1120; 0.1124; 0.1128 0.0127; 0.0123; 0.0119 0.012 90% 0.243; 0.250; 0.248 0.1018; 0.1046; 0.1038 0.0229; 0.0201; 0.0209 0.021 96% 0.167; 0.169; 0.163 0.0707; 0.0715; 0.0609 0.0540; 0.0532; 0.0557 0.054 99% 0.168; 0.166; 0.164 0.0711; 0.0703; 0.0695 0.056; 0.054; 0.057 0.056 Bảng PL5.4 Kết đo tổng lực khử nồng độ dung môi khác Mẫu Đo lần Đo lần Đo lần Giá trị trung bình MĐC 70% 80% 90% 96% 99% 0.374 0.517 0.626 0.895 0.901 0.385 0.498 0.616 0.898 0.900 0.370 0.497 0.631 0.902 0.902 0.376 0.504 0.624 0.898 0.901 Bảng PL5.5 Kết đo khả khử gốc tự DPPH tỷ lệ dung môi/nguyên liệu khác Mẫu Kết đo 0.256 MĐC Nồng độ DPPH bị khử giá trị trung bình 0 0.094 0.241; 0.245; 0.247 0.237; 0.236; 0.237 0.232; 0.230; 0.229 0.225; 0.220; 0.223 0.173; 0.169; 0.172 0.167; 0.165; 0.168 1/1 2/1 3/1 4/1 5/1 6/1 Nồng độ DPPH 0.1009; 0.1026; 0.1034 0.0633; 0.0637; 0.0645 0.0973; 0.0964; 0.0960 0.0944; 0.0924; 0.0936 0.0731; 0.0715; 0.0727 0.0707; 0.0699; 0.0711 0.006; 0.010; 0.008 0.014; 0.013; 0.008 0.030; 0.021; 0.023 0.033; 0.035; 0.037 0.034; 0.056; 0.034 0.050; 0.056; 0.053 0.008 0.012 0.024 0.035 0.051 0.053 Bảng PL5.6 Kết đo tổng lực khử tỷ lệ dung môi/nguyên liệu khác Mẫu MĐC 1/1 2/1 3/1 4/1 5/1 6/1 Đo lần 0.400 0.558 0.850 0.823 0.719 0.675 Đo lần 0.402 0.562 0.837 0.828 0.728 0.664 Đo lần 0.411 0.545 0.841 0.811 0.739 0.671 Giá trị trung bình 0.210 0.407 0.625 0.715 0.900 0.670 Bảng PL5.7 Kết đo khả khử gốc tự DPPH thời gian chiết khác Mẫu MĐC Kết đo 0.289 Nồng độ DPPH 0.121 Nồng độ DPPH bị khử Giá trị trung bình 20 30 40 50 60 70 80 0.229; 0.221; 0.226 0.211; 0.213; 0.215 0.203; 0.206; 0.209 0.196; 0.199; 0.196 0.162; 0.161; 0.161 0.210; 0.200; 0.198 0.212; 0.218; 0.220 0.0906; 0.0928; 0.0948 0.0887; 0.0985; 0.0903 0.0854; 0.0866; 0.0879 0.0825; 0.0838; 0.0825 0.0686; 0.0682; 0.0682 0.0883; 0.0842; 0.0834 0.0891; 0.0915; 0.0924 0.0245; 0.0278; 0.0258 0.0319; 0.0311; 0.0303 0.0352; 0.0339; 0.0327 0.0380; 0.0368; 0.0380 0.0519; 0.0524; 0.0524 0.0323; 0.0364; 0.0372 0.0315; 0.0290; 0.0282 0.026 0.031 0.034 0.038 0.052 0.035 0.030 Bảng PL5.8 Kết đo tổng lực khử thời gian chiết khác Mẫu MĐC 20 30 40 50 60 70 80 Đo lần 0.229 0.309 0.320 0.332 0.373 0.349 0.321 Đo lần 0.287 0.303 0.318 0.331 0.368 0.345 0.332 Đo lần 0.291 0.302 0.320 0.324 0.377 0.348 0.325 Giá trị trung bình 0.301 0.345 0.589 0.765 0.903 0.872 0.823 Bảng PL5.9 Kết đo khả khử gốc tự DPPH nhiệt độ chiết khác Mẫu Kết đo Nồng độ DPPH Nồng độ DPPH bị khử giá trị trung bình MĐC 0.220 0.092 0 4C 0.188; 0.190; 0.187 0.063; 0.060; 0.057 0.031; 0.039; 0.035 0.035 28 C 0.198; 0.196; 0.196 0.0834; 0.0825; 0.0825 0.019; 0.008; 0.012 0.013 500C 0.180; 0.183; 0.176 0.040; 0.042; 0.054 0.054; 0.051; 0.048 0.051 Bảng PL5.10 Kết đo tổng lực khử nhiệt độ chiết khác Mẫu Đo lần Đo lần Đo lần Giá trị trung bình MĐC 40 C 280C 500C 0 41 0.23 0.96 0.42 0.23 0.89 0.38 0.19 0.89 0.40 0.21 0.90 Bảng PL5.11 Kết đo khả khử gốc tự DPPH lần chiết khác Mẫu Kết đo Nồng độ DPPH MĐC 0.353 Nồng độ DPPH bị khử giá trị trung bình 0.147 0 Chiết lần 0.296; 0.292; 0.288 0.1234; 0.1218; 0.1202 0.053; 0.050; 0.048 0.050 Chiết lần 0.341; 0.340; 0.331 0.1419; 0.1414; 0.1378 0.023; 0.023; 0.019 0.021 Chiết lần 0.351; 0.352; 0.352 0.1459; 0.1464; 0.1464 0.005; 0.003; 0.001 0.002 Bảng PL5.12 Kết đo tổng lực khử lần chiết khác Mẫu Đo lần Đo lần Đo lần Giá trị trung bình Chiết lần 0.894 0.897 0.908 0.899 Chiết lần 0.303 0.305 0.297 0.301 Chiết lần 0.101 0.103 0.100 0.102 ... đến khả chống oxy hóa dịch chiết từ vỏ long - 33 Kết thu tiến hành chiết chất chống oxy hóa từ vỏ long phương pháp ngâm chiết dung mơi khác Màu sắc hoạt tính chống oxy hóa dịch chiết từ vỏ long. .. làm dung môi chiết chất chống oxy hóa từ vỏ long thí nghiệm 3.4 Ảnh hưởng nồng độ dung môi đến khả chống oxy hóa dịch chiết từ vỏ long Màu sắc hoạt tính chống oxy hóa dịch chiết từ vỏ long với nồng... (v/w) cho dịch chiết có khả chống oxy hóa cao 3.6 Ảnh hưởng thời gian ngâm chiết đến khả chống oxy hóa dịch chiết từ vỏ long Màu sắc hoạt tính chống oxy hóa dịch chiết từ vỏ long thời gian chiết