Đang tải... (xem toàn văn)
Tổng quan về thành phần dịch trích bã bột cây thông
PHAN TONG QUAN - — Chương I ĐẠI CƯƠNG VỀ CÁC CÂY CĨ TÍNH LỢI SỮA — Chương II CÁC PHƯƠNG PHÁP SỬ DỤNG ĐỂ TÌM HIỂU THÀNH PHẦN HĨA HỌC CỦA DỊCH Bà HỘT BƠNG BỞI NƯỚC, TRÍCH Phần tổng quan - Chương | Nhiều nghiên cứu thực hột bông, tập trung phần sợi Với phần hột, nghiên cứu dịch trích eter etil cho chat gossypol, sắc tố độc, có tính ngừa thai cho đàn ơng Trung Quốc [68].Gossypol cịn có tính ngừa thai cho phụ nữ cần ƯĨ sản xuất sieroid buồng trứng 123| Gossypol có khả trị ung thư gan, phổi 129 kháng H.I.V 142] BANG 1: Một số thuốc VN có tính lợi sữa theo tài liệu kinh nghiệm Đông Y, srr i LIÊN VIỆT NĂM TÊN KHOA HỌC | Bong bong {Rong gao | Béng vải HO Lygodium Mexuosum Gossampinus malabarica Gossypium herbaceum TÀI LIỆU THAM Schizaeaceae Bombacese Malvaceae 4° {Cho dé | Cổ sữa PhyUanthus urinaria Euphorbia hirta Euphorbiaceae Euphorbiaceas ]Ïï lớn (hoắc hướng) [1a thd tdng Hyplis suaveolens Streptocaulon juventas Lamiaceae |llat mo Sesanum 10 1] 12 ¡3 [Lá cách [La mit |Mướp hương |Mùi Premna integrifolia Artocarpus integrifoba Luffa cylindrica Coriandram sativum | Đính lăng Polyscias fructicosa Centela 1S | Rau day Corchorus 16 |Sệp sộp Ficus i Sung Ficus i8 |Sữa Alstonia scholans 19 | thâu đầu Ricinus communis | Thong thao Teuapanax 31 | Thuốc đồi 22 | Vong nom Một 38,2 - 51,1 lượng số tác gid TRUNG Đỗ Tất lợi |2 Petelot [76] Petelot {Petelot | Petelat Đỗ Tất Lợi Petelot Asclepiadaceae | Đã Tất lợi Hỗ Tất Lợi indicum fd | lau má FUCHANG, Araliaceae Poda Haccao Verbenaceae Moraceae Cucurbitaceae Umbelliferae asiaLica 1mbelhferae oljlorius Đỗ Ta Lai Petelot | Peiclot Đỗ Tất lợi Petelot Pilaceae Petelot pumila Moraceae Đã Tất Lợi glomerata Moraceae Đỗ Apocynaceae Petelot Euphorbiaceae |Petelot Araliaceae Petelot Pouzolzia zeylanica Unticaceae Đỗ Tất Lợi Urythrina Papilionaceae |Pctelot da % protein g6m papyrifera indica nghiên QUỐC, năm cứu 1983 KHẢO dich [22] cho trích biét hệt Tất Lợi bã nước hột GŨ chứa 16 loai amino acid, vdi acid glutamic arginin có hàm 21,3 % va 12,1 % tổng số amino acid, Năm 1988 YUNUSKHANOV [71], x4c dinh anuno acid hội Gossypium arboreum, G barbadense va G, hirsutum Ca cay déu chita Phần tổng quan - Chương Ì amino acid —§— nhu acid aspartic, acid glutamic, glicin va alanin Céc amino tính acid chiếm > 25,3%; amino acid có tính ba¿ chiếm CUONG [I có < 13,6 % tổng số amino acid LE XUAN acid cho biết việc thử nghiệm trâu sữa Ấn Độ với khấu phần gôm rơm thức ăn tình 7,75 Kg/con/ngày, Nếu giảm phần sở nầy xuống 4,6 Kự bổ sung thêm bánh MUH (rÏ mat va uré), cộng thêm bã hột bơng (0,45 Kg) trì suất sữa trâu livngay tăng lợi tức cho người chăn nuôi lên rupi/ngay Nam 1989, theo GUYOMARCH [25] , dich trích hội bơng nước nóng chứa polisacarid gồm ramnoz, arabinoz, xiloz, manoz va ghicoz, NGu ding chat trích thơ để ni chuột tháng tuổi, cho ăn 400 mg/ngày mg/ngày, lượng mỡ sữa tuyến vú tăng lên lần Nam [990 , PAVLOVSKAYA (Tashkent) [55], xac dinh ham 500 ludng protein hội Gossypium hirsuium la 31-40 % , wong G, burbudense 1a 46-48 % va tong G herbuceum 28-30 % Năm Gossypium 1992, KENT hirsutum cộng , 14 chifa enzym [37], nghién cfu 14 mam loai glioxisom để chuyển cdc lipid du uit thành hidrat carbon cần thiết cho tăng trưởng Tóm tất, nghiên cứu hột bơng phần đơng tập trung phương pháp ly trích gossypol từ hội dung môi hữu ; phần trích ly bã hội nước chưa nghiên cứu Mục đích chúng tơi tim hiểu phần dịch trích bã hội bơng nước nóng , làm Lăng tính lợi sữa thco kính nghiệm dân gian, Cũng loại hột nói chung, hội bơng chứa cấu tử celuloz, homiceluloz, pelisacarid, protcin, lignin chất tỷ lệ thấp protein du ui, glicoproicin ,cnzym, lipid, cdc chất có mầu chất vơ Mặc dù người ta phân tích thành phần thành tế bào, chưa có hình ánh cấu trúc phân tử thành tế bào trình bày polimer, nối liên kết polimer Thí dụ thành tế bào cấp gồm sợi celuloz giống lõi kết ứnh có kết cấu trật tự cao, bao quanh vùng vơ định hình gồm phân tử ccluloz gắn với polisacarid glicoprotein cách lỏng lẻo Polisacarid pectic va hemiceluloz chất kết dính gắn chặt sợi co luloz Hiện nay, chưa có phương pháp tách rời loại chất khỏi chất nêu trơn, trích ly với nước, Vì vậy, thời gian trích ly với nước kéo đài, polisacarid không tan, lúc, acid hữu cơ, anuno acid bị trích Tùy thuộc ngưồn gốc, polisacarid trích ly nước gơm, chất nhầy, tình bột, fructan, pecúc, galacturonan Chúng có trọng lượng phân tử lớn Phan tong quan - Chuong | SOO I : Phương pháp tổng quát trích chất thành tế bào thực vat theo TREVOR ROBINSON [67] Ngun liệu thơ - Trích nước nóng i j Phần khơng lan Phan tan - Trích NaOH 17,5 % - Elanol S0 % E—— _—_— Phần không tan Ĩ Phần tan Phần không tan j Phần tan œ-Ccluloz - Chal pectic - Phosphat - Tỉnh bột - Monosacarid - Gơm - Oligosacarid - Chất nhầy Acid hóa trọng lượng - Arabinogalacian - ÑRamnogalacluronan phân tử thấp - Chất có mầu ] Phần trầm Phần lan Hemuoe luloz có trọng hượng Hemuce luloz vai trăm ngàn dalon Thông không - Fructan F phần tử cao - Hidrat carbon có trọng lượng phân tử thấp thường , polisacarid lan nước, polisacarid chất thẳng tan thực vật có chức dự trữ hột ,sẽ phan nhánh dễ phân tần nước để tạo dạng keo Các đại phân tử có dạng hình cầu dạng chuỗi Đại phân tử hình cầu phân nhánh mạnh, chuỗi dây cuộn lại chặt chế nên bền để tỉnh chế giicogen, albumin, hemoglobin Đại phân tứ hình chuỗi kéo dài theo chiều nên dài, mỏng sợi tóc, sợi lở gồm ccluloz cây, Nó uốn dóo cuộn lại thành lối Các đại phân tử hình chuỗi nằm cạnh thành bó — = Phan téng quan - Chuong | chúng có nhiều điểm tiếp xúc đại phân tử liên kết với nhiều loại nối, thường nội hidrogen Thí dụ nguyên tử hidrogen nhóm -NH- prolcin oxigon nhóm carbonil chuỗi đạt phân tử nằm kế bên Mặc dù hidrogcn yếu (4-8 Kcal/mol) so với nối hóa trị cấp -(80- 150 Kecal/mol), với số lượng lớn cầu nối dọc thco chuỗi làm đại phân tử gắn với chặt chẽ, Các đại phần tử hình cầu,do có vài điểm tiếp xúc nhau, nên dễ dàng tách rời nhau,Vì thế, polimcr hình chuối tan polimer hình cầu 1471, 1671 TREVOR ROBINSON {67| nêu phương pháp tổng quát để trích chải thành tế bào thực vật trình bày sơ đồ 1, 1.2.2 Mô tả thực vật hơng Cây bơng lồi nhỏ, sống lâu, có đến § thùy, nhiều có khía, Hoa don kom thoo bắc lớn có cưa; tràng hoa mẫu vàng trỞ nên đỏ sau nở hoa, Hoa mọc nách nhánh ngắn Trái có dạng nang hình khối bầu dục (4-8 x 3-4) cm, có đến ngăn hình nỗn Trong ngăn, có đến 12 hội mang sợi tợ dài, Những sợi tơ mọc lên từ bề mặt hột Có arboreum, lồi bơng :foai diploid Gossypium herbaceum), (Gossypium A Chau vdi sui day va loat tetraploid Chau My vi soi dai rung binh hirsutum L.) va vdi soi dat (Gossypium ngan (Gossypium barbadense L.) [T2] Theo PETELOT A {76|, tất phận bơng có tác dụng trị liệu; hạ sốt ; lá, hoa bổ phối Nước ngâm đậm đặc lá, hoa có tính chống viêm Ở Mỹ người da đcn dùng vỏ rễ làm thuốc phá thai, Dịch trích hội với nước nóng có tính lợi sữa, dùng cho phụ nữ cho bú để làm tang lượng bo sữa, Hột nghiên cứu hội Gossypium herbaceum ,ho Malvaceae Phan iéng quan - Chuong I —8— Chương 11 CÁC PHƯƠNG PHÁP SỬ DỤNG ĐỂ TÌM HIỂU THÀNH PHẦN HOA HOC CUA DICH TRICH LY BA HOT BONG BOI NUGC, Mười (11) phương pháp khác áp dụng để tìm hiểu thành phần hóa học hoạt tính lợi sữa dịch trích ly bã hột bóng nước Ở dạng đông cô chân không H.1 Phương pháp siêu lọc để tách chiết sơ số cấu tử hóa học dịch trích ly bã hột hởi nước : Trong thập niên 60, nhiều tác giả cô lập protcin từ bã hột cách cho kết tủa chất trích ly với dụng dịch muối NaCl 10 % cộng phosphat 0,1M pH 7.4 1531, với dụng địch nhosphalt % {15}, với dụng dịch NaC] M {35] vdi dung dich NaOH 0,015 N [8] Cuối thập niên 70, vài tác giả cô lập proein bã hội phương pháp siêu lọc [41], 1621 Đến cuối thập niên 80, phương pháp siêu lọc phát triển thêm , dùng màng lọc với lỗ có đường kính khác để lọc phân tứ có trọng lượng phân tử khác nhau, Các tác giả dùng phương pháp để khảo - sái polisacarid có trọng lượng phần tử > F0 KD > 30 KD loại vùng Trung Á, có hột bơng 139] HI.2 Phương pháp định lượng miễn dịch phóng xạ (R.LA = RADIO IMMUNO ASSAY) để thử nghiệm tính lợi sữa phân đoạn siêu lọc : H.2.1 Các yếu tố có ảnh hưởng đến phái triển tuyến sữa : Với phụ nữ, tế bào mô tiết xuất lúc mang thai, tác động steroid buồng trứng (oestrogen, progesteron, corlicoid);, hormon tuyến yên ( hormon tăng trưởng prolacUn) Ở lồi động vật có vú, Lyon L cộng [46] chứng steroid buồng trứng (E2 L7 progostcron) làm phát triển tuyến vú thỏ cái, dê Nếu steroid budng trứng không diện, chuột, cho tác dụng lượng cao hormon tuyến yên cấy tuyến yên vào chuột , có thé tăng trưởng luyến sữa]491 Khi cho tác dụng chất CB 154 ,mội chất ức chế prolacun giai đoạn đầu việc tiết sữa , sữa khơng tiết |33] Chính prolacun ,chớ khơng phải steroid buồng trứng ,giữ vai trò chủ việc tiết sữa Progesteron khơng phải hormon tuyến sữa yếu mà kết hợp trình ban đầu với oestrogen làm tăng trưởng tuyến sữa, làm lam lạo yếu hormon tuyến sữa khác prolacun, glucocorticoid, insulin, hormon tăng trưởng nhạy cảm Trong sO prolactin déng vai ro quan trọng ,còn khác hormon góp phần làm tăng khả hoạt động prolacun Go Phần tổng quan - Chương II Nơi loài động vật có vú sau sinh ,song song với lượng tiết sữa, hàm lượng prolacun tăng theo cách đáng kể máu, Đo đó, dịch trích ly thuốc có ảnh hưởng đến việc kích thích tiết sữa, kích thích tiết prolacún Vì ,việc định phan prolactin huyết tương động vật thứ nghiệm với chất trích cho biết tính lợi sữa dịch trích trên, Chúng tơi chọn phương pháp tác giả MESSINGER H G |50] để đo hàm lượng prolacun huyết tương trờu chuột phương pháp định lượng miễn dịch phóng xa , nhằm m hiểu hoạt tính tăng sữa trừu chuột phân đoạn siêu lọc dịch trích bã hội hơng nước Việc thí nghiệm sinh vật sống đạt kết khả quan động vậi có độ nhạy cảm hormon nhiều yếu tố ảnh hưởng đến tiết prolacin nơi trừu, Hàm khác Ngoài có lượng prolactin cda itu thay d6i theo chu kỳ động dục, thời gian ngày đêm, căng thẳng thần kinh bị lấy máu lần đầu, nhiệt độ (theo mùa có íL hay nhiều ánh nắng mặt rời) |6] Tất phương pháp đo hormon sử dụng phương pháp định lượng chất miễn dịch phóng xạ Phương pháp dựa vào cạnh tranh kháng ngun khơng mang tính phóng xạ kháng thể có mang đơng vị phóng xa với số lượng biết trước, gắn vào kháng thể đặc biệt, có số lượng biết trước số lượng íLhơn tổng số kháng nguyên , Phản ứng chung : Ag + Ac ———~* |Ag -Ac] + Phức kết tụ kháng nguyên kháng thể Ag (1) Với diện kháng ngun khơng phóng xạ, phản ứng : Ax + Ag + Ac ==> [| Ag - Ac|+IAg-Ac]+Ag + Ag@) (2) cân theo định luật báo toàn khối lượng, Cân bang đạt nhờ huyết miễn dich dic biét (immusérum spécifique) giúp cho việc kết tủa hai phức chất |Ag - Ác |và | Ag - Ac | Việc định lượng thực máy số phóng xạ Vẽ đường biểu diễn chuẩn | © —] Phan téng quan - Chuong I] biểu thị số phần trăm kháng nguyên có phóng xa nối liền với kháng thể ,khi có diện tăng dần kháng nguyên khơng phóng kháng ngun xXa.Song song, chuẩn phóng bị ống nghiệm phần trăm xa xác định trên, kháng khơng phóng xa thay mẫu cần định phan HÌNH nguyên : Đường biểu điễn chuẩn % hoạt tính chung LAg -Acl aN _ Mẫu cần đo Số đo KH, „Nông độ kháng nguyên ~ 160 320 Nẵng độ Ag (ngán) Với Ag” > Ác, ta có đẳng thức : Bchung _ B` _ Ác Agchung Ag Ac Ag chung :_ Số lượng kháng thể _: Số lượng kháng nguyên chung (Ag + Ag` ) Ag Ag : : Ag+Ag’ Số lượng kháng nguyên cần định phân Số lượng kháng nguyên có gắn phóng xa H chung: Số lượng kháng nguyên gắn vào kháng thể, B :_ Số lượng kháng nguyên phóng xạ bị gắn Phương trình biểu dién mội hiperbon dạng y = —— phịng thí nghiệm, đỡ kiện xử lý bói chương trình tinh 11.3 Định phân hàm lượng đường tổng quát phương pháp so màu [74] Đường trung tính D-galacioz, D-glucoz , 13>-xHoz hay deoxihexoz thường điện D-mannoz thâo mộc aldohexoz aldopentoz D-arabinoz, L-ramanoz, L-fucoz ( Hình 2) ¬ Phan téng quan - Chuong II HÌNH 2: Cấu trúc đường trung tính thảo mộc CHO —T-OH —— H —— H -[†-OH CH2OH H HO HO H l)-galacto⁄ CHO HO ——H HO ——H H ——OH H -—OH CH2OH CHO H —7—OH HO ——H H-—+- OH H —- OH CH2OH l)-mrannioZ I)-glucoz CHO CHO H -+- OH H H —+-OH HO ——H HO H H HO L-fucoz CHO —— OH H ~~ OH HO —+—H —~ H OH HO HO ———— H H HO —†~H CHO —TTH -—7—-OH —-OH TH CH3 CH;OH CH;OH CH; L-ramnoz Dưới (ormaldchid, tác dụng acctaldchid, D- xiloz acid vô cơ, pcnloz crotonaldchid L- arabinoz với hexoz dẫn trở xuất aldehid furfural nhv 5-hidroximetilfurfural 5-mectilfurfural sản phẩm giảm cấp không chứa hệ thống nối đôi liên hợp Tỉ lệ tương đối dẫn xuất furfura] với chất hàm sắc thay đổi tùy theo nồng độ acid, nhiệt độ, thời gian phan ứng Phương pháp có sai số trung bình khoảng ‘% Định phân phương pháp so màu, tác chất orcinol, antron, phenol, cistcin sử dụng antron dùng nhiều Cơ chế phản ứng: antron hay 9,10-dihidro-9-oxoantraccn mơi acid nóng , kết hợp với sản phẩm giảm cấp đường, chất dẫn xuất để tạo thành chất có màu xanh dương lục |34| (hình 3) Phan ứng hị ức chế chất oxid hóa hoạt hóa hởi khử hay chất kháng- oxid hóa Vài tác giả đề nghị dùng chất kháng- oxid tiourê để ổn định dung dịch antron Độ hấp thu cực đại chất màu tạo thành từ chất đường trường furfural chất hóa khoảng 620 nm, độ dài sóng đo 585 nm để tránh tượng giao thoa gây diện protein cho phẩn ứng với tác chất antron Phân tổng quan - Chương H —12— Acid uronic cling cho mau yu vdi antron, cé 46 hấp thu cực đại 560 nm; 585 nm, độ hấp thu acid uronic không đáng kể so với độ hấp thu chất dường Osammn, H.Á Định phân acid sialic không tác dụng với antron, đường đơn trung tính qua dẫn xuất acetat alditol phương pháp sắc ký khí 191 Polisacarid thủy gidi cho monosacarid, sau d6 monosacarid acctil héa dan xuat acetat bay hoi , x4c dinh bdi phudng pháp sắc ký khí, Điều kiện cần thiết để chuyển hóa polisacarid thành monomer thay đổi tùy theo câu trúc thành phần cấu tao monomer cla cdc polisacarid Với _polisacarid đơn giản, thủy giải đễ đàng khó khăn polisacarid chứa đơn vị acid uronic osamin Các nhóm amino Ở vị trí C-2 monomer hầu hết polglicosamin bị prolon hóa thủy giải, ổn định cầu nối gHcosic, Muốn bé gấy cầu nối này, cần điều kiện mạnh mẽ bơn với HCI N, 100 °C , ... thơ - Trích nước nóng i j Phần khơng lan Phan tan - Trích NaOH 17,5 % - Elanol S0 % E—— _—_— Phần không tan Ĩ Phần tan Phần không tan j Phần tan œ-Ccluloz - Chal pectic - Phosphat - Tỉnh bột -.. .Phần tổng quan - Chương | Nhiều nghiên cứu thực hột bông, tập trung phần sợi Với phần hột, nghiên cứu dịch trích eter etil cho chat gossypol, sắc tố... DỤNG ĐỂ TÌM HIỂU THÀNH PHẦN HOA HOC CUA DICH TRICH LY BA HOT BONG BOI NUGC, Mười (11) phương pháp khác áp dụng để tìm hiểu thành phần hóa học hoạt tính lợi sữa dịch trích ly bã hột bóng nước