Đang tải... (xem toàn văn)
nghiên cứu khả năng chuyển nạp gen của ba giống bông vải Coker 312 và VN36P bằng vi khuẩn
[...]... DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Nội dung nghiên cứu Nghiên cứu khả năng chuyển nạp gen của hai giống bông vải Coker 312 và VN36P bằng vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens, sử dụng plasmid pManCa (Hoa và Bong, 2003) mang gen pmi và gen gus để xây dựng quy trình chuyển nạp gen với hệ thống thanh lọc bằng mannose đối với cây bông vải 3.2 Thời gian và địa điểm thực hiện Thời gian: khóa luận được thực hiện... mô sẹo giống nhau (100%) Chúng tôi cho rằng sự khác nhau trong tỷ lệ hình thành mô sẹo của mẫu lây nhiễm là do hệ thống thanh lọc và giống được sử dụng khác nhau 33 CHƢƠNG 5 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Từ kết quả bước đầu thu nhận được về khả năng đáp ứng chuyển nạp gen bằng vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens của hai giống bông vải Coker 312 và VN36P và vi c ứng dụng hệ thống thanh lọc bằng đường... đến hiệu quả chuyển nạp gen như vi khuẩn, thời gian lây nhiễm, vật liệu nuôi cấy khởi đầu, quy trình chọn lọc, v.v Trên cơ sở đó tiến hành hoàn thiện với hệ thống thanh lọc bằng đường mannose để ứng dụng trong vi c nghiên cứu khả năng chuyển nạp gen của các giống bông đang được trồng ở Vi t Nam 34 CHƢƠNG 6 TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VI T 1 Lê Trần Bình, 2001 Thực trạng chuyển nạp gen ở Vi t Nam Hội... virB mã hoá và đột biến ở bất kì gen nào trong số 11 gen của operon này đều làm mất khả năng tạo pili và tạo khối u và tạo khối u (Lai và Kado, 1998) Các protein VirB đều khiển tạo chiên mao và VirB2 là tiểu phần chính của chiên mao này Hai protein VirB là VirB4 và VirB11 có hoạt tính ATPase và được cho là cung cấp năng lượng cho vi c xuất các tiểu phần protein khác, cho vận chuyển T-DNA Hệ thống VirB... diệt cỏ… Sự chuyển nạp gen thành công trên cây trồng đã được ghi nhận bằng cách sử dụng plasmid Ti, thông qua vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens để đưa gen mong muốn vào trong bộ gen cây trồng Phương pháp sử dụng vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens để chuyển nạp gen còn được gọi là phương pháp chuyển nạp gen gián tiếp 2.3.1 Đặc điểm vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens Giống Agrobacterium được chia làm... Nghệ Sinh Học, Vi n Lúa Đồng Bằng Sông Cửu Long, huyện Cờ Đỏ, TP Cần Thơ 3.3 Vật liệu nghiên cứu Giống bông vải Coker 312 và VN36P Hạt bông vải tự thụ được thu từ cây bông vải trồng ở nhà lưới của bộ môn Công Nghệ Sinh Học, Vi n Lúa Đồng Bằng Sông Cửu Long Mẫu cấy: trụ hạ diệp của cây mầm in vitro 5 - 7 ngày tuổi Dụng cụ, thiết bị, hoá chất ở bộ môn Công Nghệ Sinh Học, Vi n Lúa Đồng Bằng Sông Cửu Long... bào VirG được phosphoryl hoá bởi aspartic acid còn lại sau khi VirA tự phosphoryl hoá (Jin và ctv, 1990) và kích hoạt sao mã cho tất cả các gen vir Các promoter của gen vir có kích thước khoảng 12bp trong trình tự “vir box” (Winans và ctv, 1987) 15 Các gen vir có vai trò trong vi c tạo sợi đơn T-DNA trong vi khuẩn và đưa sợi đơn TDNA vào trong tế bào cây Các protein được mã hoá bởi gen virD và virE... Chuyển gen bằng vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens Chuyển nạp gen là kỹ thuật đưa một hay nhiều gen lạ đã được thiết kế ở dạng DNA tái tổ hợp vào bộ gen của sinh vật đang nghiên cứu Những thành tựu của kỹ thuật nuôi cấy mô và kỹ thuật tái tổ hợp DNA đã mở ra triển vọng đối với chuyển nạp gen ở thực vật bậc cao, tạo ra những tính trạng di truyền mới như kháng sâu bệnh hại, thuốc diệt cỏ… Sự chuyển nạp. .. chất của tế bào cây, nơi đây các bước cần cho chuyển T-DNA vào nhân và hòa hợp với DNA của cây được thực hiện (Zhu và ctv, 2000) 16 Hình 2.2 Mô hình chuyển nạp T-DNA từ tế bào vi khuẩn vào tế bào cây (nguồn Zhu và ctv, 2000) 2.3.2.3 Cơ chế lây nhiễm Vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens sống phổ biến ở xung quanh và trên bề mặt rễ cây Vùng mà vi khuẩn sống gọi là vùng rễ, nơi mà vi khuẩn tồn tại nhờ vi c... trong tế bào vi khuẩn và do các protein VirD1 và 17 VirD2 thực hiện Sau đó protein VirD2 gắn vào sợi đơn T-DNA để tạo thành phức hợp TDNA Phức hợp T-DNA-VirD2 cùng với protein VirE2 được chuyển vào trong tế bào cây thông qua hệ thống chuyển nạp được mã hoá bởi các gen virB Cùng với một số thành phần trong tế chất của tế bào cây, các protein của vi khuẩn sẽ tiếp tục đưa phức hợp T-DNA vào trong nhân 123doc.vn