Đang tải... (xem toàn văn)
bước đầu đọc trình tự vùng rDNA - ITS của nấm Rhizoctonia solani Kuhn
[...]... tinh sch 27 Hỡnh 10 Trỡnh t v peak vựng rDNA- ITS ca dũng BV-6 2-0 3 28 Hỡnh 11 Trỡnh t v peak vựng rDNA- ITS ca dũng SR-650 29 Vi sn phm PCR ó lm tinh sch theoqui trỡnh trờn, chng1 tụi tin hnh c trỡnh t trc tip vựng rDDNA -ITS ca 2 dũng SR-650 v BV-6 2-0 3 s dng 2 primer ITS1 v ITS4 4.4.1 c trỡnh t vựng rDNA- ITS ca dũng BV-6 3-0 2 Vi primer ITS1 , vựng rDNA- ITS ca dũng BV-6 2-0 3 ó c c l 361bp Trỡnh t nh sau: gggaatttaa... t vựng rDNA- ITS ca dũng SR-650 vi trỡnh t vựng rDNA- ITS ca cỏc dũng nm R solani cú mó s sau: AB122134 AG-IA 670 bp AB122126 AG1-ID 694 bp AB122124 AG 2-1 669 bp AB122143 AG -4 672 bp AB122142 AG1-IC 651 bp Qua nhiu kt qu chỳng tụi nhn thy vựng rDNA- ITS ca dũng nm mang s hiu AB122126 thuc nhúm tip hp AG1-ID l phự hp nht vi trỡnh t 31 vựng rDNA- ITS c c ca dũng SR-650 T l tng ng trỡnh t on rDNAITS ó c... R solani t cỏc mu thc vt bnh v s dng 20 dũng nm ny nghiờn cu Bng 3 Danh sỏch cỏc dũng nm Rhizoctonia solani c s dng trong nghiờn cu Stt Tờn dũng nm Kớ ch Ni ly mu 1 CX-8 Ci xanh Tp HCM 2 SR-650 Su riờng Bỡnh Dng 3 L-74 Lỳa Tr Vinh 4 XL-76 X lỏch An Giang 5 BV-6 2-0 3 Bụng vi Bỡnh Thun 6 L-67 Lỳa ng Thỏp 7 RM-61 Rau mung ng Nai 8 CB-63 Ci Bp Lõm ng 9 LB-73 Lc bỡnh Tin Giang 10 L-7 1-0 4 Lỳa Cn Th 11 L-7 1-0 5... phn ng PCR 4.3 Kt qu khuch i vựng rDNA- ITS ca cỏc dũng nm R Solani vi hai primer ITS4 v ITS5 S dng 2 primer ITS4 v ITS5 do White v ctv (1991) thit k cho vựng ITS ca rDNA (gm ITS 1-5 ,8S -ITS2 ), sn phm sn phm khuch i c d kin cú kớch thc khong 700bp Chỳng tụi ó thc hin phn ng PCR c thc hin vi 10 100ng DNA, 1X DNA polymerase buffer, 1,5 mM MgCl2, 1àM cho mi primer ITS4 v ITS5 , 1U Taq DNA polymerase (hỡnh... ITS5 18S ITS1 ITS3 ITS1 5,8S ITS2 ITS2 28S ITS4 ITS4 B Hỡnh 4: Lc on ITS rDNA v cỏc primer Trỡnh t ca rDNA c dựng nghiờn cu rt nhiu v mi quan h di truyn ca nhiu dũng nm i vi nm R solani, rDNA cú cha cỏc trỡnh t ca cỏc ribosome 18S; 5,8S; 28S v cỏc vựng ITS nm xen k gia cỏc trỡnh t rDNA ú Vựng ITS ny ó c nghiờn cu rt nhiu bng k thut PCR, RFLP v k thut c trỡnh t (Kuninaga v ctv, 1997) Vựng ITS lp li... nhúm ph AG-214 1v AG- 2-2 thỡ khụng cú s khỏc bit v v trớ gii hn trong on DNA ny Nhng ct bng enzyme HhaI thỡ cú s khỏc bit v v trớ gii hn trong on DNA ny gia cỏc nhúm ph AG- 2-2 -IIIB v AG- 2-2 -IV Ngoi ra, khi ct bng enzyme BamHI, HhaI v HpaI i vi cỏc dũng nm AG-HG-I, HG-II ca nhúm AG4 thớ cng thy cú s khỏc bit Schneider v ctv (1997) ó thc hin phn ng PCR trờn vựng ITS rDNA vi 2 primer ITS1 v ITS4 i vi... gaccagttga attaacatta ggtttacttt gagacacccc ctgaactcaa aaggtatgtt ccaggaaagg ag Do 2 chui DNA ó c c l quỏ ngn nờn chỳng tụi khụng xỏc nh c trỡnh t vựng rDNA- ITS ca dũng BV-6 2-0 3 4.4.2 c trỡnh t vựng rDNA- ITS ca dũng SR-650 Vi primer ITS1 , vựng rDNA- ITS ca dũng SR-650 ó c c l 602bp Trỡnh t nh sau: ggggaattat tgtatttatt accgaggagt agagttgtag ctggccattt ttctggcaat gtgcacattc ttctctttca tccacacacc cctgtgcacc... l 10 100ng DNA, 1X DNA polymerase buffer, 1,5 mM MgCl2, 0,4àM cho mi primer ITS4 v ITS5 , 1U Taq DNA polymerase, vựng rDNA- ITS ó c khuch i thnh cụng Sn phm cú kớch thc khong 700bp 4.4 c trỡnh t trc tip on rDNA- ITS vi 2 primer ITS1 v ITS4 Trong iu kin gii hn ca ti, chỳng tụi ch tin hnh c trỡnh t ca 2 dũng nm BV-6 2-0 3 v SR-650 Trc khi tin hnh c trỡnh t, sn phm PCR c lm tinh bng kit Quantum Prep Freeze... bỡnh Tin Giang 10 L-7 1-0 4 Lỳa Cn Th 11 L-7 1-0 5 Lỳa Cn Th 12 LB-70 Lc bỡnh Vnh Long 13 L-6 7-0 4 Lỳa ng Thỏp 14 B-61 Bp ng Nai 15 L-61 Lỳa ng Nai 16 L-73 Lỳa Tin Giang 17 L-74 Lỳa Tr Vinh 18 CP-5 0-0 2 C phờ Dc Lc 19 X-61 u xanh ng Nai 20 CLV-72 C lng vc Long An 21 4.2 Li trớch DNA Theo qui trỡnh li trớch ca Lee v Taylor (1990), chỳng tụi thu c DNA tng s ca nm R solani Qui trỡnh ny khụng s dng RNase nờn... thnh phn phn ng PCR khuch i thnh cụng vựng rDNA- ITS ca nm R solani Bc u ó c c trỡnh t vựng rDNA- ITS ca nm R solani 5.2. ngh Hon thin qui trỡnh c trỡnh t cú kt qu c trỡnh t tt hn c trỡnh t vựng rDNA- ITS ca nhiu dũng nm cú th ỏnh giỏ s a dng di truyn ca qun th nm ny 34 PHN VI TI LIU THAM KHO Ting Vit 1 Bựi Chớ Bu v Nguyn Th Lang, 1999 Di truyn phõn t - Nhng nguyờn tc c bn trong chn ging cõy trng 123doc.vn