Đang tải... (xem toàn văn)
flublok vắc xin chống cúm sản xuất từ tế bào côn trùng
Côn Trùng Học Ứng Dụng Vắc - xin FluBlok ĐẠI HỌC QUỐC GIATHÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN KHOA SINH HỌC BÀI BÁO CÁO MÔN CÔN TRÙNG HỌC ỨNG DỤNG Đề tài: GVHD: TS TRẦN PHI HÙNG SVTH : Hồ Thị Kim Lan MSSV : 0515283 Thành phố Hồ Chí Minh, ngày 29 tháng năm 2009 MỤC LỤC Hồ Thị Kim Lan - 0515283 Trang 29/5/2009 Côn Trùng Học Ứng Dụng Vắc - xin FluBlok Tổng quan Trang Giới thiệu FluBlok .Trang Giới thiệu về Baculovirus Trang Sản xuất vắc-xin chống cúm từ tế bào côn trùng phương thứ ưu Trang 4.1 Sơ lược quy trình sản xuất Trang 4.1.1 Sản xuất vắc-xin từ phôi trứng Trang 4.1.2 Sản xuất vắc-xin từ nuôi cấy tế bào động vật hữu nhũ Trang 4.1.3 Sản xuất vắc-xin từ tế bào côn trùng Trang 4.2.So sáng tổng quan lợi quy trình sản xuất vắc-xin chống cúm từ tế bào trùng với phương thức cịn lại Trang 5 Sản xuất FluBlok Trang 5.1 Tế bào côn trùng expresSF+ .Trang 5.1.1 Giới thiệu .Trang 5.1.2 Con đường xử lý tế bào Trang 11 5.1.3 Sự dị tìm virus ngẫu nhiên .Trang 11 5.1.3.1 Cách tiếp cận Trang 11 5.1.3.2 Lựa chọn họ virus Trang 12 5.1.3.3 Lựa chọn virus đích Trang 13 5.2 Các thử nghiệm lâm sàng Trang 13 Kết luận - Đề nghị Trang 15 Tài liệu tham khảo Trang 16 FLUBLOK - VẮC-XIN CHỐNG CÚM Hồ Thị Kim Lan - 0515283 Trang 29/5/2009 Côn Trùng Học Ứng Dụng Vắc - xin FluBlok SẢN XUẤT TỪ TẾ BÁO CÔN TRÙNG Tổng quan Đối với nhà sinh học nói riêng nhà khoa học tất nhân loại nói chung quen thuộc với hai chữ Côn Trùng Ai biết Cơn Trùng lồi động vật có số lượng lớn đa dạng Trái Đất Tầm quan trọng lồi Cơn trùng khơng phủ nhận Nói Cơn Trùng, Giáo sư Marcel Dicke, nhà côn trùng học, Đại học Wageningen miền nam Hà Lan cho biết: "Nếu trùng, giới khơng giống có ngày hơm nay, chí chẳng có dịp có mặt đời Chúng ta hồn tồn phụ thuộc vào đời sống trùng, nên cho người thấy tầm quan trọng chúng Đó mục đích tuần lễ hội Bởi thực trái đất hành tinh côn trùng người" (Theo:http://vietbao.vn/Khoa-hoc/99-con-trung-co-loi-cho-con-nguoi/ 10977635/188/) Lời khẳng định Giáo sư Marcel Dicke toát lên tầm quan trọng Côn trùng sống Trái đất Thật vậy, có 1% cịn lại sâu bọ có hại, 99% trùng có ích cho sinh tồn lồi người Nhiều nghiên cứu từ trùng đem đến cho người ứng dụng mang tính thực tiễn khoa học quý giá Ngày nay, với phát triển khoa học kỹ thuật, nghien cứu để Bảo tồn loài sinh vật quý giá này, người ngày hướng đến việc nghiên cứu ứng dụng trùng, để vừa vừa thực mục đích bảo tồn, vừa đem đến cho người lợi ích to lớn từ lồi động vật với số lượng cực lớn sinh giới Công ty Protein Corp (Mỹ) thử nghiệm thành công loại vắc-xin chống cúm người, tạo từ tế bào côn trùng với tên gọi FluBlOk (Theo:http://www.dietcontrung.vn/kien-thuc-ung-dung/san-xuat-vacxin-chong-cum-tu-te-bao-con-trung.html) Phát nói đem đến cho người niềm hy vọng lớn, phương thức bảo vệ sức khỏe cho nhân loại, mang đến giá trị kinh tế lớn lao thu nhập từ việc kinh doanh loại vắc-xin Bài báo cáo xin phép nói rõ quy trình sản xuất, ưu điểm vấn đề xung quanh việc Sản xuất FluBlOk - vắc-xin chống cúm sản xuất từ tế bào côn trùng Giới thiệu FluBlok FluBlok ngưng kết tố hồng cầu (trivalent recombinant hemagglutinin rHA) tái tổ hợp tam trị, sản xuất từ tế bào côn trùng thông qua việc sử dụng hệ thống biểu thức vector baculovirus (Baculovirus Expression Vector System - BEVS) cung cấp giải pháp hấp dẫn so với loại vắc-xin cúm bất hoạt tam trị (trivalent inactivated influenza vaccines - TIVs) sản xuất từ tế bào trứng dùng lúc Quy trình cơng nghệ đem sản xuất vắc-xin an Hồ Thị Kim Lan - 0515283 Trang 29/5/2009 Côn Trùng Học Ứng Dụng Vắc - xin FluBlok toàn, hiệu nhanh chóng FluBlok chứa đựng lượng HA cao TIV gấp lần thành phần khơng cịn chứa đựng Protein trứng hay chất bảo quản trứng Độ khiết cao sinh kháng thể cho phép tác động liều bậc cao mà ảnh hưởng lớn gọi phản ứng phụ lên chủ thể người BEVS hệ thống sản xuất an toàn, hạn chế tốc độ phát triển sinh không mong muốn trình sản xuất (Theo: http://www.sciencedirect.com/science?_ob=ArticleURL&_udi=B6WBS4VVN4T31&_user=10&_rdoc=1&_fmt=&_orig=search&_sort=d&view=c&_acct=C0000502 21&_version=1&_urlVersion=0&_userid=10&md5=063e2de7599dd62efaf78f15c8 e4b4c1 - Cox MM, Hollister JR, Báo cáo FluBlok, a next generation influenza vaccine manufactured in insect cells, Biologicals (2009), doi:10.1016/j.biologicals.2009.02.014) Giới thiệu Baculovirus về Baculovirus thường tìm thấy rau xanh, trở thành thành phần chế độ ăn uống lành mạnh người Cái tên Baculovirus bắt nguồn từ chữ baculum tiếng Latinh - có nghĩa hình que, mơ tả hình dạng virus Baculovirus xác định phạm vi hẹp sinh vật chủ - loài sâu bọ cánh vảy Bướm - nơi mà chúng gây bệnh chết người Khi đó, côn trùng Baculoviruses bị nhiễm độc baculovirus gây (http://www.nhcma.org/avian/mcpher.pdf) biến tính cấu trúc keo, đặc biệt polyhedrin protein Trong môi trường sống virus, polyhedrin protein Bảo vệ virus khỏi tia cực tím Tế bào trùng thực nhiều sửa đổi hợp lý hoạt động sinh học protein phức tạp q trình đường hóa, hình thành mối liên kết disulfua, photphoryl hóa Nhiều năm qua, hàng ngàn gen tái thành cơng nhanh chóng tế bào trùng Với hệ thống sản xuất BEVS, protein sản xuất tuần, thay tháng, năm; vius (nói dịng gen virus đó) biến đổi mặt di truyền để gây độc cho tế bào côn trùng Hồ Thị Kim Lan - 0515283 Trang 29/5/2009 Côn Trùng Học Ứng Dụng Vắc - xin FluBlok Kiểu gen baculovirus tương đối nhỏ (khoảng 160 kb) nhận dạng kiểu gen bị tiêu hủy kỹ thuật giấy thấm Southern Sau virus gây nhiễm độc tế bào côn trùng, tế bào biến đổi thiết bị sản xuất protein baculovirus trước chết Những protein (dị dạng) khác nguồn gốc gây chết tế bào phần đời ngắn ngủi lại vòng đời chúng.Các protein liên quan tạo điều khiển promoter polyhedrin - promoter mạnh biết đến Các protein tế bào côn trùng sản xuất thường độc hại tế bào có khả thực sửa đổi bổ sung phức tạp (Theo: http://www.proteinsciences.com/aboutus/pdf/Bioprocessing.pdf) B Baculovirus Expression Vector System (BEVS) http://www.nhcma.org/avian/mcpher.pdf) Hệ thống BEVS mang lại nhiều lợi thế, đặc biệt tránh tiếp xúc trực tiếp người với quy trình sản xuất Hồ Thị Kim Lan - 0515283 Trang 29/5/2009 Côn Trùng Học Ứng Dụng Vắc - xin FluBlok Con người không tiếp xúc trực tiếp với quy trình sản xuất (Theo:http://www.inb-biotechnologies.com/adx/aspx/adxGetMedia.aspx? DocID=701,686,650,26,12,2,1,Documents&MediaID=618&Filename=Robinson++NCNV+II+(2007).pdf) Sản xuất vắc-xin chống cúm từ tế bào côn trùng phương thứ ưu 4.1 Sơ lược quy trình sản xuất 4.1.1 Sản xuất vắc-xin từ phôi trứng Tập hợp, thu nhặt trứng thụ tinh => gây ảnh hưởng với vius cúm, ủ nhiệt độ 32-370C => quay ly tâm LS/HS, xác định chất bệnh thơng qua phân tích chẩn đốn, sắc ký =>Xử lý - xử lý với Formal đehit 4.1.2 Sản xuất vắc-xin từ nuôi cấy tế bào động vật hữu nhũ Làm tan lọ nhỏ WCB, phát triển tới vảy Mfg => gây ảnh hưởng với vius cúm, ấp trứng nhiệt độ 32-370C => => quay ly tâm LS/HS, xác định chất bệnh thông qua phân tích chẩn đốn, sắc ký => Xử lý với Formal đehit Tóm lại quy trình là: Sản xuất vắc-xin từ phôi trứng (http://www.nhcma.org/avian/mcpher.pdf) Hồ Thị Kim Lan - 0515283 Trang 29/5/2009 Côn Trùng Học Ứng Dụng Vắc - xin FluBlok Chuẩn bị tế bào gốc => Gây ảnh hưởng ủ bệnh => xóa dấu vết tế bào, làm vius => vius bất hoạt 4.1.3 Sản xuất vắc-xin từ tế bào côn trùng Làm tan lọ nhỏ dụng cụ WCB, phát triển tới vảy Mfg => gây ảnh hưởng với vius cúm, ấp trứng nhiệt độ 22-270C, MF/DF sắc ký =>Baculovirus bất hoạt (Theo:http://www.inbbiotechnologies.com/adx/aspx/ adxGetMedia.aspx? Tế bào côn trùng (http://www.nhcma.org/avian/mcpher.pdf) DocID=701,686,650,26,12,2,1,Documents&MediaID=618&Filename=Robinson++NCNV+II+(2007).pdf) 4.2 So sáng tổng quan lợi quy trình sản xuất vắc-xin chống cúm từ tế bào trùng với phương thức lại Dây chuyền quy trình đơn giản, độ an tồn cao so với phương thức sản xuất từ trứng gà Có thể điểu chỉnh thời gian Khơng có thích nghi chủng virus dòng tế bào Đối với trùng, trình địi hỏi trình tự gen chủng Tránh sử dụng virus sống Khơng cịn RNA virus cúm Khơng có nguy lây lan dịch bệnh Việc sản xuất cỏ thể cần tháng từ đồng hóa trình tự gen Có thể ni cấy dạng huyền phù Phương thức tiếp cận lần để sản xuất vắc-xin bệnh cúm Không gây nguy hiểm nhân viên Hồ Thị Kim Lan - 0515283 Trang 29/5/2009 Côn Trùng Học Ứng Dụng Vắc - xin FluBlok Giảm bớt trình sản xuất phức tạp, giảm việc sử dụng thiết bị dụng cụ phức tạp, từ giảm đáng kể chi phí thiết bị trình sản xuất Tăng nhanh suất (Năng suất q trình sản xuất cao so với từ ni cấy mô tế bào động vật hữu nhũ) Việc tiếp cận phương thức sản xuất khép kín tán thành (Theo: http://www.inb-biotechnologies.com/adx/aspx/adxGetMedia.aspx? DocID=701,686,650,26,12,2,1,Documents&MediaID=618&Filename=Robi nson+-+NCNV+II+(2007).pdf) Kết so sánh thống báo cáo khoa học khác Theo http://www.edenbiodesign.com/documents/130907_Cell_culture.pdf baculovirus tái tổ hợp bắt đầu sư dụng cách nhanh chóng, khơng dòng tế bào động vật hữu nhũ khác, nghĩa không cần thời gian để lựa chọn mở rộng trước bắt đầu Năng suất protein tương tự tương đối giống đáp ứng quy mô nhu cầu thực tế Cervarix ", Vacxin GlaxoSmithKline (GSK) cho vắc-xin phòng bệnh bại liệt người sản xuất cách sử dụng cơng nghệ baculovirus, ví dụ văc-xin bệnh cúm Protein Science's FluBlOk chứa protein ngưng kết tố hồng cầu (rHA) tái tổ hợp Người ta tế bào côn trùng có đường chuyển hóa đường giống đường chuyển hóa đường tế bào động vật có vú, đường chuyển hóa đường vùng HA giống văc-xin dẫn xuất động vật hữu nhũ Con đường chuyển hóa đường tế bào động vật có vú Theo: (http://www.edenbiodesign.com/documents/130907_Cell_culture.pdf) Hồ Thị Kim Lan - 0515283 Trang 29/5/2009 Côn Trùng Học Ứng Dụng Vắc - xin FluBlok Con đường chuyển hóa đường tế bào côn trùng Theo: (http://www.edenbiodesign.com/documents/130907_Cell_culture.pdf) Tế bào côn trùng khơng bị nhiễm vius tế bào động vật hữu nhũ, hạn chế tối đa công đoạn loại bỏ phê chuẩn để lựa chọn vius, tăng mức độ an toàn văc-xin thu từ tế bào trùng, từ giảm đáng kể thời gian chi phí để thực thử nghiệm lâm sàng Thống kê lợi từ việc sản xuất vắc-xin chống cúm từ tế bào côn trùng Sơ đồ biểu diễn lợi tốc độ q trình sản xuất vắc-xin từ tế bào trùng (Novavax) - từ 10-12 tuần - so với phương pháp truyền thống (traditional) phải 24 tuần Hồ Thị Kim Lan - 0515283 Trang 29/5/2009 Côn Trùng Học Ứng Dụng Vắc - xin FluBlok http://www.novavax.com/download/File/BioPham_Reprints_Jan_09_FO.pdf Mối tương quan suất sản xuất vắc-xin từ phương pháp: từ phôi trứng gà, tế bào động vật từ tế bào côn trùng http://www.novavax.com/download/File/BioPham_Reprints_Jan_09_FO.pdf Biểu đồ mô tả khác chi phí sản xuất phương pháp: từ phôi trứng (egg-based), tế bào động vật hữu nhũ (mamalian cell) tế bào côn trùng (insect cell) http://www.novavax.com/download/File/BioPham_Reprints_Jan_09_FO.pdf Như vậy, khẳng định sản xuất vắc-xin chống cúm từ tế bào côn trùng phương thức ưu Sản xuất FluBlok 5.1 Tế bào côn trùng expresSF+ Hồ Thị Kim Lan - 0515283 Trang 10 29/5/2009 Côn Trùng Học Ứng Dụng Vắc - xin FluBlok 5.1.1 Giới thiệu Tập đoàn Protein Sciences sử dụng hệ thống BEVS để sản xuất protein tái tổ hợp từ dòng tế bào đặc trùng expresSF+ (SF+) lớp côn trùng cánh vảy Tế bào SF+ bắt nguồn từ dòng tế bào Sf9 tạo Spodoptera frugiperda => Sf9 Cells nhờ phương (Theo:http://www.regonline.com/custImages/244811/Smith%20pháp sinh sản %20NCNV%20II%20(2007).pdf) vơ tính hỗn hợp dịng tế bào IPLB-Sf21AE Cherry Smith trường Đại học Texas A&M Tại thời điểm dòng tế bào Sf9 đượcphát triển, dịng tế bào IPLB-Sf- 21AE ni cấy liên tục kể từ lập vào năm 1970, từ nuôi cấy sơ phôi thai thơng thường buồng trứng bình thường mổ xẻ từ buồng trứng nhộng loài Spodoptera frugiperda (Theo: http://www.sciencedirect.com/science?_ob=ArticleURL&_udi=B6WBS4VVN4T31&_user=10&_rdoc=1&_fmt=&_orig=search&_sort=d&view=c&_acct=C0000502 21&_version=1&_urlVersion=0&_userid=10&md5=063e2de7599dd62efaf78f15c8 e4b4c1) Một số đặc tính tế bào SF+ làm cho chúng thích hợp để sử dụng tế bào để sản xuất dược phẩm sinh học cách sử dụng hệ thống BEVS : Các tế bào SF+ phát triển trì hỗn sản phẩm trung gian tế bào tỷ trọng thấp lên tỷ trọng cao mà khơng cần kết lại thành nhóm Việc nuôi cấy tế bào SF+ thông thường tới 450L điều kiện có cGMP trì tế bào thích hợp khoảng từ 18 đến 24 đồng hồ Tăng đáng kể suất protein chứa đựng dòng tế bào SF+ so với dòng tế bào cha mẹ Sf9 Tế bào SF+ hỗ trợ tăng trưởng linh hoạt baculovirus tái tổ hợp thành phần có độ chuẩn cao virus, cho phép biểu protein sản xuất thành phần virus thực nhờ việc sử dụng dịng tế bào đơn có chất lượng thuộc tính chắn có 50 đường Hồ Thị Kim Lan - 0515283 Trang 11 29/5/2009 Côn Trùng Học Ứng Dụng Vắc - xin FluBlok cho phép gìn giữ thành phần hạt giống trở nên linh hoạt đáng kể thời gian sản xuất có cGMP với quy mơ lớn Hình ảnh biểu diễn thay đổi hình thái phát triển dịng tế bào SF+ thời gian ni cấy (Theo: http://www.proteinsciences.com/aboutus/pdf/Bioprocessing.pdf) Các kiểm tra chất lượng dòng tế bào SF+ mơ tả trước thực theo tài liệu hồ sơ Q5A tổ chức Hội nghị Quốc tế (IHC) Hiệp hội lương thực dược phẩm giới (FDA) : « Số điểm để xét thuộc tính dịng tế bào sử dụng sản xuất dược phẩm sinh học » năm 1993, phác thảo đạo năm 2006 : « Thuộc tính chất lượng tế bào vật liệu sinh học khác sử dụng sản xuất vắc-xin để phòng chống điều trị dịch bệnh cúm » Ngồi mơ tả việc kiểm tra McPherson, kiểm tra cịn dựa vào đánh giá phê bình FDA 5.1.2 Con đường xử lý tế bào Sự dò tìm trực quan thể hạt tế bào - kiểu gen virus yếu virus trú ẩn nơi an tồn có khả trừ virus cảm ứng để tái sinh, mà xảy trình tự tế bào đặc biệt Để đánh dấu nhiễm trùng, tế bào SF+ an toàn, tế bào từ ngân hàng tế bào SF+ kết thúc sản xuất đường (P>50) xử lý hóa học ủ bệnh nhiệt độ cao để cảm ứng tế bào thuộc giống để khảo sát kính hiển vi điện tử quét (TEM) Hồ Thị Kim Lan - 0515283 Trang 12 29/5/2009 Côn Trùng Học Ứng Dụng Vắc - xin FluBlok Để cảm ứng đặc biệt đường xử lý hóa học, tế bào SF+ sử lý với hợp chất Halogen dạng vòng 5-iododeoxyuridine (IdU) - hợp chất mà đưa đến để hoạt hóa virus nuôi cấy tế bào côn trùng động vật hữu nhũ Việc xử lý với IdU thực với có mặt IdU, tế bào phát triển ngày Và sau ngày phục hồi, phân tích TEM Phân tích việc xủ lý tế bào với chất hóa học đưa đến phát khơng cịn tồn thể virus thể sống cịn chứa tế bào 200 tế bào kiểm tra Một cú sốc nhiệt độ cao phương pháp độc lập thứ hai sử dụng để cảm ứng đặc biệt tế bào SF+ Để đảm bảo tế bào thực bị gây stress nhiệt độ cao, chọn điều kiện kết nối trước để cảm ứng mạnh (gây sốc) protein dòng tế bào liên quan tới tế bào Sf9 Trong cú sốc nhiệt học đó, protein quan sát cảm ứng, ủ bệnh thời gian từ 15 phút tới đồng hồ nhiệt độ lớn 37 0C Các tế bào SF+ sốc nhiệt đơn giản ủ bệnh tế bào 45 phút nhiệt độ 43 0C, sau ngày để phục hồi, phân tích kính hiển vi TEM giống đường xử lý hóa học.Và việc phân tích việc xử lý tế bào nhiệt đưa đến phát khơng cịn tồn thể virus thể sống cịn chứa tế bào 200 tế bào kiểm tra giống trường hợp dùng đường xử lý hóa học Tuy nhiên có điều quan trọng cần lưu ý, hạn chế hai phương pháp thiếu điều khiển cảm ứng tế bào côn trùng Hiện , khơng có « vìrus có chứa RNA chuyển vật liệu dì truyền thành dna tế bào ký chủ » giản tiếp ảnh hưởng đến tế bào Spodoptera frugiperda phát triển thành tế bào SF+ tiềm tàng, đó, khơng khả thi Và đó, điều kiện xử lý phát triển dựa giả thuyết sử dụng nghiên cứu dòng tế bào động vật hữu nhũ nguyên tắc 5.1.3 Sự dị tìm virus ngẫu nhiên 5.1.3.1 Cách tiếp cận Những virus sử dụng côn trùng loài vật chủ tự nhiên sơ khai phân loại gồm có 17 họ 30 giống sử dụng tất hốc biết đến cho mã hóa gen, ngoại trừ dsDNA-RT Tính đa dạng lớn virus gây bệnh côn trùng bị ghép với lỗ hổng lớn nghiên cứu khoa học chúng ta, virus tạo nên thử thách môi trường - nơi mà phát triển dòng virus khảo sát để phát diện virus gây bệnh côn trùng tế bào Một cách lý tưởng, thử nghiệm di truyền có khả phát tất lồi virus gây bệnh trùng biết đến bên họ virus đặc biệt cần thiết Gần đây, mồi PCR thiết kế cho có khả phát hai lồi virus gây bệnh mụn dộp, bại liệt cũ Với phân tích này, mồi PCR thiết kế theo liên ứng - thối hóa mồi đoạn oligonuclotide lai (CODEHOPs) cho tiếp cận phương pháp PCR CODEHOP phương pháp tiếp cận tốt để tận dụng Hồ Thị Kim Lan - 0515283 Trang 13 29/5/2009 Côn Trùng Học Ứng Dụng Vắc - xin FluBlok thuận lợi protein ngắn ( chứa - amino acid), bảo tồn cao mô tip acid amin tìm thấy protein liên quan mã hóa lồi virus họ Dựa thành công cách sử dụng khác phương thức tiếp cận này, bắt đầu phát triển khảo sát PCR để sử dụng chiến lược CODEHOP để bảo vệ dòng tế bào SF+ khỏi làm hỏng virus gây bệnh côn trùng 5.1.3.2 Lựa chọn họ virus Để tập trung thử nghiệm phát triển theo hướng họ s gây bệnh côn trùng chứa đựng loài virus tiềm ẩn nguy cao làm hỏng tế bào SF+, đánh giá họ côn trùng có chứa virus biết ảnh hưởng tới lồi trùng cảnh vảy Bảng danh sách họ virus biết chứa virus gây bệnh trùng trừ lồi virus gây bệnh côn trùng virus gây hại gỗ (Trang bên) Hồ Thị Kim Lan - 0515283 Trang 14 29/5/2009 Côn Trùng Học Ứng Dụng Vắc - xin FluBlok DANH SÁCH CÁC HỌ VIRUS CHỨA CÁC VIRUS GÂY BỆNH STT Họ Ascoviridae Baculoviridae Birnaviridae Dicistroviridae Iridoviridae Metaviridae Nodaviridae Parvoviridae Polydnaviridae 10 11 12 Poxviridae Pseudoviridae Reoviridae 13 Tetraviridae CÔN TRÙNG Kiểu Gen Thành phần loài dsDNA Spodoptera frugiperda ascovirus 1a dsDNA AcMNPV Cydia pomonella granulovirus dsRNA Drosophila X virus Cricket paralysis virus; ssRNA(+) Infectious flacherie virus Invertebrate iridescent virus 6; dsDNA Invertebrate iridescent virus Saccharomyces cerevisiae Ty3 virus; ssRNA- Drosophila melanogaster gypsy virus; RT Ascaris lumbricoides tas virus ssRNA(+) Nodamura virus Junonia coenia densovirus; Bombyx mori densovirus; Aedes aegypti densovirus; ssDNA Periplaneta fuliginosa densovirus Campoletis sonorensis ichnovirus; dsDNA Cotesia melanoscela bracovirus Menontha melontha entomopoxvirus; Amssacta moorei entomopoxvirus; dsDNA Chironomis luridis entomopoxvirus ssRNA(+) Drosophila melanogaster copia virus dsRNA Cypovirus 1; Idnoreovirus Nudaurelia capensis b virus; ssRNA(+) Nudaurelia capensis u virus Bảng 1: Danh sách họ virus chứa virus gây bệnh trùng Dựa vào phân tích chúng tơi loại trừ họ Dicistoviridae phải chịu vắng mặt virus gây bệnh côn trùng cảnh vảy biết lây lan nhanh họ Birnaviridae, mà chứa đựng giống đơn gồm có lồi virut Drosophila X virus Cũng loại trừ hai họ Reoviridae Polydnaviridae, hai số bao gồm virus mang thông tin di truyền hạn chế Cuối cùng, phân tích virut thuộc họ Metaviridae Pseudoviridae loại trừ mối quan hệ họ hàng chúng, tế bào trùng kệt luận nguồn tài nguyên phong phú Mục tiêu bảo tồn vùng xác định protein mã hóa thành viên thành phần họ virus gần có mặt kiểu gen tế bào SF+, chất retroelements, kết tích cực từ phương pháp PCR khơng thiết lây nhiễm đại diện có Hồ Thị Kim Lan - 0515283 Trang 15 29/5/2009 Côn Trùng Học Ứng Dụng Vắc - xin FluBlok mặt Ngoài ra, thử nghiệm cho đại diện thực phương pháp phân tích PERT F-PBERT, xác nhận có mặt hoạt động phiên mã ngược, nuôi cấy bề mặt tế bào SF+, bao gồm có mặt retroelement Tuy nhiên, kết thúc trình sản xuất tế bào xác định để chứa đựng hạt retrovirus lây nhiễm kiểm tra phương pháp phân tích ni cấy tế bào 5.1.3.3 Lựa chọn virus đích Các protein virus đích thiết kế CODEHOPs lựa chọn cách thực cách có hệ thống việc tự điều tra thơng tin di truyền sẵn có cho lồi vi-rút họ Tiêu chí để lựa chọn chuỗi protein đích cho thiết kế mồi dựa trên: Số lượng lồi virus họ giúp cho trình tự protein đích có khả Khả nhận dạng việc bảo tồn acid amin trình tự xếp thành hàng CÁC PROTEIN VIRUS ĐÍCH DẠNG CODEHOP Số tương ứngSTT 1Họ virus Prot ein đích Ascoviridae Iridoviridae Nodaviridae Parvoviridae Poxviridae Tetraviridae Major capsid protein Major capsid protein RNA dependent RNA polymerase Non-structural protein DNA polymerase/spheroidin Major capsid protein CAF05815 Q05815 ABS29339 NP051020 AAA92858 AA073881 Bảng 2: Danh sách protein virus đích dạng CODEHOP Sau lựa chọn protein đích chứa sẵn trình tự acidamin từ họ virus để nhân trình tự gen liên kết, sau chỉnh sửa khối acid amin liên kết việc sử dụng khối trình tự xử lí liên kết 5.2 Các thử nghiệm lâm sàng Nói đến chương tình thử nghiệm lâm sàng, phải kể tới chương trình PSC01, PSC03, PSC04 PSC06 Mỗi chương trình có vài nét riêng, ví dụ chương trình PSC01 chọn thực mùa cúm 2004-2005, tiến hành Hồ Thị Kim Lan - 0515283 Trang 16 29/5/2009 Côn Trùng Học Ứng Dụng Vắc - xin FluBlok cho người từ 18-49 tuổi, kết dựa tổng hợp so sánh bệnh nhân tiêm vắc-xin FluBlok tiêm giả dược; chương trình PSC04, mùa cúm năm 2007-2008, dành cho đối tượng 18-49 tuổi, kết tổng hợp từ việc cho đối tượng tiêm vắc-xin FluBlok; chương trình PSC06 (năm 2007-2008đối tượng từ 50-64 tuổi) PSC03 (năm 2006-2007, đối tượng 65 tuổi) kết tổng hợp so sánh đối tượng tiêm vắc-xin FluBlok vắc-xin Fluzone (vắc-xin chứa virus làm bất hoạt thuộc tuýp A (H1N1), tuýp A (H3N2), tuýp B1,2) Giữa chương trình, kết thu có phần xê dịch nhỏ, tóm lại thử nghiệm lâm sàng tiến hành 6577 người trưởng thành (18 tuổi lớn 18 tuổi) Bốn chương trình áp dụng với 5106 người độ tuổi 18-49 với liều lượng tiêm từ vắc-xin FluBlok là: (2497 người nhận 135µg, 151 người nhận 75 µg) từ giả dược (2458 người); áp dụng với 1471 người từ 50 tuổi trở lên với vắc-xin Flublok 736 người vắc-xin Fluzone 735 người (Theo: http://www.sciencedirect.com/science? _ob=ArticleURL&_udi=B6WBS-4VVN4T31&_user=10&_rdoc=1&_fmt=&_orig=search&_sort=d&view=c&_acct=C0000502 21&_version=1&_urlVersion=0&_userid=10&md5=063e2de7599dd62efaf78f15c8 e4b4c1) Như nói, kết tổng hợp có chênh lệch nhỏ chương trình, đưa đến kết khả quan, sức đề kháng thể người tiêm vắc-xin Flublok tăng đáng kể tỷ lệ nhiễm bệnh giảm đến 86% (Theo: http://www.dietcontrung.vn/kien-thuc-ung-dung/san-xuat-vac-xin-chong-cum-tu-tebao-con-trung.html Kết luận - Đề nghị Tóm lại việc sản xuất vắc-xin FluBlok thành tựu khoa học đem lại lợi ích vơ thiết thực nghiên cứu khoa học việc phòng chữa bệnh, đặc biệt cơng đấu tranh phịng chống lại đại dịch cúm biến tấu phức tạp đại dịch cúm Với đa dạng giới trùng, cịn nhiều, nhiều chất chiết xuất từ tế bào trùng để phát triển, chế biến thành hợp chất chữa trị bệnh cho người, chí bệnh mạn tính; chất cần thiết phục vụ vào nhu cầu cần thiết sống người Việc sản xuất vắc-xin từ tế bào côn trùng thực hiện, để sản xuất vắc-xin phòng bệnh cúm từ dịng tế bào Sf9 lồi trùng Spodoptera frugiperda, vắc-xin chống bệnh sốt rét, bào chế từ ký sinh trùng Plasmodium falciparum làm yếu Hiệu tác động vắc-xin lên sức khỏe người khả quan Do đề nghị nhiều nghiên cứu đối tượng côn trùng, nhằm tạo nhiều dược phẩm sinh học, đem lại lợi ích nhiều mặt cho người Đối với việc dạy học Việt Nam, bên cạnh Phân loại giáo dục bảo tồn, cần tìm hiểu thêm ứng dụng loại trùng, khuyến khích việc phát ứng dụng mới, đồng thời hỗ trợ nghiên cứu đối tượng côn trùng kết hợp với ngành Sinh học phân tử, Hồ Thị Kim Lan - 0515283 Trang 17 29/5/2009 Côn Trùng Học Ứng Dụng Vắc - xin FluBlok Sinh hóa, Sinh lý động vật để hiểu rõ chế sinh học cấu trúc giải phẫu vấn đề liên quen nhắm hỗ trợ kiến thức qua lại, để sớm có phát thú vị ứng dụng giới côn trùng vốn đa dạng đất nước Việt Nam Đối với FluBlok, cần phê chuẩn nhanh chóng tổ chức Lương thực Dược phẩm giới FDA FluBlok, để FluBlok nhanh chóng thừa nhận ưu ứng dụng rộng rãi toàn giới, nhằm đấu tranh với nạn biến tấu đại dịch cúm nguy hiểm đến sức khỏe người sinh vật sống khác Tài liệu tham khảo Các liệu dùng báo cáo dịch từ báo cáo thông tin tiếng Anh internet (trừ trang web http://www.dietcontrung.vn/kien-thuc-ungdung/san-xuat-vac-xin-chong-cum-tu-te-bao-con-trung.html) http://vietbao.vn/Khoa-hoc/99-con-trung-co-loi-cho-con-nguoi/10977635/188/) http://www.sciencedirect.com/science?_ob=ArticleURL&_udi=B6WBS4VVN4T31&_user=10&_rdoc=1&_fmt=&_orig=search&_sort=d&view=c&_acct=C0000502 21&_version=1&_urlVersion=0&_userid=10&md5=063e2de7599dd62efaf78f15c8 e4b4c1 http://www.nhcma.org/avian/mcpher.pdf http://www.proteinsciences.com/aboutus/pdf/Bioprocessing.pdf http://www.inb-biotechnologies.com/adx/aspx/adxGetMedia.aspx? DocID=701,686,650,26,12,2,1,Documents&MediaID=618&Filename=Robinson++NCNV+II+(2007).pdf http://www.edenbiodesign.com/documents/130907_Cell_culture.pdf http://www.novavax.com/download/File/BioPham_Reprints_Jan_09_FO.pdf http://www.regonline.com/custImages/244811/Smith%20-%20NCNV%20II %20(2007).pdf) http://www.ncsrt.com/Baculovirus%20and%20Insect%20Cell%20Poster %202006.pdf Hồ Thị Kim Lan - 0515283 Trang 18 29/5/2009 Côn Trùng Học Ứng Dụng Hồ Thị Kim Lan - 0515283 Vắc - xin FluBlok Trang 19 29/5/2009 ... Việc sản xuất vắc- xin từ tế bào côn trùng thực hiện, để sản xuất vắc- xin phòng bệnh cúm từ dòng tế bào Sf9 lồi trùng Spodoptera frugiperda, vắc- xin chống bệnh sốt rét, bào chế từ ký sinh trùng. .. định sản xuất vắc- xin chống cúm từ tế bào côn trùng phương thức ưu Sản xuất FluBlok 5.1 Tế bào côn trùng expresSF+ Hồ Thị Kim Lan - 0515283 Trang 10 29/5/2009 Côn Trùng Học Ứng Dụng Vắc - xin FluBlok. .. quy trình sản xuất Trang 4.1.1 Sản xuất vắc- xin từ phôi trứng Trang 4.1.2 Sản xuất vắc- xin từ nuôi cấy tế bào động vật hữu nhũ Trang 4.1.3 Sản xuất vắc- xin từ tế bào côn trùng