Đang tải... (xem toàn văn)
I.VECTOR LÀ GÌ? vector chuyển gene là phân tử DNA có khả năng tự sao chép, tồn tại độc lập trong tế bào mà không nhất thiết phải gắn vào hệ gene tế bào chủ và mang được gene mong muốn với số lượng lớn. Vector phải gắn thêm promoter (trình tự điều hòa) tạo thuận lợi cho sự phiên mã gene lạ cũng như các gene đánh dấu để dễ dàng phát hiện ra vector hay gene lạ gắn vào. Vector được cấu tạo tùy theo mục tiêu sử dụng và được cải tiến không ngừng. Véctơ tách dòng (vector cloning) là một phân tử DNA có kích thước nhỏ cho phép cài gắn một đoạn DNA ngoại lai vào nhằm mục đích nhân đoạn DNA ngoại lai lên với số lượng lớn.
BÀI TiỂU LuẬN: Gi ng Viên h ng d n:Nguy n Th Vân Anhả ướ ẫ ễ ị Nhóm 1: Đ ng Th Bìnhặ ị Cao Th Vân Anhị VECTOR I.VECTOR LÀ GÌ? vector chuyển gene là phân tử DNA có khả năng tự sao chép, tồn tại độc lập trong tế bào mà không nhất thiết phải gắn vào hệ gene tế bào chủ và mang được gene mong muốn với số lượng lớn. Vector phải gắn thêm promoter (trình tự điều hòa) tạo thuận lợi cho sự phiên mã gene lạ cũng như các gene đánh dấu để dễ dàng phát hiện ra vector hay gene lạ gắn vào. Vector được cấu tạo tùy theo mục tiêu sử dụng và được cải tiến không ngừng. Véctơ tách dòng (vector cloning) là một phân tử DNA có kích thước nhỏ cho phép cài gắn một đoạn DNA ngoại lai vào nhằm mục đích nhân đoạn DNA ngoại lai lên với số lượng lớn. CÁC LOẠI VECTOR LỊCH SỬ RA ĐỜI CỦA VECTOR Năm 1973 các nhà khoa học đã nối nhiều đoạn ADN vào plasmid được tách ra từ vi khuẩn E.coli. Plasmid này có thể hoạt động, tự sao chép khi đưa vào tế bào vi khuẩn E.coli, từ đó tạo ra công nghệ quan trọng trong công nghệ di truyền là tách dòng gen. Thành tựu đầu tiên của kỹ thuật ADN tái tổ hợp là việc sản xuất ra hoocmon sinh trưởng người (hGH-human growth hoocmon) nhờ vi sinh vật nhận là Escherichia coli (E.coli). Các nhà khoa học đưa được gen mã hoá hGH vào E.coli. E.coli có ADN tái tổ hợp đã sản sinh ra một lượng rất lớn hoocmon sinh trưởng người và được sử dụng vào thực tiễn y học. Vào những năm đầu của thập kỷ 80 thế kỷ XX, nhờ kỹ thuật ADN tái tổ hợp, người ta đã sản xuất interferol, sản xuất protein chống đông máu v.v… II.Phân loại 1.plasmid vector Plasmid là các thông tin di truyền ngoài nhân,được tìm Thấy nhiều loài vi khuẩn khác nhau .Chúng là những phân tử AND mạch vòng ,sợi đôi, kích thước từ 1 đến 400Kb ,có khả nằng tự sao chép để tồn tại độc lập trong tế bào . Hình 1: M t t bào vi khu n có ộ ế ẩ ch a plasmid và nh kính hi n ứ ả ể vi đi n t phóng đ i h gen c a ệ ử ạ ệ ủ plasmid. Đó là m t vòng ADN ộ khép kín và th ng xo n cu n ườ ắ ộ vào nhau. Các loại plasmid *Phân nhóm các plasmid là dựa vào khả năng truyền sang vi khuẩn khác của chúng . Plasmid tiếp hợp (conjugative) chứa các tra-genes, giúp thực hiện một quá trình phức tạp gọi là tiếp hợp (conjugation), chuyển một plasmid sang vi khuẩn khác (hình 4). Plasmid không tiếp hợp là những plasmid không có khả năng tự thực hiện tiếp hợp, vì thế chúng chỉ có thể được chuyển sang một vi khuẩn khác khi có sự trợ giúp (ngẫu nhiên) của plasmid tiếp hợp. Còn có một nhóm plasmid trung gian gọi là nhóm di chuyển được (mobilisable). Chúng chỉ mang các gene cần thiết cho việc di chuyển. Những plasmid này có thể chuyển với tần suất cao khi có mặt một plasmid tiếp hợp.Nhiều loại plasmid khác nhau có thể cùng tồn tại trong một tế bào, đã có 7 plasmid khác nhau được tìm thấy trong E. coli. Mặt khác, những plasmid có họ hàng thường không thể cùng tồn tại - không tương hợp (incompatible), một trong số chúng sẽ bị loại khỏi tế bào. Vì thế, các plasmid còn được xếp vào các nhóm không tương hợp (incompatibility group), dựa vào khả năng cùng tồn tại của chúng trong một tế bào. Sự sắp xếp theo tính không tương hợp dựa vào cơ chế điều hòa những chức năng Hình 4 : Sơ đồ về tiếp hợp ở vi khuẩn 1 DNA nhiễm sắc thể. 2 Plasmids. 3 Pilus. *phân lo i plasmid là d a vào ch c năng. Có ạ ự ứ 5 nhóm chính: Plasmid gi i tínhớ (Fertility-(F) plasmid), mang các tra gene, có kh năng ti p h p. ả ế ợ Plasmid mang tính kháng (Resistance-(R) plasmid), mang các gene có kh năng kháng ả l i các thu c kháng sinh hay các ch t đ c. ạ ố ấ ộ Đ c bi t d i thu t ng R-factor tr c khi ượ ế ướ ậ ữ ướ phát hi n ra b n ch t c a nó là plasmid. ệ ả ấ ủ Col-plasmid, ch a gene mã hóa cho s t ng ứ ự ổ h p ợ colchicine, m t protein có th gi t ch t ộ ể ế ế các vi khu n khác. ẩ Plasmid phân h yủ , giúp phân h y các ch t l ủ ấ ạ nh ư toluene hay salicylic acid. Plasmid mang đ c tínhộ , làm cho sinh v t tr ậ ở thành sinh v t gây b nhậ ệ Các ứng dụng của plasmid Plasmid đóng m t vai trò quan tr ng trong các phòng thí ộ ọ nghi m di truy n và sinh hóa, n i chúng đ c s d ng đ ệ ề ơ ượ ử ụ ể nhân b n ho c bi u hi n các gene c n quan tâm. Có r t nhi u ả ặ ể ệ ầ ấ ề plasmid đ c th ng m i hóa cho các ng d ng trên. Đ u ượ ươ ạ ứ ụ ầ tiên, các gene c n quan tâm đ c g n chèn vào plasmid. ầ ượ ắ Plasmid này có ch a, ngoài gene quan tâm, m t hay vài gene ứ ộ kháng kháng sinh. Plasmid này sau đó đ c đ a vào bên trong ượ ư vi khu n b ng m t quá trình g i là ẩ ằ ộ ọ bi n n pế ạ (transformation). Vi khu n sau đó đ c nuôi trên môi tr ng có ch a kháng ẩ ượ ườ ứ sinh. Nh ng vi khu n nh n đ c plasmid s bi u hi n kh ữ ẩ ậ ượ ẽ ể ệ ả năng kháng kháng sinh (nh gene kháng kháng sinh n m trên ờ ằ plasmid), do đó s ng đ c trên môi tr ng nuôi c y có ch a ố ượ ườ ấ ứ kháng sinh t ng ng. Kháng sinh trong môi tr ng, tuy ươ ứ ườ nhiên, l i có kh năng tiêu di t nh ng vi khu n không nh n ạ ả ệ ữ ẩ ậ đ c plasmid vì chúng không mang gene kháng kháng sinh ượ này. Nh v y, vi khu n ch a plasmid đ c tách riêng ra, tăng ờ ậ ẩ ứ ượ sinh, thu l i và ly gi i đ phân l p plasmid.ạ ả ể ậ Plasmid pGEX-3x là một vector tách dòng phổ biến 2.Cosmid vector Được thiết kế để phân dòng những đoạn AND lớn (khoảng 40-45kb).Đây làloại vector nhân tạo kết hợp các thuộc tính của plasmid với phage.Cosmid vector có chứa đầu cos đầu dính của phage giúp AND của phage từ dạng thẳng nối lại thành vòng tròn nên có thể gói bọc dễ dàng trong đầu của phage.Mặt khác cosmid vector lại có phần gốc plasmid nên chúng có khả năng tự phân đôi như những plasmid của vi khuẩn.Do hầu như toàn bộ phần AND của phaeg đã đươc cắt bỏ nên chúng có khả năng mang đoạn AND ngoại lai có kích thước lớn.Khi đoạn AND ngoại lai được ghép nối các cosmid tái tổ hợp sẻ được gói bọc trong phage.Phage mang AND tái tổ hợp không tự nhân lên được vì phần AND phage đã bị loại bỏ nhưng chúng vẫn có khả năng lây nhiễm vàop vi khuẩn.Tuy nhiên sau khi vào vi khuẩn chúng lại có khả năng tự nhân lên do bản thân trong vi khuẩn có plasmid binh thường.Cosmid mang đoạn gen lạ có thể dài đến 45kb dùng để lập thư viện gen ở ruồi giấm,chuột,và cả người. bác có vector bong bóng 600 x 600 - 139k - png webtretho.com 3. vector phage Các phage (virut của vi khuẩn) được dùng lam vector chuyển gen do khả năng thực hiện việc mang gen từ tế bào vi khuẩn cho sang tế bào chủ nhận Các phage sử dụnh làm vector tách dòng hiện nay phần lớn bắt nguồn từ phage lamda có nhiều phage như :EMBL3,EMBL4, lamda GEM11,phage M13…Phage M13 thường được sử dụng làm vector tách dòng nóp có AND sợi đơn chứa 10 gen,có kích thước khoảng 6400bp,chỉ xâm nhiểm vào ecoli. 4.Vector là vírut có tế bào eukaryote Các vector vi rút thường được sử dụng là các loại virút SV40 (Smianvirut),adeno virut ,reto virút ….các vectỏ nhom này thương được sử dụng trong tách dòng gen và chuyển gen của tế bào động thực vật bậc cao [...]...5.các vector khác Plasmid ti :được sử dụng rộng rãi trtumifacciens gây bệnh tạo khối u (tumor) ở thực vật Vector nhiêm sắc thể nhân tạo của nấm men YAC : nấm men là đối tượng quan trọng trong công nghệ di truyền.Các plasmid có nguồn gốc từ vi khuẩn đưa vào... gốc từ vi khuẩn đưa vào nấm men hoạt động thường không hiệu quả.ngược lạiplasmid có nguồn gốc nấm men đưa vào tế bào vi khuẩn lại không hoạt động.cho tới nay ở vi sinh vật nhân chuẩn(eukaryota) mới chỉ tìm được một loại plasmid duy nhất đó là plasmid hình vòng có kích thước khoảng 2micromet,có nhiều trong tế bào nấm men sacchromyces urevisiae ong việc chuyển gen ở thực vật,plasmid ti bất đầu từ vi khuẩn . vector tách dòng phổ biến 2.Cosmid vector Được thiết kế để phân dòng những đoạn AND lớn (khoảng 40-45kb).Đây làloại vector nhân tạo kết hợp các thuộc tính của plasmid với phage.Cosmid vector. lượng lớn. Vector phải gắn thêm promoter (trình tự điều hòa) tạo thuận lợi cho sự phiên mã gene lạ cũng như các gene đánh dấu để dễ dàng phát hiện ra vector hay gene lạ gắn vào. Vector được. ng Viên h ng d n:Nguy n Th Vân Anhả ướ ẫ ễ ị Nhóm 1: Đ ng Th Bìnhặ ị Cao Th Vân Anhị VECTOR I .VECTOR LÀ GÌ? vector chuyển gene là phân tử DNA có khả năng tự sao chép, tồn tại độc lập trong tế