mùa khô trình bày tại Bảng 11. Số lượng vi khuẩn trung bình trong gan cá ba sa thu mẫu trên sông Tiền (35,83.10 4 CFU/g) cao hơn sông Hậu (13,35.10 4 CFU/g) vào mùa mưa. Mùa khô số lượngh vi khuẩn trong gan cá bệnh ở sông Tiền (5,31.10 4 CFU/g) cũng cao hơn sông Hậu (0,87. 10 4 CFU/g). Mùa mưa, số lượng vi khuẩn phân lập được từ gan cá cũng cao hơn mùa khô trên cả hai khu vực sông Tiền và sông Hậu. Số lượng vi khuẩn phân lập được từ gan cá chưa có biểu hiện bệnh lý bên ngoài (cá “khỏe”) rất thấp ( 0,22. 10 4 CFU/g). Bảng 11. Kết quả phân lập đònh lượng vi khuẩn tổng số từ gan cá bệnh và cá chưa có biểu hiện bệnh lý bên ngoài trong thời gian nghiên cứu. Mùa mưa Mùa khô Số lượng vi khuẩn (10 4 CFU/g) Số lượng vi khuẩn (10 4 CFU/g) Điểm thu mẫu cá bệnh Số lượng mẫu Min Max Trung bình Số lượng mẫu Min Max Trung bình Sông Tiền 6 2,0 109 35,83 10 0,2 16,7 5,31 Sông Hậu 19 0,1 218 13,35 12 0,17 3,75 0,87 Cá “khỏe” - - - - 5 0,1 0,29 0,22 Theo kết quả phân tích thống kê, tổng số vi khuẩn cảm nhiễm trên gan cá ba sa giữa sông Tiền và sông Hậu không sai khác có ý nghóa thống kê (P > 0,05). Số lượng vi khuẩn cảm nhiễm trên gan cá giữa mùa mưa và mùa khô, cũng không sai khác có ý nghóa thống kê. ( P > 0,05). Mật độ cảm nhiễm của vi khuẩn trên gan cá giữa mùa mưa trên sông Tiền và sông Hậu, giữa mùa mưa và mùa khô trên sông Hậu đều không sai khác có ý nghóa thống kê. Nhưng có sự khác biệt có ý nghóa thống kê giữa mùa mưa và mùa khô trên sông Tiền; mùa khô trên sông Tiền và Hậu. III. 4 Tính nhạy cảm của các chủng vi khuẩn phân lập từ cá bệnh đối với một số thuốc kháng khuẩn thông dụng. Tính nhạy cảm của các vi khuẩn phân lập được từ cá basa đối với các loại 51 thuốc kháng khuẩn lưu hành phổ biến trên thò trường được trình bày tại Bảng 12. Nhìn chung, các chủng vi khuẩn phân lập từ cá bệnh nhạy cảm với Furazolidone, Neomycine và Gentamycine. Ngoài A. sobria, các chủng vi khuẩn này thể hiện tính đề kháng thuốc (drug resistance) đối với Penicilline, Ampicilline, Tetramycine, Streptomycine, Chloramphenicol và Sulfamethoxazole. Bảng 12. Tính nhạy cảm của các vi khuẩn phân lập từ cá basa bò bệnh đối với một số thuốc kháng khuẩn thông dụng Vi khuẩn TT Tên thuốc Aeromonas sp A. hydrophila A. sobria A.cavia e Pseudomonas sp 1 Furazolidone S S S S S 2 Neomycine S S N S S 3 Gentamycine S S S S S 4 Penicilline R R R R R 5 Ampicilline R R R R R 6 Tetramycine R R S R R 7 Streptomycine R R S R R 8 Chloramphenicol R R S R R 9 Sulfamethoxazole N R S R N * Ghi chú: R: kháng thuốc; S: nhạy cảm ; N: ít nhạy cảm Hình 6. Kháng sinh đồ vi khuẩn Aeromonas hydrophila 52 Phan Văn Ninh và cộng sự (1993) đã nghiên cứu tính nhạy cảm thuốc của vi khuẩn Aeromonas sp. phân lập từ cá he nuôi trong bè tại An giang bò bệnh tuột vảy và xuất huyết. Kết quả nghiên cứu cho thấy vi khuẩn gây bệnh nhạy cảm với Chloramphenicol, Furazolidon; ít nhạy cảm với Streptomycine, Chlotetracyline; đề kháng Ampicilline và Penicilline. Từ kết quả nghiên cứu này, các tác giả đề xuất việc sử dụng kháng sinh trong việc trò bệnh cho cá nuôi. Kết quả nghiên cứu này cũng được người nuôi cá bè tại An giang vận dụng phòng và trò bệnh xuất huyết cho cá basa, tuy nhiên hiện thời hiệu quả chữa trò thấp. Kết quả thử nghiệm tính nhạy cảm thuốc của các chủng vi khuẩn phân lập đã trình bày trên đây góp phần giải thích tính hiệu quả thấp của công tác chữa trò bệnh cho cá basa tại An Giang trong những năm gần đây. Đề tài nghiên cứu này chưa tiến hành so sánh các chủng Aeromonas sp. đã phân lập được với các chủng do Phan Văn Ninh và cộng sự đã công bố do các chủng vi khuẩn này không được lưu giữ. Tuy nhiên, có nhiều khả năng rằng, do việc sử dụng phổ biến các loại thuốc kháng khuẩn trong nghề nuôi cá, đã hình thành nhiều chủng vi khuẩn kháng thuốc trong môi trường nước tại các điểm nuôi cá ở An Giang. Tình hình này đòi hỏi cần có các nghiên cứu sâu hơn về khu hệ vi sinh vật nước tại An Giang, và nghiên cứu các biện pháp phòng trò bệnh hữu hiệu, hạn chế việc sử dụng thuốc thiếu chọn lọc nhằm đảm bảo sự phát triển nghề nuôi trồng thủy sản bền vững tại đòa phương. III.5 Kết quả thực nghiệm gây nhiễm trở lại III.5.1 Các chủng vi khuẩn sử dụng cho thí nghiệm 53 Qua quá trình phân lập, nuôi cấy, đònh danh vi khuẩn, đã lưu giống 5 loại vi khuẩn: Pseudomonas sp (chủng STB116971), A. caviae (SHB4108972), A. sobria (STB511983), A. hydrophila (SHB681984), và Aeromonas sp (SHB6111985). Từ kết quả phân lập vi khuẩn đònh tính, đã chọn hai chủng vi khuẩn A. hydrophila SHB681984 và A. sobria STB511983 gây nhiễm thực nghiệm cho cá basa để xác đònh tính chất gây bệnh (pathogenicity) của các loại vi khuẩn này. III.5.2 Tính chất gây bệnh của A. hydrophila SHB681984 + Cá thí nghiệm: Cá thí nghiệm có chiều dài trung bình 9,5cm ( 8,0-10,3 cm), khối lượng trung bình: 8,5 gr/con (5,3 -11,9 gr). Sau khi tiêm dung dòch muối sinh lý (nhóm cá đối chứng) hoặc canh khuẩn, cá được nuôi trong bể kính theo từng nhóm, mỗi bể 10 con (Hình7) . Nhiệt đôï không khí trung bình trong thời gian thí nghiệm 35 -37 o C. 54 Hình 7. Các bể kính bố trí thí nghiệm gây nhiễm trở lại + Kết quả theo dõi cá thí nghiệm: Thí nghiệm tiến hành từ ngày 8 tháng 5 năm 1998. Sau khi tiêm xong, cá vẫn bơi lội và bắt mồi bình thường. Sau 28 giờ, một số cá có triệu chứng khác thường: trương bụng, bơi lội quay tròn không đònh hướng, một số ngữa bụng, hô hấp mạnh, treo mình thẳng đứng trong nước. Biểu hiện bên ngòai: xuất huyết vi bụng, vi hậu môn, vi đuôi. hậu môn lồi đỏ. Khoảng 2 - 3 giờ sau khi quan sát thấy các biểu hiện trên, một số cá chết. Giải phẩu các cá thể này để quan sát nội tạng, nhận thấy mạch máu trương to, gan sưng và có màu đen, mật sưng, ruột trương phồng chứa đầy hơi, thành bụng xuất huyết. Hình 8. Dấu hiệu bệnh lý bên ngoài cá thí nghiệm gây nhiễm trở lại và đối chứng 55 56 Hình 9. Dấu hiệu bệnh lý ở nội quan cá thí nghiệm gây nhiễm trở lại và đối chứng Cá chết nhiều trong vòng 31- 46 giờ sau khi tiêm canh khuẩn, sau đó chết rãi rác trong 7 ngày đầu. Từ ngày thứ 8 không thấy cá bò chết. Tỷ lệ sống của các nhóm cá thí nghiệm được trình bày tại biểu đồ 5. 57 Biểu đồ 5: Tỷ lệ sống của các nhóm cá trong thí nghiệm gây nhiễm bởi vi khuẩn A. hydrophila SHB681984 0 20 40 60 80 100 0 24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 Thời gian thí nghiệm (giờ) Tỷ lệ sống (%) 10 cfu/ml 10 cfu/ml 10 cfu/ml Control Sau 10 ngày theo dõi, nhóm cá được tiêm 0,1 ml canh khuẩn chứa 10 7 cfu/ml có tỷ lệ sống thấp nhất (26,67%). Tỷ lệ sống tương ứng của các nhóm cá được tiêm canh khuẩn 10 5 , 10 3 lần lượt là 83,3%, và 93,3%. Cá thuộc nhóm đối chứng không chết và hoàn toàn khỏe mạnh trong suốt quá trình thí nghiệm. + Kết quả phân lập vi khuẩn từ cá thí nghiệm: Ngay khi cá chết, đã tiến hành giải phẩu quan sát và phân lập được A. hydrophila từ gan, thận và lách của các cá thể này. Trên môi trường phân lập vi khuẩn chỉ thấy xuất hiện một dạng khuẩn lạc đặc trưng duy nhất. Kết quả thí nghiệm cho thấy, chủng A. hydrophila SHB681984 phân lập từ cá 58 bệnh tại An Giang có thể gây tỷ lệ tử vong cao cho cá thí nghiệm. Tỷ lệ sống của các nhóm cáù thí nghiệm có tương quan thuận với lượng vi khuẩn sử dụng. Cá thí nghiệm bò bệnh thể hiện dấu hiệu bệnh lý tương tự như triệu chứng bệnh lý quan sát được tại các bè nuôi cá. Tỷ lệ sống 100% của nhóm cá đối chứng cho thấy rằng hiện tượng cá chết trong các lô thí nghiệm không liên quan đến yếu tố chăm sóc quản lý trong quá trình thực hiện. Đồng thời, việc phân lập được duy nhất A. hydrophila từ cá thí nghiệm bò bệnh cho thấy chủng A. hydrophila SHB681984 là một tác nhân gây bệnh xuất huyết trên vi và xoang miệng cá basa nuôi bè tại An Giang. Mặt khác, tỷ lệ tử vong thấp của các nhóm cá tiêm với nồng độ vi khuẩn 10 3 và 10 5 cho thấy A. hydrophila SHB681984 là tác nhân gây bệnh không bắt buộc (opportunistic pathogen) đối với cá ba sa trong điều kiện tiến hành thí nghiệm. III.5.3 Tính chất gây bệnh của A. sobria STB511983 + Cá thí nghiệm: Cá thí nghiệm có chiều dài trung bình 10,9cm (10,0 - 12,7cm), khối lượng trung bình: 9,3 g (8 -11 g). Sau khi tiêm dung dòch muối sinh lý (nhóm cá đối chứng) hoặc canh khuẩn, cá được nuôi trong bể kính theo từng nhóm, mỗi bể 10 con tương tự như trình bày phần trên. Nhiệt đôï không khí trung bình trong thời gian thí nghiệm 33 - 36 o C. + Kết quả theo dõi cá thí nghiệm: Thí nghiệm tiến hành từ ngày 23 tháng 7 năm 1998. Sau khi tiêm xong, cá vẫn bơi lội và bắt mồi bình thường. Trong suốt 15 ngày sau khi gây nhiễm, không phát hiện được dấu hiệu bệnh lý khác lạ xảy ra. Tỷ lệ sống 15 ngày của các nhóm cá được gây nhiễm thực nghiệm với A. sobria STB511983 liều lượng 0,1 ml dung dòch chứa 10 7 , 10 5 , 10 3 cfu/ml và nhóm đối chứng là 100%. 59 + Kết quả phân lập vi khuẩn từ cá thí nghiệm: Sau ngày thứ 15, chọn 3 con cá đã được gây nhiễm với nồng độ 10 7 cfu/ml, giải phẩu quan sát và phân lập vi khuẩn từ gan, thận, lách. Kết qủa quan sát nội tạng không phát hiện dấu hiệu bệnh lý của bệnh xuất huyết trên tất cả các cá thể nghiên cứu. Đồng thời, đã phân lập được A. sobria từ các cá thể này. Kết quả gây nhiễm thực nghiệm cho thấy, A. sobria STB5118983 với liều lượng đã sử dụng không gây bệnh xuất huyết cho cá basa trong các điều kiện thí nghiệm. Sự xuất hiện của vi khuẩn này trong các mẫu cá bệnh thu được từ các bè nuôi cá tại An giang có thể giải thích rằng đây là tác nhân thứ cấp và không đóng vai trò quan trọng trong quá trình phát sinh bệnh xuất huyết của cá ba sa. Do không có đủ số lượng cá giống dùng cho thí nghiệm gây nhiễm trở lại và hạn chế về mặt thời gian, nên tính chất gây bệnh của các chủng Aeromonas sp., A. caviae, và Pseudomonas sp phân lập từ cá bệnh chưa được nghiên cứu. Tuy nhiên, do các chủng vi khuẩn A. caviae chỉ phân lập được từ cá bệnh trong mùa mưa và Pseudomonas sp chỉ phân lập được từ cá bệnh thu tại các bè nuôi trên sông Tiền (Bảng 10), có thể nhận đònh rằng các loại vi khuẩn này là tác nhân gây bệnh thứ cấp (secondary pathogens). Ngược lại, các chủng Aeromonas sp. được phân lập từ cá bệnh thu trên sông Tiền và sông Hậu, cả trong mùa mưa và mùa khô với tần số xuất hiện cao, vì vậy, vần tiến hành nghiên cứu thêm về vò trí phân loại và tính chất gây bệnh của các chủng vi khuẩn này. 60 . từ cá thí nghiệm bò bệnh cho thấy chủng A. hydrophila SHB681984 là một tác nhân gây bệnh xuất huyết trên vi và xoang miệng cá basa nuôi bè tại An Giang. Mặt khác, tỷ lệ tử vong thấp của các. đã sử dụng không gây bệnh xuất huyết cho cá basa trong các điều kiện thí nghiệm. Sự xuất hiện của vi khuẩn này trong các mẫu cá bệnh thu được từ các bè nuôi cá tại An giang có thể giải thích. dụng kháng sinh trong việc trò bệnh cho cá nuôi. Kết quả nghiên cứu này cũng được người nuôi cá bè tại An giang vận dụng phòng và trò bệnh xuất huyết cho cá basa, tuy nhiên hiện thời hiệu quả