1 1 PHẦN 1 MỞ ĐẦU 1.1 ĐẶT VẤN ĐỀ Độc tố verotoxin VT2e do E. coli tiết ra là tác nhân chính gây bệnh phù trên heo sau cai sữa gây thiệt hại lớn cho ngành chăn nuôi heo ở nƣớc ta. Việc sử dụng kháng sinh để điều trị phù ở heo tuy có hiệu quả nhƣng gây ra nhiều triệu chứng phụ nhƣ rối loạn tiêu hoá, tạo ra các chủng vi sinh vật kháng kháng sinh gây khó khăn cho những lần trị bệnh về sau. Do đó sử dụng vacxin để phòng bệnh phù do E. coli trên heo đƣợc xem là liệu pháp thích hợp nhất. Một số tác giả đã thử nghiệm vacxin nhƣợc độc, hoặc vacxin chết bƣớc đầu ghi nhận hiệu quả bảo vệ nhất định. Tuy vậy, các phản ứng phụ vẫn là những trở ngại lớn cho việc áp dụng rộng rãi những loại vacxin này. Vacxin tái tổ hợp đƣợc tạo ra bằng cách loại bỏ yếu tố gây bệnh của vi sinh vật mà vẫn giữ đƣợc đặc tính kháng nguyên của chúng đang đƣợc các nhà khoa học quan tâm nhằm khắc phục những nhƣợc điểm nói trên. Hiện nay, TS. Nguyễn Ngọc Hải và các cộng sự đã thành công trong việc tạo ra đƣợc E. coli mang gen mã hoá cho tiểu phần B của độc tố VT2e và tinh sạch đƣợc protein này. Từ thực tế đó, đƣợc sự chấp nhận của bộ môn Công Nghệ Sinh Học, với sự hƣớng dẫn của TS. Nguyễn Ngọc Hải, chúng tôi thực hiện đề tài: “Đánh giá khả năng đáp ứng miễn dịch đối với protein tái tổ hợp MBP-VT2eB trên heo ”. 1.2 MỤC TIÊU VÀ YÊU CẦU - Mục tiêu Đánh giá khả năng ứng dụng protein tái tổ hợp MPB-VT2e trong sản xuất vacxin phòng bệnh phù do E. coli trên heo. - Yêu cầu  Xây đựng thí nghiệm kiểm tra khả năng đáp ứng miễn dịch của MBP-VT2eB trên heo.  Định tính kháng huyết thanh bằng phƣơng pháp khuyếch tán trên thạch.  Xác định liều TCID 50 (Tissue Culture Infectious Dose) trên tế bào vero  Kiểm tra hiệu giá kháng thể kháng MBP-VT2eB bằng phƣơng pháp trung hòa độc tố trên tế bào vero. 2 2 PHẦN 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 VACXIN 2.1.1 Lịch sử ra đời vacxin Hiện nay vacxin đƣợc xem là một phƣơng pháp hữu hiệu để phòng bệnh trên ngƣời và động vật. Từ xa xƣa khi mà con ngƣời vẫn chƣa hiểu biết về hệ thống miễn dịch đặc hiệu thì ngƣời Trung Quốc đã biết sử dụng những vảy từ ngƣời bị bệnh đậu mùa để phòng bệnh này. Năm 1798, Edward Jenner đã quan sát thấy hiện tƣợng những ngƣời vắt sữa bò thƣờng tiếp xúc với những con bò bị đậu mùa thì không bị nhiễm bệnh đậu mùa. Từ đó ông sử dụng virus gây bệnh đậu mùa trên bò nhƣ một vacxin chống lại bệnh đậu mùa trên ngƣời. Sau này, ngƣời ta biết rằng đó là nhờ những protein trên bề mặt virus gây bệnh đậu mùa trên bò tƣơng tự nhƣ những protein có trên bề mặt của virus gây đậu mùa trên ngƣời. Và Pasteur là ngƣời đặt ra nền móng cho việc sử dụng vacxin khi khám phá ra nguyên lý: “Muốn phòng bệnh phải gây cho thú bệnh nhẹ”. Từ đó đến nay, ngƣời ta đã sản xuất ra nhiều loại vacxin phòng nhiều loại bệnh do vi khuẩn, virus, kí sinh trùng gây ra nhƣ: bệnh đậu mùa, bệnh lở mồm long móng, bệnh tả với nhiều dạng tồn tại khác nhau. Nhƣng dù bất cứ dạng nào vacxin cũng mang một chức năng chung là tạo miễn dịch cho cơ thể ngƣời và động vật, phòng chống lại các loại bệnh truyền nhiễm và nhiều tác nhân gây hại khác [4]. 2.1.2 Đáp ứng miễn dịch 2.1.2.1 Kháng nguyên[4] a. Định nghĩa Kháng nguyên là một chất tự nhiên hay tổng hợp có khả năng gây đáp ứng miễn dịch khi đƣợc đƣa vào cơ thể của một động vật thích hợp hoặc là chất có khả năng phản ứng với một kháng thể hay một tế bào của hệ thống miễn dịch. Trên cấu trúc phân tử của kháng nguyên có sự hiện diện của các quyết định kháng nguyên gọi là epitope. b. Tính chất của kháng nguyên  Tính sinh miễn dịch: tính sinh miễn dịch của một kháng nguyên phụ thuộc vào: 3 3 Trọng lƣợng phân tử : kháng nguyên phải có trọng lƣợng phân tử đạt tối thiểu là 10.000Da. Tuy nhiên có một số chất có trọng lƣợng phân tử nhỏ nhƣng có tính sinh miễn dịch vì chúng gắn với protein khác để trở thành kháng nguyên hoàn chỉnh, ngƣợc lại một số chất có trọng lƣợng phân tử lớn nhƣng không có tính sinh miễn dịch. Lƣợng epitope khác loài vì hệ thống miễn dịch không phản ứng với các epitope cùng loài.  Tính đặc hiệu Tính đặc hiệu của kháng nguyên do những epitope quyết định. Các epitope là vị trí để kháng thể hay các lympho T mẫn cảm gắn với kháng nguyên một cách đặc hiệu. Tính đặc hiệu của kháng nguyên rất nghiêm ngặt tuy nhiên đôi khi vẫn xảy ra hiện tƣợng hai kháng nguyên khác nhau có thể cho phản ứng chéo nhau. 2.1.2.2 Kháng thể[4] a. Định nghĩa Kháng thể (immunoglobin Ig) là protein dạng cầu đƣợc tổng hợp bởi tế bào lympho và tế bào plasma khi bị kích thích bởi kháng nguyên. Nó đƣợc tạo ra để giúp sinh vật chống đỡ các yếu tố kháng nguyên có hại vào cơ thể. b. Cấu trúc tổng quát của kháng thể Phân tử immunoglobulin gồm một hay nhiều đơn vị hình thành, chúng có cấu trúc tƣơng đối giống nhau. Mỗi đơn vị là một phân tử protein có 4 chuỗi polypeptit giống nhau từng đôi một: 2 chuỗi nhẹ và 2 chuỗi nặng, chúng đƣợc nối với nhau bằng những cầu nối disulfua. Kháng thể đƣợc cấu tạo từ hai loại chuỗi polypeptit là chuỗi nặng và chuỗi nhẹ đƣợc liên kết với nhau bằng các liên kết disulfide. Các chuỗi nhẹ bao gồm hai dạng κ, λ, hai dạng này chung cho tất cả các loại kháng thể. Các chuỗi nhẹ đều đƣợc cấu tạo từ hai phần:  Phần hằng định: kí hiệu C L (constant) có tận cùng –COOH với trình tự acid amin tƣơng đối không đổi  Phần thay đổi: kí hiệu V L (variable) có tận cùng là –NH 2 . Trật tự acid amin trong vùng này thay đổi từng nhóm một, rất khác nhau từ cá thể này đến cá 4 4 thể khác và ngay trong một cá thể, phần này đƣợc kí hiệu V κ (cho type kappa) và V λ (cho type lambda). [3] Có các kiểu chuỗi nặng nhƣ: µ, δ, γ1, γ2, γ3, γ4, α, ε và dạng của chuỗi nặng sẽ qui định phân loại lớp nhƣ IgM, IgD, IgG, IgA, và IgE và dƣới lớp nhƣ IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2 (5) . Các chuỗi nặng đƣợc cấu tạo từ hai vùng: vùng hằng định (CH) và vùng dễ biến đổi (VH), các vùng dễ biến đổi có khu vực tận cùng là N. Các vùng dễ biến đổi bao gồm 3 vùng siêu biến (hypervariable) đƣợc tách biệt bằng các vùng bảo thủ hơn (framework regions) ở giữa. Những vùng này là những vùng liên kết với kháng nguyên hay còn gọi là paratop, vì vậy nó còn đƣợc gọi là vùng định tính bổ sung (complementarity-detemining regions) [15]. Vùng nằm giữa CH1 và CH2 của chuỗi H đựơc gọi là vùng khớp hay vùng bản lề đảm bảo cho tính mềm dẻo của các phân tử kháng thể đồng thời là hai cánh tay (VL, CL, VH, CH1) di động trong không gian. 2.1.2.3 Cơ chế đáp ứng miễn dịch Khi cơ thể đã đƣợc miễn dịch thì khi tác nhân gây bệnh xâm nhập, chúng sẽ không thực hiện đựơc quá trình gây bệnh và nhanh chóng bị loại trừ khỏi cơ thể. Nhƣ vậy vacxin là yếu tố khởi phát của quá trình đáp ứng miễn dịch và kháng nguyên là thành phần cơ bản của vacxin. Khi đƣa vacxin vào cơ thể cũng có nghĩa là đƣa một loại kháng nguyên lạ vào cơ thể, kháng nguyên này sẽ kích thích cơ Hình 2.1. Cấu trúc kháng thể (Timothy G. Standish, 2003) 5 5 thể thú sản xuất ra một loại protein mới có chức năng bảo vệ và tham gia miễn dịch là kháng thể (antibody). Nhƣ vậy việc tiêm vacxin vào cơ thể thú chính là việc tập dƣợt cho cơ thể thực hiện quá trình đáp ứng miễn dịch chống lại tác nhân gây bệnh khi chúng xâm nhập vào những lần sau đó. Hay còn gọi là gây miễn dịch chủ động. Khi cơ thể tiếp nhận vacxin, miễn dịch đƣợc tạo ra chính là sự huy động toàn bộ hệ thống miễn dịch tham gia. Bao gồm hệ thống miễn dịch trung ƣơng, hệ thống miễn dịch ngoại biên và nhiều loại tế bào có thẩm quyền miễn dịch khác. Do đó quá trình đáp ứng miễn dịch chính là sự hoạt động của hệ miễn dịch, là sự phối hợp nhịp nhàng của hệ thống tủy xƣơng nhằm tạo ra các loại tế bào nguồn, rồi từ đó chuyển hóa thành các tế bào có thẩm quyền miễn dịch bao gồm tế bào lympho B, lympho T, đại thực bào và một số tế bào chuyên biệt khác. Đáp ứng miễn dịch còn đƣợc hổ trợ và tham gia của các cơ quan nhƣ hạch, lách, các mô lymphô đƣờng ruột, đƣờng hô hấp, cũng nhƣ tế bào tua (dendric cells), các tế bào trình diện kháng nguyên (antigen presenting cells-APC) và một số thành phần khác. Cả hai quá trình cá thể thu nhận đƣợc: miễn dịch dịch thể và miễn dịch trung gian tế bào chính là hệ quả của sự tiếp nhận kháng nguyên, hoạt hóa, biệt hóa và sự tham gia của các tế bào lympho B, lympho T. Quá trình đáp ứng miễn dịch dịch thể do tế bào lymphô B đảm nhận. Từ tế bào nguồn tủy xƣơng biệt hóa thành tế bào lympho B khởi thủy (pro-B) sau đó thành tiền lymphoB (pre- B). Tiếp theo các tế bào này sẽ đƣợc biệt hoá thành lympho B chƣa chín có bộc lộ bề mặt IgM. Sau đó lympho B chín muồi đã bộc lộ IgM và IgD bề mặt. Nếu lympho B chín không gặp kháng nguyên sẽ bị phân hủy. Lympho B khi gặp kháng nguyên và đƣợc sự hợp tác hổ trợ của lympho T giúp (helper T for B cell) hoặc hợp tác giúp đỡ của lympho T hổ trợ sẽ tiếp tục đƣợc biệt hóa thành nguyên bào (B-blast) và tế bào plasma (plastmocyte). Chỉ có tế bào plasma mới có khả năng tiết kháng thể đặc hiệu với kháng nguyên lạ. Các kháng thể này đi vào máu và tồn tại trong huyết thanh hoặc chất dịch của cơ thể. Mặt khác nguyên bào B sẽ trở thành tế bào B ghi nhớ (memory- B) để khi gặp kháng nguyên vào nhắc nhở, chúng có thể nhanh chóng nhớ lại và sản xuất kháng thể nhanh và nhiều hơn [5] . 6 6 Miễn dịch trung gian tế bào do tế bào lympho T đảm nhận. Các tế bào nguồn bắt đầu từ tủy xƣơng di tản xuống tuyến ức và đƣợc tuyến ức huấn luyện, biệt hóa rồi non hóa trở lại để trở thành tiền lympho T. Các tiền lympho T tiếp tục đƣợc biệt hóa thành ở vùng vỏ tuyến ức để trở thành lympho T chƣa chín. Các lympho T chƣa chín đƣợc biệt hóa tiếp tục để trở thành lympho T chín đi vào hệ máu ngoại vi và đi đến các cơ quan tổ chức khác cƣ ngụ tại các vùng phụ thuộc tuyến ức của lách và hạch. Khi đại thực bào đƣa thông tin kháng nguyên đến các lympho T tiếp nhận, rồi biệt hóa để trở thành nguyên bào lympho T rồi tiếp tục trở thành nhóm tế bào mẫn cảm với kháng nguyên có chức năng nhƣ một kháng thể đặc hiệu. Nhƣ vậy kháng thể tế bào là loại tế bào có thẩm quyền miễn dịch lympho T đã đƣợc biến đổi, biệt hóa trở thành tế bào gây độc có tác dụng tiêu diệt kháng nguyên. Đặc biệt, lympho T sau khi đƣợc biệt hóa tiếp xúc với kháng nguyên đặc hiệu còn có khả năng sản xuất một số chất dịch ngoại bào [1]. Các chất này có tác dụng trợ giúp đắc lực và tăng cƣờng quá trình đáp ứng miễn dịch còn đƣợc gọi là lymphokin, đặc trƣng là các loại cytokine (gồm các loại interleukin IL-1, IL-2 ), chemokin và các yếu tố gây hoại tử tế bào (TNF). Một số nguyên bào T mẫn cảm cũng trở thành “ tế bào nhớ”, có vai trò trong “trí nhớ miễn dịch”. Ngoài ra còn có một số tế bào T khác làm nhiệm vụ duy trì đáp ứng miễn dịch nhƣ: lymphoT cảm ứng (T I -inducer), lympho T hỗ trợ (T H -helper), lympho T ức chế (T S - suppressor), lympho T hỗ trợ cho lympho T ức chế (T HS - suppressor for helper), lympho T quá mẫn (T D - delayed-type hypersensitivity)[3]. Để tạo khả năng phòng hộ có hiệu quả cho cơ thể thú thì vacxin phải đảm bảo các yêu cầu sau:  An toàn: vacxin không đƣợc gây bệnh và không hay ít gây phản ứng có hại trên cơ thể của thú.  Vô trùng: vacxin chỉ chứa duy nhất hay một vài loại kháng nguyên đƣợc chọn làm vacxin mà không bị nhiễm tạp các loại khác.  Hiệu lực: vacxin phải kích thích sinh miễn dịch cho cơ thể. Tính hiệu lực thực chất là mức độ biểu hiện gây miễn dịch của kháng nguyên. Vacxin có hiệu lực cao hay thấp, tức là nói đến mức độ gây miễn dịch của vacxin. Khả năng phòng hộ của vacxin phụ thuộc vào yếu tố quyết định tính miễn dịch của chế phẩm. Yếu tố này chính là thành phần protein đặc biệt có trên bề mặt 7 7 của tác nhân gây bệnh hay trên bề mặt của chế phẩm vacxin của chính tác nhân gây bệnh đó. Thành phần này còn đƣợc gọi là kháng nguyên do một gen hay một số gen của vi sinh vật tổng hợp nên. Những gen này đƣợc gọi là gen kháng nguyên. Ngƣời ta có thể clone gen này và chuyển vào một hệ thống vectơ thích hợp để sản xuất ra loại protein của gen kháng nguyên làm vacxin. Protein này còn đƣợc gọi là protein tái tổ hợp dùng sản xuất vacxin tái tổ hợp [3]. 2.1.2.4 Các yếu tố ảnh hưởng đến đáp ứng miễn dịch [4] Bản thân túc chủ Những loài khác nhau thì khả năng đáp ứng miễn dịch khác nhau. Ở những cá thể khác nhau thì tính sinh miễn dịch cũng khác nhau, do:  Di truyền: ngƣời ta có thể tăng khả năng đáp ứng miễn dịch bằng cách tuyển chọn những nhóm giống có khả năng đáp ứng miễn dịch cao. Tùy cơ địa của từng cá thể mà có thể có hiện tƣợng dị ứng khi gây miễn dịch.  Tuổi: thú quá nhỏ thì khả năng đáp ứng miễn dịch không cao do hệ thống cơ quan miễn dịch của thú chƣa phát triển hoàn chỉnh. Hơn nữa những thú nhỏ đều có kháng thể do mẹ truyền nên những kháng thể này có thể trung hòa kháng nguyên đƣa vào.  Tình trạng sức khỏe: những thú khỏe mạnh khả năng đáp ứng miễn dịch cao hơn những thú bị bệnh hay sức khỏe yếu. Do đó chỉ gây miễn dịch với những thú có sức khỏe tốt , không mắc các bệnh truyền nhiễm khác.  Chế độ dinh dƣỡng: những thú đƣợc nuôi dƣỡng tốt sẽ đáp ứng miễn dịch tốt hơn những thú không đƣợc chăm sóc tốt. Kháng nguyên  Tính lạ kháng nguyên Đáp ứng miễn dịch xảy ra khi có sự khác biệt chủng loài giữa kháng nguyên và túc chủ. Khả năng đáp ứng miễn dịch tăng khi kháng nguyên càng lạ.  Cấu tạo hóa học của kháng nguyên Kháng nguyên có bản chất protein hay polysaccharide thì khả năng gây đáp ứng miễn dịch cao cả khi chúng ở dạng hòa tan hay trong cấu tạo phức tạp. Các kháng nguyên đƣợc tổng hợp từ một loại axit amin thì khả năng kích ứng miễn dịch thấp hơn so với những kháng nguyên đƣợc tổng hợp từ hai loại axit 8 8 amin và từ những axit amin mạch vòng (đặc biệt là tyrozine). Các polypeptide đƣợc tổng hợp từ axit amin dạng D thì khả năng gây đáp ứng miễn dịch cao vì ít bị biến đổi. Các kháng nguyên có bản chất là lipit, steroid, axit nucleic khả năng kích ứng miễn dịch thấp hay không có trừ khi chúng đƣợc gắn với protein tải.  Kích thƣớc của phân tử kháng nguyên Kháng nguyên có kích thƣớc càng lớn và cấu trúc càng phức tạp thì khả năng kích ức miễn dịch càng cao vì một phân tử kháng nguyên càng lớn thì nó càng có cấu trúc phức tạp và có nhiều quyết định kháng nguyên. Đây là yếu tố đảm bảo tính sinh miễn dịch. Hơn nữa kháng nguyên có cấu trúc phân tử càng lớn thì càng dễ bị đại thực bào phát hiện và xử lý nên nó khả năng kích ứng miễn dịch cao. Những kháng nguyên có cấu trúc phân tử nhỏ dễ bị đại thực bào bỏ qua nên khả năng kích ứng miễn dịch thấp. Cách gây miễn dịch và liều lƣợng kháng nguyên  Đƣờng đƣa kháng nguyên vào cơ thể vật chủ: Với những kháng nguyên mạnh, đƣa kháng nguyên vào đƣờng mạch máu có thể dễ dàng gây đáp ứng miễn dịch: nhƣ vi khuẩn, virus, tế bào. Những kháng nguyên hòa tan thì phải có quy trình gây miễn dịch thích hợp tốt nhất là đƣờng tiêm trong da, dƣới da.  Liều lƣợng kháng nguyên: nếu lƣợng kháng nguyên quá thấp thì không đủ gây đáp ứng miễn dịch. Ngƣợc lại nếu lƣợng kháng nguyên nhiều quá sẽ gây ức chế miễn dịch.  Quy trình gây miễn dịch có ảnh hƣởng lớn tới tính sinh miễn dịch của phân tử kháng nguyên. Cùng một loại kháng nguyên nếu gây miễn dịch trên hai qui trình khác nhau thì khả năng gây đáp ứng miễn dịch khác nhau. Mỗi một loại kháng nguyên thích hợp với một qui trình gây miễn dịch riêng. Đối với những kháng nguyên yếu thì phải tuân theo một qui trình miễn dịch nghiêm ngặt và phải chủng nhiều lần mới có hiệu quả. Trong khi đó những kháng nguyên mạnh thì chỉ cần chủng một lần. Hiệu ứng cộng lực kháng nguyên  Các nhà miễn dịch học đã chứng minh rằng: nếu gây miễn dịch nhiều loại kháng nguyên cùng lúc cho thú thì lƣợng kháng thể đặc hiệu sinh ra tƣơng 9 9 ứng với mỗi loại kháng nguyên sẽ ít nhất ngang bằng hay nhiều hơn khi kháng nguyên đó kích thích một mình. Đây là hiện tƣợng cộng lực kháng nguyên. Tuy nhiên đối với những kháng nguyên có cấu trúc hóa học gần giống nhau thì xảy ra hiện tƣợng cạnh tranh kháng nguyên. Nếu cùng một lúc mẫn cảm hai loại kháng nguyên: một liều mạnh, một liều nhẹ thì thú có thể chỉ phản ứng với kháng nguyên liều mạnh. Phản ứng thứ phát  Nếu thú đã đƣợc mẫn cảm với kháng nguyên đó một lần thì hàm lƣợng kháng thể sẽ tăng sớm và nhiều hơn nếu thú gặp lại kháng nguyên đó. Đó là nhờ tế bào lympho có khả năng nhớ để khi gặp lại kháng nguyên đó thì sẽ lập tức tăng sinh thành dòng tế bào có hoạt tính miễn dịch. Chất bổ trợ  Hiệu quả đáp ứng miễn dịch sẽ tăng nếu bổ sung tá chất vào kháng nguyên. Vì tá chất tăng khả năng thực bào của đại thực bào đối với kháng nguyên, tăng khả năng tồn tại của kháng nguyên trong cơ thể thú và gây phản ứng viêm không đặc hiệu làm tăng tính sinh miễn dịch. 2.1.3 Phân loại Có nhiều cách để phân loại vacxin nhƣ dựa theo phƣơng pháp sản xuất, bản chất sinh học của kháng nguyên hay nguồn cung cấp kháng nguyên. Nếu phân loại theo tính chất sinh học thì vacxin đƣợc phân làm 3 nhóm sau: 2.1.3.1 Vacxin sống (lived vaccine) Vacxin cƣờng độc [4] Đây là loại vacxin đƣợc lấy từ những chủng vi sinh vật gây bệnh có độc lực cao. Tuy nhiên, các nhà miễn dịch học đã dùng số lƣợng rất nhỏ để vi sinh vật không đủ sức gây bệnh nhƣng lại gây đƣợc đáp ứng miễn dịch. Hiện nay,vacxin này không còn đƣợc sử dụng vì độ an toàn không cao. Vacxin nhƣợc độc (attenuated vaccine)[4] Vacxin nhƣợc độc đƣợc tạo ra từ những chủng vi sinh vật có độ lực thấp hoặc từ những chủng vi sinh vật có độc lực cao đƣợc làm yếu đi để chúng không có khả năng gây bệnh mà vẫn giữ đƣợc đặc tính kháng nguyên. Các chủng vi sinh vật này đƣợc tạo ra bằng cách nuôi các chủng vi sinh vật có độc lực cao trong môi . Nghệ Sinh Học, với sự hƣớng dẫn của TS. Nguyễn Ngọc Hải, chúng tôi thực hiện đề tài: Đánh giá khả năng đáp ứng miễn dịch đối với protein tái tổ hợp MBP-VT2eB trên heo ”. 1 .2 MỤC TIÊU VÀ YÊU. Đánh giá khả năng ứng dụng protein tái tổ hợp MPB-VT2e trong sản xuất vacxin phòng bệnh phù do E. coli trên heo. - Yêu cầu  Xây đựng thí nghiệm kiểm tra khả năng đáp ứng miễn dịch của MBP-VT2eB. khác nhau thì khả năng đáp ứng miễn dịch khác nhau. Ở những cá thể khác nhau thì tính sinh miễn dịch cũng khác nhau, do:  Di truyền: ngƣời ta có thể tăng khả năng đáp ứng miễn dịch bằng cách