Nguyênlý“Test thậnBỉ” Ưunhược điểm???? Ý tưởngkhắcphụcnhược điểm Khôngdùngdịchthận, mẩuthậnmà dùngmẫutáchchiết Táchchiếtthế nào? Lượngmẫubaonhiêu? Làmthế nào để kiểmtra đượcchấtlượngtest?? Yêu cầuqui trìnhtáchchiếtthế nào? p Tách đượcchấtcầntìmrakhỏimẫu pĐảmbảođộ thuhồi pCácchấtsửdụngkhông ảnhhưởng đếnchấtcầntìmvàkếtquảđọc p Nếucóthể hạnchếđượccácchất gâydươngtínhgiả Thích ứngPremi-Test Lượngmẫubaonhiêu? Xác định Độ mẫncảmcủa VSV vớikhángsinh KiểmsoátChấtlượngmôi trường, Đĩacấyvsv Xác địnhlượngKS ítnhất cóthể tạovòngvôkhuẩn (A) Kiểmtralạiqui trìnhtách chiết= kschuẩn Xâydựngcôngthứctính lượngmẫubénhấtcần lấy(M) M (g) = A * MRL -1 Làmthế nào để kiểmtra đượcchất lượngtest?? Đánhgiácácthamsốđộ mạnh (LOD, Độ nhạy, Độđặchiệu, độ chínhxác) Phạm Kim Đăng, Marie-Louise SCIPPO; Guy DEGAND; Caroline DOUNY; Guy MAGHUIN-ROGISTER (2007): Chuẩn hóa phương pháp sàng lọc định tính kiểm soát tồn dư kháng sinh trong thực phẩm cónguồn gốc động vật theo qui định số 2002/657/EC (bài tổng hợp). Tạp chíKHKT Nông nghiệp, ĐHNN I, TậpV, Số 1/2007; Trang 24-30. http://www.hua.edu.vn/tc_khktnn/default.asp?i d=11&ID_S=20 Chuẩnbịthựchiện Nguyênliệuvàhoáchât - Dungdịchchuẩn (dung môi, chấtchuẩn) - Giốngvisinhvật: Bacillussubtilis BGA - Môi trường nuôi cấy Standard IINutrient Agar for microbiology - Mẫu“trắng” - Dextrose, methanol, NH 4 OH 2M, NaOH1M, HCl1 và2M. - Trimethoprime (TMP) 1 mg/ml - Đĩagiấy đườngkính12 mm - ĐĩaPetri - Acetonitrile, Acetone Dụngcụ pMicropipet p Cânphântích(gam, mg, µg) p Nồihấptiệttrùng p Nồihấpcáchthuỷ à45-47°C p Vortex p Máylắcđảo đầu p Lytâm(2000-6000 vòng/phút) p Hệ thốngbay hơi(lytâmchânkhôngor thổiNitơ) p Tủấm30°C Chuẩnbịmôitrường(1 lít) § Cân 25 g môi trường § Thêm 6 g dextrose = 0,6% (nếudùngdungdịch20% cần?) § Hoàtrong 1 lit nướccất(–số ml đường) (đunsôi, khuấy liêntục, cẩnthậnkhi sắpsôi) § Chovàocáclọ(4x250 ml) (nắphơilỏng) § Tiệttrùngtrong15 phút ở 121°C +/-0,1. § Làmnguồivề47°C bằngnồicáchthuỷ (Nếuthạchdự trữà90°C trong3h, làmnguộià47°C khoảng30 phút) Chuẩnbịmôitrường(1 lít) § Môitrường đưavàosửdụngsaukhihiệuchỉnh pH=7,2±0,1 ở 25°C bằngHClhoặcNaOH1M § Mỗilọ100 ml môitrường: 20µl TMP (1mg/ml) + 100 µldungdịchhuyềnphùB.subtilis đượcphaloãngtheo hướngdẫnàlắcđều § Đổ 14 ml thạch/đĩa (dày2,2 mm) à (200 ml = 14 đĩa) § Sau khi để thạchcứng, đĩa baogóibaonilonplastic và đượcbảoquản ở 4°C tối đa 1 tuần(úpnắpxuống) . Guy MAGHUIN-ROGISTER (2007 ): Chuẩn hóa phương pháp sàng lọc định tính kiểm soát tồn dư kháng sinh trong thực phẩm c nguồn gốc động vật theo qui định số 2002/ 657 /EC (bài tổng hợp). Tạp chíKHKT. đượcchấtcầntìmrakhỏimẫu pĐảmbảođộ thuhồi pCácchấtsửdụngkhông ảnhhưởng đếnchấtcầntìmvàkếtquảđọc p Nếucóthể hạnchếđượccácchất gâydươngtínhgiả Thích ứngPremi-Test Lượngmẫubaonhiêu? Xác định Độ mẫncảmcủa VSV vớikhángsinh KiểmsoátChấtlượngmôi trường,. 1/2007; Trang 24-30. http://www.hua.edu.vn/tc_khktnn/default.asp?i d=11&ID_S=20 Chuẩnbịthựchiện Nguyênliệuvàhoáchât - Dungdịchchuẩn (dung môi, chấtchuẩn) - Giốngvisinhvật: Bacillussubtilis BGA