1. 1. Ph Ph ủ ủ kh kh á á ng ng th th ể ể đã đã đư đư ợ ợ c c tinh tinh l l ọ ọ c c lên lên b b ề ề m m ặ ặ t t r r ắ ắ n n (1 (1 µ µ g g kh kh á á ng ng th th ể ể c c ừ ừ u u kh kh á á ng ng l l ạ ạ i i kh kh á á ng ng nguyên nguyên c c ó ó ngu ngu ồ ồ n n g g ố ố c c th th ỏ ỏ IgG IgG ) ) + °C Kháng thể 16/04/2008 2. a) 2. a) Cho Cho m m ẫ ẫ u u đã đã đư đư ợ ợ c c t t á á ch ch chi chi ế ế t t ho ho ặ ặ c c dung dung d d ị ị ch ch kh kh á á ng ng nguyên nguyên chu chu ẩ ẩ n n v v à à o o 2. b) 2. b) Cho Cho kh kh á á ng ng nguyên nguyên c c ó ó g g ắ ắ n n men men v v à à o o E E E E E E Ag-Enz E E E E E E Antigen 2. c) 2. c) Cho Cho kh kh á á ng ng th th ể ể đ đ ặ ặ c c hi hi ệ ệ u u th th ỏ ỏ v v à à o o E E E E E E 3. 3. ủ ủ 2h 2h ở ở 4 4 ° ° C C SpecificAb E E E E E E E E E E E E 4. 4. R R ử ử a a lo lo ạ ạ i i b b ỏ ỏ c c á á c c ch ch ấ ấ t t không không đư đư ợ ợ c c g g ắ ắ n n ( ( ba ba l l ầ ầ n n ) ) E E 6. 6. D D ừ ừ ng ng ph ph ả ả n n ứ ứ ng ng b b ằ ằ ng ng H H 2 2 SO SO 4 4 . . Substate /chromophore 7. 7. Đ Đ ọ ọ c c ở ở 450 nm. 450 nm. 5. 5. Cho Cho dung dung d d ị ị ch ch ph ph ả ả n n ứ ứ ng ng m m à à u u v v à à o o TMB/H TMB/H 2 2 O O 2 2 v v à à ủ ủ 30 30 ’ ’ trong trong b b ó ó ng ng t t ố ố i i Chuẩnbịhoáchất PBS pH 7.4 : 9g NaCl+ 7,78g Na 2 HPO 4 .2H 2 O+ 0,75 g KH 2 PO 4 trong1 lítH 2 O Methanol/PBS (50/50 V/V) Phaloãngdung dịch đệm10x PhaloãngKN gắnenzyme 100x KhôiphụcKT đôngkhô(+ 6 ml dung dịchphaloãng) ! Lượnghoáchấtchuẩnbịsốmẫuphântích+ đườngchuẩn QUI TRÌNH TÁCH CHIẾTMẪU (*) PBS pH 7.4 :9 gamNaCl, 7,78 gamNa 2 HPO 4 .2H2O và0,75 gamKH 2 PO 4 trong1 lít nướccất 5 gammẫu 5 ml methanol/PBS (50/50v/v) lắc đảo đầu30’ 10’, 4000rpm Ly tâm10 phút vớivậntốc3000 vòng/phút 30’’ 0,5 ml 4,5 ml d 2 đệm phaloãng 30 giây (phaloãng10x) 50 µl/giếng QUI TRÌNH TEST QUI TRÌNH TEST S 12 S8S811 H S 12 S7S70.50.5 G S 11 S6S60.30.3 F S 11 S5S50.20.2 E S 10 S4S40.10.1 D S 10 S3S3.05.05 C S9S2S200 B S9S1S1NSNS A 121110987654321 Dungdịchchuẩn Mẫu ChuẩnbịPlate QUI TRÌNH TEST 50 µl mẫu8 táchchiếtH4H3 50 µl mẫu7 táchchiếtG4G3 50 µl mẫu6 táchchiếtF4F3 50 µl mẫu5 táchchiếtE4E3 50 µl mẫu4 táchchiếtD4D3 50 µl mẫu3 táchchiếtC4C3 50 µl mẫu2 táchchiếtB4B3 50 µl mẫu1 táchchiếtA4A3 50 µl dd0.05 ng/mlH2H1 50 µl dd0.1 ng/mlG2G1 50 µl dd0.2 ng/mlF2F1 50 µl dd0.3 ng/mlE2E1 50 µl dd0.5 ng/mlD2D1 50 µl dd1 ng/mlC2C1 100 µl dd KT/giếng 50 µl dd0 ng/mlB2B1 Lắc nhẹ, đ o ở b ư ớc sóng 450 trong vòng 30 phút 50 µl dd dừng phản ứng màu/giếng Lắc nhẹ, ủ 30phút trong bóng tối t° phòng 150 µl peroxide/TMB/giếng dốc bỏ hết, rửa 3 lần = dd đệm, vỗ úp hết ủ 1h ở 4°C 100 µl dd E. Conjugate/giếng Lắc nhẹ 1 phút rồi ủ 1h ở 4°C -150 µl dd đệmp.loãngA2A1 B10B9B8B7B6B5B4B3B2Bước1ô . nm. 5. 5. Cho Cho dung dung d d ị ị ch ch ph ph ả ả n n ứ ứ ng ng m m à à u u v v à à o o TMB/H TMB/H 2 2 O O 2 2 v v à à ủ ủ 30 30 ’ ’ trong trong b b ó ó ng ng t t ố ố i i Chuẩnbịhoáchất PBS pH 7. 4 : 9g NaCl+ 7, 78g Na 2 HPO 4 .2H 2 O+ 0 ,75 g KH 2 PO 4 trong1 lítH 2 O Methanol/PBS (50/50 V/V) Phaloãngdung dịch đệm10x PhaloãngKN. dịchphaloãng) ! Lượnghoáchấtchuẩnbịsốmẫuphântích+ đườngchuẩn QUI TRÌNH TÁCH CHIẾTMẪU (*) PBS pH 7. 4 :9 gamNaCl, 7, 78 gamNa 2 HPO 4 .2H2O và0 ,75 gamKH 2 PO 4 trong1 lít nướccất 5 gammẫu 5 ml methanol/PBS (50/50v/v) lắc đảo. đư đư ợ ợ c c g g ắ ắ n n ( ( ba ba l l ầ ầ n n ) ) E E 6. 6. D D ừ ừ ng ng ph ph ả ả n n ứ ứ ng ng b b ằ ằ ng ng H H 2 2 SO SO 4 4 . . Substate /chromophore 7. 7. Đ Đ ọ ọ c c ở ở 450 nm. 450 nm. 5. 5. Cho Cho dung dung d d ị ị ch ch ph ph ả ả n n ứ ứ ng ng m m à à u u v v à à o o TMB/H TMB/H 2 2 O O 2 2 v v à à ủ ủ 30 30 ’ ’ trong trong b b ó ó ng ng t t ố ố i i Chuẩnbịhoáchất PBS