KHỐI PHỔ & LC-MS Mass Spectrometry & LC-MS Phạm gia Huệ Hà nội 07-08-2009  Công cụ PT hay dùng nhất hiện nay.  Kỹ thuật cung cấp thông tin về: 1. Khối lượng và công thức phân tử 1 hợp chất 2. MS cùng với NMR và IR cho phép nghiên cứu cấu trúc phân tử 3. Thành phần định tính và định lượng của một hỗn hợp. 4. Máy MS chuyển các Phân tử thành các ion ở thể khí và tách chúng theo tỷ số m/z và ghi lại cường độ từng ion, cho một phổ khối. 5. PT được mẫu rất nhỏ, dạng rắn, lỏng, khí của các chất PTL nhỏ cỡ (một số Da) tới các protein (cỡ trên 300 000 Da). (Dalton (Da) = amu) Khối phổ (MS) là gì? Khối phổ (MS) là gì? Nguyên lý cơ bản là • sự tạo thành các ion, • các ion này được tách hay lọc theo tỷ lệ m/z (khối lượng/điện tích) của chúng, • và được phát hiện. Các thành phần một máy MS Nguồn ion PT khối Detector ion Phổ Khối m/z Signal Intensity Nạp mẫu R R L L K K Chân không cao X X ử ử lý lý v v à à l l ư ư u u d d ữ ữ li li ệ ệ u u Tránh ion PT va chạm với các phân tử trong không khí Cường độ tín hiệu 1. Nguồn ion hoá  Biến đổi chất PT, tạo thành các ion phân tử (molecule) và các ion mảnh (fragment)  Hai kỹ thuật chính hay dùng: • Bắn phá electron (Electron Impact - EI): tạo ion dùng chùm electron năng lượng cao: phương pháp “cứng” • Ion hoá hoá học (chemical ionization -CI) tạo ion thông qua phản ứng với các ion thuốc thử: phương pháp “mềm” • Ví dụ: Electron bắn phá methanol: tạo cation gốc methanol, một ion phân tử: CH 3 OH + 1 e -  CH 3 OH +. + 2 e- • Chỉ một số (~0.01%) phân tử chất PT (M) được ion hoá • Phần lớn các ion phân tử bị phá thành các mảnh nhỏ hơn (cation, gốc, phân tử trung hoà nhỏ hơn) 1.1. Bắn phá electron (EI) + + Sợi đốt Khu vực Gia tốc ion PT khối Chùm electron 1.1. Bắn phá electron (EI) Chỉ các mảnh tích điện được phát hiện M e - 2e - M +• Mẫu Cation gốc / Ion phân tử • • Bắn phá / ion hoá [Mẹ] 70 eV F 1 +• NF 1 F 2 + Mảnh cation gốc F 2 • [Mảnh Con] + Phân mảnh F 1 + F 1 • Mảnh trung hoà + + Mảnh cation Mảnh cation Mảnh gốc Gốc Các LK dễ gãy là các LK yếu nhất, tạo các mảnh bền Phổ MS của pentobarbital, bắn phá bằng electron • Ion phân tử M+., có m/z 226, mất gần hết. • Tạo thành các mảnh m/z 197, 156, 141, 112, 98, 69, and 55, • Các pic này là dấu vết các mảnh trong cấu trúc của phân tử M. • Pic lớn nhất trên phổ MS là pic cơ bả n (coi như có cường độ 100%) . Cường độ pic khác tính theo % của pic cơ bản. Pic cơ bản Molecular ion peak M + . Pic ion phân tử Khối lượng phân tử =226 1.2. Ion hoá học (CI) – PHƯƠNG PHÁP mềm • Tạo ít mảnh. • Dùng thừa thuốc thử dạng khí như CH 4 . • Chùm electrons (100–200 eV) chuyển CH 4 thành các SP như CH 5 + CH 5 + là chất cho proton mạnh, phản ứng hoá học với chất phân tích tạo ra phân tử proton hoá MH + , có nhiều trên phổ MS ion hoá hoá học dùng methan 3544 44 2 CHCHCHCH eCHeCH .       MHCHMCH 45 (M+1) peak . KHỐI PHỔ & LC-MS Mass Spectrometry & LC-MS Phạm gia Huệ Hà nội 07-08-2009  Công cụ PT hay dùng nhất hiện nay.  Kỹ thuật cung cấp thông tin về: 1. Khối lượng và công thức phân tử 1. các mảnh m/z 19 7, 15 6, 14 1, 11 2, 98, 69, and 55, • Các pic này là dấu vết các mảnh trong cấu trúc của phân tử M. • Pic lớn nhất trên phổ MS là pic cơ bả n (coi như có cường độ 10 0%) . Cường. cho một phổ khối. 5. PT được mẫu rất nhỏ, dạng rắn, lỏng, khí của các chất PTL nhỏ cỡ (một số Da) tới các protein (cỡ trên 300 000 Da). (Dalton (Da) = amu) Khối phổ (MS) là gì? Khối phổ (MS)