ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN ******* LƯƠNG QUẾ ANH ĐÁNH GIÁ KỸ THUẬT CHẨN ĐOÁN SỚM NHIỄM HIV VÀ XÁC ĐỊNH TỈ LỆ NHIỄM HIV Ở TRẺ EM SINH RA TỪ MẸ NHIỄM HIV Chuyên ngành: Di truyền học - Khoa Sinh học Mã số: 60 42 70 LUẬN VĂN THẠC SĨ CHUYÊN NGÀNH DI TRUYỀN Người hướng dẫn khoa học: PGS. TS. Trương Thị Xuân Liên Thành phố Hồ Chí Minh, năm 2010 LỜI CẢM ƠN Em xin chân thành cảm ơn cô Trương Thò Xuân Liên đã tạo điều kiện, tận tình hướng dẫn và động viên em trong suốt quá trình hoàn tất đề tài tốt nghiệp. Em xin cảm ơn tất cả các Thầy, Cô khoa Sinh học trường Đại học Khoa Học Tự Nhiên đã cung cấp cho em những kiến thức quý báu trong suốt quá trình học tập. Xin chân thành cảm ơn các anh, chò và các bạn Phòng Xét Nghiệm HIV/AIDS, Khoa Xét Nghiệm Sinh Học Lâm Sàng, Viện Pasteur Thành phố Hồ Chí Minh đã tạo mọi điều kiện thuận lợi và động viên, khuyến khích giúp đỡ em trong quá trình thực hiện đề tài. Cảm ơn các bạn trong lớp Cao học di truyền K15 đã động viên, khuyến khích tôi trong suốt khóa học. Cuối cùng, con xin cảm ơn bố mẹ đã thương yêu, chăm sóc, lo lắng và khuyếnh khích con trong suốt quá trình học tập, từ khi bắt đầu cho đến khi hoàn tất đề tài tốt nghiệp. LƯƠNG QUẾ ANH MỤC LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG DANH MỤC BIỂU ĐỒ DANH MỤC HÌNH DANH MỤC SƠ ĐỒ ĐẶT VẤN ĐỀ 9 MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU 10 CHƯƠNG I. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 11 I.1. ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA VIRÚT HIV 12 I.1.1. Phân loại virút 12 I.1.2. Cấu trúc hình thể và bộ gen virút HIV-1 13 I.1.3. Chu kỳ sống của virút 15 I.2. TÌNH HÌNH NHIỄM HIV CỦA PHỤ NỮ VÀ THAI PHỤ 17 I.2.1. Tình hình nhiễm HIV của phụ nữ và thai phụ trên thế giới 17 I.2.2. Tình hình nhiễm HIV của phụ nữ và thai phụ ở Châu Á và Việt Nam 19 I.3. CÁC CON ĐƯỜNG LÂY TRUYỀN HIV TỪ MẸ SANG CON 22 I.4. CÁC YẾU TỐ LIÊN QUAN ĐẾN LÂY TRUYỀN MẸ CON 24 I.4.1. Yếu tố liên quan đến HIV 24 I.4.2. Yếu tố của thai phụ 25 I.4.3. Các yếu tố liên quan đến bệnh sản khoa 26 I.4.4. Các yếu tố liên quan đến thai nhi 27 I.5. CHƯƠNG TRÌNH DỰ PHÒNG LÂY TRUYỀN MẸ SANG CON 27 I.5.1. Giới thiệu về chương trình dự phòng lây truyền mẹ sang con (PMTCT) 27 I.5.2. Nuôi dưỡng trẻ sau sinh 31 I.6. CHẨN ĐOÁN SỚM NHIỄM HIV VÀ CÁC PHƯƠNG PHÁP CHẨN ĐOÁN SỚM HIỆN NAY 32 I.6.1. Tầm quan trọng của chẩn đoán sớm 32 I.6.2. Các phương pháp dùng trong chẩn đoán sớm hiện nay 33 I.6.3. Các xét nghiệm chẩn đoán sớm nhiễm HIV cho trẻ dưới 18 tháng tuổi thực hiện tại viện Pasteur TP. HCM 37 CHƯƠNG II. VẬT LIỆU PHƯƠNG PHÁP 39 II.1. CÁC THIẾT BỊ, DỤNG CỤ, HOÁ CHẤT SỬ DỤNG 40 II.2. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 41 II.2.1. Chọn mẫu nghiên cứu 41 II.2.2. Quy trình thực hiện 42 II.2.2.1. Thu thập và xử lý mẫu 42 II.2.2.2. Các kỹ thuật sử dụng 44 II.3. PHÂN TÍCH SỐ LIỆU 54 CHƯƠNG III. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 55 III.1. ĐÁNH GIÁ KỸ THUẬT XÁC ĐỊNH NHIỄM HIV BẰNG REAL - TIME PCR RNA TRÊN MẪU HUYẾT TƯƠNG 56 III.2. ĐÁNH GIÁ KỸ THUẬT XÁC ĐỊNH NHIỄM HIV BẰNG REAL - TIME PCR DNA TRÊN MẪU DBS 59 III.3. SO SÁNH KỸ THUẬT PHÁT HIỆN NHIỄM HIV TRÊN MẪU DNA VÀ RNA 62 III.4. SO SÁNH KẾT QUẢ XÉT NGHIỆM NHIỄM HIV KHI THỰC HIỆN BẰNG BỘ KIT GENERIC HIV DNA CELL CỦA BIOCENTRIC VÀ KIT ROCHE AMPLICOR HIV-1 DNA V1.5 63 III.5. ĐÁNH GIÁ TỶ LỆ NHIỄM HIV Ở TRẺ EM SINH RA TỪ MẸ CÓ HUYẾT THANH DƯƠNG TÍNH 64 III.5.1. Thống kê một số đặc điểm của nhóm đối tượng nghiên cứu 64 III.5.2. Tỉ lệ nhiễm HIV của nhóm đối tượng nghiên cứu 68 CHƯƠNG IV. BÀN LUẬN 71 IV.1. ĐÁNH GIÁ CÁC KỸ THUẬT CHẨN ĐOÁN SỚM PHÁT HIỆN NHIỄM HIV TỪ RNA VÀ DNA 72 IV.2. TỶ LỆ NHIỄM HIV Ở TRẺ EM SINH RA TỪ MẸ CÓ HUYẾT THANH DƯƠNG TÍNH TẠI CÁC TỈNH KHU VỰC PHÍA NAM 73 CHƯƠNG V. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 76 BÀI BÁO ĐÃ ĐƯỢC ĐĂNG 78 TÀI LIỆU THAM KHẢO 79 PHỤ LỤC 83 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT AIDS Hội chứng suy giảm miễn dịch mắc phải (Acquired immune deficiency syndrome) ANRS Cơ quan nghiên cứu về HIV- AIDS và viêm gan do vi rút của Pháp (Agence Nationale de Recherche sur le Sida) ART Antiretroviral therapy ARV Antiretroviral bp base pair CRFs Dạng tái tổ hợp (circulating recombinant forms) ct Chu kỳ ngưỡng (threshold cycle) DBS Mẫu máu khô nhỏ trên giấy thấm (Dried Blood Spots) DNA Acid deoxyribonucleic gp glycoprotein HIV Human immunodeficiency virus OD Mật độ quang (optical density) PBMC Tế bào trong máu ngoại vi (peripheral blood mononuclear cell) PCR Polymerase Chain Reaction PKNT Phòng khám ngoại trú PMTCT Phòng lây truyền mẹ con (Preventing Mother-to-child Transmission) RNA Acid ribonucleic STD Độ lệch chuẩn (standard deviation) TP. HCM Thành phố Hồ Chí Minh WHO Tổ chức Y tế thế giới (World Health Organization) DANH MỤC BẢNG Bảng I.1. Các yếu tố ảnh hưởng đến lây truyền HIV từ mẹ sang con 24 Bảng III.1. Độ lặp lại của phản ứng Real - time PCR RNA 56 Bảng III.2. Kết quả trị số ct 25 lần chạy mẫu chứng có nồng độ thấp của Real - time PCR RNA 58 Bảng III.3. Độ lặp lại của phản ứng Real - time PCR DNA 59 Bảng III.4. Kết quả trị số ct 20 lần chạy mẫu chứng có nồng độ thấp của Real - time PCR DNA 61 Bảng III.5. Kết quả khi thực hiện xét nghiệm chẩn đoán định tính HIV trên mẫu DNA và RNA 62 Bảng III.6. Kết quả Real-time PCR trên các mẫu lấy theo cách khác nhau (DBS từ gót chân trẻ, DBS và huyết tương từ máu tĩnh mạch) 63 Bảng III.7. Kết quả so sánh giữa 2 loại sinh phẩm chẩn đoán được sử dụng 63 DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ III.1. Kết quả Real - time PCR RNA 20 lần chạy mẫu chứng dương pha loãng các nồng độ khác nhau 57 Biểu đồ III.2. Theo dõi giá trị ct của mẫu chứng dương có nồng độ thấp (600 copies/mL) trên 25 lần chạy khác nhau của Real - time PCR RNA 58 Biểu đồ III.3. Kết quả Real - time PCR DNA 20 lần chạy mẫu chứng dương pha loãng các nồng độ khác nhau 60 Biểu đồ III.4. Theo dõi giá trị ct của mẫu chứng dương có nồng độ thấp (3 copies/1 phản ứng) trên 20 lần chạy khác nhau của Real - time PCR DNA 61 Biểu đồ III.5. Tỉ lệ % mẫu phân bố theo độ tuổi và giới tính 65 Biểu đồ III.6. Tình hình can thiệp dự phòng lây truyền mẹ sang con trong nhóm đối tượng nghiên cứu 66 Biểu đồ III.7. Thời điểm phát hiện mẹ nhiễm HIV 67 Biểu đồ III.8. Tỉ lệ nhiễm HIV phân bố theo nhóm tuổi 68 Biểu đồ III.9. Tỉ lệ nhiễm HIV khi trẻ được dự phòng đầy đủ, không dự phòng và dự phòng không đầy đủ 69 Biểu đồ III.10. Tỉ lệ nhiễm HIV của trẻ theo thời điểm nhiễm HIV của mẹ 70 DANH MỤC HÌNH Hình I.1. Phân loại virút HIV 13 Hình I.2. Cấu trúc của HIV-1 13 Hình I.3: Cấu trúc bộ gen của virút HIV 14 Hình I.4. Chu kỳ sống của virút HIV-1 15 Hình I.5. Phân tử gp120 gắn vào thụ thể CD4 và đồng thụ thể 16 Hình I.6. Tỉ lệ nhiễm HIV ở phụ nữ 15-19 tuổi phân bố theo vùng 17 Hình I.7. Tỷ lệ nhiễm HIV (%) trong số các phụ nữ mang thai đi khám thai ở vùng cận Sahara Châu Phi, 1997-2007 18 Hình I.8. Tình hình nhiễm HIV ở phụ nữ mang thai tại một số quốc gia 19 Hình I.9. Ước tính và dự báo số người nhiễm HIV/AIDS ở Việt Nam 20 Hình I.10. Ước tính và dự báo số phụ nữ mang thai nhiễm HIV/AIDS 21 tại Việt Nam 21 Hình I.11. Ước tính và dự báo số trẻ em (0 - 14 tuổi) nhiễm HIV/AIDS 21 tại Việt Nam 21 Hình I.12. Ước tính tỉ lệ nhiễm trong tử cung và lúc sinh 23 Hình III.1. Kết quả phát hiện nhiễm DNA - HIV bằng bộ kit Amplicor 64 DANH MỤC SƠ ĐỒ Sơ đồ I.1. Quy trình cung cấp dịch vụ chăm sóc và điều trị dự phòng. Lây truyền HIV từ mẹ sang con cho phụ nữ trong quá trình mang thai 29 Sơ đồ I.2. Quy trình cung cấp dịch vụ chăm sóc và điều trị dự phòng lây truyền HIV từ mẹ sang con phụ nữ không biết tình trạng HIV khi chuyển dạ 30 Sơ đồ I.3. Quy trình quản lý phụ nữ mang thai nhiễm HIV 31 Sơ đồ I.4. Quy trình xét nghiệm phát hiện nhiễm HIV cho trẻ dưới 18 35 tháng tuổi 35 Sơ đồ II.1. Quy trình thu thập mẫu nghiên cứu 43 Sơ đồ II.2. Các phương pháp xác định nhiễm HIV sử dụng trong đề tài 44 [...]... chống HIV/ AIDS hiện nay MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU § Đánh giá kỹ thuật chẩn đoán sớm nhiễm HIV trên trẻ em dưới 18 tháng tuổi § Xác định tỉ lệ nhiễm HIV của trẻ em được sinh ra từ mẹ có huyết thanh dương tính với HIV hay trẻ có triệu chứng nghi ngờ nhiễm HIV (trẻ bị phơi nhiễm HIV) tại khu vực phía Nam Luận văn thạc sĩ sinh học 10 Lương Quế Anh Chẩn đoán sớm nhiễm HIV ở trẻ em CHƯƠNG I Luận văn thạc sĩ sinh. .. Lây nhiễm HIV trong khi sanh được khảo sát ở những trẻ sinh đôi hay sinh ba từ bà mẹ bị nhiễm HIV cho thấy trẻ sinh đầu tiên có tỉ lệ nhiễm HIV cao gấp hai lần các trẻ sinh sau Luận văn thạc sĩ sinh học 22 Lương Quế Anh Chẩn đoán sớm nhiễm HIV ở trẻ em Hình I.12 Ước tính tỉ lệ nhiễm trong tử cung và lúc sinh (23) Nhiều nghiên cứu gần đây về kiểu sanh cũng có liên quan đến tỉ lệ lây nhiễm mẹ con Mổ... sĩ sinh học 32 Lương Quế Anh Chẩn đoán sớm nhiễm HIV ở trẻ em thời, những cái chết này có thể tránh khỏi nếu trẻ em được chẩn đoán sớm (32) Chẩn đoán sớm nhiễm HIV giúp cung cấp các dịch vụ chăm sóc và điều trị sớm cho trẻ nhiễm HIV, đồng thời cũng tránh những lo lắng không cần thiết cho bố mẹ cũng như gia đình trẻ Tổ chức Y tế thế giới khuyến cáo cần phải kiểm tra tình trạng nhiễm HIV của trẻ sinh ra. .. 7% vào năm 1992, tỉ lệ nhiễm HIV vùng này khoảng 1-2 % những năm 1994 - 1997 và có thể tăng đến 13% vào năm 2010 (3) Ở San Pedro, tỉ lệ nhiễm HIV ở thai phụ là 4% vào năm 1994 Tại Sao Paulo, tỉ lệ nhiễm HIV ở thai phụ khoảng 1% năm 1990 đến 1995, trong khi đó ở Rio de Janeiro, tỉ lệ này vào khoảng 1 - 3% (4) I.2.2 Tình hình nhiễm HIV của phụ nữ và thai phụ ở Châu Á và Việt Nam Tại Châu Á, tỉ lệ nhiễm. .. nguy cơ lây nhiễm cao · Phòng ngừa sự mang thai ngoài ý muốn ở phụ nữ đã bị nhiễm HIV · Điều trị dự phòng lan truyền mẹ sang con nếu người phụ nữ nhiễm HIV quyết định sinh con Luận văn thạc sĩ sinh học 27 Lương Quế Anh Chẩn đoán sớm nhiễm HIV ở trẻ em · Chăm sóc và hỗ trợ cho những người mẹ nhiễm HIV, con cái và gia đình, đồng thời giám sát, đánh giá duy trì các hoạt động của chương trình Ở nước ta,... chăm sóc và điều trị dự phòng Lây truyền HIV từ mẹ sang con cho phụ nữ trong quá trình mang thai (35) Luận văn thạc sĩ sinh học 29 Lương Quế Anh Chẩn đoán sớm nhiễm HIV ở trẻ em Sơ đồ I.2 Quy trình cung cấp dịch vụ chăm sóc và điều trị dự phòng lây truyền HIV từ mẹ sang con phụ nữ không biết tình trạng HIV khi chuyển dạ (35) Luận văn thạc sĩ sinh học 30 Lương Quế Anh Chẩn đoán sớm nhiễm HIV ở trẻ em Sơ... học 21 Lương Quế Anh Chẩn đoán sớm nhiễm HIV ở trẻ em Trong chương trình hành động quốc gia phòng chống HIV AIDS, chính phủ Việt nam dự kiến sẽ khống chế tỷ lệ nhiễm HIV từ mẹ truyền sang con xuống dưới 10% và khống chế tỷ lệ phụ nữ mang thai nhiễm HIV xuống dưới 0,25% vào năm 2010 (18) I.3 CÁC CON ĐƯỜNG LÂY TRUYỀN HIV TỪ MẸ SANG CON (38) Hầu hết trẻ em bị nhiễm HIV là do lây truyền mẹ con Qua nhiều công... HIV của trẻ sinh ra từ mẹ bị nhiễm HIV trong vòng 6 tuần tuổi để bắt đầu các dịch vụ điều trị và chăm sóc y tế cho trẻ bị nhiễm Nếu không có sự can thiệp, 5 - 10% trẻ sơ sinh được sinh ra từ mẹ nhiễm HIV sẽ bị nhiễm do bú sữa mẹ Nếu mẹ được dự phòng ART đầy đủ, tình trạng lây nhiễm trong khi mang thai và cho con bú sẽ giảm đáng kể Chẩn đoán sớm nhiễm HIV sẽ giúp cho việc quyết định mẹ có nên cho con... nhiễm mẹ con Mổ bắt con làm giảm tỉ lệ lây nhiễm, vỡ ối sớm và kéo dài trên 4 giờ làm tăng nguy cơ lây nhiễm Nhiều trẻ em sinh ra từ mẹ bị nhiễm HIV kết quả xét nghiệm HIV âm tính lúc mới sanh nhưng sau đó vài ngày xét nghiệm là dương tính Điều đó cho thấy trẻ có thể bị lây nhiễm trong lúc sanh Ảnh hưởng của mỗi đường lây truyền đến tỉ lệ nhiễm HIV trẻ chưa được xác định rõ, tuy nhiên đa số các nghiên... học khuyến cáo phụ nữ nhiễm HIV không nên mang thai Kết quả cho thấy nồng độ HIV càng cao thì tỉ lệ lây nhiễm từ mẹ sang con càng cao Luận văn thạc sĩ sinh học 24 Lương Quế Anh Chẩn đoán sớm nhiễm HIV ở trẻ em Khi người mẹ mang thai bị nhiễm HIV ở giai đoạn chuyển huyết thanh hay giai đoạn cuối (hai thời điểm có nồng độ virút cao nhất trong suốt thời kỳ nhiễm) thì tỉ lệ lây nhiễm HIV cho con là cao nhất . LƯƠNG QUẾ ANH ĐÁNH GIÁ KỸ THUẬT CHẨN ĐOÁN SỚM NHIỄM HIV VÀ XÁC ĐỊNH TỈ LỆ NHIỄM HIV Ở TRẺ EM SINH RA TỪ MẸ NHIỄM HIV Chuyên ngành: Di truyền học - Khoa Sinh học Mã số: 60 42 70. phòng chống HIV/ AIDS hiện nay. MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU § Đánh giá kỹ thuật chẩn đoán sớm nhiễm HIV trên trẻ em dưới 18 tháng tuổi. § Xác định tỉ lệ nhiễm HIV của trẻ em được sinh ra từ mẹ có huyết. III.5.2. Tỉ lệ nhiễm HIV của nhóm đối tượng nghiên cứu 68 CHƯƠNG IV. BÀN LUẬN 71 IV.1. ĐÁNH GIÁ CÁC KỸ THUẬT CHẨN ĐOÁN SỚM PHÁT HIỆN NHIỄM HIV TỪ RNA VÀ DNA 72 IV.2. TỶ LỆ NHIỄM HIV Ở TRẺ EM SINH