- 171 - cao iu tr s lm thay i tỡnh trng bnh tt hn. Nh cú IgG ngoi sinh cnh tranh vi IgG ni sinh ỏi lc thp trong c ch gn vi khỏng nguyờn, lm tng thc bo phc hp khỏng nguyờn khỏng th. Thiu ht di lp IgG mc dự IgG vn c tng hp bỡnh thng, thm chớ cao hn bỡnh thng nhng vn xy ra nhim khun tỏi phỏt nng. Nguyờn nhõn cú th l do s thiu ht cú chn lc cỏc di lp IgG. Nhng trng hp ny cn phi c iu tr bng immunoglobulin. iu tr thay th thiu ht min dch th phỏt IgG trong iu tr bnh bch cu lympho món tớnh: cỏc kt qu nghiờn cu ó ch ra rng nhng trng hp c iu tr bng IgG 7S vi liu 400mg/kg th trng trong 3 tun liờn tip ớt b nhim trựng so vi nhúm dựng gi dc placebo vi P=0,001. IgG trong iu tr hi chng thiu ht min dch mc phi: hi chng ny c c trng bi gim ton b s lng v chc nng ca t bo lympho T, lm cho ngi bnh d b nhim trựng do kh nng ỏp ng min dch km. Nhng khi s dng IgG vi liu 400mg/kg th trng kộo di hng thỏng giỳp bnh nhõn chng c nhim trựng c hi. IgG trong a chn thng (polytrauma) s dng IgG 7S vi liu 400mg/kg th trng giỳp trỏnh c cỏc trng hp viờm phi do vi khun Gram ( - ). IgG c ng dng trong iu tr mt protein nguyờn phỏt Chỳ ý: chng ch nh IgG i vi cỏc trng hp mt protein th phỏt nh hi chng thn h, bnh viờm rut món tớnh, bng nng. III. SN XUT KHNG TH DCH TH C HIU Nhng yu t u tiờn cho vic sn xut khỏng th t hiu qu l: - Cú nhng quy trỡnh thao tỏc chung vit bng vn bn. - Cú ti liu hng dn v sn xut rừ rng cho tng loi khỏng th c sn xut. - S tụn trng trit cỏc hng dn trờn trong quỏ trỡnh sn xut. Cỏc bc sn xut khỏng th bao gm: 3.1. Lp k hoch Mi loi khỏng th c sn xut trong mt c s phi cú k hoch sn xut chi tit mụ t cỏc bc ca quy trỡnh, s lng sn phm cn sn xut, thi gian tin hnh K hoch c lp l ti liu trong quy trỡnh sn xut chun c chi tit húa. 3.2. Ti liu ca quy trỡnh sn xut + Quy trỡnh k thut chi tit l ti liu sn xut cho mi loi khỏng th. Ti liu phi nờu rừ nguyờn lý sn xut, cỏc cụng on sn xut v phng phỏp kim tra sn phm sau mi cụng on. + Tài liu nêu rõ: - Ngun gc ca kháng nguyên để gây miễn dịch. - Động vật và tiêu chuẩn của động vật dùng sản xuất kháng thể. - Trình t sn xut - Kim nghim sn phm Mi công on u phi mô t chi tit các thao tác k thut, phng pháp ánh giá sn phm ca từng công on. 3.3. Quy trỡnh sn xut khỏng th c hiu 3.3.1. Nguyên lý chung của quá trình tạo miễn dịch cao cho động vật - Mỗi loại kháng thể đặc hiệu đợc hệ miễn dịch của động vật sản sinh ra khi có kích thích của kháng nguyên của một loại vi sinh vật dùng làm giống gốc - Để có hàm lợng kháng thể cao phải gây tối miễn dịch cho động vật theo nguyên lý chung: + Dùng vacxin gây miễn dịch cơ sở + Gây tối miễn dịch bằng cách nhắc lại nhiều lần bằng vacxin hoặc công cờng độc với liều tăng dần - 172 - 3.3.2. Yêu cầu về nguyên liệu, động vật + Nguyờn vt liu, húa cht: nguyờn vt liu, húa cht c s dng trong quỏ trỡnh sn xut khỏng th phi m bo yờu cu k thut v phi c phờ chun ca c quan cp giy chng nhn cú thm quyn quc gia. + Động vật dùng trong sản xuất và kiểm định: phi đạt tiêu chuẩn và yêu cu k thut IV. MT S QUY TRèNH SN XUT KHNG HUYT THANH 4.1.Quy trỡnh sn xut khỏng huyt thanh di ( Viện các chế phẩm sinh học Trờng xuân, Trung Quốc) Kháng huyết thanh dại đợc sản xuất từ huyết thanh của ngựa đã đợc gây tối miễn dịch bằng virus dại cố định. Kháng huyết dại là globulin miễn dịch dạng dung dịch hoặc dạng đông khô. Sơ đồ tóm tắt sản xuất kháng huyết thanh dại gồm các bớc sau: Bớc 1: Gây miễn dịch cho ngựa - Gây miễn dịch cơ sở: dùng kháng nguyên là virus dại vô hoạt - Gây tăng miễn dịch: dùng vacxin nhắc lại. Bớc 2: Lấy máu để thu huyết tơng Khi huyết thanh ngựa có nồng độ kháng thể dại đạt 100UI/ml, lấy máu (cho chất chống đông và kháng sinh) rồi loại bỏ hồng cầu để thu huyết tơng. Bớc 3: Tiêu hoá huyết tơng Pha loãng huyết tơng 2 - 3 lần. Để ở nhiệt độ 30 0 C, điều chỉnh pH, thêm pepsin. Bớc 4: Quá trình tinh chế + Làm biến tính bằng nhiệt để loại bỏ Fibrin, Albumin, mảnh Fc - Đun nóng 57 - 59 0 C, thêm Amonium sulfat (NH 4 ) 2 SO 4 15% - Lọc loại bỏ chất tủa, giữ lại phần nớc nổi + Tạo tủa - Cho thêm Amonium sulfat (NH 4 ) 2 SO 4 20% để gây tủa - Giữ lại tủa, loại bỏ phần nớc nổi Bớc 5: Cô đặc, gạn lọc, vô trùng F(ab) 2 + Thêm nhôm 5% để hấp phụ chất gây sốt và protein tạp. + Cô đặc F(ab) 2 bằng phơng pháp siêu lọc + Cho thêm chất dinh dỡng vào rồi lọc vô trùng Bớc 6: Kiểm định sản phẩm + Hoá lý + Vô khuẩn + An toàn + Công hiệu + Hàm lợng F(ab) 2 Bảng 7.2: Tiêu chuẩn kỹ thut của kháng huyết thanh dại Thử nghiệm Tiêu chuẩn kỹ thuật Trạng thái khi lắc Nhận dạng Hàm lợng Protein pH Muối (NH 4 ) 2 SO 4 Chloroform Albumin F(ab) 2 Vô khuẩn An toàn Chí nhiệt tố Trong, màu trắng Đạt < 170 g/ l 6 - 7 7,5 - 9,5 g/ l < 0,1 g/l < 0,5 % (ml/ml) Không có > 60% Đạt Đạt Nhiệt độ tăng < 1,3 0 C - 173 - Nguyên liệu tơng tự nhóm máu A Công hiệu Kết luận < 4àg/ml >200 UI/ml Đạt 4.2. Quy trỡnh ch to IgG th c hiu Thỏ là động vật hay đợc sử dụng để sản xuất kháng thể dịch thể đặc hiệu dùng trong chẩn đoán bệnh truyền nhiễm. Ví dụ: Bệnh dại, bệnh dịch tả lợn, bệnh tụ huyết trùng Qui trình sản xuất IgG thỏ đặc hiệu gồm các bớc sau: Bớc 1: Gây miễn dịch cho thỏ - Gây miễn dịch cơ sở: dùng kháng nguyên là virus hoặc vi khuẩn vô hoạt. - Gây tối miễn dịch: dùng vacxin nhắc lại và kiểm tra hàm lợng kháng thể Bớc 2: Thu hoạch huyết thanh - Khi huyết thanh thỏ có nồng độ kháng thể cao. Ví dụ: Trong sản xuất kháng huyết thanh tụ huyết trùng, kiểm tra máu thấy hiệu giá phản ứng IHA đạt >1/160, tiến hành lấy máu thỏ vô trùng bằng cách bộc lộ động mạch cổ lấy máu để 37 0 C/1 giờ, sau đó cho vào tủ lạnh để 4 0 C qua đêm, chắt lấy huyết thanh. Bớc 3: Chiết tách IgG: Phơng pháp Caprylic axit - Amonium sulphat (NH 4 ) 2 S0 4 - Cho 1 thể tích huyết thanh + 4 thể tích dung dịch đệm (60mM Axetat buffer pH=4) - Nhỏ từng giọt Caprylic axit vào, tỷ lệ 25àl/1ml huyết thanh pha loãng, để ở nhiệt độ phòng 30 phút; ly tâm 10.000 vòng/phút / 30 phút, ở nhiệt độ 4 0 C. Loại bỏ cặn (Albumin). Thu lại dịch nổi. Thêm vào dịch nổi Amonium sulphat cho đến khi bão hoà. Khuấy đều, để yên ở nhiệt độ phòng 30 phút. Ly tâm 10.000 vòng/phút / 30 phút ở nhiệt độ 4 0 C. Thu lấy cặn (IgG kết tủa). Thêm vào IgG đã kết tủa1 lng nhỏ dung dịch đệm PBS. Bớc 4: Kiểm tra độ tinh khiết, hiệu giá, tính đặc hiệu - Kiểm tra độ tinh khiết của IgG bằng phơng pháp điện di. - Kiểm tra hiệu giá, tính đặc hiệu bằng phơng pháp huyết thanh học V. MT S QUY TRèNH SN XUT KHNG TH LềNG Kháng thể lòng đỏ là trong lòng đỏ của trứng gia cầm có kháng thể dịch thể đặc hiệu Kháng thể đợc tạo ra bằng phơng pháp gây miễn dịch cao cho động vật, nên kháng thể đặc hiệu chính là lớp IgG. Động vật hay sử dụng để chế kháng thể lòng đỏ là gà. Ví dụ: Kháng thể lòng đỏ kháng virus Gumboro, kháng thể lòng đỏ kháng virus viêm gan vịt, kháng thể lòng đỏ kháng Mycoplasma gallisepticum. Thu trứng Mổ trứng thu lòng đỏ Pha loãng lòng đỏ với dung môi Kiểm tra vô trùng Kiểm tra an toàn Kiểm tra hiệu lực Đóng chai Bảo quản 20 0 C Gây miễn dịch cao cho gà đẻ với virus viêm gan vịt - 174 - Hình 7.1: Quy trình sản xuất kháng thể lòng đỏ kháng virus viêm gan vịt VI. MT S CH PHM HUYT THANH DNG TRONG Y HC V TH Y HC 6.1. Huyt thanh khỏng c t un vỏn Huyết thanh kháng độc tố uốn ván đợc điều chế từ máu ngựa đã gây miễn dịch bằng giải độc tố uốn ván.Ngoài thành phần chính là immunoglobulin đặc hiệu có khả năng trung hòa độc tố uốn ván, còn có chất bảo quản là tricresol, các chất ổn định pH và tính đẳng trơng của dung dịch. Chế phẩm là dung dịch tiêm, ống 1ml có chứa 1500 IU (International Unit - đơn vị quốc tế) hoặc ống 2 ml có 6000 IU hoặc 10000 IU. Chỉ định dùng phòng bệnh uốn ván cho ngời và động vật bị vết thơng phần mềm dập nát, vết thng sâu kín, vết thơng nhiễm bẩn. Th- ờng dùng với liều 1.500 hoặc 3.000 IU. Khi điều trị uốn ván dùng với liều cao hơn 6000 IU, 10.000IU hoặc hơn. Tiêm di da Bảo quản ở nhiệt độ t 2 0 C n 8 0 C. 6.2. Globulin min dch khỏng c t un vỏn Globulin miễn dịch kháng độc tố uốn ván đợc điều chế từ máu ngời hoặc động vật đã đợc miễn dịch bằng giải độc tố uốn ván. Globulin miễn dịch cùng loài nên lúc dùng hiếm khi gây ra các phản ứng phụ. + Thành phần: IgG đặc hiệu kháng uốn ván và một số thành phần khác nh: glycocol, natri mercurothiolat. + Trình bày: hỗn dịch tiêm, ống hoặc bơm tiêm. + Chỉ định phòng và điều trị bệnh uốn ván nh huyết thanh kháng độc tố uốn ván. + Cách dùng: tiêm bắp thịt + Bảo quản: ở nhiệt độ t 2 0 C đến 8 0 C, tránh ánh sáng. 6.3. Huyt thanh khỏng c t bch hu Huyết thanh kháng độc tố bạch hầu đợc điều ch từ máu ngựa đã gây miễn dịch bằng giải độc tố bạch hầu. + Thành phần: Ig đặc hiệu có khả năng trung hòa độc tố do vi khuẩn bạch hầu (Corynebacterium diphtheriae) tiết ra và chất bảo quản. + Trình bày: dung dịch tiêm, thờng đóng ống 10ml chứa 10.000 IU + Chỉ định dùng: phòng và điều trị bệnh bạch hầu. + Cách dùng: tiêm dới da hoặc bắp thịt + Bảo quản: ở nhiệt độ từ 2 0 C - 8 0 C. 6.4. Huyt thanh khỏng c t vi khun c tht Huyết thanh kháng độc tố vi khuẩn độc thịt (Botulinum antitoxin) là chế phẩm chứa IgG kháng độc có khả năng trung hòa độc tố của vi khuẩn C. botulinum typ A, B, E hoặc hỗn hợp các typ. Vi khuẩn C. botulinum thờng nhiễm vào thực phẩm trong môi trờng kị khí, chủ yếu là thịt hoặc chế phẩm từ thịt. Ngời và động vật bị nhiễm độc do ăn thực phẩm có độc tố với các biểu hiện nh: đau quặn bụng, nôn, thở gấp và có thể dẫn đến liệt cơ bộ phận. + Thành phần: huyết thanh kháng độc tố vi khuẩn độc thịt thơng mại thờng là đa giá, gồm 3 typ A, B, E điều chế từ máu ngựa đã đợc gây miễn dịch. + Trình bày: dung dịch tiêm - 175 - + Cách dùng: tiêm bắp thịt + Bảo quản: ở nhiệt độ từ 2 0 C đến 8 0 C, không làm đông băng. Trong 1ml huyết thanh kháng độc tố vi khuẩn độc thịt của Aventis Pasteur có: - Kháng độc tố typ A: 500 IU - Kháng độc tố typ B: 500 IU - Kháng độc tố typ E: 50 IU - Cresol tối đa 3 mg 6.5. Huyt thanh khỏng c t vi khun hoi th sinh hi Độc tố hoại th sinh hơi (gas - gagrene toxin) do vi khuẩn kị khí Clostridium gây nên. Giống vi khuẩn Clostridium gồm nhiều loài, trong số đó có 3 loài gây bệnh thờng gặp l: C. perfringens; C. septicum; C.novyi. Những vết thơng phần mềm sâu, kín, bẩn dễ bị nhiễm vi khuẩn hoại th sinh hơi. Ngời và động vật bị bệnh hoại th sinh hơi có biểu hiện nhiễm trùng, nhiễm độc nặng. ở phần cơ thể bị hoại tử da tím tái, phù nề, có lớp hơi dới da. Tổn thơng hoại tử lan rộng dẫn đến nguy cơ phải tháo khớp. + Thành phần: huyết thanh kháng độc tố hoại th sinh hơi đợc điều chế từ máu ngựa đã đợc miễn dịch là chế phẩm chứa Ig kháng độc tố có khả năng trung hòa đặc hiệu độc tố các loài gây bệnh Clostridium tơng ứng. Ngoài Ig đặc hiệu còn có các tá chất bảo quản và duy trì sự ổn định của chế phẩm + Trình bày: dung dịch tiêm + Chỉ định dùng: Để điều trị bệnh hoại th sinh hơi hoặc dự phòng cho những bệnh nhân bị chấn thơng nặng. + Cách dùng: tiêm tĩnh mạch + Bảo quản: ở nhiệt độ từ 2 0 C đến 8 0 C. + Trong 1ml huyết thanh kháng độc tố hoại th sinh hơi của Aventis Pasteur có: Kháng độc tố C. perfringens: 1000 IU Kháng độc tố C. septicum: 500 IU Kháng độc tố C. novyi: 1000 IU Cresol tối đa 3 mg 6.6. Huyt thanh khỏng di Huyết thanh kháng dại đợc điều chế từ máu ngựa đợc gây miễn dịch bằng vacxin dại. + Thành phần: Ig đặc hiệu có khả năng bất hoạt virus dại, chất bảo quản và tá dợc. + Trình bày: dung dịch tiêm, thờng đóng lọ 5 ml, chứa 1000 IU + Chỉ định dùng: tiêm cho ngời, động vật bị chó nghi dại hoặc chó dại cắn gần đầu hoặc bị cắn nhiều vết thơng. Huyết thanh kháng dại thờng dùng kết hợp với vacxin dại. + Cách dùng: tiêm bắp thịt ở vị trí khác bên với vị trí tiêm vacxin dại. Huyết thanh kháng dại còn đợc dùng để tiêm xung quanh vết thơng hoặc để tẩm đắp vào vết thuơng bị chó cắn. + Bảo quản: ở nhiệt độ từ 2 0 C - 8 o C. 6.7. Globulin min dch khỏng di Globulin miễn dịch kháng dại đợc điều chế từ máu ngời hoặc động vật đã gây miễn dịch bằng vacxin dại + Thành phần: Ig đặc hiệu kháng dại, Glycocol, Natri clorua, Merthiolat + Trình bày: hỗn dịch tiêm thờng đóng ống 2ml, chứa 150 IU. + Chỉ định dùng: Tiêm cho ngời và động vật bị chó nghi dại hoặc chó dại cắn gần đầu hoặc cắn nhiều vết. Huyết thanh kháng dại thờng dùng kết hợp với vacxin dại. - 176 - + Cách dùng: tiêm bắp thịt ở vị trí khác bên với vị trí tiêm vacxin dại. Huyết thanh kháng dại còn đợc dùng để tiêm xung quanh vết thơng hoặc để tẩm đắp vào vết thơng bị chó cắn. + Bảo quản: ở nhiệt độ từ 2 - 8 o C 6.8. Nh d ch tiờm cha khỏng th chng bnh Gumboro, Newcastle, IB (Infectious Bronchitis - viờm khớ qun truyn nhim). + Mô tả: kháng thể chống bệnh Gumboro, Newcastle, IB là một nhũ dịch tiêm vô trùng, chế từ trứng gà của đàn gà đã đợc gây tối miễn dịch với virus Gumboro, Newcastle, IB. + Thành phần: kháng thể đặc hiệu chống virut Gumboro, Newcastle, IB và một số kháng thể không đặc hiệu khác. Mỗi ml nhũ dịch chứa ít nhất 25 - 30 mg hàm lợng IgG + Tác dụng: là 1 kháng thể đặc hiệu có tác dụng trung hòa các virus gây bệnh Gumboro, Newcastle, IB ở gà. Kháng thể có tác dụng chữa bệnh và phòng các bệnh truyền nhiễm do virus Gumboro, Newcastle, IB cho gà ở các lứa tuổi khác nhau Kháng thể Gumboro tồn tại trong cơ thể 20 ngày, nhng nồng độ có tác dụng bảo hộ tốt nhất trong thời gian 10 ngày sau khi tiêm. Ngoài ra kháng thể còn có tác dụng nh một liệu pháp protein cho cơ thể. + Chỉ dẫn: Đặc hiệu chữa bệnh và phòng các bệnh truyền nhiễm do virus Gumboro, Newcastle, IB cho gà ở các lứa tuổi khác nhau. Và tăng sức đề kháng cho đàn gà. + Liều lợng và cách sử dụng: Tiêm bắp cho gà càng sớm càng tốt sau khi mắc bệnh Phòng bệnh Chữa bệnh Gà dới 500 g 0,5 ml / con 0,5 - 1 ml / con Gà trên 500 g 1 ml / con 1 - 2 ml / con + Chú ý: Để kháng thể ở nhiệt độ bình thờng từ 5 - 10 phút và lắc kĩ trớc khi tiêm Cần bổ sung thêm vitamin B - complex và chất điện giải cho gà. Thuốc dễ nhiễm khuẩn, nếu bảo quản không tốt rất dễ hỏng nên chỉ dùng một lần sau khi mở nắp. + Bảo quản và hạn dùng: Bảo quản ở nhiệt độ từ 2 0 C - 4 o C đợc 2 tháng Bảo quản ở nhiệt độ âm sẽ đợc 6 tháng Bảo quản lạnh, tránh ánh sáng khi vận chuyển + Trình bày: Thuốc đóng lọ 50 ml, 100 ml 6.9. Khỏng th a giỏ phũng, cha bnh viờm gan do virus vt. + Thành phần: Là kháng thể đa giá đợc chế từ vịt đã gây tối miễn dịch bằng các kháng nguyên, bao gồm: Kháng thể chống bệnh viêm gan virus ở vịt. Kháng thể chống bệnh dịch tả vịt. Kháng thể không đặc hiệu khác. + Tác dụng: Kháng thể rất có hiệu quả trong điều trị và phòng các bệnh viêm gan do virus ở vịt, dịch tả vịt. Kháng thể có tác dụng điều trị ngay sau khi tiêm vài giờ Có tác dụng nh protein liệu pháp nhằm tăng sức đề kháng chung cho thủy cầm. Kháng thể lu giữ trong máu 20 ngày nhng tác dụng bảo hộ tốt nhất trong vòng 10 ngày đầu sau khi tiêm. + Liều lợng và cách sử dụng: tiêm bắp thịt hoặc dới da - Phòng bệnh viêm gan do virus: vịt, ngan từ 1 - 7 ngày tuổi tiêm bắp 0,5ml/con. Tiêm phòng nhắc lại sau 10 ngày với liều 1ml/con. - 177 - - Điều trị bệnh viêm gan do virus, dịch tả vịt: Vịt, ngan dới 2 tuần tuổi: Lần 1: 0,5 - 1 ml/con Lần 2: 0,5 - 1 ml/con sau 3 ngày Vịt, ngan trên 2 tuần tuổi : Lần 1: 1 - 2 ml/con Lần 2: 1 - 2 ml/con sau 3 ngày Tăng sức đề kháng cho con bệnh bằng B - complex, thuốc điện giải. Kết hợp với kháng sinh chống bội nhiễm. Chú ý : - Thuốc rất an toàn, hiệu quả cao - Để ở nhiệt độ phòng 30 phút và lắc kỹ trớc khi dùng - Sát trùng bơm kim tiêm trớc khi dùng - Mỗi lọ kháng thể khi đã mở ra chỉ dùng 1 lần. Bảo quản: - Bảo quản lạnh ở nhiệt độ 2 - 8 0 C, tránh ánh sáng trực tiếp. - Thời gian bảo quản 2 tháng kể từ ngày sản xuất Hạn dùng: 3 tháng kể từ ngày sản xuất Trình bày: lọ nhựa 50 ml, 100 ml. 6.10. Huyt thanh khỏng nc rn Rn c gm nhiu ging khỏc nhau, trong mi ging cú nhiu loi. Nn nhõn b rn c cn cú biu hin au, sng n ti ch, tớm tỏi, xut huyt nng, ri lon hụ hp, tru tim mch v t vong nu khụng c x lý v iu tr kp thi. Khi b rn cn, thng l khụng xỏc nh c rn ú thuc loi rn no. Do vy huyt thanh khỏng nc rn dựng iu tr thng l huyt thanh a giỏ, hn hp ca huyt thanh n giỏ c hiu i vi nhng loi rn thng gp. Huyt thanh khỏng nc rn a giỏ c iu ch t mỏu nga c gõy min dch bng hn hp gii c t nc rn ca cỏc loi rn c thng gp Thnh phn : - Immunoglobulin a giỏ cú kh nng trung ho cỏc nc rn tng ng - Glycocol - Phenol lm cht bo qun - Tỏ dc Trỡnh by: dung dch tiờm úng l 5ml hoc úng trong bm tiờm cú sn kim tiờm kp thi tiờm cho nn nhõn. Cỏch dựng : tiờm bp tht Bo qun : gi nhit 2 - 8 o C, trỏnh ỏnh sỏng. Cõu hi ụn tp chng 1. ng dng ca khỏng th dch th c hiu trong chn oỏn bnh truyn nhim v chn oỏn ung th? 2. ng dng ca khỏng th dch th c hiu trong phũng bnh truyn nhim? 3. ng dng ca khỏng th dch th c hiu trong iu tr bnh truyn nhim? 4. Nguyờn lý chung ca quỏ trỡnh sn xut khỏng th dch th c hiu. - 178 - 5. Quy trình sản xuất kháng huyết thanh dại. 6. Quy trình sản xuất IgG thỏ dùng cho chẩn đoán. 7. Quy trình sản xuất chế phẩm kháng thể từ lòng đỏ trứng gà. - 179 - PHỤ LỤC Phụ lục 1 TIÊU CHUẨN ĐỐI VỚI ĐÀN GÀ SẠCH BỆNH (SPF – Specific pathogen free) Đàn gà sạch bệnh SPF dùng sản xuất trứng SPF cần được kiểm tra như sau : a/ 50% đàn được kiểm tra cách 1 tháng 1 lần và cho thấy không nhiễm các mầm bệnh sau đây b/ 50% đàn được kiểm tra 3 tháng/1 lần Mầm bệnh Kiểm tra M. gallisepticum SA M.synoviae SA M.pullorum SA Virus Newcastle HI Virus gây viêm phế quản truyền nhiễm IB HI/ELISA/AGPT Virus gây viêm thanh quản truyền nhiễm ILT HI/ELISA/AGPT Virus Gumboro IBD HI/ELISA/AGPT Virus Avian Adeno GPI AGP/SN/FA Virus Avian Adeno GPII AGP Virus gây hội chứng giảm đẻ EDS 76 HI Virus đậu gà Fow Pox Lâm sàng/ AGP Virus Avian Reo SN/AGP/FA Virus gây viêm não tuỷ truyền nhiễm ở gia cầm (Avian Encephalomyelitis) FES/ELISA/AGP/SN Virus gây bệnh Marek’s AGP Virus gây bệnh leucosis ở gia cầm PM/SN/ELISA Virus gây bệnh lưới nội mô Reticuloendotheliosis SN/FA/ELISA/AGP Mầm bệnh gây bệnh cúm ở gia cầm Avian influenza AGP Vi khuẩn Salmonella Kiểm tra vi khuẩn Nhân tố gây bệnh thiếu máu Chicken Anaemia CAA SN/IFA/ELISA Virus Avian Nephaeitis FA Virus gây bệnh viêm mũi - khí quản ở gà tây (Turkey Rhinotracheitis) ELISA SA: Ngưng kết trên phiến kính FES: Mẫn cảm phôi PM: Trộn lẫn kiểu hình - 180 - Phụ lục 2 KIỂM TRA VÔ TRÙNG VACXIN THÚ Y 1. Cỡ mẫu: Mẫu gồm 1% số lọ trong 1 lô định kiểm tra: tối thiểu 3 lọ và tối đa 10 lọ 2. Kiểm tra phát hiện vi khuẩn: 2.1. Môi trường: một trong các loại môi trường sau: - Thioglycollate broth - Soybean casein digist broth - Trypticase soy broth (TSB) 2.2. Cách làm: Mẫu được hoàn nguyên như khuyến nghị trên nhãn và ít nhất 1ml mẫu đã hoàn nguyên được cấy vào môi trường nước thịt (thể tích mẫu không vượt quá 10% thể tích môi trường. Nuôi cấy ở 30 - 37 o C trong ít nhất 7 ngày. TSB được nuôi cấy trong điều kiện yếm khí. Trong trường hợp có vi khuẩn đường ruột, mẫu cũng được cấy vào thạch Heart Infusion Agar. 2.3. Đánh giá: Không có tạp nhiễm vi khuẩn hoặc trong trường hợp có vi khuẩn đường ruột cho phép không quá 1 khuẩn lạc của vi khuẩn hoại sinh. 3. Kiểm tra Mycoplasma 3.1. Môi trường: a/ Heart Infusion Broth (Heart Infusion Agar), với các phụ gia sau: Proteose peptone, chiết suất yeast autolysate/ Fresh yeast, nicoinamide adenine dinucleotie, L-cysteine hyđrochloride, huyết thanh ngựa và tetrazolium chloride hoặc chất chỉ thị khác. b/ Nước thịt PPLO (Hayflick) – Thạch PPLO (Hayflick), với các phụ gia sau: huyết thanh ngựa, chiết suất từ nấm. 3.2. Cách làm: Mẫu được hoàn nguyên như khuyến nghị và cấy đồng thời vào nước thịt PPLO (1ml trong 100ml) và thạch PPLO (0,1ml). Nước thịt được nuôi cấy ở 33 – 37 0 C trong 14 ngày, trong thời gian này cấy thêm 0,1 ml mẫu vào thạch PPLO trong ngày thứ 3, 7, 10, 14. Tất cả các đĩa thạch được nuôi cấy ở nơi có độ ẩm cao, 4 – 6% CO 2 , nhiệt độ 33 – 37 0 C trong 10 – 14 ngày. 3.3. Đánh giá: Qua kính hiển vi, không có tạp nhiễm Mycoplasma ở các đĩa thạch 4. Kiểm tra Salmonella 4.1. Môi trường: - Môi trường lỏng: sử dụng một trong hai loại môi trường sau: Nước thịt Selenite Nước thịt Jetrahionate - Môi trường rắn: Sử dụng một trong các loại môi trường sau: Thạch Mac Conkey Thạch Salmonell Shigella Thạch Brilliant Green Thạch Desoxycholate Citrate Thạch XLD 4.2. Cách làm: Mẫu được hoàn nguyên và tối thiểu 1ml mẫu được cấy vào môi trường lỏng (không quá 10% thể tích). Nuôi cấy ở 35 – 37 o C trong 18 – 24 giờ, sau đó lấy canh khuẩn cấy vào thạch, để thạch ở 35 – 37 o C ít nhất 48 giờ. Đánh giá: Không thấy vi khuẩn Salmonella 5. Kiểm tra phát hiện nấm: 5.1. Môi trường: Nước thịt và Sabouraud Nước thịt và thạch Soybean Casein Digest 5.2. Cách làm: Mẫu được hoàn nguyên và tối thiểu 1ml được cấy vào nước thịt (không quá 10% thể tích môi trường). Nuôi cấy ở 20 – 25 0 C trong 14 ngày. 5.3. Đánh giá: không có tạp nhiễm nấm. [...]... TI LIU THAM KHO A Tài liệu trong nước 1 Vũ Triệu An, Jean Claude Homberg (1997) Miễn dịch học NXB Y học, Hà Nội 2 Nguyễn Đình Bảng, Nguyễn Thị Kim Hương (2003) Vacxin và chế phẩm trong phòng và điều trị NXB Y học, H Nội 3 Bộ môn dị ứng học (2002) Chuyên đề dị ứng học tập I và tập II NXB Y học, Hà Nội 4 Cục Thú y (2007) Quy trình - Tiêu chuẩn ngành thú y NXB Nông nghiệp, Hà Nội 5 Nguyễn Bá Hiên, Nguyễn... Doanh, Phạm Sỹ Lăng, Nguyễn Thị Kim Thành, Chu Đình Tới (2008) Vi sinh vật - Bệnh truyền nhiễm vật nuôi NXB Giáo dục, Hà Nội 6 Đỗ Thị Hòa, Bùi Quang Tề, Nguyễn Hữu Dũng, Nguyễn Thị Muội (2004) Bệnh học thủy sản NXB Nông nghiệp, Hà Nội 7 Nguyễn Ngọc Lanh, Văn Đình Hoa (2006) Miễn dịch học NXB Y học, Hà Nội 8 www.google.com.vn B Tài liệu nước ngoài 1 C.L.Baldwin, C.J.Howard, J.Nacssens (2009).Veterinary... pullorum Thớ nghim c tin hnh trờn 20 g, mi g c c tiờm 10 liu vacxin theo nhng ng sau: di da hoc bp, rch vo mo v nh mt, 5 g dựng lm i chng Theo dừi g trong 21 ngy xem cú phnng cc b hay ton thõn khụng G cht c m khỏm kim tra bnh tớch ỏnh giỏ g khụng cú triu chng lõm sng do vacxin 2.2 Thớ nghim c tin hnh tng t nh trờn nhng dựng 10 g v cui giai on theo dừi, 10 g c kim tra huyt thanh xem cú khỏng th chng cỏc... cú kt qu kim tra õm tớnh vi cỏc bnh Newcastle, CELO, viờm ph qun truyn nhim IB, Mareks, hi chng gim EDS 76, Mycoplasma gallisepticum, M synoviae v Salmonella pullorum 1.1 Vo mng CAM 10 liu vacxin ó trung ho c tiờm vo 10 phụi g 9 12 ngy tui Phụi no cht trong 24 gi u thỡ loi b Tt c phụi cht sau 24 gi v sng c kim tra kh nng ngng kt hng cu Sau 7 ngy nc niu nang c trn cy truyn v quy trỡnh trờn c lp li... khỏng th chng cỏc tỏc nhõn gõy bnh trờn hay khụng ỏnh giỏ: G kho mnh v cú kt qu huyt thanh õm tớnh vi cỏc yu t gõy bnh trờn tr virus vacxin 3 Kim tra bng cỏch cy vo mụi trng t bo Mu vacxin i din khụng di 10 liu c trung ho vi huyt thanh ti min dch c hiu Sau ú vacxin trung ho c tiờm vo ti thiu 1 loi t bo 1 lp hoc dũng t bo cú ngun gc t bn ng vt kho mnh virus hp th lờn t bo 37oC trong 1 gi Mụi trng t bo... t ngoi lai nu khụng tỡm thy nhõn t hp ph hng cu 4 Phn ng kt hp b th phỏt hin virus gõy bnh Leucosis gia cm: Mụi trng t bo x phụi g c dựng phi mn cm vi cn nhúm A v B ca virus gõy bnh Leucosis Ti thiu 10 liu vacxin c tiờm vo mụi trng t bo Mụi trng c duy trỡ ti thiu 9 ngy, thi gian ú t bo c b sung 3-4 ngy 1 ln Mụi trng i chng dng s dng nhúm A v B v cú i chng õm Cui giai on nuụi cy, thc hin phn ng kt... R.L., Th1 and Th2 cells: different pattern of lymphokine secrection lead to different functional properties, Annu Rev Immuno.l 7:145, 1989 4 Weller P F The immunobiology of eosinophils, N Engl J Med 320:1 110 - 1118, 1991 U U - 183 - Mục lục PHN M U .2 I KHI NIM V MễN HC 2 II VAI TRề V V TR CA MễN HC 2 III KHI QUT NI DUNG CHNG TR èNH MễN H 3 C 1 Thụng tin... Khỏi nim 8 2.2 Nguyờn lý 8 III C TNH C BN CA VACXIN 8 IV THNH PHN CA VACXIN 9 4.1 Khỏng nguyờn 9 4.2 Cht b tr 10 V YấU CU CA MT VACXIN 19 VI PHN LOI VACXIN 19 6.1 Vacxin cht 19 6.2 Vacxin sng 20 6.3 Vacxin di n v 22 6.4 Vacxin th h... 175 6.8 Nh d ch tiờm cha khỏng th chng bnh Gumboro, Newcastle, IB (Infectious Bronchitis viờm khớ qun truyn nhim) 176 6.9 Khỏng th a giỏ phũng, cha bnh viờm gan do virus vt 176 6 .10 Huyt thanh khỏng nc rn 177 PH LC 179 TI LIU THAM KHO .183 . 133 2. Các phản ứng huyết thanh học có thể quan sát trực tiếp 133 3. Các phản ứng huyết thanh học phải dùng kỹ thuật đánh dấu để phát hiện 153 Chương 7 MIỄN DỊCH HỌC ỨNG DỤNG TRONG ĐIỀU TRỊ. ĐẶC HIỆU VÀ ỨNG DỤNG 165 2.1. Ứng dụng kháng thể dịch thể đặc hiệu trong chẩn đoán bệnh 165 2.2. Ứng dụng kháng thể dịch thể đặc hiệu trong ®iÒu trÞ bÖnh 165 III. SẢN XUẤT KHÁNG THỂ DỊCH THỂ. (1997). Miễn dịch học. NXB Y học, Hà Nội 2. Nguyễn Đình Bảng, Nguyễn Thị Kim Hơng (2003). Vacxin và chế phẩm trong phòng và điều trị. NXB Y học, H Nội. 3. Bộ môn dị ứng học (2002). Chuyên đề dị ứng