Bộ giáo dục đào tạo Tr-ờng đại học nông nghiƯp hµ néi - tiªu quang an nghiên cứu số đặc điểm bệnh lí lợn mắc hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản (prrs), Sử dụng kỹ thuật hóa mô miễn dịch ®Ĩ Ph¸t HIƯN VIRUS Chun ngành : BƯnh lÝ häc chữa bệnh vật nuôi Mó s : 62.62.50.01 tóm tắt luận án tiến sỹ nông nghiệp hà nội - 2012 Công trình đ-ợc hoàn thành Bộ môn bệnh lí khoa thú y Tr-ờng đại học nông nghiệp Hà Néi Ng-êi h-íng dÉn khoa häc: GS.TS ®Ëu Ngäc Hào Pgs ts nguyễn hữu nam Phản biện 1: GS.TS Nguyễn Quang Tuyên Tr-ờng Đại học Nông lâm Thái Nguyên Phản biện 2: PGS TS Bùi Thị Tho Tr-ờng Đại học Nông nghiệp Hà Nội Phản biện 3: TS Phạm Văn Đông Cục Thú y Luận án đ-ợc bảo vệ tr-ớc Hội đồng chấm luận án cấp Tr-ờng, họp Tr-ờng Đại học Nông nghiệp Hà Nội Vào hồi 30 ngày tháng năm 2012 Có thể tìm hiểu luận án tại: - Th- viện Quốc gia - Th- viện Tr-ờng Đại học Nông nghiệp Hà Nội MỞ ĐẦU TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI Hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản lợn (Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome – PRRS) hay gọi dịch “tai xanh” lợn loại ARN virus thuộc họ Arteriviridae gây Bệnh phát lần Mỹ vào năm 1987 sau bệnh lây lan nhanh qua châu lục khác, năm 1991 viện Thú y Trung ương Hà Lan, nhà khoa học phân lập virus gây hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản lợn, đặt tên Lelystad để kỷ niệm nơi mà người ta tìm Hiện có hai chủng virus lưu hành tiếp tục gây cac vụ dịch giới Việt Nam, chủng Châu Âu thường gọi Lelystad-LV chủng Bắc Mỹ với đại diện VR-2332 Hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản (PRRS), trở thành vấn đề thời năm gần nước ta Dịch bệnh PRRS nổ lần vào ngày 12/3/2007 Hải Dương, sau dịch lây lan nhiều tỉnh, thành phố nước Cho đến dịch thường xuyên lưu hành gây thiệt hại lớn cho ngành chăn nuôi, đặc biệt tình hình chăn ni cịn phân tán nước ta Đã có nghiên cứu PRRS; tập trung vào vấn đề dịch tễ học, virus gây bệnh, đặc biệt vai trò vi khuẩn thứ phát ổ dịch PRRS Tuy nhiên nghiên cứu bệnh lí lâm sàng, giải phẫu bệnh học, tiêu huyết học lợn mắc PRRS nghiên cứu phương pháp chẩn đoán, xác định virus để phân biệt với bệnh truyền nhiễm khác gần thiếu, không nước mà phạm vi giới Trước thực tế chúng tơi tiến hành thực đề tài: “Nghiên cứu số đặc điểm bệnh lí lợn mắc hội chứng rối loạn hơ hấp sinh sản (PRRS), sử dụng kỹ thuật hóa mơ miễn dịch để phát virus” MỤC TIÊU CỦA ĐỀ TÀI + Nghiên cứu có hệ thống đặc điểm bệnh lí lợn mắc PRRS, với trọng tâm triệu chứng lâm sàng, biến đổi bệnh lí đại thể, vi thể, thay đổi tiêu huyết học lợn mắc PRRS nhằm phân biệt với bệnh phổi khác lợn + Nghiên cứu bội nhiễm số vi khuẩn kế phát, gây bệnh tích cho lợn ổ dịch PRRS; giúp cho công tác phịng chống dịch xác hiệu + p dụng phương pháp hóa mơ miễn dịch (Immunohistochemistry IHC) để chẩn đoán xác định khu trú PRRSV mô bào lợn bệnh * Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ THỰC TIỄN CỦA ĐỀ TÀI: + Đây nghiên cứu đầy đủ số đặc điểm bệnh lí hội chứng rối loạn hơ hấp sinh sản lợn (PRRS) Những biến đổi đại thể, vi thể quan lợn bệnh, thay đổi tiêu huyết học, tình trạng suy đa tạng lợn mắc PRRS… + p dụng phương pháp hóa mơ miễn dịch (IHC) chẩn đốn xác định vị trí khu trú virus nhiều mơ bào lợn bệnh, điều có ý nghĩa lớn nghiên cứu phân lập PRRSV nghiên cứu chế sinh bệnh virus + Kết nghiên cứu luận án tài liệu tham chiếu cho nghiên cứu chuyên sâu khác + Kết nghiên cứu sở khoa học để nhà chuyên mơn hoạch định phương pháp phịng trị bệnh hiệu + Luận án tài liệu tham khảo có ý nghĩa phục vụ cho giảng dạy nghiên cứu khoa học NHỮNG ĐÓNG GÓP MỚI CỦA ĐỀ TÀI + Đây nghiên cứu bước đầu có hệ thống triệu chứng lâm sàng, biến đổi đại thể, vi thể quan lợn mắc PRRS, từ phân biệt với bệnh phổi khác lợn + Đây nghiên cứu bước đầu công bố kết thay đổi số tiêu huyết học, tình trạng suy đa tạng lợn mắc PRRS + Sử dụng thành công kỹ thuật hóa mơ miễn dịch (IHC) để chẩn đốn PRRS xác định khu trú virus mô bào lợn bệnh BỐ CỤC CỦA LUẬN N: Luận án gồm 149 trang chia thành phần sau: Mở đầu (4 trang), Chương 1: tổng quan tài liệu (35 trang), Chương 2: Đối tượng, nội dung nguyên liệu phương pháp nghiên cứu (13 trang), Chương 3: Kết nghiên cứu thảo luận (74 trang), Chương 4: Kết luận tồn đề nghị (3 trang), Tài liệu tham khảo (19 trang) Luận án gồm 38 bảng, 66 Hình ảnh minh họa Tổng số tài liệu tham khảo 132, bao gồm 35 tài liệu tiếng Việt, 97 Tài liệu tiếng Anh Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU MỘT SỐ HIỂU BIẾT VỀ HỘI CHỨNG RỐI LOẠN HÔ HẤP VÀ SINH SẢN Ở LỢN (PRRS) 1.1 Mầm bệnh 1.1.1 Nguồn gốc phân loại Nguyên nhân gây hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản lợn loại virus thuộc họ Arteriviridae Họ Ateriviridae có giống Aterivirus bao gồm thành viên là: Equine Ateritis Virus (EAV) gây viêm động mạch, sẩy thai viêm phổi ngựa non Porcine Respiratory and Reproductive Syndrome Virus (PRRSV) gây rối loạn hô hấp sinh sản lợn 1.1.2 Hình thái cấu trúc PRRSV Virus có hình cầu, có vỏ bọc có gai nhơ Kích thước virus vào khoảng 45-80nm, nhân nucleocapsid có kích thước 25-35nm, bề ngồi virus bao bọc lớp vỏ Vi rút PRRS PRRSV ARN virus với gen là sợi ARN đơn dương có kích thước khoảng 15 kilobase với hai đầu 5´ 3´ Đầu 5´ chứa đến 75% ARN polymeraza, đầu 3´ chứa hầu hết gen mã hóa protein cấu trúc (Meng cs, 1994) Có khung đọc mở ORFs (Open Reading Frame): ORF1a, ORF1b, ORF2a, ORF2b, ORF3, ORF4, ORF5, ORF6 ORF7 Trong ORF1a ORF1b (kích thước khoảng 12kb) mã hóa cho 12 protein phi cấu trúc (Nonstructural Protein- NSP) NSP1- NSP12 Các ORFs cịn lại mã hóa cho protein cấu trúc, có protein có khả trung hịa kháng thể, gồm phân tử glycoprotein, phân tử protein màng (M) Một phân tử protein vỏ nhân virus (N) Cấu trúc vi rút PRRS 1.3 Cơ chế gây bệnh Sau xâm nhập vào thể lợn, virus PRRS công đại thực bào đặc biệt đại thực bào phế nang Có tới 40% đại thực bào bị phá hủy làm cho sức đề kháng lợn bị suy giảm nghiêm trọng mở đường cho bệnh truyền nhiễm kế phát gây chết lợn Đại thực bào bình thường Đại thực bào bệnh lí PRRSV phá hủy TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU VỀ BỆNH LÍ LỢN MẮC PRRS 2.1 Nghiên cứu PRRS giới Dấu ấn nói kết nghiên cứu Viện Thú y Lelystad Hà Lan, nơi tìm PRRSV năm 1991 Cấu trúc gen Meng cs, (1995) cơng bố, trình tự gen PRRSV giải mã mà không gặp nhiều khó khăn Gao Xiao-Lei cs, (2009), so sánh biến đổi bệnh lí lợn trường hợp nhiễm tự nhiên chủng PRRSV độc lực cao gây bệnh nhân tạo cho lợn chủng Bắc Mỹ VR-2332… Hiện PRRS nhà khoa học nhiều nơi giới tập trung nghiên cứu 2.2 Nghiên cứu PRRS Việt Nam Mầm bệnh PRRSV đề cập đến qua báo cáo Nguyễn Bá Hiên, (2007), Lê Văn Lãnh, (2007) Về triệu chứng bệnh tích PRRS thể qua báo cáo Nguyễn Hữu Nam, (2007), Phạm Ngọc Thạch, (2007), Lê Văn Năm, (2007) Các tác giả Phạm Sỹ Lăng, (2007) thơng báo tình trạng nhiễm liên cầu khuẩn vi khuẩn thứ phát lợn mắc PRRS Theo Nguyễn Hữu Nam cs, (2007); Bùi Quang Anh cs, (2007) Trong ổ dịch thường gặp loại vi khuẩn gây bệnh kế phát phổi lợn mắc PRRS là: Mycoplasma hyopneumonia (suyễn lợn); Pasteurella multocida (tụ huyết trùng); Bordetella bronchiseptica (viêm teo mũi); Streptococcus suis type (liên cầu khuẩn) Haemophilus parasuis (viêm đường hô hấp) Hàng năm PRRS nhà khoa học Việt Nam không ngừng quan tâm, nghiên cứu Chương NỘI DUNG NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU Lợn lứa tuổi mắc PRRS ổ dịch Phạm vi nghiên cứu đề tài, thực nghiên cứu đề tài phạm vi tỉnh thuộc vùng tả ngạn sơng Hồng có dịch PRRS từ năm 2007 – 2010 (Thái Nguyên, Bắc Giang, Lạng Sơn, Bắc Ninh, Hải Dương, Quảng Ninh, Hải Phịng, Hưng n, Thái Bình) Địa điểm nghiên cứu Đề tài thực sở theo dõi tình hình dịch PRRS xảy số tỉnh thuộc vùng tả ngạn sông Hồng Mẫu bệnh phẩm lưu giữ làm thí nghiệm Bộ mơn Bệnh lí Khoa Thú y trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội Các tiêu huyết học lợn mắc PRRS xét nghiệm Khoa Thú y, Khoa Huyết học Hóa sinh bệnh viện Trung ương Quân đội 108 Các thí nghiệm phân lập giám định vi khuẩn kế phát ổ dịch PRRS, thực Bộ môn Vi trùng Viện Thú y Quốc gia 2.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 2.2.1 Nghiên cứu diễn biến dịch số địa phương - Xác định tỷ lệ mắc PRRS - Xác định tỷ lệ chết lợn mắc PRRS 2.2.2 Nghiên cứu đặc điểm bệnh lí chủ yếu - Nghiên cứu Triệu chứng lâm sàng lợn mắc PRRS - Nghiên cứu Bệnh tích đại thể lợn mắc PRRS - Xác định số vi khuẩn kế phát lợn mắc PRRS - Nghiên cứu bệnh tích vi thể số quan lợn mắc PRRS 2.2.3 Nghiên cứu số tiêu huyết học lợn mắc PRRS + Thay đổi hồng cầu + Thay đổi bạch cầu + Thay đổi GOT, GPT máu lợn ốm + Thay đổi protein huyết tương 2.2.4 Áp dụng phương pháp hóa mơ miễn dịch (IHC) để chẩn đoán PRRSV 2.3 NGUYÊN LIỆU 2.3.1 Dụng cụ Sử dụng dụng cụ cần thiết phục vụ cho thí nghiệm 2.3.2 Hóa chất thí nghiệm Sử dụng hóa chất cần thiết Bộ mơn Bệnh lí thú ý để thực thí nghiệm đề tài 2.4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.4.1 Phương pháp quan sát 2.4.2 Phương pháp mổ khám toàn diện 2.4.3 Phương pháp điều tra hồi cứu 2.4.4 Phương pháp lấy mẫu 2.4.5 Phương pháp phân lập virus môi trường tế bào Marc-145 2.4.6 Phương pháp RT-PCR Để xác định chắn lợn ốm có mắc PRRS hay khơng Chúng tiến hành phản ứng RT- PCR, dùng kit QIAamp để tách chiết ARN, với cặp mồi ORF7; P08L220619, P08L220620, (Mồi xuôi: GATTGCGGCAAATGATAACC; Mồi ngược: TGCCATTCACCACACATTCT) cặp mồi cho phép xác định đoạn gen có kích thước 372bp mã hóa protein N virus 2.4.7 Phương pháp làm tiêu vi thể Thực theo quy trình làm tiêu vi thể Bộ mơn Bệnh lí thú y 2.4.8 Phương pháp nhuộm hóa mơ miễn dịch Theo quy trình nhuộm hóa mơ miễn dịch Bộ mơn Bệnh lí khoa thú y trường Đại học Nơng nghiệp Hà Nội 2.4.9 Phương pháp xét nghiệm tiêu huyết học + Các tiêu hồng cầu, bạch cầu lợn mắc PRRS đo máy phân tích tiêu huyết học Celldyn 3700 Khoa Thú y Trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội + Các tiêu GOT, GPT, Protein huyết phân tích Khoa Hóa sinh bệnh viện Trung ương Quân Đội 108 2.4.10 Phương pháp xét nghiệm số vi khuẩn kế phát ổ dịch PRRS Các vi khuẩn Actinobacillus pleuropneumoniae (App), Pasteurella multocida (P multocida), Streptococcus suis (St suis), Escherichia coli (E coli), Salmonella sp, Clostridium perfringens (Cl perfringens) Được xét nghiệm theo qui trình phân lập vi khuẩn thường qui Bộ môn vi trùng, Viện Thú Y Quốc gia 2.4.11 Phương pháp thống kê sinh học dùng để xử lý số liệu cần thiết Sử dụng phương pháp thông kê sinh học, kiểm định giả thiết test "t" để xử lý số liệu cần thiết đề tài Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 3.1 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU DIỄN BIẾN DỊCH PRRS TẠI MỘT SỐ ĐỊA PHƯƠNG 3.1.1 Diễn biến tình hình dịch PRRS số tỉnh thuộc vùng tả ngạn sông Hồng từ năm 2007-2010 Bảng 3.1 Diễn biến tình hình dịch PRRS tỉnh vùng tả ngạn sông Hồng từ năm 2007-2010 (Số liệu tổng hợp theo báo cáo quan Thú Y vùng II) Số Số xã Số thơn Số hộ có Số lợn Số lợn chết Năm huyện có có dịch có dịch dịch ốm(con) tiêu hủy (con) dịch 2007 36 231 602 4.286 53.030 18.900 2008 10 55 105 3.325 13.063 12.314 2009 12 42 816 303 2010 55 385 1.155 8.967 124.318 53.525 Tổng 107 683 1.867 16.620 191.227 85.042 Qua bảng số liệu thấy: Sau bốn năm dịch PRRS lưu hành tàn phá, riêng tỉnh thuộc tả ngạn sông Hồng có 191.227 lợn ốm, số lượng lợn chết buộc phải tiêu hủy 85.042 Chúng nhận thấy lợn lứa tuổi khác có tỷ lệ mắc bệnh khác Tỷ lệ mắc PRRS theo tuổi biểu diễn qua hình 3.3 50 40 Lợn thịt 30 Lợn 20 Đực giống 10 Lợn nái Hình 3.3 Biểu đồ tổng hợp tỷ lệ lợn mắc PRRS theo cấu đàn địa bàn nghiên cứu Qua biểu đồ ta thấy, lợn thịt có tỉ lệ mắc PRRS cao nhất, sau đến lợn con, thực tế số lượng lợn nuôi thịt dân lớn, thường chăn nuôi phân tán theo qui mô nhỏ lẻ Trong q trình nghiên cứu chúng tơi thấy vùng dịch PRRS, lợn lứa tuổi khác có tỷ lệ chết khác Kết biểu diễn qua hình 3.6 60 Lợn t hịt 40 Lợn Đực giống Lợn nái 20 Loại lợn Hình 3.6 Biểu đồ biểu diễn tỷ lệ lợn chết mắc PRRS theo cấu đàn địa bàn nghiên cứu Qua biểu đồ thấy số 45.959 lợn chết mắc PRRS, có tới 25.747 lợn chiếm tỷ lệ cao 56,02%, lợn thịt có 18.043 chết tương ứng với tỷ lệ 39.26% Còn lợn nái chết 4.69% 3.1.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng qui mô chăn nuôi đến dịch bệnh PRRS 60 40 Trại lớn Trại vừa 20 Trại nhỏ Hình 3.7 Biểu đồ biểu diễn kết nghiên cứu ảnh hưởng qui mô chăn nuôi đến dịch bệnh PRRS Chúng nhận xét: Những trang trại có qui mơ chăn ni lớn tỷ lệ nhiễm PRRS thấp hơn, ngược lại với qui mơ trang trại nhỏ tỷ lệ mắc bệnh cao nhiều Cụ thể gia trại hộ chăn ni nhỏ lẻ có tỷ lệ nhiễm 57,65%, tỷ lệ 35,45% trang trại vừa nhỏ, 14,47% trang trại lớn Trại lớn thường đầu tư tốt hơn, ý thức trình độ chăn ni tốt hơn, nên tỷ lệ mắc PRRS chắn thấp 3.2 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM BỆNH LÝ CHỦ YẾU CỦA LỢN MẮC PRRS 3.2.1 Kết xác định triệu chứng lâm sàng đặc trưng lợn mắc PRRS Bảng 3.7 Triệu chứng lâm sàng lợn mắc PRRS (n=100 cho loại lợn theo dõi, Nái chửa nái nuôi n= 50) T Loại lợn Lợn theo Lợn cai Lợn choai Nái chửa Nái nuôi T Triệu chứng mẹ (%) sữa (%) (%) (%) (%) Sốt 40-41ºC 91 94 95 94 92 Bỏ ăn 97 98 100 98 96 Thân ửng đỏ 96 98 98 86 82 Tai xanh 4 Tiêu chảy 93 94 81 70 64 Khó thở 85 91 95 86 92 Chảy nước mũi 55 59 67 54 50 Chảy máu mũi 33 29 18 34 44 10 Rỉ mắt, sưng mắt 44 37 15 46 48 - - - - 18 11 Viêm vú 12 Viêm phận sinh dục 38 46 Qua theo dõi đàn lợn bệnh vùng dịch PRRS, thấy triệu chứng điển sau: Những ngày đầu lợn sốt, ăn, lợn bỏ ăn thân chuyển sang đỏ dần, vài ngày sau bắt đầu tím tái vùng da mỏng, tím tai, sau lợn bệnh bị tiêu chảy nặng, phân sống, phân có màu nâu vàng Một số lợn bệnh có triệu chứng nơn máu, mắt sưng, có dử mắt, mũi chẩy dịch nhầy đặc Trước chết lợn thường sốt cao, người run bần bật, sùi bọt mép Qua bảng 3.7 thấy tỷ lệ lợn bị tiêu chảy (64 – 94%), khó thở (85 – 95%) triệu chứng chảy nước mũi (50-67%) Có thể thấy tỷ lệ tiêu chảy lợn theo mẹ lợn cai sữa cao đối tượng khác, lý làm cho lợn theo mẹ lợn cai sữa có tỷ lệ chết cao vùng dịch PRRS 3.2.2 Nghiên cứu biến đổi thân nhiệt lợn mắc PRRS Bằng cách dùng nhiệt kế thủy ngân đo nhiệt độ qua trực tràng Chúng thấy thân nhiệt lợn mắc PRRS tăng đạt cao vào ngày thứ bẩy (41,8 0C) trung bình 41,6 0C Trong thân nhiệt lợn khỏe khơng có biến đổi, dao động ngưỡng sinh lý 3.2.3 Ảnh hưởng PRRSV lợn nái sinh sản 11 Qua bảng kết phân lập vi khuẩn chúng tơi thấy App dương tính với tỷ lệ cao 63.3%, nói App ngun nhân số vi khuẩn kế phát gây chết lợn Sau E.coli dương tính với tỷ lệ 53.3% Bên cạnh E.coli App P multocida, St suis, Salmonella sp, Cl perfringens góp phần làm cho dịch bệnh trầm trọng phức tạp hơn, nhiên tỷ lệ bội nhiễm vi khuẩn không cao chiếm 13,3%-36,7% Khi có vi khuẩn bội nhiễm mà đặc biệt vi khuẩn đường hô hấp, làm cho bệnh tích đại thể phổi đa dạng Chúng tơi có so sánh bệnh tích lợn mắc PRRS với số trường hợp bệnh phổi khác, kết trình bày bảng 3.22 Bảng 3.22 So sánh bệnh tích phổi lợn mắc PRRS với số bệnh phổi thường gặp Đặc điểm Đặc điểm Đặc điểm bệnh lí xen kẽ vi Loại bệnh bệnh lí bệnh lí riêng khuẩn kế phát chung biệt PRRS -Viêm phổi Viêm kẽ phổi, - Viêm phổi dính sườn, viêm -Phổi xuất viêm phổi xoang bao tim, huyết hoại tử, phổi - Hạch phổi sưng to, xuất huyết nhục hóa - Mặt cắt có dịch nhầy, bọt mủ Viêm phổi -Viêm phổi Viêm phổi Phế quản chứa dịch nhầy lẫn màng phổi -Phổi xuất dính sườn máu, hạch phổi sưng phù, tụ App huyết huyết xơ hóa, viêm xoang bao tim chứa dịch đục lẫn máu Suyễn lợn -Viêm phổi Phổi viêm Phổi sưng to căng bóng rìa tù, Mycoplasma -Phổi xuất Bệnh tích đối mặt cắt có bọt màu trắng xám huyết xứng hai bên hồng phổi Rìa phổi có tổn thương màu đỏ xám giống tuyến tụy, gọi tụy tạng hóa Tụ huyết -Viêm phổi Viêm phổi Khí quản, phế quản tụ huyết, có trùng lợn -Phổi xuất thùy, bọt lẫn máu P multocida huyết Phổi tụ huyết Phổi, hạch phổi hạch sưng to màu đỏ sẫm Chúng tơi thấy: Ở PRRS với bệnh tích đặc trưng viêm kẽ phổi, nhục hóa hoại tử phổi, bệnh tụ huyết trùng lợn bệnh lí đặc trưng viêm phổi thùy, phổi tụ huyết, App lại gây viêm phổi dính sườn, cịn Mycoplasma lại gây viêm phổi dạng đối xứng hai bên Điều có ý nghĩa chẩn đốn phân biệt 12 3.2.7 Kết nghiên cứu bệnh tích vi thể lợn mắc PRRS 3.2.7.1 Kết nghiên cứu bệnh tích vi thể phổi, hạch phổi hạch Amidan lợn mắc PRRS Bảng 3.23 Kết nghiên cứu bệnh tích vi thể phổi, hạch phổi hạch Amidan lợn mắc PRRS (n=90) Phổi Hạch Phổi Hạch amidan (n = 90) (n = 30) (n = 30) Bệnh tích n + Tỷ lệ % n+ Tỷ lệ% n+ Tỷ lệ% Viêm 90 100,0 30 100,0 87 96,7 Sung huyết 90 100,0 30 100,0 14 46,7 Xuất huyết 90 100,0 30 100,0 12 40,0 Thâm nhiễm tế bào 87 96,7 11 36,7 6,7 viêm Thối hóa tế bào 36 40,0 30,0 16,7 Huyết khối 81 90,0 10,0 0 lòng mạch Tăng sinh tế bào 48 53,3 29 96,7 0 Tăng sinh nang 75 83,3 30 100,0 16, lympho (n + : mẫu có kết dương tính) Hiện tượng viêm phổi, hạch phổi hạch amidan chiếm tỷ lệ cao từ 96,7 – 100%, điều thể rõ qua tiêu vi thể đặc biệt phổi, dịch rỉ viêm lấp đầy phế quản phế nang, chắn nguyên nhân gây khó thở suy hơ hấp hầu hết lợn bệnh ổ dịch PRRS + Biến đổi bệnh lí phổi: Đối với dịch lợn mắc PRRS, phổi quan có biến đổi mặt vi thể rõ rệt phổ biến - Hiện tượng sung huyết, xuất huyết Đây bệnh tích vi thể điển hình, có 100% tiêu nghiên cứu Các mao mạch phế nang giãn rộng, nhiều chỗ thành mạch bị đẩy lồi vào lòng phế nang Đôi chỗ vách mạch quản bị tổn thương, đứt nát Trong phế nang chứa đầy dịch rỉ viêm đại thực bào, có hay nhiều hồng cầu tùy theo mức độ xuất huyết phổi nặng hay nhẹ Lòng phế quản chứa nhiều đại thực bào, vùng phổi gần phế quản tượng sung huyết xuất huyết nặng hơn, mặt khác quan sát toàn tiêu phổi thể là: Phổi bị tổn thương không đều, vùng sung huyết, xuất huyết vùng phổi lành bệnh thường xen kẽ Điều thấy rõ quan sát bệnh tích đại thể 13 đám mảng loang lổ, đỏ, đỏ thẫm, tím đen đan xen với vùng phổi lành bệnh Trong số tiêu bản, chúng tơi tìm thấy hạt hemosiderin có màu vàng nâu nằm nguyên sinh chất tế bào Hemosiderin hình thành phổi xuất huyết nặng, mảnh hồng cầu huyết sắc tố bị đại thực bào phế nang ăn (Cao Xuân Ngọc, 1997) - Thâm nhiễm tế bào viêm bệnh tích vi thể chiếm tỷ lệ cao tiêu phổi lợn mắc PRRS chiếm 96,7% Các tế bào thâm nhiễm đa dạng, chủ yếu bạch cầu đơn nhân bạch cầu đa nhân trung tính, qua cho thấy có dấu hiệu nhiễm trùng kế phát Chúng tơi quan sát thấy bạch cầu tập trung nhiều nơi, phế nang kể lòng tiểu phế quản, điều cho thấy thể lợn bệnh có phản ứng mạnh với mầm bệnh bạch cầu huy động phổi để bảo vệ thể - Huyết khối lòng mạch xuất với tỷ lệ cao, tượng có 81/90 tiêu phổi lợn mắc PRRS, chiếm tỷ lệ 90% Trên tiêu thường thấy hồng cầu tập trung thành đám lòng mạch quản, lòng mạch quản phình to Huyết khối coi rối loạn tuần hoàn phổi lợn bệnh, tượng phổ biến có ổ viêm nói chung viêm phổi lợn mắc PRRS nói riêng - Tăng sinh nang lympho Với 83,3% tiêu vi thể phổi lợn mắc PRRS có bệnh lí tăng sinh nang lympho, điều cho thấy thể lợn bệnh tập trung cao độ “vũ khí” cần thiết để bảo vệ nâng cao sức đề kháng thể - Hiện tượng tăng sinh tế bào thối hóa tế bào chúng tơi tìm thấy tiêu phổi với tỷ lệ không cao 53,3% (tăng sinh) 40% (thối hóa) Tế bào tăng sinh chủ yếu tế bào xơ với hình dạng dài, nhân bé, tế bào xơ già có nhân to xốp Bệnh tích thối hóa tế bào phổi lợn bệnh biểu không rõ ràng, thực chất tượng biến chất mơ bào tăng sinh tổ chức q trình viêm phổi Những bệnh tích vi thể phổi lợn mắc PRRS mà chúng tơi thường gặp, có nhiều nét tương đồng so với kết Nguyễn Hữu Nam (2007) nghiên cứu PRRS + Bệnh tích hạch phổi Trong tiêu hạch phổi nghiên cứu thấy bệnh tích vi thể chúng nặng điển hình, với 100% tiêu hạch phổi có tượng sung huyết xuất huyết, bên cạnh có tới 100% tiêu hạch phổi có bệnh 14 lí tăng sinh nang lympho Như vậy, thấy hạch phổi có phản ứng rõ rệt để nâng cao sức đề kháng thể 3.2.7.2 Kết nghiên cứu bệnh tích vi thể gan, lách thận lợn mắc PRRS Bảng 3.24 Kết nghiên cứu bệnh tích vi thể gan, lách thận lợn mắc PRRS Gan (n = 30) Bệnh tích Lách (n = 30) Thận (n = 30) Tỷ lệ n+ Tỷ lệ % n+ Tỷ lệ % n+ Sung huyết 6,7 27 90,0 27 90,0 Xuất huyết 24 80,0 20 66,7 Thâm nhiễm tế bào viêm 17 56,7 10,0 Thối hóa tế bào 12 28 93,3 Huyết khối lòng mạch 26 86,7 Tăng sinh tế bào 29 96,7 Tăng sinh nang Lympho 12 40,0 40,0 30,0 % (n + : mẫu có kết dương tính) Qua bảng 3.24, chúng tơi có nhận xét: Lách quan bị tổn thương nặng sau phổi Trên tiêu giải phẫu bệnh lách, thể hầu hết bệnh lí tế bào, đặc biệt tăng sinh thối hóa tế bào mức độ cao Trong 30 mẫu nghiên cứu có tới 28 mẫu có bệnh lí thối hóa tế bào (93,3%), 29 mẫu có bệnh lí tăng sinh tế bào (96, 7%) Đây hệ rối loạn, suy hô hấp làm cho công phổi giảm, thể lợn bệnh cần trao đổi lượng lớn O2 CO2 buộc lách phải hoạt động bù để cung cấp kịp thời hồng cầu cho thể Với tiêu giải phẫu bệnh thận thấy xung huyết xuất huyết, kết phù hợp với bệnh tích mổ khám thận thường xuất huyết nặng 15 3.3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CÁC CHỈ TIÊU HUYẾT HỌC CỦA LỢN MẮC PRRS 3.3.1 Kết khảo sát số tiêu hệ hồng cầu lợn bệnh Bảng 3.26 Kết khảo sát số tiêu hệ hồng cầu lợn bệnh Stt Chỉ tiêu Lợn bệnh (n =20) X  mx Đối chứng (n =20) X  mx P Số lượng hồng cầu (triệu/mm3) 6, 53  0,07 5,80 - 7,70 6, 22  0,06 5,65 - 7,25 < 0,05 Hàm lượng Hb (mg%) 13,85  0,51 11,70 - 15,20 12,10  0,31 10,95 - 14,50 < 0,05 Tỷ khối huyết cầu (%) 45,45  0,41 42,50 - 47,50 42,45  0,60 38,40 - 45,70 < 0,05 Thể tích bình qn hồng cầu (µm3) 69,68 68,25 < 0,05 Nồng độ huyết sắc tố bình quân (%) 28,51 30,53 < 0,05 Lượng huyết sắc tố bình quân hồng cầu (pg) 19,46 21,18 < 0,05 Qua bảng 3.26: cho thấy số lượng hồng cầu lợn đối chứng trung bình 6,22 ± 0,06 triệu/mm3 dao động 5,65 - 7,25 Theo Hồ Văn Nam cs, (1997), số lượng hồng cầu lợn trung bình 6,5 triệu/mm3, dao động từ 6,00 - 7,50 Theo Nguyễn Xuân Tịnh cs, (1996) số lượng hồng cầu dao động từ 6,00 - 8,00 triệu/mm3 Perk cs, (1964) số lượng hồng cầu lợn trung bình 6,50 triệu/mm3 dao động từ 5,00 - 8,00 triệu/mm3 Schmidt, D.A, (1986), số lượng hồng cầu giao động từ 5,7 - 8,3 triệu/mm3, trung bình triệu/mm3 Theo Coles, (1967) số lượng hồng cầu lợn khoẻ 6,5 triệu/mm3, giao động khoảng từ đến triệu/mm3 Khi lợn mắc bệnh số lượng hồng cầu tăng lên 6,53 ± 0,07 triệu/mm3 dao động 5,80 - 7,70 Khi lợn bị mắc PRRS gây thiếu oxy mô bào, nên khoảng thời 16 gian ngắn sau bị bệnh thể có phản ứng thích nghi, tăng cường tạo máu kéo dài tuổi thọ hồng cầu làm cho số lượng hồng cầu tăng lên nhằm khắc phục tình trạng thiếu oxy mô bào - Hàm lượng huyết sắc tố tỷ lệ thuận với số lượng hồng cầu, hồng cầu tăng lên hàm lượng huyết sắc tố tăng lên, lợn ốm hàm lượng huyết sắc tố trung bình 13,85 ± 0,51 mg% dao động 11,70 - 15,02% Ở lợn đối chứng hàm lượng huyết sắc tố trung bình 12,10 ± 0,31 mg% dao động 10,95 - 14,50% - Tỷ khối huyết cầu (Hematocrit) tỷ lệ phần trăm khối lượng hồng cầu thể tích máu định, đơn vị tính % Tỷ khối huyết cầu tăng hay giảm phụ thuộc vào nhiều nguyên nhân khác nhau, việc xác định tỷ khối huyết cầu có ý nghĩa lớn chẩn đoán Tỷ khối huyết cầu lợn mắc PRRS mà chúng tơi khảo sát trung bình 45,45 ± 0,41% dao động 42,50 - 47,50% tăng cao với đối chứng Theo số lượng hồng cầu tăng kéo theo tăng tương ứng tỷ khối huyết cầu.Theo Bush cs, (1995) tỷ khối hồng cầu lợn dao động 32 - 42%, Theo Coles, tỷ khối huyết cầu lợn dao động khoảng từ 32 đến 50% Như kết nghiên cứu nằm khoảng dao động chung - Thể tích bình qn hồng cầu (Vbq) thể tích bình qn hồng cầu , đơn vị tính µm3 tính theo cơng thức: Vbq (µm3) = Tỷ khối hồng cầu x 10 Số triệu hồng cầu/mm3 Qua khảo sát thấy lợn ốm thể tích bình qn HC 69,68 µm3, lợn đối chứng 68,25µm3 Như lợn mắc bệnh, thể tích trung bình hồng cầu lớn so với lợn đối chứng Kết khảo sát nồng độ huyết sắc tố bình quân lợn ốm 28,51% lợn đối chứng 30,53 % Điều chứng tỏ kéo dài tuổi thọ hồng cầu chất lượng hồng cầu so với bình thường - Lượng huyết sắc tố bình qn hồng cầu (pg) lượng hemoglobin chứa hồng cầu Hàm lượng huyết sắc tố bình quân lợn ốm 21,18pg, cịn lợn đối chứng trung bình 19,46pg Trong lượng huyết sắc tố bình quân hồng cầu lợn bệnh thay đổi không đáng kể so với lợn khoẻ (p > 0,05) nồng độ huyết sắc tố bình quân lợn bệnh lại thấp lợn đối chứng khẳng định chất lượng hồng cầu bị suy giảm nghiêm trọng lợn bệnh gây nên hậu tất yêu thiếu oxy nghiêm trọng mô bào Sau kiểm tra tiêu hệ hồng cầu tiêu Hemoglobin lợn bệnh chúng tơi có nhận xét sau 17 Khi lợn mắc PRRS, số lượng hồng cầu tăng lên thích nghi, chất lượng hồng cầu giảm nên tình trạng thiếu oxy mơ bào nghiêm trọng Bảng 3.27 Kết khảo sát tiêu bạch cầu lợn bệnh Chỉ tiêu Lợn bệnh (n = 30) X ± mx Đối chứng (n = 30) X ± mx P Số lượng bạch cầu (nghìn/mm3) 15,75  0,48 (12,55 - 18,75) 12,25  0,48 (10,50 - 14,25) < 0,05 63,75  0,56 (58,55 - 66,75) 37,55  1,06 (34,70 - 44,50) < 0,05 Bạch cầu đa nhân trung tính (%) Bạch cầu toan 5,80  0,32 5,05  0,33 < 0,05 (%) (4,20 - 7,55) (4,75 - 6,20) Bạch cầu kiềm 0,65  0,17 0,65  0,18 < 0,05 (%) (0,46 - 0,75) (0,48 - 0,73) Bạch cầu đơn 1,40  0,18 5,20  0,38 < 0,05 nhân lớn (%) (1,20 - 2,50) (3,60 - 6,50) Tế bào lympho 28,30  0,57 49,50  1,55 < 0,05 (%) (26,50 - 32,40) (45,70 - 54,60) Qua bảng 3.27 thấy: số lượng bạch cầu lợn bệnh trung bình 15,75  0,48 nghìn/mm3 dao động từ 12,55 - 18,75 nghìn/mm3 tăng rõ rệt so với lợn khoẻ 12,25  0,48 nghìn/mm3, dao động 10,50 - 14,25 nghìn/mm3 Nguyên nhân làm bạch cầu máu lợn bệnh tăng tác nhân gây bệnh (vi khuẩn ) xâm nhập vào thể, quan đáp ứng miễn dịch có phản ứng chống lại vi khuẩn Kết nghiên cứu thực nghiệm lợn Cysewski cs, (1989), cho thấy, lợn mắc nhóm bệnh phổi số lượng bạch cầu tăng lên rõ rệt Về tỷ lệ loại bạch cầu thấy: lợn bệnh tỷ lệ bạch cầu đa nhân trung tính bạch cầu toan tăng lên rõ rệt so với lợn đối chứng - Bạch cầu đa nhân trung tính lợn bệnh 63,75  0,56 (%); đó, tỷ lệ bạch cầu đa nhân trung tính lợn đối chứng là: 37,55  1,06 (%).Tỷ lệ bạch cầu toan lợn bệnh 5,80  0,32 (%), tỷ lệ lợn khoẻ là: 5,05  0,33% Cùng với tăng bạch cầu trung tính bạch cầu toan tỷ lệ tế bào lympho giảm tương ứng Đặc biệt tỷ lệ bạch cầu đơn nhân lớn giảm rõ rệt 1,4 % lợn bệnh so với 5,2% lợn đối chứng Điều phù hợp với chế sinh bệnh PRRS, virus gây PRRS có đích cơng đại thực bào phế nang, loại tế bào nhóm đơn nhân thực bào với tế bào đơn nhân lớn Sự thay đổi công thức bạch cầu, theo xảy tác Cơng thức bạch cầu 18 động nhiễm khuẩn kê phát PRRS kích thích tăng thực bạch cầu toan bạch cầu trung tính phạm vi để chống lại xâm nhập vi khuẩn vào thể bị suy giảm sức đề kháng Tỷ lệ bạch cầu trung tính bạch cầu toan tăng lên phù hợp với phản ứng tự nhiên sinh vật, trình bệnh lí nhiễm khuẩn cấp tính, tỷ lệ bạch cầu trung tính thường tăng lên Smith, (1972); Vũ Triệu An, (1978); Jubb, K.V Kennedy, (1985); Cao Xuân Ngọc, (1997) Chúng tơi tiến hành lấy máu phân tích biến động số lượng bạch cầu lợn mắc PRRS ổ dịch (lợn thí nghiệm – lợn bệnh LB) so sánh với lợn khỏe bình thường (lợn đối chứng – lợn khỏe LK), kết trình bầy Hình 3.47 Số lượng 25 Đối chứng 20 Thí nghiệm 15 10 Thời gian 0 12 15 18 21 Hình 3.47 Biến động số lượng bạch cầu lợn mắc PRRS Qua kết đếm số lượng bạch cầu hai đối tượng lợn LK LB mà theo dõi cho thấy, lơ đối chứng khơng có biến động lớn mặt số lượng bạch cầu, dao động từ khoảng 9.88- 11.83 nghìn/mm3, có coi ngưỡng bạch cầu lợn trạng thái sinh lý bình thường Đối với lơ thí nghiệm, ngày tất lợn theo dõi có số lượng bạch cầu ngưỡng sinh lý bình thường, dao động từ 10.56- 11.44 nghìn/mm3 máu Sau ba ngày theo dõi số lượng bạch cầu giảm nhẹ mức 9.32-9.68 nghìn/mm3 máu Trong khoảng từ 6-9 ngày, bạch cầu lợn thí nghiệm giảm mạnh có cịn 6.56 nghìn/mm3 máu đạt 59,96% so với bình thường Tuy nhiên từ ngày 12- ngày 21 số lượng bạch cầu tăng nhanh trung bình từ 17.79-22.09 nghìn/mm3 máu 3.3.3.Kết nghiên cứu tiêu GOT & GPT lợn mắc PRRS Xét nghiệm số tiêu sinh hóa máu chúng tơi thu kết sau: Bảng 3.29 Kết nghiên cứu tiêu GOT & GPT Đối tượng P Lợn ốm Lợn bình thường nghiên cứu X ± mx X ± mx Chỉ tiêu GOT/AST (U/l) 383 ± 2,56 48 ± 0,87 < 0,01 GPT/ALT (U/l) 68,8 ± 1,34 42 ± 0,72 < 0,01 19 Khi gan bị tổn thương, tế bào nhu mô gan bị hủy hoại mạnh GOT GPT tăng cao Trong trường hợp tổn thương khí quan khác trường hợp viêm virus hay nhiễm độc, GOT GPT tăng đến 10 lần (Vũ Đình Vinh, 1995) Qua kết xét nghiệm khẳng định, thể lợn bệnh có hủy hoại tế bào lớn, hậu triệu chứng suy đa tạng đặc trưng nhiễm trùng huyết Đây nguyên nhân làm cho lợn chết hàng loạt 3.3.4 Kết nghiên cứu tiêu hàm lượng Protein huyết lợn bệnh Chúng tơi có kết luận lợn mắc PRRS protein tổng số máu giảm đáng kể 5,83 so với 7,87 g/l lợn khỏe (P