[...]... peroxidase Enzyme này chứa hai đến ba nhóm hoạt động amine trong phân tử và chứa 12-14.5% carbohydrate Xác định hoạt tính enzyme này bằng máy quang điện cơ chất thường sử dụng là chromogen-2,2’-azinobis [3-ethylbenzothiazoline-sulfonate] (ABTS) và peroxidase có hoạt tính riêng là 1000u/c ở 25oC Trong miễn dịch người ta thường sử dụng cơ chất là 3,3’;5,5’tetramethyl benzidine Thiết bị sử dụng Khay nhựa... nguyên trong đĩa càng thấp do “cạnh tranh” • Độ nhạy cao Nguyên lý phản ứng tương tự như hai loại trên song chỉ khác là huyết thanh của mẫu thử có KT kháng HIV ủ cùng với kháng thể kháng HIV có gắn Enzym Như vậy có sự tranh chấp giữa hai loại kháng thể trong phản ứng kết hợp với KN-KT đã gắn vào pha rắn, Đậm độ KT trong mẫu thử càng cao thì KT càng ít được cố định vào KN Cơ chất sẽ cho 1 phản ứng màu... nghịch với đâm đô KT của màu phải thử Ứng dụng của phương pháp elisa -Xác định nồng độ của KT trong huyết thanh - Kiểm tra sự có mặt của KN -Phát hiện các yếu tố có khả năng gây dị ứng trong thực phẩm -Xác định sự có mặt của dược phẩm -Xác định hoạt tính một số hợp chất sinh học -Xét nghiệm HIV Xét nghiệm HIV AIDS(Acquired Immuno-Deficiency Syndrome) là hội chứng suy giảm miễn dịch mắc phải gây ra... gắn enzyme “Rửa” Thêm cơ chất Ghi nhận sự thay đổi ( màu, huỳnh quang, OD…) 1 Elisa trực tiếp Phát hiện trực tiếp: KN virus, axit nucleic hoặcVirus Áp dụng: - Phát hiện nhiễm HIV ở trẻ sơ sinh được sinh ra từ mẹ nhiễm HIV - Phát hiện sớm giai đoạn mới nhiễm HIV (giai đoạn cửa sổ) hoặc khi kết quả phát hiện KT không rõ ràng - Theo dõi diễn tiến bệnh, đánh giá hiệu quả điều trị thuốc kháng virút và trong. .. mà kháng nguyên HIV được cố định Rửa giải các thành phần khác trong huyết thanh.Nếu huyết thanh có kháng thể HIV sẽ được giữ lại Một kháng thể thứ cấp đặc hiệu với kháng thể HIV được thêm vào đĩa Enzyme: Horseral peroxidase giải kháng thể thứ cấp có gắn enzyme sẽ được giữ lại bề mặt có kháng thể HIV Cơ chất: TMB Cho cơ chất đặc hiệu với enzyme của kháng thể thứ cấp thay đổi màu sắc: “đầu tiên màu vàng... biến cơ chất không màu thành một sản phẩm có màu Phản ứng màu được nhận định sơ bộ bằng mắt thường và đọc chính xác bằng quang kế 3 Sandwich Elisa THAO TÁC Cố định các kháng nguyên, kháng thể chưa biết Thêm mẫu cần xác định KN ( hoặc KT ) KT dùng để phát hiện gắn với enzyme được thêm vào Thêm cơ chất Ghi nhận kết quả 3 Sandwich Elisa: không sử dụng kháng thể thứ cấp ELISA sandwich: độ đặc hiệu và... 1000u/c ở 25oC Trong miễn dịch người ta thường sử dụng cơ chất là 3,3’;5,5’tetramethyl benzidine Thiết bị sử dụng Khay nhựa 96 giếng Thiết bị sử dụng Máy đọc elisa (máy quang phổ có các bước sóng khác nhau Thiết bị sử dụng Micropipette Micropipette tips Thiết bị sử dụng Máy rửa khay nhựa Micropipette multi tips Ưu điểm phương pháp elisa +Dễ thực hiện + Có thể tiến hành đồng thời nhiều mẫu + Có thể phát... globlin người gắn enzym Như vậy hình thành 1 Sandwich của phức hợp KN_KT_KN_Enzym Sự thay đổi này làm tăng độ nhạy và đô đặc hiệu của phản ứng, nó cũng cho cho phép phát hiện tất cả các lớp kháng thể vì không dùng Anti IgG người gắn Enzym 3 Sandwich Elisa: sử dụng kháng thể thứ cấp 4 Elisa cạnh tranh + Đưa hỗn hợp này vào các giếng của vi phiếm có chứa kháng nguyên + “Ủ” kháng thể không được đánh . thể , tạo thành trong phản ứng miễn dịch. Ta có thể sử dụng máy so màu quang điện, huỳnh quang để xác định phản ứng. Enzyme alkaline phosphate Enzyme này được sử dụng trong phản ứng miễn dịch elisa) + TMB: là cơ chất mà enzyme biến đổi tạo sản phẩm có màu xanh bước sóng 370-652nm chuyển màu vàng 450nm Enzyme sử dụng trong phương pháp elisa Enzyme ở đây được sử dụng để xác định hỗn hợp. trực tiếp với enzyme, tín hiệu quang học do enzyme làm biến đổi cơ chất sẽ giúp phát hiện KN cần kiểm tra. Trong trường hợp sử dụng KT thứ cấp (secondary antibody) được gắn với enzyme thông