Đang tải... (xem toàn văn)
nghiên cứu hóa học và nhận dạng một số nhóm chất có trong cây chó đẻ răng cưa
ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM ------------------------------ NGÔ ĐỨC TRỌNG NGHIÊN CỨU HOÁ HỌC VÀ NHẬN DẠNG MỘT SỐ NHÓM CHẤT CÓ TRONG CÂY CHÓ ĐẺ RĂNG CƯA (PHYLLANTHUS URINARIA L., EUPHORBIACEAE) L L U U Ậ Ậ N N V V Ă Ă N N T T H H Ạ Ạ C C S S Ĩ Ĩ H H O O Á Á H H Ọ Ọ C C THÁI NGUYÊN - 2008 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM --------------------------------- NGÔ ĐỨC TRỌNG NGHIÊN CỨU HOÁ HỌC VÀ NHẬN DẠNG MỘT SỐ NHÓM CHẤT CÓ TRONG CÂY CHÓ ĐẺ RĂNG CƯA (PHYLLANTHUS URINARIA L., EUPHORBIACEAE) Chuyên ngành : Hoá hữu cơ Mã số : 60.44.27 L L U U Ậ Ậ N N V V Ă Ă N N T T H H Ạ Ạ C C S S Ĩ Ĩ H H O O Á Á H H Ọ Ọ C C Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS PHẠM VĂN THỈNH THÁI NGUYÊN - 2008 LỜI CẢM ƠN Tôi xin chân thành bày tỏ lòng cảm ơn sâu sắc của mình tới PGS.TS Phạm Văn Thỉnh - Người thầy đã tận tình hướng dẫn, động viên và giúp đỡ tôi trong suốt quá trình học tập, nghiên cứu và thực hiện luận văn. Tôi xin chân trân trọng cảm ơn TS. Nguyễn Quyết Tiến, TS. Phạm Thị Hồng Minh, Th.S. Vũ Anh Tuấn, Th.S Hứa Văn Thao những người thầy đã động viên và giúp đỡ từng bước đi của tôi trong quá trình nghiên cứu thực hiện luận văn. Xin chân thành cảm ơn phòng hoạt chất sinh học của trường Đại học Y Thái Nguyên và cơ sở sản xuất kinh doanh thuốc thành phẩm của Bác sĩ Hoàng Sầm, phòng nghiên cứu cấu trúc - Viện Hóa học đã tận tình giúp đỡ và tạo mọi điều kiện thuận lợi để tôi hoàn thành các kế hoạch nghiên cứu. Nhân dịp này, tôi cũng xin chân trọng cảm ơn Ban Giám hiệu, Ban lãnh đạo Khoa Hóa, Khoa Sau đại học - Trường Đại học Sư phạm Thái Nguyên đã tạo mọi điều kiện thuận lợi cho tôi hoàn thành bản luận văn này. Thái Nguyên, tháng 9 năm 2008 Tác giả Ngô Đức Trọng LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi, các số liệu, kết quả nêu trong luận án này là trung thực và chưa từng được ai công bố trong bất kỳ công trình nào khác. Tác giả NGÔ ĐỨC TRỌNG DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DÙNG TRONG LUẬN VĂN SKLM : Sắc kí lớp mỏng UV : Ultraviolet spectrocopy MS : Mass Spectroscopy EI-MS : Electron Impact Mass Spectroscopy LC-MS : Liqud chromatography - Mass Spectroscopy FT-IR : Fourier Transform Infrared Spectroscopy NMR : Nuclear Magnetic Resonance 1 H-NMR : 1 H-Nuclear Magnetic Resonance 13 C-NMR : 13 C- Nuclear Magnetic Resonance DEPT : Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer COSY : Correlated Spectroscopy HSQC : Heteronuclear Spectroscopy- Quantum Coherence HMBC : Heteronuclear multiple - Bond Correlation HIV : Human Immunodeficiency Virus đvC : Đơn vị Cacbon D D A A N N H H M M Ụ Ụ C C C C Á Á C C B B Ả Ả N N G G Trang Bảng 2.1: Khối lƣợng chất tổng số đƣợc chiết từng phân đoạn của cây chó đẻ răng cƣa (Phyllanthus urinaria L)………………………… .……….26 Bảng 2.2: Phát hiện các nhóm chất trong cây chó đẻ răng cƣa…………………27 Bảng 2.3: Kết quả thử hoạt tính sinh học của dịch chiết thô từ cây chó đẻ răng cƣa (Phyllanthus urinaria L)………………… .……………… .… 29 Bảng 2.4: Số liệu phổ 13 C-NMR (CDCl 3 , 125Mhz) của chất PH-1 trong cây chó đẻ răng cƣa (Phyllanthus urinaria L)………………… .……… .….30 Bảng 2.5: Phổ 1 H-NMR và 13 C-NMR của chất PE-3………… ……………….32 Bảng 3.1: Số liệu phổ 13 C-NMR (CDCl 3 , 125Mhz) của PH-1 trong cây chó đẻ răng cƣa (Phyllanthus urinaria L) và phổ của -sitosterol [15]….… 40 Bảng 3.2: Số liệu phổ NMR của PE-1 và số liệu phổ NMR trong phần mềm ACD/NMR của 5-hidroxymetylfufural 44 Bảng 3.3: Số liệu phổ NMR của PE-2 và số liệu phổ NMR trong phần mềm ACD/NMR của axit gallic 48 Bảng 3.4: Số liệu phổ NMR của PE-3 và số liệu phổ trong phần mềm ACD/NMR của chất kampherol .52 D D A A N N H H M M Ụ Ụ C C C C Á Á C C H H Ì Ì N N H H Trang Hình 1.1: Cây chó đẻ răng cƣa (Phyllanthus urinaria L, Euphorbiaceae . 3 Hình 2.1: Đƣờng kính vùng ức chế xung quanh giếng thạch (mm) theo phƣơng phƣơng pháp khuyếch tán trên thạch 28 Hình 3.1: Phổ FT-IR của -sitosterol (PH-1) .36 Hình 3.2: Phổ 1 H-NMR của -sitosterol (PH-1) 37 Hình 3.3: Phổ 13 C-NMR và ATP của -sitosterol (PH-1) 38 Hình 3.4: Phổ 1 H-NMR-DMSO của PE-1 .42 Hình 3.5: Phổ 13 C-NMR-DMSO của PE-1 43 Hình 3.6: Phổ 1 H-NMR-DMSO của PE-2 .46 Hình 3.7: Phổ 13 C-NMR-DMSO của PE-2 47 Hình 3.8: Phổ 1 H-NMR-AcetoneD6 của PE-3 .50 Hình 3.9: Phổ 13 C-NMR-AcetoneD6 của PE-3 51 D D A A N N H H M M Ụ Ụ C C C C Á Á C C S S Ơ Ơ Đ Đ Ồ Ồ Sơ đồ 2.1: Quy trình ngâm chiết mẫu .26 MỤC LỤC Lời cảm ơn Lời cam đoan Danh mục các chữ viết tắt dùng trong luận văn Danh mục các bảng Danh mục các hình và sơ đồ MỞ ĐẦU 1 CHƢƠNG I. TỔNG QUAN 3 1.1. Mô tả thực vật 3 1.2. Tác dụng sinh học của chi Phyllanthus 4 1.2.1 Một số công dụng của chi Phyllanthus 4 1.2.2 Một số tác dụng dƣợc lý của chi Phyllanthus .5 1.3 Tình hình nghiên cứu hoá học thực vật của chi Phyllanthus 6 1.3.1 Một số đại diện của nhóm tecpenoit 6 1.3.2 Một số đại diện của khung axit 8 1.3.3 Một số đại diện của Lignan .9 1.3.4 Một số đại diện của khung flavonoit 11 1.3.5 Một số hợp chất phenolic khác 12 1.3.6 Một số hợp chất nhóm ankaloit .15 1.4 Tình hình nghiên cứu hóa học của loài Phyllanthus urinaria L 16 CHƢƠNG II. THỰC NGHIỆM 23 2.1. Đối tƣợng và phƣơng pháp nghiên cứu 23 2.1.1. Thu mẫu cây, xác định tên khoa học và phƣơng pháp xử lý mẫu 23 2.1.2. Phƣơng pháp phân lập các hợp chất từ các dịch chiết 23 2.1.3. Phƣơng pháp khảo sát và xác định cấu trúc hoá học các hợp chất 24 2.2. Dụng cụ, hoá chất và thiết bị nghiên cứu .24 2.2.1. Dụng cụ và hoá chất 24 2.2.2. Thiết bị nghiên cứu 25 2.3. Các dịch chiết từ cây chó đẻ răng cƣa (Phyllanthus urinaria L) 25 2.3.1. Các dịch chiết .25 2.3.2. Khảo sát định tính các dịch chiết 27 2.3.3. Thử hoạt tính sinh học .27 2.4. Phân lập, tinh chế các chất từ 29 2.4.1. Dịch chiết n-hexan 29 2.4.2. Dịch chiết trong etylaxetat (PE) .31 2.4.2.1 Chất PE-1 31 2.4.2.2 Chất PE-2 31 2.4.2.3 Chất PE-3 32 CHƢƠNG III. THẢO LUẬN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 34 3.1. Nguyên tắc chung 34 3.2. Xác định định tính các nhóm chất thiên nhiên 34 3.3. Phân lập và nhận dạng các hợp chất 35 3.3.1. -sitosterol (PH-1) .35 3.3.2. 5-Hydroxymetylfufural (PE-1) .41 3.3.3. Axit gallic (PE-2) 45 3.3.4. Kampherol (PE-3) .49 3.4. Thử hoạt tính sinh học 53 KẾT LUẬN 55 DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN .56 TÀI LIỆU THAM KHẢO 57 PHỤ LỤC .62 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 1 MỞ ĐẦU Từ xưa đến nay, những cây thuốc dân gian vẫn đóng vai trò hết sức quan trọng trong đời sống hàng ngày của con người. Từ trước khi có sự ra đời của thuốc tây, nhiều loài cây cỏ trong tự nhiên đã được sử dụng trong dân gian để chữa bệnh và rất có hiệu quả. Rất nhiều loại bệnh tật đã được chữa khỏi nhờ thảo dược. Ngày nay những hợp chất tự nhiên được phân lập từ cây cỏ đã được ứng dụng rộng rãi trong rất nhiều ngành công nghiệp, nông nghiệp, chúng được dùng để sản xuất thuốc chữa bệnh, thuốc bảo vệ thực vật, làm nguyên liệu cho ngành công nghiệp thực phẩm và mỹ phẩm v.v . Mặc dù công nghệ tổng hợp hoá dược ngày nay đã phát triển mạnh mẽ, tạo ra các biệt dược khác nhau sử dụng trong công tác phòng, chữa bệnh. Điều đó đã góp phần làm tăng tuổi thọ con người, song nhu cầu sử dụng cây cỏ để làm thuốc cũng ngày càng tăng lên, được khoa học hiện đại soi sáng, vì trong chúng có chứa những biệt dược rất khó tổng hợp. Mặt khác việc dùng thuốc nam hầu như không gây ra tác dụng phụ. Có nhiều bộ môn khoa học nghiên cứu về cây thuốc ra đời. Việc nghiên cứu cây thuốc đã giúp cho chúng ta hiểu rõ về thành phần và cấu trúc hóa học, hoạt tính sinh học, tác dụng dược lí của cây thuốc. Trên cơ sở các nghiên cứu đó có thể tạo ra chất mới có hoạt tính sinh học cao như mong muốn để làm thuốc chữa bệnh. Cây chó đẻ răng cưa là một cây thuốc đã được sử dụng từ lâu trên thế giới cũng như ở Việt Nam. Trong Y học dân tộc cây này được nhân dân dùng làm thuốc để chữa nhiều loại bệnh như: đau viêm họng, đinh râu, mụn nhọt, viêm da lở ngứa, sản hậu ứ huyết đau bụng, trẻ em tưa lưỡi, chàm má, bệnh viêm gan,… rất có hiệu quả. [...]...2 Thực vật chó đẻ răng cưa có nhiều ứng dụng quan trọng nhưng gần đây mới được các nhà khoa học các nước quan tâm chọn làm đối tượng nghiên cứu, còn ở nước ta hiện có rất ít công trình nghiên cứu về thành phần hóa học và dược lí học của cây chó đẻ răng cưa Với mục đích nghiên cứu và tìm hiểu thành phần hóa học các hợp chất có hoạt tính sinh học của cây chó đẻ răng cưa, góp phần làm tăng thêm sự... “Nghiên cứu hóa học và nhận dạng một số nhóm chất có trong cây chó đẻ răng cưa (Phyllanthus urinaria L., Euphorbiaceae)” Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 3 CHƢƠNG I TỔNG QUAN 1.1 Mô tả thực vật Cây chó đẻ răng cưa còn gọi là diệp hạ châu, diệp hoè thái, lão nha châu, trân châu thảo, cam kiềm, rút đất, khao ham (Tày), prakphle (Campuchia) Tên khoa học là: Phyllanthus... [43] Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 11 1.3.4 Một số đại diện của khung flavonoit Từ dịch chiết etanol loài Phyllanthus emblica L đã phân lập được quecxetin và catechin Đây là hai chất có hoạt tính chống oxi hóa tốt [49] OH HO HO O O OH OH OH OH * * OH OH OH O 11 Quecxetin 12 Catechin Cũng về vấn đề nghiên cứu khả năng chống oxi hóa, các nhà khoa học đã... tách từ loài Phyllanthus emblica Các hợp chất đã tách, được làm sạch và đem khảo sát khả năng chống oxi hóa Kết quả cho thấy trong số 6 chất trên thì geraniin là chất có khả năng chống oxi hóa tốt nhất (ở nồng độ IC50 = 4.7 và 65.7 μM, thử nghiệm sự oxi hóa lipit) Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 13 Từ loài Phyllanthus amarus đã tách được axit shikimic (3-... R1 + R2 = CH2 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 19 MeO O OMe OMe OMe OMe O O O OMe OMe OMe OMe OMe 33 34 MeO O OMe OMe OMe OMe O MeO OMe OMe O O OMe 35 36 O OMe OMe O MeO OMe OMe O O OMe OMe 37 O OMe 38 Cũng từ loài Phyllanthus urinaria L Zhang L Z và cộng sự đã tách được một chất mới là ellagitannin [54] Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên... trên thị trường Ngoài những nhóm hợp chất trên, từ loài Phyllanthus anisolobus đã tách được hai γ -lacton: menisdaurilide và aquilegiolide [43] Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 16 1.4 Tình hình nghiên cứu hóa học của loài Phyllanthus urinaria L Từ loài Phyllanthus urinaria L đã tách được một số triterpen như: stigmasterol, daucosterol, sigmasterol-3-O- ... chú: Dấu (+): Phản ứng dương tính, (++): Phản ứng dương tính rất rõ; (-): Không có 2.3.3 Thử hoạt tính sinh học Thử hoạt tính vi sinh vật kiểm định Thử định tính theo phương pháp khuyếch tán trên thạch, sử dụng khoang giấy lọc tẩm chất thử theo nồng độ tiêu chuẩn Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ... (thịt, cá, trứng, đậu phụ) Riêng cây chó đẻ răng cưa (Phyllanthus urinaria L) trong y học dân tộc được nhân dân dùng để chữa đau viêm họng, đinh râu, mụn nhọt, viêm da, lở ngứa, sản hậu ứ huyết đau bụng, trẻ em tưa lưỡi, chàm má, chữa bệnh gan, sốt, rắn rết cắn rất có hiệu quả Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 5 Một số bài thuốc dùng cây chó đẻ răng cưa (Phyllanthus... đã tách được một số axit hữu cơ như: Axit succinic, axit ferulic, axit dotriancontanic, axit hecxacosanoic [11], [53] Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 17 HO O HO OH H3CO 26 Axit ferulic Gần đây, cũng từ loài cây này, nhóm các nhà khoa học Trung Quốc đã phân lập được 5 hợp chất, đó là: ester mono-[2-(4-carboxy-phenoxycarbonyl)vinyl] terephthalat, axit (E)-3-(5’-hydroperoxy-2,2’-dihydroxy[1,1’-... lup-20(29)en-3β,15α-diol [41] Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 7 Theo [39], từ loài Phyllanthus oxyphyllus đã tách được: 29-nor-3,4seco-friedelan tritecpen (axit 29-nor-3,4-seco-friedelan-4(23),20(30)-dien-3oic) và một secquitecpen mới là guaiane secquitecpen (5-hydroxy-6,9epoxyguaiane) Những hợp chất này được đánh giá là có khả năng chống oxi hóa tốt ở nồng độ thử . ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM ------------------------------ NGÔ ĐỨC TRỌNG NGHIÊN CỨU HOÁ HỌC VÀ NHẬN DẠNG. 2008 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM --------------------------------- NGÔ ĐỨC TRỌNG NGHIÊN CỨU HOÁ HỌC VÀ NHẬN DẠNG
