Góp phần chỉnh lý kỹ thuật xét nghiệm Sức bền hồng cầu TÓM TẮT 65 người bình thường được tiến hành xét nghiệm sức bền hồng cầu ở một số điều kiện kỹ thuật khác nhau (5ml, 3ml dung dịch nhược trương và 1 hay 2 giọt hồng cầu). Xử lý số liệu bằng phương pháp so sánh trung bình. Kết quả cho thấy mức bắt đầu tan ở các điều kiện kỹ thuật (3ml dd nhược trương và 5ml dd nhược trương với 1 giọt HC hoặc 2 giọt HC) là không có sự khác biệt, nhưng ở mức tan hoàn toàn với 3ml dd nhược trương và cho 2 giọt HC là 2,85  0,129, với 3ml dd nhược trương, 1 giọt HC là 2,875  0,132, đều thấp hơn có ý nghĩa so với ở 5ml dd nhược trương, 1 giọt HC là 3,075  0,168 (p < 0,001).Như vậy kết quả xn sức bền hồng cầu khi sử dụng 3ml dd nhược trương có khác kết quả khi sử dụng 5 ml dd nhược trương. SUMMARY The study was carried out on 65 healthy people with osmotic fracgility test in four different conditions ( A: 1 red cell pack drop added to 5 ml hypotonic solution; B: 2 red cell pack drops added to 5 ml hypotonic solution; C: 1 red cell pack drop added to 3 ml hypotonic solution; D: 2 red cell pack drops added to 3 ml hypotonic solution).The results show that mean of the OD of beginning lysis tubes at each technique condition are no different but mean of the OD of complete lysis tubes are different: - D: mean of complete lysis tubes is 2,85 ± 0,129. - C: mean of complete lysis tubes is 2,875 ± 0,132. They are all less significant (p< 0,001) than mean of the OD of complete lysis tubes in A condition (3,075 ± 0,168) . From the results above that we suggest that: Osmotic fracgility test should be carried out by 1 red cell pack added to 5 ml hypotonic solution. ĐẶT VẤN ĐỀ Xét nghiệm sức bền hồng cầu dựa trên nguyên lý là: màng hồng cầu là màng màng bán thấm, do vậy khi cho hồng cầu vào dung dịch nhược trương, nước sẽ từ ngoài vào làm trương to hồng cầu. Dung dịch càng nhược trương nước sẽ vào càng nhiều và hồng cầu càng dễ vỡ. Lợi dụng tính chất đó người ta cho hồng cầu vào một loạt các dung dịch nhược trương có nồng độ khác nhau và quan sát mức độ tan của hồng cầu để đánh giá tính bền vững của màng hồng cầu. Hiện nay chưa thống nhất một số điểm kỹ thuật đó là cho 1 hay 2 giọt hồng cầu vào 3 hay 5 ml dung dịch nhược trương. Để tiến hành xét nghiệm cần chuẩn bị các dung dịch muối nhược trương pH=7,4 có nồng độ chênh lệch nhau 0,25 ‰,như vậy việc cho 1 hay 2 giọt hồng cầu vào 3 hay 5 ml có làm thay đổi tính nhược trương của dung dịch hay không, kết quả xét nghiệm khi không thống nhất các tiêu chí kỹ thuật trên có bị ảnh hưởng không? Để giải quyết câu hỏi này, chúng tôi tiến hành so sánh sức bền hồng cầu ở người bình thường và một số bệnh nhân thiếu máu trong các điều kiện kỹ thuật khác nhau nhằm 2 mục tiêu sau: 1. Đánh giá vai trò của một số yếu tố kỹ thuật liên quan đến kết quả xét nghiệm sức bền hồng cầu. 2. Tìm hiểu sức bền hồng cầu ở người Việt Nam bình thường. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU: 65 người bình thường (là người tình nguyện hiến máu tại Viện huyết học Truyền máu Trung ương) được tiến hành đo sức bền hồng cầu tại Khoa Di truyền Viện Huyết học Truyền máu Trung ương tại 4 điều kiện kỹ thuật khác nhau (3 hoặc 5 ml dung dịch muối nhược trương + 1 hoặc 2 giọt hồng cầu). PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU: Đo sức bền hồng cầu theo kỹ thuật của h và g.dicono( có chỉnh lý) DỤNG CỤ,HOÁ CHẤT: Dung dịch mẹ có áp lực thẩm thấu tương đương với dung dịch Natri Chlorua 10% (bảo quản được hàng tháng) bao gồm các muối sau đây: - Natri chlorua : 180 gr -Natri dihydrophophat (NaH 2 PO 4 2H 2 O): 4,86gr -Di natri hydro photphat (Na 2 HPO 4 ): 27,31 gr -Nước cất vừa đủ: 2000ml Khi pha nếu dung dịch không trong thì phải lọc. Từ dung dịch mẹ 10% pha thành dung dịch con 5% và pha tiếp thành các dung dịch1‰,2‰,2,5‰,2,75‰…6‰,7‰ (Từ nồng độ 2,75‰ đến 6‰ cứ mỗi nồng độ cách nhau 0,25‰). Nồng độ ‰ 1‰ 2‰ 2,5‰ 2,75‰ 3‰ 3,25‰ Số ml d 2 5% 2 4 5 5,5 6 6,5 Nồng độ ‰ 3,5‰ 3,75‰ 4‰ 4,25‰ 4,5‰ 4,75‰ Số ml d 2 5% 7 7,5 8 8,5 9 9,5 Nồng độ ‰ 5‰ 5,5‰ 6‰ 7‰ Số ml d 2 5% 10 11 12 14 -Lấy số ml dung dịch con 5% cho vào bình mức (theo số lượng trên) thêm nước cất vừa đủ 100 ml. CÁCH TIẾN HÀNH XÉT NGHIỆM:  Lấy 3 - 4 ml máu tĩnh mạch có chống đông bằng heparin hay natri oxalate hoặc natri citrate.  Chuẩn bị 64 ống nghiệm cho một mẫu nghiên cứu đều nhau, loại ống nghiệm ly tâm đường kính 1 cm x 6 cm,xếp thành 4 dãy. Đánh số từ 1 đến 16 cho mỗi dãy. Cho vào mỗi ống nghiệm 3 ml hoặc 5 ml các dung dịch đệm đã pha loãng ra phần nghìn như trên theo nồng độ giảm dần ( ống số 1 nồng độ 7 ‰ …ống số 16 nồng độ 1‰). - Cho vào mỗi ống nghiệm 1 giọt hồng cầu hoặc 2 giọt hồng cầu (sau khi ống máu đã gạn bỏ phần huyết tương). - Lắc nhẹ 2-3 lần cho đều hồng cầu trong các ống nghiệm. - Để ở nhiệt độ phòng xét nghiệm 22 0 C từ 1h2h thì đọc kết quả(có thể quay ly tâm rồi đọc kết quả và tính tỷ lệ phần trăm huyết tán. Kết quả đánh giá bao gồm mức bắt đầu tan (phần trên dung dịch có màu hồng, có lắng cặn) và mức tan hoàn toàn (toàn bộ dung dịch có màu đỏ trong suốt).  So sánh kết quả giữa các điều kiện kỹ thuật khác nhau bằng phương pháp so sánh trung bình. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN: 1. Kết quả sức bền hồng cầu ở người bình thường ở mức bắt đầu tan: Bảng 1: Kết quả sức bền hồng cầu ở người bình thường ở mức bắt đầu tan: HC ml 1 giọt 2giọt p 3 ml dd nhược trương 4,725  0,218 4,725  0,218 > 0,05 5 ml dd nhược trương 4,778  0,150 4,725  0,218 > 0,05 p > 0,05 > 0,05 Mức bắt đầu tan của hồng cầu ở các điều kiện được trình bày trong bảng 1. Theo đó mức bắt đầu tan của hồng cầu không có sự khác biệt giữa các điều kiện kỹ thuật (với p > 0,05).Giá trị của mức bắt đầu tan trong nghiên cứu của chúng tôi nằm trong giới hạn bình thường 4,5 - 5‰. So sánh với một số nghiên cứu trước đó như Nguyễn Thuý Nga (2005), kết quả mức bắt đầu tan của chúng tôi cao hơn (4,778  0,15 so với 4,13  0,34). Khi so sánh mức bắt đầu tan của hồng cầu giữa các điều kiện kỹ thuật, chúng tôi không thấy có sự khác biệt. Kết quả này tương tự với nghiên cứu của tác giả Nguyễn Thuý Nga (2005). 2. Kết quả sức bền hồng cầu ở người bình thường ở mức tan hoàn toàn: Bảng 2: Kết quả sức bền hồng cầu ở người bình thường ở mức tan hoàn toàn: HC ml 1 giọt 2 giọt p 3 ml dd nhược trương 2,875 0,132 2,85  0,129 > 0,05 5 ml dd nhược trương 3,075 0,168 3,025 0,132 > 0,05 p < 0,05 < 0,05 Mức tan hoàn toàn của hồng cầu ở người bỡnh thường trong nghiên cứu của chúng tôi được trình bày trong bảng 2. Theo đó, mức tan hoàn toàn của hồng cầu ở điều kiện 3ml dd nhược trương, một giọt hồng cầu và 3ml dd nhược trương, 2 giọt HC thấp hơn có ý nghĩa so với ở điều kiện 5 ml dd nhược trương, 1 giọt HC (p< 0,05). Tương tự như vậy mức tan hoàn toàn của hồng cầu ở các điều kiện nói trên cũng thấp hơn so với ở điều kiện 5 ml dd nhược trương, 2 giọt HC. Kết quả này của chúng tôi có khác biệt so với nghiên cứu trước đó của tác giả Nguyễn Thuý Nga (2005). Tuy nhiên mức tan hoàn toàn trong nghiên cứu của chúng tôi cũng như nghiên cứu trước đó của tác giả Nguyễn Thuý Nga (2005) có thấp hơn đôichút so với giới hạn 3- 3,5 ‰ đã được công bố trong các tàI liệu chuẩn trước đây. Để có một số liệu thống nhất ở người Việt Nam bình thường, cần có thêm những nghiên cứu với qui mô lớn hơn. KẾT LUẬN 1. Vai trò của các điều kiện kỹ thuật: + Mức bắt đầu tan của hồng cầu không có sự khác biệt giữa các điều kiện kỹ thuật (3 hoặc 5 ml dung dịch muối nhược trương + 1 hoặc 2 giọt hồng cầu). + Mức tan hoàn toàn có sự khác biệt giữa điều kiện 3ml dd nhược trương, 2 giọt HC và 5ml dd nhược trương, 1 giọt HC. 2. Sức bền hồng cầu ở người bình thường :  Hồng cầu bắt đầu tan ở nồng độ muối 4,507- 4,928‰  Tan hoàn toàn ở nồng độ muối 2,721- 3,243‰. KIẾN NGHỊ Từ những kết quả này, chúng tôi xin kiến nghị nên thực hiện kỹ thuật đo sức bền hồng cầu ở điều kiện 5 ml dung dịch muối nhược trương + 1 giọt hồng cầu. TÀI LIỆU THAM KHẢO 1. Bộ Y tế, “ Kỹ thuật xét nghiệm cơ bản huyết học”, Nhà xuất bản Y học, Hà nội, tr. 93-101, 175-176. 2. Nguyễn Công Khanh (1985), “Một số đặc điểm lâm sàng và huyết học bệnh  thalassemia ở người Việt nam, chủ yếu ở người Miền Bắc Việt nam”, Luận án Phó Tiến sỹ Y học, Trường Đại học Y Hà nội. 3. Nguyễn Thuý Nga (2005), “Sức bền hồng cầu ở người bình thường và một số bệnh nhân thiếu máu tại Viện Huyết học Truyền máu trung ương”, Khoá luận tốt nghiệp Cử nhân kỹ thuật y học, Trường Đại học Y Hà nội. 4. Phạm Quang Vinh (2003), “Bệnh huyết sắc tố”, Bài giảng Huyết học – Truyền máu, Nhà xuất bản Y học, tr. 171. . Góp phần chỉnh lý kỹ thuật xét nghiệm Sức bền hồng cầu TÓM TẮT 65 người bình thường được tiến hành xét nghiệm sức bền hồng cầu ở một số điều kiện kỹ thuật khác nhau (5ml,. ĐỀ Xét nghiệm sức bền hồng cầu dựa trên nguyên lý là: màng hồng cầu là màng màng bán thấm, do vậy khi cho hồng cầu vào dung dịch nhược trương, nước sẽ từ ngoài vào làm trương to hồng cầu. . kiến nghị nên thực hiện kỹ thuật đo sức bền hồng cầu ở điều kiện 5 ml dung dịch muối nhược trương + 1 giọt hồng cầu. TÀI LIỆU THAM KHẢO 1. Bộ Y tế, “ Kỹ thuật xét nghiệm cơ bản huyết học”,