BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI HOÀNG VIỆT DŨNG NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ TÁC DỤNG ỨC CHẾ ENZYM ACETYLCHOLINESTERASE CỦA HAI LOÀI Piper thomsonii (C. DC.) Hook. f. var. thomsonii VÀ Piper hymenophyllum Miq., HỌ HỒ TIÊU (Piperaceae) TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC Chuyên ngành : DƯỢC HỌC CỔ TRUYỀN Mã số : 62.72.04.06 Hà Nội, năm 2014 Công trình được hoàn thành tại: - Bộ môn Dược liệu - Trường Đại học Dược Hà Nội. - Trung tâm Đào tạo - Nghiên cứu Dược - Học viện Quân y. - Viện Hóa sinh biển, Viện Sinh thái và Tài nguyên sinh vật - Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam. - Khoa Dược, Đại học Catholic, Daegu, Hàn Quốc. Người hướng dẫn khoa học: 1. TS. Đỗ Quyên 2. PGS. TS. Nguyễn Minh Chính Phản biện 1: Phản biện 2: Phản biện 3: Luận án sẽ được bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án cấp trường họp tại Trường Đại học Dược Hà Nội vào hồi giờ , ngày ….tháng……năm 2014. Có thể tìm hiểu luận án tại: - Thư viện Quốc gia Việt Nam. - Thư viện Trường Đại học Dược Hà Nội. - Thư viện Học viện Quân y. 1 A. GIỚI THIỆU LUẬN ÁN 1. Đặt vấn đề Theo giả thuyết về vai trò của hệ cholinergic, enzym acetylcholinesterase (AChE) được xác định là một trong những đích phân tử đối với bệnh Alzheimer. Trên cơ sở đó, một vài phương pháp thử in vitro đã được xây dựng, trong đó, phương pháp đo quang sử dụng thuốc thử Ellman được sử dụng khá phổ biến trong hầu hết các nghiên cứu sàng lọc tác dụng ức chế AChE in vitro của dược liệu hoặc hợp chất tinh khiết hiện nay. Đây cũng là hướng nghiên cứu vẫn thu hút được sự quan tâm của nhiều nhà khoa học trên thế giới. Gần đây, kết quả nghiên cứu sàng lọc dược liệu cho thấy dịch chiết của một số loài thuộc chi Piper L. có tác dụng ức chế AChE in vitro. Bên cạnh đó, tiềm năng nghiên cứu về chi Piper L. là khá lớn bởi số lượng phong phú của các loài thuộc chi này. Xuất phát từ những lý do trên, chúng tôi tiến hành đề tài: ‘‘Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và tác dụng ức chế enzym acetylcholinesterase của hai loài Piper thomsonii (C. DC.) Hook. f. var. thomsonii và Piper hymenophyllum Miq., họ Hồ tiêu (Piperaceae)”. 2. Mục tiêu của luận án 1. Mô tả đặc điểm hình thái, xác định tên khoa học và mô tả đặc điểm vi học của 2 loài nghiên cứu. 2. Xác định được thành phần hóa học của 2 loài nghiên cứu. 3. Triển khai được phương pháp và áp dụng để đánh giá hoạt tính ức chế AChE in vitro của dịch chiết toàn phần, dịch chiết phân đoạn và hợp chất phân lập được từ 2 loài nghiên cứu. 3. Những đóng góp mới của luận án 3.1. Về thực vật 2 Đã xác định tên khoa học của 2 loài nghiên cứu đồng thời mô tả chi tiết đặc điểm hình thái và đặc điểm vi học của 2 loài này. 3.2. Về hóa học Đã chiết xuất, phân lập được từ 2 loài nghiên cứu 14 hợp chất và tất cả đều đã được xác định cấu trúc. Trong đó, có 3 hợp chất lần đầu tiên phân lập được từ tự nhiên, 4 hợp chất lần đầu tiên phân lập được từ chi Piper L. và 14 hợp chất được phân lập lần đầu tiên từ hai loài nghiên cứu. 3.3. Về tác dụng sinh học - Đã triển khai được phương pháp đánh giá tác dụng ức chế AChE in vitro phù hợp với điều kiện phòng thí nghiệm trong nước. - Dựa trên phương pháp này, hoạt tính ức chế AChE in vitro của các mẫu dịch chiết và hợp chất tinh khiết phân lập từ 2 loài nghiên cứu đã được đánh giá. Kết quả nghiên cứu góp phần thông tin về hoạt tính của 14 hợp chất phân lập được đồng thời gợi ý khung cấu trúc 1- allyl-3,4-dihydroxybenzen có hoạt tính ức chế AChE in vitro. 4. Ý nghĩa của luận án - Xác định tên khoa học của 2 loài nghiên cứu giúp cho kết quả nghiên cứu về hóa học và tác dụng sinh học được khẳng định rõ nguồn gốc. - Xác định đặc điểm vi học góp phần tiêu chuẩn hóa thực vật. - Kết quả nghiên cứu về thành phần hóa học góp phần bổ sung thông tin về 3 hợp chất lần đầu tiên phân lập được từ tự nhiên, 4 hợp chất lần đầu tiên phân lập được từ chi Piper L. và 14 hợp chất lần đầu tiên phân lập được từ 2 loài nghiên cứu. - Kết quả nghiên cứu về tác dụng ức chế AChE in vitro góp phần thông tin về hoạt tính này của 14 hợp chất phân lập được. Đồng thời, kết quả này cũng gợi ý khung cấu trúc 1-allyl-3,4- dihydroxybenzen sở hữu hoạt tính ức chế AChE in vitro. 3 5. Bố cục của luận án Luận án có 128 trang, gồm 4 chương, 46 bảng, 53 hình. Bố cục gồm các phần: Đặt vấn đề (2 trang); Tổng quan (41 trang); Nguyên vật liệu, trang thiết bị và phương pháp nghiên cứu (12 trang); Kết quả nghiên cứu (55 trang); Bàn luận (16 trang); Kết luận và kiến nghị (2 trang). Danh mục các công trình đã công bố liên quan đến luận án (1 trang). Luận án có 153 tài liệu tham khảo (14 trang) và phần phụ lục. B. NỘI DUNG CỦA LUẬN ÁN Chương 1. TỔNG QUAN Đã thu thập tài liệu trong nước và trên thế giới về hai nội dung: - Tổng quan về chi Piper L. gồm 3 nội dung chính: vị trí phân loại, phân bố và đặc điểm thực vật của chi Piper L.; thành phần hóa học của chi Piper L.; công dụng, tác dụng sinh học và độc tính của chi Piper L. - Tổng quan về nghiên cứu sàng lọc hoạt tính ức chế AChE in vitro. Chương 2. NGUYÊN VẬT LIỆU, TRANG THIẾT BỊ VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1. Nguyên vật liệu - Phần trên mặt đất của hai loài nghiên cứu được thu hái tại Vườn Quốc gia Cúc Phương, Ninh Bình vào tháng 04/2011. - Các dung môi và hóa chất sử dụng trong nghiên cứu đều đạt tiêu chuẩn tinh khiết phân tích, tiêu chuẩn dùng cho HPLC và tiêu chuẩn dùng cho NMR xuất xứ Trung Quốc, Hàn Quốc, Sigma, Merck. 2.2. Trang thiết bị Một số trang thiết bị chính được sử dụng trong luận án gồm: máy đo phổ cộng hưởng từ hạt nhân, máy đo phổ khối lượng, hệ 4 thống sắc ký lỏng hiệu năng cao điều chế, máy đo quang ELISA, hệ thống cất quay chân không, hệ thống làm lạnh tuần hoàn, máy hứng mẫu tự động, cân phân tích, kính hiển vi… 2.3. Phương pháp nghiên cứu * Nghiên cứu về thực vật - Quan sát và mô tả đặc điểm hình thái, đối chiếu với tài liệu tham khảo và tiêu bản mẫu để xác định tên khoa học của 2 loài nghiên cứu. - Xác định đặc điểm vi phẫu của thân, lá và đặc điểm bột phần trên mặt đất của 2 loài nghiên cứu bằng kính hiển vi. * Nghiên cứu về hóa học - Các phân đoạn dịch chiết bằng dung môi có độ phân cực khác nhau chiết xuất từ hai loài nghiên cứu được đánh giá hoạt tính ức chế AChE in vitro. 4 phân đoạn sở hữu hoạt tính mạnh nhất được nghiên cứu phân lập hợp chất bằng phương pháp sắc ký cột kết hợp với phương pháp sắc ký lớp mỏng điều chế, sắc ký lỏng hiệu năng trung bình và sắc ký lỏng hiệu năng cao điều chế. - Nhận dạng các chất phân lập được dựa trên các dữ liệu về: năng suất quay cực, phản ứng hóa học đặc trưng, phổ khối lượng, phổ cộng hưởng từ hạt nhân kết hợp đối chiếu tài liệu tham khảo. * Nghiên cứu về tác dụng ức chế AChE in vitro - Triển khai phương pháp đánh giá hoạt tính ức chế AChE in vitro dựa trên phương pháp đo quang sử dụng thuốc thử Ellman. - Đánh giá hoạt tính ức chế AChE in vitro của các mẫu dịch chiết và hợp chất tinh khiết phân lập được từ 2 loài nghiên cứu bằng phương pháp triển khai được. Chương 3. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1. Kết quả nghiên cứu về thực vật 5 3.1.1. Kết quả nghiên cứu về thực vật của loài Piper thomsonii (C. DC.) Hook. f. var. thomsonii * Đặc điểm hình thái Cây thảo, leo. Lá mọc cách. Phiến lá có 2 dạng hình trứng và hình elip; gốc lá tròn hoặc hơi nhọn; mép nguyên; chóp lá nhọn; không có lông. Gân 7. Cụm hoa dạng bông, mọc đối diện với lá, không có lông. Hoa đơn tính khác gốc. Mỗi hoa có 1 lá bắc, gần hình tròn. Bộ nhị 2-3; bao phấn 2 ô. Bộ nhụy có 1 lá noãn tạo thành bầu, 1 ô, 1 noãn; gần hình cầu, không có lông. Núm nhụy xẻ 3-5 thùy, không có vòi nhụy. * Đặc điểm vi phẫu - Vi phẫu thân: lần lượt từ ngoài vào trong gồm: lớp biểu bì; mô dày gồm các đám nằm rải rác trong mô mềm vỏ; vòng mô cứng; ở những chỗ lõm của vòng mô cứng có các bó libe – gỗ; mô mềm ruột; các bó libe – gỗ nằm ở phần ruột thân; khối mang màu nằm rải rác ở mô mềm; chính giữa phần ruột thân là mô khuyết. - Vi phẫu lá: + Phần gân lá: gân lá lồi hai mặt trên và dưới. Biểu bì trên và dưới là một lớp tế bào xếp đều đặn, thành dày, hình tròn. Đám mô dày xếp sát biểu bì trên và cung mô dày xếp sát biểu bì dưới. Mô mềm gồm những tế bào hình tròn, vách mỏng. Một bó libe – gỗ to, hình tròn, nằm ở chính giữa gân lá với gỗ ở phía trên gồm các tế bào có thành dày, hóa gỗ và libe ở phía dưới. Bao quanh bó libe – gỗ là đám sợi mô cứng. Khối mang màu nằm rải rác ở mô mềm. + Phần phiến lá: dưới lớp biểu bì là lớp hạ bì có một hàng tế bào hình chữ nhật, to, vách mỏng. Mô mềm đồng hóa xếp giữa 2 lớp hạ bì, tế bào nhỏ, vách mỏng, xếp khá đều đặn, chứa nhiều lạp lục. 6 * Đặc điểm bột phần trên mặt đất gồm: mảnh biểu bì thân; mảnh biểu bì mang lỗ khí; mảnh mô mềm; mảnh mạch điểm; mảnh mạch vạch; mảnh mạch xoắn; bó sợi; hạt tinh bột đơn hoặc tụ thành đám; tinh thể calci oxalat hình phiến; mảnh mô cứng; hạt phấn; mảnh mô mang khối có màu. 3.1.2. Kết quả nghiên cứu về thực vật của loài Piper hymenophyllum Miq. * Đặc điểm hình thái Cây thảo, leo, phần non có nhiều lông. Lá mọc cách. Phiến lá hình trứng hẹp; gốc hình tim, lệch rõ; mép nguyên; chóp lá nhọn; hai mặt lá có lông ở gân. Gân 5-7. Cụm hoa dạng bông, mọc đối diện với lá. Cuống cụm hoa có lông. Hoa đơn tính khác gốc. Mỗi hoa có một lá bắc, gần hình tròn. Bộ nhị 2; bao phấn 2 ô. Bộ nhụy có 1 lá noãn tạo thành bầu, 1 ô, 1 noãn; gần hình cầu, có lông. Núm nhụy xẻ 4 thùy. * Đặc điểm vi phẫu - Vi phẫu thân: gồm các đặc điểm gần giống đặc điểm vi phẫu thân của loài Piper thomsonii (C. DC.) Hook. f. var. thomsonii. Một số điểm khác là: thân của loài Piper hymenophyllum Miq. không tròn đều, có lông che trở và ở dưới lớp biểu bì có mô dày tạo thành vòng chứ không nằm rải rác trong mô mềm. - Vi phẫu lá: gồm các đặc điểm gần giống với đặc điểm vi phẫu lá của loài Piper thomsonii (C. DC.) Hook. f. var. thomsonii. Một số điểm khác là lá của loài Piper hymenophyllum Miq. có gân trên lõm, bên ngoài có lông che trở. * Đặc điểm bột phần trên mặt đất của loài Piper hymenophyllum Miq. có hầu hết những đặc điểm bột phần trên mặt đất của loài Piper thomsonii (C. DC.) Hook. f. var. thomsonii. Một số điểm khác là bột 7 của loài Piper hymenophyllum Miq. có mảnh lông che trở đa bào và tinh thể calci oxalat có thêm hình khối đa giác. 3.2. Kết quả nghiên cứu về hóa học Từ 2 phân đoạn cắn trong dung môi n-hexan và EtOAc chiết xuất từ loài P. thomsonii (C. DC.) Hook. f. var. thomsonii và 2 phân đoạn cắn trong dung môi CHCl 3 và EtOAc chiết xuất từ loài P. hymenophyllum Miq. đã phân lập được 14 hợp chất. Tất cả những hợp chất này đều đã được nhận dạng dựa trên dữ liệu một số loại phổ. * Nhận dạng hợp chất PT1 Phổ 1 H-NMR (400 MHz, CDCl 3 ) δ H (ppm): 6,76 (2H, d, J = 8,0 Hz); 7,06 (2H, d, J = 8,0 Hz); hai proton olefin tại δ H 5,52 (2H, m) và một tín hiệu của nhóm methyl tại δ H 0,91 (t, J = 6,0 Hz). Phổ 13 C-NMR (100 MHz, CDCl 3 ) δ C (ppm): 133,49 (C-1), 129,39 (C-2/6), 115,23 (C-3/5) và 153,57 (C-4); một liên kết đôi tại δ C 128,32 và 130,77; 7 cacbon methylen tại δ C 32,56 (C-1′), 27,21 (C-4′), 29,71 (C-5′), 29,30 (C-6′), 29,20 (C-7′), 31,86 (C-8′) và 22,66 (C-9′); 1 nhóm methyl bậc một tại δ C 14,09 (C-10′). Phổ HR-FAB-MS xuất hiện píc ion m/z 232,1829 [M] + cho phép xác định công thức phân tử của hợp chất PT1 là C 16 H 24 O. Dựa vào những dữ liệu ở trên kết hợp đối chiếu tài liệu cho phép kết luận hợp chất PT1 có tên là 4-(2’-(Z)-decenyl) phenol và có cấu trúc như sau: Hình 3.11. Cấu trúc hóa học của hợp chất PT1 * Nhận dạng hợp chất PT2 Phổ 1 H-NMR (400 MHz, CDCl 3 ) δ H (ppm): tín hiệu của proton oxymethylen tại δ H 5,39 và các tín hiệu proton đặc trưng cho vòng benzen một lần thế trong khoảng δ H 7,45 ~ 8,10. HO 1 3 5 1' 2' 3' 5' 9' 8 Phổ 13 C-NMR (100 MHz, CDCl 3 ) δ C (ppm): tín hiệu của 14 nguyên tử cacbon gồm 1 nhóm cacbonyl tại δ C 166,41; một nhóm oxymethylen tại δ C 66,68; hai vòng benzen một lần thế tại δ C 128,16, 128,23, 128,37, 128,59, 129,70, 130,17 và 136,59. Phổ HR-ESI-MS xuất hiện píc ion m/z 235,0716 [M+Na] + cho phép xác định công thức phân tử của hợp chất PT2 là C 14 H 12 O 2 . Dựa vào những dữ liệu ở trên kết hợp đối chiếu tài liệu cho phép kết luận hợp chất PT2 có tên là benzyl benzoat và có cấu trúc như sau: Hình 3.13. Cấu trúc hóa học của hợp chất PT2 * Nhận dạng hợp chất PT3 Phổ 1 H-NMR (400 MHz, CDCl 3 ) δ H (ppm): tín hiệu của 9 proton thơm trong khoảng δ H 6,92~8,11; một tín hiệu của oxymethylen tại δ H 5,44 và tín hiệu của một nhóm methoxy tại δ H 3,86. Phổ 13 C-NMR (100 MHz, CDCl 3 ) δ C (ppm): tín hiệu của 15 nguyên tử cacbon bao gồm: 1 cacbonyl tại δ C 166,53; 12 cacbon thơm tại δ C 130,43 (C-1), 129,68 (C-2,6), 128,29 (C-3,5), 132,83 (C- 4), 124,46 (C-1′), 157,52 (C-2′), 110,49 (C-3′), 129,46 (C-4′), 120,44 (C-5′) và 129,40 (C-6′); 1 cacbon oxymethylen tại δ C 62,17 (C-7′); một nhóm methoxy tại δ C 55,44. Phổ HR-ESI-MS xuất hiện píc ion m/z 265,0820 [M+Na] + cho phép xác định công thức phân tử của hợp chất PT3 là C 15 H 14 O 3 . Dựa vào những dữ liệu ở trên kết hợp đối chiếu tài liệu cho phép kết luận hợp chất PT3 có tên là 2-methoxybenzyl benzoat và có cấu trúc như sau: 1 3 4 7 O O [...]... Piper L và xác định được tên khoa học của hai loài này là Piper thomsonii (C DC.) Hook f var thomsonii (tên đồng nghĩa là Piper bavinum C DC.) và Piper hymenophyllum Miq - Đã mô tả đặc điểm vi phẫu thân, lá và đặc điểm bột phần trên mặt đất của 2 loài nghiên cứu góp phần tiêu chuẩn hóa hai loài này 2 Về thành phần hóa học của hai loài nghiên cứu - Từ bột phần trên mặt đất của loài Piper thomsonii (C DC.). .. đặc điểm vi học và tác dụng ức chế enzym acetylcholinesterase của loài tiêu lá mỏng (Piper hymenophyllum Miq., chi Piper L., họ Piperaceae)”, Tạp chí Dược học, tập 449, số 01/2013, tr 18-21 2 Hoàng Việt Dũng, Đỗ Quyên, Nguyễn Minh Chính, Tô Đào Cường, Byung Sun Min (2013), Nghiên cứu đặc điểm thực vật, đặc điểm vi học và tác dụng ức chế enzym acetylcholinesterase của loài tiêu Ba Vì (Piper bavinum... dụng trong đề tài luận án * Về đặc điểm vi học của 2 loài nghiên cứu 20 Nhìn chung, thông tin về đặc điểm vi học của các loài thuộc chi Piper L còn rất hạn chế so với số lượng loài thực có của chi này Vì vậy, để có thể sử dụng đặc điểm vi học một cách hiệu quả hơn trong xác định loài, cần có thêm nhiều kết quả nghiên cứu hơn trong tương lai Hiện tại, nghiên cứu về đặc điểm vi học chủ yếu nhằm góp phần. .. phần tiêu chuẩn hóa thực vật 4.2 Về thành phần hóa học Hiện nay, trong lĩnh vực nghiên cứu hóa thực vật, phương pháp nghiên cứu phân lập hợp chất tự nhiên theo định hướng tác dụng sinh học được sử dụng khá phổ biến Phương pháp này có ưu điểm là đem lại xác suất thành công cao hơn đồng thời tiết kiệm được chi phí và thời gian nghiên cứu Áp dụng phương pháp này, dựa trên kết quả sàng lọc tác dụng ức chế. .. hóa học dựa trên khung cấu trúc dẫn đường là 1-allyl-3,4-dihydroxybenzen 3 Tiếp tục nghiên cứu thêm về thành phần hóa học và sàng lọc một số tác dụng sinh học khác của những hợp chất phân lập được từ hai loài nghiên cứu của luận án 24 CÁC CÔNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN 1 Hoàng Việt Dũng, Đỗ Quyên, Nguyễn Minh Chính, Hà Minh Tâm, Tô Đào Cường (2013), Nghiên cứu đặc điểm thực vật, đặc điểm. .. tính ức chế của 14 hợp chất tinh khiết phân lập được từ 2 loài nghiên cứu rất khác nhau với IC50 từ 14,46 – 476,12 μM Trong đó, hợp chất PH7 sở hữu hoạt tính ức chế AChE in vitro mạnh nhất và hợp chất PH4 có hoạt tính yếu nhất Chương 4 BÀN LUẬN 4.1 Về đặc điểm thực vật * Về đặc điểm hình thái và định tên khoa học 2 loài nghiên cứu Để xác định tên khoa học của 2 loài nghiên cứu, đặc điểm hình thái của. .. tính ức chế AChE in vitro mạnh nhất gồm các chất PH5, PH6 và PH7 có điểm chung là trong công thức cấu tạo đều có phần khung 1-allyl- 22 3,4-dihydroxybenzen Kết quả này gợi ý rằng khung 1-allyl-3,4dihydroxybenzen sở hữu tác dụng ức chế AChE in vitro KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN 1 Về đặc điểm thực vật của hai loài nghiên cứu - Đã mô tả chi tiết đặc điểm thực vật của hai loài nghiên cứu thuộc chi Piper. .. bảng 3.18 và 3.19 cho thấy 2 phân đoạn cắn n-hexan và EtOAc chiết xuất từ loài Piper thomsonii (C DC.) Hook f var thomsonii và 2 phân đoạn cắn CHCl3 và EtOAc chiết xuất từ loài Piper hymenophyllum Miq là những phân đoạn cắn có hoạt tính ức chế AChE in vitro mạnh nhất ở từng loài nghiên cứu Trên cơ sở đó, những phân đoạn này tiếp tục được nghiên cứu về thành phần hóa học Từ 4 phân đoạn được chọn ở trên,... là 1% - Hai phân đoạn dịch chiết trong dung môi n-hexan và EtOAc chiết xuất từ loài Piper thomsonii (C DC.) Hook f var thomsonii và hai phân đoạn dịch chiết trong dung môi CHCl3 và EtOAc chiết xuất từ loài Piper hymenophyllum Miq được chọn để nghiên cứu về thành phần hóa học bởi chúng sở hữu hoạt tính ức chế AChE in vitro mạnh hơn những phân đoạn dịch chiết trong các dung môi khác được nghiên cứu - Đã... rộng rãi là P thomsonii (C DC.) Hook f var thomsonii Do đó, mẫu nghiên cứu được giám định lại bằng cách so sánh đặc điểm hình thái của nó với thông tin mô tả và ảnh vẽ của loài P thomsonii (C DC.) Hook f var thomsonii trong tài liệu thực vật chí Trung Quốc Kết quả cho thấy hầu hết các đặc điểm hình thái giữa loài nghiên cứu và loài đối chiếu là giống nhau Dựa vào kết quả so sánh này, loài HVD-002-11 . 3 9,9 5 (C- 4 ), 2 5,2 2 (C- 5 ), 3 6,7 4 (C- 6 ), 3 7,5 0 (C- 8 ), 2 4,5 4 (C- 9 ), 3 7,4 3 (C- 1 0 ), 3 7,3 5 (C- 1 2 ), 2 4,8 7 (C- 1 3) và 3 9,4 4 (C- 1 4); 4 nhóm methin tại δ C 12 3,1 0 (C- 2 ), 3 2,8 5 (C- 7 ), 3 2,7 6 (C- 1 1 ), 2 8,0 4. 13 0,4 3 (C- 1 ), 12 9,6 8 (C- 2, 6 ), 12 8,2 9 (C- 3, 5 ), 13 2,8 3 (C- 4 ), 12 4,4 6 (C- 1 ), 15 7,5 2 (C- 2 ), 11 0,4 9 (C- 3 ), 12 9,4 6 (C- 4 ), 12 0,4 4 (C- 5 ) và 12 9,4 0 (C- 6 ); 1 cacbon oxymethylen tại δ C 6 2,1 7 (C- 7 ); . MHz, CDCl 3 ) δ C (ppm): tín hiệu của 15 nguyên tử cacbon δ C 5 3,5 6 (C- 1 ), 2 6,9 5 (C- 2 ), 4 1,9 7 (C- 3 ), 8 1,2 1 (C- 4 ), 5 4,5 7 (C- 5 ), 3 0,1 3 (C- 6 ), 2 7,7 2 (C- 7 ), 2 5,0 1 (C- 8 ), 3 9,0 9 (C- 9 ), 15 3,6 8 (C- 1 0 ),