NG D NG CNSH TRONG Ứ ụ TH Y S Nủ ả K13S2 - Nhóm 2 Seminar  Hà Thị Mỹ Dung  Trần Thị Luyến  Phạm Thị Hồng Liên  Nguyễn Thị Kim Phụng  Huỳnh Thanh Phương  Nguyễn Thị Thu Thanh  Trần Quốc Trung  Trương Thị Ngọc Vinh  Võ Thị Kim Xuyến NộI DUNG  Chuyển gen  Chuẩn đoán bệnh  Nhân giống  Chuyển đổi giới tính CHUYểN GEN CÁ Các h ng t o cá chuy n ướ ạ ể gen Các h ng t o cá chuy n ướ ạ ể gen Chuy n gen GH nh m t o cá có t c đ ể ằ ạ ố ộ l n nhanh, hi u su t s d ng t/ăn caoớ ệ ấ ử ụ . Chuy n gen mã hóa protein ể AFP(antifreeze pr)_pr ch ng l nhố ạ Cô ng ngh antisene RNA t o sane ệ ạ ph m b sung v i RNA virusẩ ổ ớ 1 s gen mã hóa cho pr phát hu nh ố ỳ quang màu xanh, màu đ hay màu ỏ vàng đã đ c chuy n vào cá.ượ ể CHUYểN GEN CÁ L a ch n và t o ự ọ ạ dòng L a ch n và t o ự ọ ạ dòng Chuy n gen vào cáể Chuy n gen vào cáể Ki m tra k t qu chuy n ể ế ả ể gen Ki m tra k t qu chuy n ể ế ả ể gen T o dòng b ng t bàoạ ằ ế T o dòng nh phân tạ ờ ử Tạo dòng nhờ sử dụng sự tăng sinh tế bào. Bao gồm các bước: - Phân hóa DNA nhân bằng enzyme giới hạn. - Tách riêng các đoạn DNA và xác định gen thành phần của chúng. - Đưa đoạn DNA vào plasmid hoặc virus để tạo phân tử DNA tái tổ hợp - Nhiễm vào vi khuẩn (thường là E.coli) hoặc nấm men để tạo dòng. Tạo dòng nhờ sử dụng sự tăng sinh tế bào. Bao gồm các bước: - Phân hóa DNA nhân bằng enzyme giới hạn. - Tách riêng các đoạn DNA và xác định gen thành phần của chúng. - Đưa đoạn DNA vào plasmid hoặc virus để tạo phân tử DNA tái tổ hợp - Nhiễm vào vi khuẩn (thường là E.coli) hoặc nấm men để tạo dòng. Tạo dòng nhờ vào phương pháp phân tử PCR Tạo dòng nhờ vào phương pháp phân tử PCR CHUYểN GEN CÁ L a ch n và t o ự ọ ạ dòng L a ch n và t o ự ọ ạ dòng Chuy n gen vào cáể Chuy n gen vào cáể Ki m tra k t qu chuy n ể ế ả ể gen Ki m tra k t qu chuy n ể ế ả ể gen Vi tiêm Xung đi nệ Tiêm tr c ự ti pế Lây nhi mễ PP khác N p gen vào kim tiêm b ng ph ng pháp capillar ạ ằ ươ (ngâm đ u kim tiêm vào dung d ch gen kho ng 10-12 ầ ị ả gi ) ho c b m tr c ti p dung d ch gen vào.ờ ặ ơ ự ế ị L p kim tiêm và kim gi vào máy vi thao tác.ắ ữ Chuy n tr ng ti n nhân vào đĩa petri có ch a môi ể ứ ề ứ tr ng đ c đ t d i kính hi n vi.ườ ượ ặ ướ ể Đi u ch nh kính hi n vi đ xác đ nh đĩa phôi và ề ỉ ể ể ị đi u ch nh máy vi thao tác đ đ a kim tiêm vào v trí ề ỉ ể ư ị c a tr ng ti n nhân.ủ ứ ề Khi th y tr ng ti n nhân h i ph ng to và tr nên ấ ứ ề ơ ồ ở sáng h n thì d ng l i và kéo nhanh kim tiêm ra.ơ ừ ạ Dòng đi n cao ệ áp BI N N PẾ Ạ S d n g s ú n g ử ụ b n g e n ắ S d n g s ú n g ử ụ b n g e n ắ S d n g t b à o ử ụ ế g c p h ô i ố S d n g t b à o ử ụ ế g c p h ô i ố Đ ó n g g ó i D N A n g o i ạ l a i t r o n g l i p o s o m e Đ ó n g g ó i D N A n g o i ạ l a i t r o n g l i p o s o m e CHUYểN GEN CÁ L a ch n và t o ự ọ ạ dòng L a ch n và t o ự ọ ạ dòng Chuy n gen vào cáể Chuy n gen vào cáể Ki m tra k t qu chuy n ể ế ả ể gen Ki m tra k t qu chuy n ể ế ả ể gen PP thấm tách DNA PP thấm tách DNA Phương pháp PCR. Phương pháp PCR. • Tách DNA của nhân tế bào ở cá đã được chuyển gen. • Chế phẩm DNA này cùng với cặp mồi đặc hiệu cho đoạn gen đã chuyển trong phản ứng PCR, nếu kết quả PCR dương tính thì chứng tỏ gen ngoại lai đã được xen vào vật chủ. • Sau khi xác định gen chuyển đã xen được vào genom của cá chuyển gen thì cần xác định là gen ngoại lai đã xen vào genom có được biểu hiện hay không và biểu hiện ở mức độ nào? Công việc này thường được liểm tra bằng phương pháp miễn dịch… CHUẩN ĐOÁN BệNH  Áp dụng các kỹ thuật RT PCR, các kít được thiết kế đặc trưng cho từng loại bệnh để nhằm phát hiện nhanh các bệnh trên con giống.  Kít được thiết kế dựa trên sự khuếch đại 1 đoạn DNA đặc trưng trên DNA bộ gen của virus. Dựa vào trình tự gen đặc hiệu cuả virus mà thiết kế cặp mồi đặc trưng cho từng bộ kit. Mẫu tôm Chuẩn bị mẫu Tách chiêt DNA(MBV va WSV) Tách chiết RNA(YHV,TSV) PCR RT_PCR Đọc kêt quả Điện di MộT Số BệNH THƯờNG GặP Bi u hi n b nhể ệ ệ Virus MBV Bệnh MBV (Monodon baculovirus) - Biểu hiện bệnh: suy giảm tốc độ sinh trưởng,tôm kém ăn, sự gia tăng của các sinh vật gây thối ở mang và bề mặt. - Chẩn đoán bệnh MBV trên tôm sú bằng phương pháp PCR sử dụng kít Duplex MBV – WSSV Bệnh đốm trắng trên tôm (WSSV) - Biểu hiện:thân có màu hồng đến đỏ, phần vỏ mang những đốm trắng nhỏ. - Chẩn đoán tác nhân gây bệnh bằng phương pháp PCR sử dụng kít IQ2000WSSV Bệnh đầu vàng trên tôm sú (YHV) - Biểu hiện bệnh: xuất hiện màu vàng ở phần đầu ngực và sự nhạt màu của toàn cơ thể. - Ch n đoán b nh đ u vàng ẩ ệ ầ trên tôm sú b ng ph ng ằ ươ pháp RT -PCR s d ng kít ử ụ IQ2000YHV/GAV Hội chứng Taura - Biểu hiện bệnh: thân tôm có màu đỏ nhạt, tôm yếu và chậm lớn. Bệnh do Taura syndrome virus gây ra. - Chẩn đoán hội chứng Taura bằng phương pháp RT- PCR sử dụng kít IQ2000TSV Bệnh VNN (viral nerve necrosis) trên cá biển - Biểu hiện bệnh: màu thân cá chuyển sang màu tối, mang cá nhợt nhạt… - Chẩn đoán bệnh VNN trên cá biển bằng phương pháp RT- PCR sử dụng kít IQ2000VNN NHÂN GIốNG  Tạo ra một số lượng lớn con giống trong một thời gian ngắn cung cấp cho cac cơ sở chăn nuôi.  Duy trì, tái tạo nguồn thủy sản tự nhiên, lai tạo, bảo tồn các thủy sản quý hiếm có nguy cơ tuyệt chủng.  Kết hợp kỹ thuật nuôi vỗ nhân tạo và sử dụng kích dục tố  Kết hợp chọn giống truyền thống với phân tích biến dị ADN và sử dụng kỹ thuật gen  Ứng dụng các công nghệ di truyền như chuyển cấy gen, đa bội thể, điều khiển giới tính  Ứng dụng công nghệ sinh học (dinh dưỡng, sinh lý sinh sản, công nghệ gen)  Nuôi vỗ cá bố mẹ: Phân biệt giới tính: - Cá đực có phần chót đầu gai sinh dục nhọn, khi thành thục mình cá thon, dài; - Cá cái có phần chót đầu gai sinh dục bầu, khi thành thục mình cá to nhô ra hai bên hông; Chọn cá bố mẹ mập, khỏe mạnh, không dị hình, có trọng lượng lớn hơn 100g/con và chiều dài tối thiểu 18cm;  Quản lý và chăm sóc: Cho ăn: có thể sử dụng 2 loại thức ăn là tươi sống và chế biến Chăm sóc: Sau 2 tháng nuôi vỗ, định kỳ kiểm tra để xác định thời gian cho cá sinh sản. Thụ tinh nhân tạo: [...]... Phương pháp sử dụng hormone:: MT (17 methyl  Con đực chuyển giới tính, gọi là con cái giả, có khả năng  estestosteron) và ET (17 ethynyltestosteron) bắt cặp và sinh sản được tạo ra bằng cách loại bỏ tuyến  nội tiết đực (tuyến androgen) từ con tôm đực chưa trưởng  Nuôi vỗ cá bố mẹ và cho đẻ trong giai chửa để chủ động  thành.  thu trứng ngay từ miệng cá mẹ Qui trình mới gồm hai bước trong tiểu phẩu tuyến nội tiết ... Nuôi vỗ cá bố mẹ và cho đẻ trong giai chửa để chủ động  thành.  thu trứng ngay từ miệng cá mẹ Qui trình mới gồm hai bước trong tiểu phẩu tuyến nội tiết  Trứng thu được đem phân loại và ấp trong khay ấp hoặc  đực ở qui mô lớn.  bình ấp để thu cá bột nở đồng loạt Ở bước I, hậu ấu trùng 25­60 ngày tuổi (PL25­60) Cá bột thu được đem nuôi trong bể hoặc trong giai và cho  Ở bước II, đàn con của con cái giả ở bước I được  ăn thức ăn có chứa hoocmôn tính đực (17 a ­  . thủy sản quý hiếm có nguy cơ tuyệt chủng.  Kết hợp kỹ thuật nuôi vỗ nhân tạo và sử dụng kích dục tố  Kết hợp chọn giống truyền thống với phân tích biến dị ADN và sử dụng kỹ thuật gen  Ứng. pháp RT- PCR sử dụng kít IQ2000VNN NHÂN GIốNG  Tạo ra một số lượng lớn con giống trong một thời gian ngắn cung cấp cho cac cơ sở chăn nuôi.  Duy trì, tái tạo nguồn thủy sản tự nhiên, lai. sử dụng kỹ thuật gen  Ứng dụng các công nghệ di truyền như chuyển cấy gen, đa bội thể, điều khiển giới tính  Ứng dụng công nghệ sinh học (dinh dưỡng, sinh lý sinh sản, công nghệ gen)  Nuôi