GVHD: Hoàng Xuân Thế Nhóm: 12 MSSV 1.Nguyễn Thị Thảo Trang 2205112096 2.Trương Thị My 2205112043 3.Nguyễn Thị Loan 2205112028 4.Nguyễn Ngọc Mai Trâm 2205112097 MÔN: PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM Đề tài: Định lượng Coliforms – E.coli bằng phương pháp đếm khuẩn lạc NỘI DUNG [...]... trước khi cấy vào đĩa  Định lượng E.coli bằng pp đếm khuẩn lạc  Nguyên tắc: Mẫu đã được đồng nhất hóa được cấy một lượng nhất định lên môi trường có chứa lactose, ủ ở 44oC trong 24h, đếm các khuẩn lạc có hình dạng đặc trưng của Coliforms Khẳng định các khuẩn lạc đã đếm là E.coli bằng các thử nghiệm IMViC  Định lượng Coliforms, Coliform phân và E.coli bằng pp đếm khuẩn lạc Chuẩn bị dịch đồng nhất... quanh khuẩn lạc có vùng tủa của muối mật  Định lượng Coliforms, Coliform phân bằng pp đếm khuẩn lạc:  Nguyên tắc: -Việc khẳng định được thực hiện bằng cách nuôi cấy trên môi trường canh chọn lọc như BGBL Để định lượng Coliforms phân, thực hiện tương tự nhưng thay đổi nhiệt độ ủ là 440C -Mật độ Coliforms hay Coliforms phân được tính dựa trên số lượng khuẩn lạc điển hình đếm được, tỉ lệ khẳng định. .. canh EC(+)& Indol(+), tính tỉ lệ khẳng định Thử nghiệm IMViC Coliforms phân Mật độ Coliforms phân Đếm số ống canh EC(+)&IMViC ++ , tính tỉ lệ khẳng định E.coli Mật độ E.coli Quy trình định lượng Coliforms, Coliforms phân, E.coli bằng pp đếm khuẩn lạc  Quy trình phân tích Coliforms và Coliforms phân Mẫu được đồng nhất hóa và pha loãng, sao cho chứa < 100 tế bào Coliforms trong 1ml dd pha loãng Pha loãng... (-) E.Coli (+) Cách tính kết quả: Dựa vào số khuẩn lạc đếm được và tỉ lệ khẳng định, tính mật độ của Coliforms và Coliforms phân: N : tổng số khuẩn lạc đếm được ni : số đĩa có số khuẩn lạc được chọn tại mỗi độ pha loãng v : dung tích mẫu (ml) cấy vào mỗi đĩa fi : độ pha loãng có khuẩn lạc được chọn tại các đĩa đếm R : tỉ lệ khẳng định  Quy trình phân tích E.coli Mẫu được đồng nhất, pha loãng và định. .. là trực khuẩn Gram âm, không sinh bào tử, hiếu khí hoặc kị khí tùy ý, lên mem lactose sinh acid và sinh hơi ở 37oC trong 24 – 48 giờ – Coliforms chịu nhiệt = coliforms + lên men lactose và sinh hơi trên môi trường canh EC ở 44oC trong 24 giờ – Coliforms phân = coliforms chịu nhiệt + sinh indol trong canh Trypton ở 44,5oC trong 24 giờ – E.coli = coliforms phân + IMViC la Tóm lại  Định lượng Coliforms, ... phân bằng pp đếm khuẩn lạc:  Nguyên tắc: -Mẫu đã được đồng nhất hóa được cấy một lượng nhất định lên môi trường thạch chọn lọc thích hợp chứa lactose Đếm số khuẩn lạc lên men lactose & sinh acid sau khi ủ ở 37±1oC trong 24-48h Ngoài lactose, môi trường chọn lọc cho Coliforms còn chứa muối mật ức chế vi khuẩn gram dương và chất chỉ thị như neutral red, crystal violet -Trên môi trường này khuẩn lạc Coliforms. .. ml Lắc để yên 1 – 2h VRB ở 45oC Phục hồi VSV 10 -15ml Chờ môi trường đặc , lật ngược, đem ủ 37oC trong 24 – 48 giờ Chọn lọc KL coliform Khuẩn lạc coliforms đặc trưng trên môi trường VRB có màu đỏ đến đỏ đậm, có vùng tủa muối mật, đường kính ≥0,5mm Đếm số khuẩn lạc đặc trưng Tính: N = tổng số KL đặc trưng trên tất cả các đĩa cấy Thử nghiệm khẳng định Coliforms - Chọn ít nhất 5 khuẩn lạc nghi ngờ, dùng... BGBL Ủ các ống BGBL ở 37 ± 1oC trong 24 – 48 giờ - Kết quả khẳng định là (+) khi vi khuẩn tăng trưởng làm đục môi trường và sinh hơi trong ống Durham Ghi nhận số ống (+) - Tính tỉ lệ khẳng định là tỉ số giữa số khuẩn lạc cho kết quả (+) với số khuẩn lạc được dùng trong thử nghiệm khẳng định Chọn 5 KL đặc trưng cấy sang 5 ống BGBL Ủ 37oC/24 – 48h Tỉ lệ khẳng định R = (Số KL sinh hơi trong BGBL) / (Số... những Coliforms có khả năng lên men lactose sinh hơi trong khoảng 24h khi được ủ ở 44oC trong môi trường EC  Coliforms phân (E.coli giả định) : Là Coliforms chịu nhiệt có khả năng sinh indole khi được ủ khoảng 24h ở 44.5oC trong môi trường Trypton Feacal Coliform E.coli Là Coliforms phân cho kết quả thử nghiệm IMViC là ++ (Indol +, Methyl Red +, Voges Proskauer -, Citrate -) E.coli el on Sa lm – Coliforms. .. oC trong 24-48h Đếm các khuẩn lạc màu đỏ đến màu đỏ đậm, có vòng tủa muối mật, đường kính ≥0,5mm, chọn 5 khuẩn lạc Cấy vào ống canh BGBL, ủ ở 37oC, 24-48h Cấy vào ống canh EC, ủ ở 44oC, 24-48h Đếm số ống canh(+) (sinh hơi).Tính tỉ lệ khẳng định Coliforms Thử nghiệm Indol Mật độ Coliforms Chọn ống canh (+) (sinh hơi) Cấy vào ống canh Trypton, MR-VP, thạch SC Citrate, ủ ở 44 Oc, 24h Đếm số ống canh EC(+)& . epidermidis, Gram (+) Bacillus cereus, Gram (+) - Nhóm Coliforms gồm 4 giống là: +Escherichia (E. coli) +Citrobacter. +Klebsiella. +Enterobacter. Escherichia coli Citrobacter freundii Klebsiella. THỰC PHẨM Đề tài: Định lượng Coliforms – E. coli bằng phương pháp đếm khuẩn lạc NỘI DUNG