B GIÁO D C VÀ ðÀO T O TRƯ NG ð I H C NÔNG NGHI P I - HÀ N I Ch biên : GS.TS VŨ TRI U MÂN GIÁO TRÌNH B NH CÂY ð I CƯƠNG (Chuyên ngành B o v th c v t) HÀ N I - 2007 Trư ng đ i h c Nơng nghi p – Giáo trình B nh đ i cương - L i nói đ u B nh ñ i cương ph n trang b nh ng ki n th c b n, khái ni m, ñ nh nghĩa, n i dung ch y u c a khoa h c b nh cây, môn h c s cho ph n b nh chuyên khoa c a môn h c b nh (Phytopathology) Môn h c giúp sinh viên n m v ng ñ c ñi m sinh v t h c sinh thái h c c a nguyên nhân gây b nh nh ng hư ng phòng tr , h n ch b nh h i N i dung ch y u c a môn h c g m: Khái ni m chung v b nh Sinh thái b nh Phòng tr b nh B nh môi trư ng N m gây b nh Vi khu n gây b nh Virus gây b nh Phytoplasma gây b nh Viroide gây b nh 10 Tuy n trùng gây b nh 11 Protozoa gây b nh 12 Th c v t thư ng ñ ng gây b nh Tham gia vi t giáo trình g m tác gi : GS.TS Vũ Tri u Mân: chương I, chương II, chương III, chương IV, chương VII, chươngVIII, chương IX PGS.TS Lê Lương T : ph n phân lo i n m - chương V, ph n tri u ch ng b nh - chương I, ph n thay ñ i c a sau b b nh -chươngI PGS.TS Nguy n Kim Vân: chương V TS ð T n Dũng: chươngVI, chương XII TS Nguy n Ng c Châu: chương X TS Ngô Th Xuyên: chương XI TS Nguy n Văn Viên: ph n bi n pháp hoá h c - chương III GS.TS Vũ H u Yêm: ph n b nh thi u dinh dư ng - chương IV PGS.TS Ngô Bích H o: ph n phân lo i phịng tr - chương VII Giáo trình ch y u dùng cho sinh viên năm th c ngành B o v th c v t Giáo trình đư c so n th o v i vi c b sung nhi u tư li u m i v y có th làm tài li u tham kh o cho k sư ñã trư ng nh ng cán b k thu t quan tâm t i môn h c b nh lý th c v t CÁC TÁC GI Trư ng đ i h c Nơng nghi p – Giáo trình B nh đ i cương - Ch−¬ng I Khái niệm chung bệnh I BệNH CÂY Và SảN XUấT NÔNG NGHIệP 1.1 Lịch sử khoa học bệnh Khoa học bệnh đợc hình th nh từ nhu cầu sản xuất nông nghiệp Thời thợng cổ, với đời sống hái lợm sau tiến l du canh, du c Con ngời không phát đợc phá hoại bệnh m cho việc bị héo, bị chết, sản xuất nông nghiệp bị t n phá l trời, v.v không phát đợc nguyên nhân gây bệnh Từ kỷ thứ trớc công nguyên v o thời cổ Hy Lạp, Theophraste đ mô tả bệnh gỉ sắt hại v tợng nấm kí sinh gốc Đến kỷ 16 chế độ phong kiến tập quyền phát triển mạnh, vùng sản xuất chuyên canh víi h ng ng n hÐcta xt hiƯn BƯnh c©y ng y c ng gây nhiều tác hại lớn cho s¶n xt v nhËn thøc vỊ bƯnh ng y c ng râ rƯt h¬n Tíi thÕ kû 18, kinh tÕ giới đ chuyển từ công trờng thủ công sang nửa khí v khí hoá Các quốc gia t hình th nh khoa học kỹ thuật phát triển mạnh Bớc đầu đ có biện pháp đơn giản phòng trừ bệnh đợc thực hiện: M Tillet (1775) v B Prevost (1807) l ngời nghiên cứu bệnh than đen lúa mì T i liệu nghiên cứu bệnh Anton de Bary (1853) đợc xuất đ tạo móng cho phát triển khoa học bệnh sau n y Hallier (1875) phát vi khuẩn gây thối củ khoai t©y A Mayer (1886), D Ivanopski (1892), M Bayerinck (1898) tìm virus khảm thuốc Nocar v Roux (1898) phát Mycoplasma động vật Schulrt v Folsom (1917 - 1921) tìm thấy bệnh củ khoai tây có hình thoi nhng không xác định rõ nguyên nhân Nhng phải tới năm 30 kỷ 20 khoa học giới phát triển nhiều nớc t công nghiệp đời, công nghiệp khí hoá chuyển sang điện khí hoá nhanh chóng năm 80 kỷ 20 tin học, điện tử, tự động hoá đ phát triển mạnh, công trình nghiên cứu bệnh đ chuyển sang bớc phát triển vợt bậc Năm 1895 - 1980, E.F Smith đ nghiên cứu hệ thống vi khuẩn gây bệnh Rất nhiều nh vi khuẩn học đ có công trình nghiên cứu Branes J.A Wdrey L.V.A, Bosh S.E, Boucher C.A., Chang M.L, Cook D., N.W Schaad, J.B Jones v W Chun vỊ vi khn häc nh÷ng năm đầu kỷ 20 nh khoa học H Lan, Pháp, Anh, Nhật Bản đ có nhiều công trình nghiên cứu Cuốn "Bệnh virus hại thực vật" (Plant virology) R.E.F Mathew l t i liệu đợc xuất nhiều lần; "Phân loại virus" (Virus Taxonomy) nhiều tác giả l t i liệu chi tiết v đại virus học bệnh v virus nãi chung Dienier v W Raymer (1966) ® xác định đợc viroide l nguyên nhân gây bệnh khoai tây có củ hình thoi Mỹ Tr ng ñ i h c Nông nghi p – Giáo trình B nh đ i cương - J Doi v cộng tác viên (1967) lần đ xác định bệnh Phytoplasma hại thực vật Nhật Bản T i liệu "Bệnh nhiệt đới" H David v Thurston; "Bệnh cây" (Plant pathology) George N Agrios đợc xuất nhiều lần l t i liệu có giá trị cho việc phát triển v nghiên cứu bệnh Đặc biệt, môn sinh học phân tử phát triển đ mang lại phát triển vợt bậc khoa học bệnh cuối kỷ 20 - đầu kỷ 21 Các hội bƯnh lý thùc vËt cđa c¸c n−íc th nh lËp từ lâu giới nh: H Lan (1891), Mỹ (1908), Nhật Bản (1916), Canada (1930), ấn Độ (1947) Hội nghị nghiên cứu bệnh lần thứ đ tập hợp nhiều nh nghiên cứu bệnh Luân Đôn (Anh) v o 8/1968 mở đầu cho hoạt động đa dạng v phong phú sau n y Hiệp hội nh nghiên cứu bệnh giới Việt Nam từ thời Lê Quý Đôn, Vân Đ i loại ngũ ông đ mô tả nhiều phơng pháp chăm sóc khoẻ, dùng vôi tro bón ruộng - hun khói bếp để bảo quản h nh tỏi, ngô - đặc biệt l đ biÕt chän v tun lùa c¸c gièng lóa tèt, Ýt bị sâu bệnh Tình hình bệnh Việt Nam đầu thể kỷ 20 đ đợc ghi nhận công trình nghiên cứu tác giả ngời Pháp F Vincens (1921) phát bệnh đạo ôn nấm Pyricularia hại lúa tỉnh Bạc Liêu, Cần Thơ, Sóc Trăng Bougnicourt (1943) phát bệnh lúa von Việt Nam Roger (1951) phát bệnh đạo ôn miền Bắc Việt Nam Trong "Bệnh nhiệt đới" (Phytopathologie des pays chaud) tác giả Roger (1954) xuất Paris nhiều bệnh hại vùng nhiệt đới đặc biệt l Việt Nam đ đợc đề cập, mô tả tỉ mỉ Sau cách mạng tháng Tám, kháng chiến chống Pháp xảy ác liệt, kéo d i năm M i tới mùa thu 1955, lần Tổ Bệnh thuộc Viện Khảo cứu trồng trọt đ đợc th nh lập từ ng nh bệnh Việt Nam đ phát triển mạnh mẽ, tới đ hình th nh hệ thống nghiên cứu, giảng dạy v quản lý công tác kiểm dịch v phòng trừ bệnh hại rộng lớn với Cục B¶o vƯ thùc vËt, ViƯn B¶o vƯ thùc vËt (BVTV), môn BVTV trờng đại học v c¸c chi cơc víi h ng ng n c¸n bé có trình độ từ cao đẳng đến đại học v đại học Rất nhiều sách bệnh gồm sách dịch, t i liệu dịch v sách hớng dẫn phơng pháp nghiên cứu, giáo trình bệnh cây, sách chuyên khảo, sách phổ biến kỹ thuật tác giả Vũ Minh, Đờng Hồng Dật, H Minh Trung, Vũ Khắc Nhợng, Lê Lơng Tề, Vũ Triệu Mân, Nguyễn Văn Tuất, Phạm Văn Kim, Nguyễn Thơ, Bùi Chí Bửu, Phạm Văn D, Nguyễn Thị Thu Hồng, v nhiều tác giả khác Từ tháng 9/2001 Hội Sinh học phân tử bệnh lý thực vật Việt Nam đ đợc th nh lập tập hợp hầu hết nh nghiên cứu bệnh Việt Nam Hội đ có nhiều mối quan hệ quốc gia v quốc tế, phát triển hợp tác nghiên cứu khoa học nh nghiên cứu bệnh Việt Nam Hội đ tổ chức hội thảo khoa học 6/2002, 10/2003, 6/2004, 10/2004, 10/2006 v đặc biệt năm 2005 đ xuất sách Những th nh tựu 50 năm nghiên cứu bệnh Việt Nam (1955 - 2005) giới thiệu công trình nghiên cứu khoa häc bƯnh c©y cđa ViƯt Nam st 50 năm qua Tr ng ủ i h c Nụng nghi p – Giáo trình B nh đ i cương - 1.2 Nh÷ng thiệt hại kinh tế bệnh Từ cuối kỷ 20 đến nay, nông nghiệp giới đ đạt đợc th nh tựu to lớn, sản lợng v suất trồng không ngừng ổn định v ng y nâng cao Tuy vậy, tác động cđa sù thay ®ỉi khÝ hËu sù biÕn ®éng cđa dịch hại đ dẫn đến thiệt hại đáng kể suất v phẩm chất trồng nhiều vïng trªn thÕ giíi Theo t i liƯu cđa Tỉ chức Lơng thực v Nông nghiệp Liên hợp quốc (FAO), thiệt hại bệnh năm 90 kỷ 20 ớc tính 11,6% Trong đó, bệnh hại nÊm cã tíi h ng chơc ng n lo i, h¬n 1000 lo i virus, 600 lo i vi khuÈn, tuyến trùng v nhiều bệnh hại khác viroide v phytoplasma, protozoa gây Trên giới, lịch sử đ có nhiều trận dịch bệnh lớn đợc ghi nhận nh trận dịch bệnh mốc sơng nấm Phytophthora infestans gây Aixơlen v o năm 1845 1847 l m triƯu ng−êi chÕt v h¬n triệu ngời phải di c nơi khác Trận dịch bệnh rỉ sắt c phê Sơrilanca đ gây thiệt hại 150 triệu frăng Pháp gây mùa đói Những trận dịch bệnh Greening v Tristeza gây tợng t n lụi cam nhiều vùng thuộc Bắc Phi, Trung Mỹ v Đông Nam Việt Nam, bệnh hại thực vật đ gây nên nhiều trận dịch nghiêm trọng gây thiệt hại lớn cho sản xuất: năm 1955 - 1956 bệnh đạo ôn đ hại 2000 ng n mẫu Bắc H Đông (cũ) Bệnh lúa von đ phá hại đến h ng trăm mẫu Bắc tỉnh ®ång b»ng s«ng Hång BƯnh lóa v ng lơi xt từ 1910 Yên Châu, Tây Bắc tới năm 40, 50; bệnh xuất đồng Bắc nhng tập trung phá hoại nặng từ 1963 1965 diện tích rộng h ng trăm ng n đồng Bắc Chỉ tính riêng tỉnh Thanh Hoá, Thái Bình, Nam Định, H Đông v H Nam năm 1964 đ có 57.500 lúa bị bệnh v ng lụi t n phá ho n to n v h ng trăm ng n bị nhiễm bệnh Bệnh đạo ôn phá hại thờng xuyên vùng đồng Bắc bộ, Bắc v Nam trung bộ, miền Nam Từ năm 1981 đến năm 1986 đ thờng xuyên phá hại 10.000 ha, có lúc tới 160.000 bị nhiễm đạo ôn (1985) với mức thiệt hại nặng, nhẹ khác Cây khoai tây, c chua, ớt, cam, chanh bị virus, hồ tiêu, c phê, thuốc bị tuyến trùng Các họ c bị héo xanh vi khuẩn v vô số bệnh hại rau, ăn quả, công nghiệp, l m thuốc, hoa cảnh gây thiệt hại to lớn Trong ®iỊu kiƯn nhiƯt ®íi khÝ mïa Êm v m−a nhiỊu quanh năm nớc ta Thiệt hại bệnh thể rõ rệt mặt sau: - Bệnh l m giảm suất trồng: bị chết, phận thân, c nh lá, củ, bị huỷ hoại Cây bị bệnh sinh trởng kém, còi cọc dẫn đến suất giảm Nếu dịch bệnh bùng phát l m giảm sản lợng diện tích rộng gây thiệt hại kinh tế lớn - Bệnh l m giảm phẩm chất nông sản thu hoạch v cất trữ: giảm giá trị dinh dỡng nh giảm h m lợng đạm, chất béo, đờng, vitamin, chất khoáng, v.v rau Tr ng ñ i h c Nông nghi p – Giáo trình B nh đ i cương - - Chè, thuốc lá, c phê bị nát vụn hay hơng vị chế biến, mía giảm h m lợng đờng, v đay sợi ngắn v giảm độ bền, dễ đứt, sợi bị hoen ố vi khuẩn phá hoại Nhựa cao su đ n hồi bị bệnh Vì vậy, bệnh l m giảm phẩm chất vật liệu d nh cho c«ng nghiƯp thùc phÈm, c«ng nghiƯp nhĐ - Bệnh l m giảm giá trị thẩm mỹ h ng hoá: bệnh loét cam gây vết lở, loét Bệnh sẹo chanh gây u lồi dạng chóp nón chanh Bệnh thán th xo i tạo vết đốm đen mặt sản phẩm n y bảo quản bị thối hỏng - Bệnh l m giảm sức sống gây chết hom giống, mắt ghép, gốc ghép, c nh ghép, sản phẩm nuôi cấy mô tế b o , nhân giống vô tính v giảm sức nảy mầm gây chết bệnh nhiễm hạt giống - Vi sinh vật gây bệnh tiết chất độc ảnh hởng trực tiếp đến bị bệnh, gây độc cho ngời v gia sóc NÊm mèc v ng (Aspergillus flavus) h¹i l¹c, đậu tơng, hạt sen tiết Aflatoxin gây ung th gan ngời v động vật - Nấm gây bệnh than đen lúa mì tiết độc tố gây ®éc cho ng−êi v gia sóc NÊm g©y bƯnh mèc hồng ngô Fusarium tiết độc tố liều cao cã thĨ g©y tư vong cho ng−êi - NÊm gây bệnh đốm vòng xu h o, bắp cải Alternaria brassicae tiết độc tố Alternarin - Bệnh gây ô nhiễm đất trồng trọt, vi sinh vật gây bệnh nằm t n d rơi xuống đất v tuyÕn trïng ®Êt ® l m ®Êt trë th nh mét n¬i nhiƠm bƯnh rÊt nguy hiĨm cho vơ trồng trọt sau Hoá chất phòng trừ bệnh tích tụ lại đất ức chế vi sinh vật có ích, l m ô nhiễm môi trờng 1.3 Đối tợng nghiên cứu khoa học bệnh Khoa học bệnh l môn khoa học nghiên cứu bị bệnh Trong ký sinh gây bệnh v môi trờng l điều kiện sinh thái quan trọng để vi sinh vật gây bệnh phát triển thuận lợi bị ức chế không phát triển v gây hại Đồng thời tính độc cao hay thấp vi sinh vật gây bệnh đ ảnh hởng rõ đến mức độ nhiễm bệnh Chính đối tợng nghiên cứu cụ thể môn bệnh l chất nguyên nhân gây bệnh cây, ảnh hởng môi trờng tới phát triển bệnh, biện pháp phòng trừ có hiệu kinh tế v bảo vệ môi trờng Chi tiết nội dung bao gồm: - Các đặc điểm triệu chứng v trình bệnh lý - Đặc điểm nguyên nhân gây bệnh v phơng pháp chẩn đoán xác định bệnh - Tác hại, tính phổ biến, quy luật ph¸t sinh v dù tÝnh bƯnh theo c¸c vïng sinh thái - Nghiên cứu tính miễn dịch, kháng bệnh, chịu bệnh v chất tợng n y để ứng dụng nghiên cứu tạo giống kháng bệnh Tr ng đ i h c Nơng nghi p – Giáo trình B nh đ i cương - - Đa biện pháp phòng trừ có hiệu v kinh tế v bảo vệ môi trờng 1.4 Những biến đổi sau bị bệnh a Những biến đổi cờng độ quang hợp Cây bị bệnh nói chung cờng độ quang hợp giảm Quá trình quang hợp giảm l diện tích giảm sút rõ rệt bị biến v ng, h m lợng diệp lục Nhiều bị bệnh rụng thấp lùn, nhỏ, biến dạng xoăn cuốn, còi cọc trờng hợp cờng độ quang hợp giảm b Những biến đổi cờng độ hô hấp Sự thay đổi cờng độ hô hÊp cđa c©y bƯnh chđ u phơ thc v o đặc tính ký sinh vật gây bệnh, đặc điểm giống nhiễm hay chống bệnh đặc điểm vùng mô tế b o bị nhiễm bệnh Đa số trờng hợp cờng độ hô hấp tăng cao giai đoạn đầu nhiễm bệnh sau giảm sút dần giảm nhanh chóng tuỳ theo đặc điểm kháng hay nhiễm bệnh ký chủ Khi cờng độ hô hấp tăng l lúc men oxy hoá tăng hoạt tính đột ngột (men catalase, peroxydase, polyphenoloxydase ) Quá trình n y đ tạo sản phẩm oxy hoá nh quinon Quinon tăng nồng độ đột ngột gây chết mô sản phẩm n y ức chế hoạt động men khử (dehydrase) nhÊt l ë c¸c gièng cã tÝnh kh¸ng cao HiƯn tợng biến đổi n y l hoạt động có ký sinh gây bệnh công v đợc coi nh phản ứng tự vệ tích cực chống bệnh c Phá huỷ trình trao đổi chất Khi bị bệnh trình trao đổi chất cá thể, giống cây, lo i nhiễm bệnh có thay đổi khác Tuy nhiên, quy luật chung l đạm tổng số v gluxit tổng số giảm trình phân huỷ mạnh Tỷ số dạng protein/phi protein giảm xuống Protein bị men protease ký sinh phân huỷ tạo lợng lớn axit amin tự do, nhiều axit amin tự lại phân giải v cuối tạo th nh NH3, bị lợng đạm lớn Đờng đa thay đổi, dạng đờng đa phân giải th nh dạng đờng đơn Các dạng gluxit dự trữ phân giải l m thay đổi số lợng v chất lợng gluxit mô bệnh (nh trờng hợp bệnh mốc sơng khoai tây, bệnh virus thực vật) bị bệnh có tợng vận chuyển, phân bố, điều ho chất đạm, gluxit bị phá vỡ d Sự biến đổi chế độ nớc Nớc l môi trờng quan trọng để thực chế sống thể Nớc định hoạt động men v phản ứng sống nhng bị bệnh luôn xảy tình trạng nớc bị bệnh Tr ng ủ i h c Nụng nghi p – Giáo trình B nh đ i cương - C−êng độ thoát nớc tăng mạnh l m nớc Sở dĩ xảy tợng n y l ký sinh đ phá huỷ hệ rễ v mạch dẫn nớc Một số ký sinh phá vỡ thân chảy nhựa v nớc từ bó mạch ngo i (hiện tợng xì mủ cao su) Ký sinh tác động tới độ thẩm thấu m ng tế b o, phá vỡ mô bảo vệ bề mặt lá, c nh,v.v l m tê liệt khả đóng mở khí khổng v thuỷ khổng Ký sinh gây hại bó mạch dẫn thờng l m bó mạch bị vít tắc, chất gôm, sản phẩm phân giải pectin, tạo khối u l m tắc bó mạch (bệnh sùi c nh chè) Bệnh gây héo v ng (các loại nấm Fusarium) hay g©y hÐo xanh (vi khuÈn Ralstonia solanacearum) e BiÕn ®ỉi cÊu t¹o cđa tÕ b o Khi nhiƠm bƯnh, ®é thÈm thÊu cđa m ng nguyªn sinh thay ®ỉi, ph¸ tÝnh b¸n thÈm thÊu cđa m ng tÕ b o, ph¸ hủ ¸p lùc thÈm thÊu v tÝnh trơng tế b o Độ keo nhớt chất nguyên sinh giảm sút Thay đổi số lợng v độ lớn lạp thể, ty thể, nhân tế b o v nhiều th nh phần khác tế b o Những biến đổi dẫn đến thay đổi hình thái tế b o v mô thực vật: Đó l sng tế b o, tăng kích thớc tế b o bất bình thờng (nh bệnh phồng chè) tạo khối u so tế b o sinh sản độ (nh bệnh sng rễ bắp cải, sùi c nh chè) gây chết mô v đám chết nh bệnh hại lá, thân, c nh, củ Những tác hại hao hụt lợng lớn chất dinh dỡng bị bệnh, phá vỡ hoạt động sinh lý bình thờng Quá trình tổng hợp v trao đổi chất nh: trao đổi đạm, gluxit, chất khoáng, chất điều ho sinh trởng bị rối loạn v phá vỡ Phá huỷ chế độ nớc l m ảnh hởng tới trình đồng hoá, sinh trởng, phát triển v tích luỹ vật chất L m thay đổi chức sinh lý - thay đổi cấu tạo tế b o v mô Cuối trờng hợp bệnh nặng dẫn đến chết 1.5 Định nghĩa bệnh Để hiểu rõ nh n o l bị bệnh, trớc hết cần có khái niệm khoẻ Với quan điểm sinh thái học v di truyền học - nêu lên khái niệm khoẻ nh sau: Cây trồng đợc trồng trọt điều kiện sinh thái khí hậu đất đai v nguồn dinh dỡng, chế độ nớc không thay đổi giống nh bố mẹ chúng v luôn biểu rõ đặc điểm đặc trng lo i v giống chúng đợc coi l khoẻ Có nhiều định nghĩa bệnh cây, dựa v o định nghĩa nh khoa học đa định nghĩa khái quát nh sau: Định nghĩa: Bệnh l động thái phức tạp, đặc trng tr×nh bƯnh lý Trư ng đ i h c Nơng nghi p – Giáo trình B nh đ i cương - Do ký sinh vật hay môi trờng không thuận lợi gây nên Dẫn đến phá vỡ chức sinh lý bình thờng L m biến đổi cấu tạo tế b o v mô thực vật L m giảm suất v phẩm chất trồng Quá trình phụ thuộc v o chất ký chủ, ký sinh v môi trờng sống Định nghĩa n y đ giải thích đầy đủ đặc điểm bệnh - ý thứ nhất: Động thái phức tạp đặc trng trình bệnh lý: ý muốn giải thích rõ: Bệnh vi sinh vật gây nên phải có trình nhiễm bệnh, phát triển bệnh có thêi gian đ bƯnh (thêi kú tiỊm dơc) hay môi trờng phải có giai đoạn khủng hoảng ban đầu dẫn đến tợng bệnh lý rõ rệt, xảy cách đột ngột - ý thứ 2: ý n y đ phân hai loại bƯnh l bƯnh trun nhiƠm (do c¸c ký sinh vËt) v bƯnh kh«ng trun nhiƠm (do m«i tr−êng) - ý thứ 3: đ giải thích phần b i viết thay đổi sau bị bệnh quang hợp, hô hấp, trao đổi chất, trao đổi chÊt, trao ®ỉi n−íc ®ã l thay ®ỉi tÊt u xảy bị bệnh - ý thứ 4: l m thay đổi tế b o v mô l hậu thay đổi hoạt động sinh lý - ý thứ 5: l m giảm suất v phẩm chất ý n y nói lên quan điểm kinh tế v sử dụng nh nghiên cứu bệnh Nếu bệnh không l m giảm suất, phẩm chất bệnh không cần phải phòng trừ - ý thứ 6: Quá trình n y phơ thc v o ký chđ thc nhãm gièng kháng bệnh, chịu bệnh hay nhiễm bệnh, phụ thuộc độ ®éc cđa ký sinh v diƠn biÕn bƯnh nỈng hay nhẹ phụ thuộc môi trờng sống điều kiện thêi tiÕt khÝ hËu, ®Êt ®ai v sinh tr−ëng, dinh dỡng chủ l điều kiện ảnh hởng rõ 1.6 Các triệu chứng bệnh gây nên Triệu chứng bệnh l biến đổi mô bệnh biĨu hiƯn bªn ngo i m ta cã thĨ quan sát, nhận biết đợc Số lợng bệnh nhiều, tuỳ theo tính chất khác loại bƯnh (bƯnh to n bé hc bƯnh cơc bé) m triƯu chøng thĨ hiƯn rÊt kh¸c nhau, nh−ng cã thể phân chia th nh nhóm loại hình triệu chứng thờng gặp nh sau: ã Vết đốm: Hiện tợng chết đám mô thực vật, tạo vết bệnh cục bộ, hình dạng to, nhỏ, tròn, bầu dục, bất định hình, m u sắc vết bệnh khác (đen, trắng, nâu, đỏ, ) gọi chung l bệnh đốm lá, Tr ng ủ i h c Nơng nghi p – Giáo trình B nh ñ i cương - ã Thối hỏng: Hiện tợng mô tế b o (củ, rễ, quả, thân chứa nhiều nớc v chất dự trữ), mảnh gian b o bị phân huỷ, cấu trúc mô bị phá vỡ trở th nh khối mềm nhũn, nát, nh o khô teo, có m u sắc khác (đen, nâu sẫm, xám trắng ), có mùi ã Chảy gôm (nhựa): Hiện tợng chảy nhựa gốc, thân, c nh cây, tế b o hoá gỗ bệnh phá hoại (bệnh chảy gôm cam, chanh) ã Héo rũ: Hiện tợng héo chết, c nh héo xanh, v ng, rũ xuống Các bó mạch dẫn bị phá huỷ, thâm đen rễ bị thối chết dẫn đến tình trạng thiếu hụt nớc, tế b o sức trơng ã Biến m u: Bộ phận bị bệnh m u xanh phá huỷ cấu tạo v chức diệp lục, h m lợng diệp lục giảm, gây tợng biến m u với nhiều hình thức khác nhau: loang lổ (bệnh khảm lá), v ng lá, bạch tạng (trắng lợt),v.v ã Biến dạng: Bộ phận bị bệnh dị hình: Lá xoăn, dăn dúm, lá, cong queo, lïn thÊp, cao vèng, bói c nh (chỉi thÇn), chun ã U sng: Khối lợng tế b o tăng lên độ, sinh sản tế b o rối loạn tạo u sng phËn bÞ bƯnh (rƠ, c nh, cđ) nh− bƯnh tun trùng nốt sng (Meloidogyne sp.), bệnh sng rễ cải bắp (Plasmodiophora brassicae), bệnh u sng lâu năm (nh Agrobacterium tumefaciens) ã Lở loét: Bộ phận bị bệnh (quả, thân, c nh, gèc) nøt vì, lt, lâm nh− c¸c bƯnh loét cam, ghẻ khoai tây ã Lớp phấn, mốc: Trên bề mặt phận bị bệnh (lá, ) bao phủ kín to n chòm lớp sợi nấm v quan sinh sản b o tư rÊt máng, xèp, mÞn nh− líp bét phÊn m u trắng đen (bệnh phấn trắng, bệnh muội đen) • ỉ nÊm: VÕt bƯnh l mét ỉ b o tử nấm lên, lộ bề mặt lớp biểu bì nứt vỡ Loại triệu chứng n y đặc trng cho số bệnh nh bệnh gỉ sắt hại cây, bệnh đốm vòng nấm ã Mumi: Hiện tợng quả, hạt, cờ bị phá huỷ to n bên chứa đầy khối sợi nÊm v b o tư nh− bét ®en gäi l bệnh than đen (bệnh hoa cúc lúa, phấn đen ngô) Trong dạng triệu chứng nấm thờng gây tợng: vết đốm, thối hỏng, chảy gôm, héo rị d¹ng hÐo v ng, u s−ng, lë lt, líp phÊn mèc, ỉ nÊm, mumi Vi khn phỉ biÕn g©y dạng: vết đốm, thổi hỏng, héo rũ dạng hÐo xanh u s−ng, lë loÐt Virus th−êng g©y dạng: biến m u, biến dạng, có vết đốm Phytoplasma, viroide, tuyến trùng thờng gây biến m u, biến dạng, u sng Vì vậy, triệu chứng bệnh dễ bị nhầm lẫn v l m cho bệnh chẩn đoán phải dùng nhiều phơng pháp phối hợp với xác định đợc nguyên nhân gây bệnh xác đặc biệt l dùng phơng pháp lây bệnh nhân tạo Tr ng ủ i h c Nơng nghi p – Giáo trình B nh ñ i cương - 10 II Đặc tính ký chủ ký sinh gây bệnh Cây thờng bị nhiễm bệnh sau trình xâm nhiễm v gây bệnh loại ký sinh vật hay tác động thời gian tơng đối d i yếu tố môi trờng Bệnh môi trờng hay gọi l bƯnh kh«ng trun nhiƠm, bƯnh sinh lý l u tố môi trờng gây đợc xem xét phần sau giáo trình n y Bệnh truyền nhiƠm l nhãm bƯnh chóng ta ®Ị cËp ®Õn phần n y l bệnh ký sinh vật gây Đó l bệnh vi sinh vật hay động vật bậc thấp gây hại Ví dơ: bƯnh virus, vi khn, nÊm, Phytoplasma, Viroide, tun trùng, Protozoa, thực vật thợng đẳng ký sinh gây 2.1 Sự tác động vi sinh vật gây bệnh v o c©y Nãi chung, vi sinh vËt g©y bƯnh công v o thờng gây hiƯn t−ỵng sau: - Sư dơng vËt chÊt dinh d−ìng để nuôi sống thể chúng - Phá huỷ trình vận chuyển v tích luỹ chất dinh dỡng l m hỏng bó mạch, huỷ hoại rễ - Trong ký sinh mô bệnh, chúng thờng sinh hoạt chất sinh học, thực chất l chất độc v men đầu độc, phân giải tế b o v l m rối loạn, phá vỡ trình trao đổi chất Chúng ta định nghĩa: - Vi sinh vật gây bệnh: l sinh vật dị dỡng cách lấy dinh dỡng ký chủ để sống phát triển v sinh sản - Cây ký chủ: l m ký sinh sống, phát triển v l ngn cung cÊp dinh d−ìng cho ký sinh - V× vËy, thùc chÊt mèi quan hÖ ký sinh l sù thiÕt lËp quan hƯ ký sinh v ký chđ sÏ xảy ký sinh xâm nhập v gây bệnh đợc ký chủ - ký sinh thắng đợc đề kháng ký chủ để thiết lập mèi quan hƯ ký sinh KÕt thóc cđa mèi quan hệ n y, có bệnh bị nhiễm bƯnh 2.2 Ph©n chia tÝnh ký sinh T theo tÝnh chất v phơng thức ký sinh, chia vi sinh vật ký sinh cách đơn giản th nh c¸c nhãm nh− sau: a Nhãm vi sinh vËt ký sinh chuyªn tÝnh Ký sinh chuyªn tÝnh (ký sinh bắt buộc) l nhóm ký sinh có khả sử dụng vật chất hữu sẵn có mô sống v phát triển Chúng không sử dụng hay không phát triển mô đ chÕt (t n d− c©y trång) Trư ng đ i h c Nơng nghi p – Giáo trình B nh ñ i cương - 11 Ví dụ: Các lo i nấm sơng mai, gỉ sắt, nấm phấn trắng hại cây, nhóm ký sinh chuyên tính kể đến virus, phytoplasma, viroide, nh−ng cã nh÷ng quan niƯm cho r»ng ký sinh vËt n y cã møc ®é ký sinh cao gọi l ký sinh tuyệt đối ë møc ®é tÕ b o, tÕ b o phát triển mạnh, tế b o chết chúng bị tiêu diệt b Nhóm vi sinh vật bán ký sinh (hoại sinh tự có điều kiện) L ký sinh vật chủ yếu sống mô sống (thờng phận bánh tẻ, gi ), sinh trởng v sinh sản cách nhân vô tính (nấm) nhng điều kiện định n o trình phát triển cá thể (hữu tính) ký chủ đồng ruộng có khả sống v tồn t n d trồng, mô cắt rời số phận đ chết hẳn Các loại nấm lúa von, tiêm lửa thuộc líp nÊm tói v nhiỊu lo i nÊm kh¸c l lo i thuộc nhóm bán ký sinh điển hình c Nhóm vi sinh vật bán hoại sinh (ký sinh tự có điều kiện) Nhóm n y gồm vi sinh vật gây bệnh phần đ gi , suy yếu nh gi , gèc th©n, cđ hay c©y suy u, chóng cã thể tồn mô đ chết, t n d trồng đất, hạt, quả, củ,v.v Điển hình nhóm n y kể ®Õn mét sè lo i nÊm mèc nh− Aspegillus niger gây bệnh héo rũ gốc mốc đen lạc; hay nấm gây bệnh bắp cải Botrytris cinerea v nhiỊu lo i nÊm mèc kh¸c C¸c nÊm n y có khả gây hại bảo quản nông sản kho thô sơ nhiệt độ bình thờng d Nhóm vi sinh vật hoại sinh Nhóm n y gồm vi sinh vật sống vật chất hữu mô đ chết, t n d trồng, đất v n−íc, Nhãm vi sinh vËt n y kh«ng cã khả sống ký sinh sống, kể mô đ suy yếu Nhóm sinh vËt ho¹i sinh n y cã ý nghÜa rÊt quan trọng việc phân huỷ chất hữu giải phóng CO2 bổ xung v o bầu khí trái đất Chúng giúp phân huỷ chất hữu v tạo mïn cho ®Êt, sè ®ã cã rÊt nhiỊu lo i vi sinh vật đối kháng sống đất đ đợc sử dụng để thực biện pháp sinh học phòng chống bệnh Trớc đây, nhóm n y đợc coi nh ho n to n không gây hại cho c©y trång, nh−ng ng y mét sè vi khuÈn v nấm hoại sinh phá hại kho nh− nÊm mèc Mucor, Penicillium v mét sè lo i vi khuẩn Sự phân chia bốn mức độ nhãm vi sinh vËt ký sinh chØ mang tÝnh tơng đối, điều kiện sinh thái môi trờng thay ®ỉi cã thĨ mét vi sinh vËt ë nhãm n y mang đặc tính nhóm khác v phân chia nhóm l nhóm chủ yếu m 2.3 Quá trình tiến hoá tính ký sinh Ng y nay, tất vi sinh vật ký sinh đ đợc xếp theo nhóm v phân loại tơng đối đầy đủ kể sử dụng đến kỹ thuật sinh học phân tử để xếp phân nhóm v đơn vị phân loại nhỏ Tuy nh nghiên cứu cổ sinh học, bƯnh lý thùc vËt, di trun häc v rÊt nhiỊu ngh nh khoa học có liên quan đ thấy rõ ngn gèc cđa c¸c vi sinh Trư ng đ i h c Nơng nghi p – Giáo trình B nh ñ i cương - 12 vật trái đất chủ yếu bắt nguồn từ đất Vi sinh vật đất (nhóm hoại sinh) cã hƯ thèng men rÊt phong phó v cã nhiỊu chất độc để tìm thức ăn v tự bảo vệ thể chúng sống môi tr−êng thiªn nhiªn Khi tiÕp xóc víi tÕ b o suy yếu nh gi , rễ cây, gốc thân chúng đ hút đợc thức ăn dễ d ng v trở th nh nhóm bán hoại sinh, lúc n y số lợng men v độc tố bắt đầu giảm Khi loại bán hoại sinh công v o qua vết thơng v mô suy yếu, phát triển lên bánh tẻ, chúng dần trë th nh vi sinh vËt b¸n ký sinh - lần thức ăn đ đợc thay đổi với số lợng dinh dỡng dồi d o hơn, men v độc tố không cần dùng đến lại giảm đến trở th nh ký sinh chuyên tính phá hại phận non v phát triển mạnh, vi sinh vật ký sinh chuyên tính đ xâm nhập v o cách nhẹ nh ng chí bảo vệ mô xanh tơi lúc ký sinh đ bắt đầu sinh sản số lợng lớn cá thể t n lụi Nhóm vi sinh vËt n y cã rÊt Ýt men v độc tố Đặc biệt vi sinh vật nh Virus, Viroide v Phytoplasma hầu nh men v độc tè, chØ cã virus giÕt vi khuÈn (Bacteriophage) míi cã hệ thống men để công tế b o vi khuẩn Tóm lại tiến hoá tính ký sinh l : Hoại sinh chuyên tính Bán hoại sinh Bán ký sinh Ký sinh chuyên tính Do đặc điểm trên, vi sinh vật ký sinh chuyên tính thờng phát sinh mạnh đợc chăm sóc tốt, điều kiện thâm canh cao, đặc biệt l đợc bón thừa đạm, lân v lợng phân cao cân đối hay giống chịu phân có tợng lốp, v.v Trái lại nấm, vi khuẩn bán hoại sinh v bán ký sinh thờng phá hại đợc chăm sóc kém, phát triển hay phận suy yếu 2.4 Khả gây bệnh vi sinh vật gây bệnh Khả gây bệnh vi sinh vật g©y bƯnh: th−êng gäi l cao hay thÊp Vi sinh vật gây bệnh có khả gây bệnh hay không phụ thuộc v o khả gây bệnh kí sinh, khả n y đợc xác định tính xâm lợc, tính gây bệnh v tính độc a Tính xâm lợc: l khả vi sinh vật xâm nhập v o bên cây, vợt qua phản ứng tự vệ để thực bớc đầu trình thiết lập mối quan hệ kí sinh b Tính gây bệnh: l khả vi sinh vật sau xâm nhập gây tác động bên để thực thiết lập mối quan hƯ kÝ sinh, biĨu hiƯn râ rƯt cđa tÝnh g©y bệnh l triệu chứng bệnh đặc trng kí chủ sau bị nhiễm bệnh c Tính độc: Tính độc (Virulence) l khái niệm bao quát hai khái niệm tính xâm lợc v tính gây bệnh, biểu mức độ lây nhiễm nặng hay nhẹ, mức độ gây hại nặng hay nhẹ Tính độc có nhiều biến động phân hoá tuỳ theo đặc điểm di truyền giống khác thuộc lo i nhiễm bệnh Hiện tợng n y giải thích giống bị chủng độc kí sinh n o gây hại nặng giống khác lo i hầu nh không bị chủng n y gây hại Tr ng ủ i h c Nơng nghi p – Giáo trình B nh ñ i cương - 13 Bình thờng, tính xâm lợc, tính gây bệnh cao có tính độc cao, nhng số trờng hợp không ho n to n nh Sự khác tính độc thể theo chủng sinh lý v nòi sinh học khác vi sinh vật gây bệnh 2.5 Phạm vi gây bệnh vi sinh vật gây bệnh (Tính chuyên hoá, chuyên hoá quan, chuyên hoá giai đoạn, phạm vi ký chủ) Tính chuyên hoá vi sinh vật gây bƯnh (th−êng gäi l réng hay hĐp) TÝnh kÝ sinh cđa vi sinh vËt th−êng thĨ hiƯn sù chän läc, mét chđng hay nßi kÝ sinh, hay mét lo i kÝ sinh chØ cã thĨ kÝ sinh trªn mét lo i nhiều lo i Khả kí sinh n y đợc gọi l phạm vi kí chủ rộng hay hẹp a Tính chuyên hoá rộng Ví dụ: nấm khô vằn lúa Rhizoctonia có phạm vi kí chủ 180 lo i Virus khảm thuốc (Tabacco mosaic virus) có phạm vi kí chủ tới 230 lo i b Tính chuyên hoá hẹp Thể kí sinh gây bệnh lo i hay mét sè Ýt lo i c©y nh−: nấm sơng mai, nấm than đen, nấm gỉ sắt c phª, mét sè vi khuÈn Xanthomonas Trong mét lo i kí sinh nh nấm Pyricularia oryzae gây bệnh đạo ôn lúa nấm gỉ sắt lúa mỳ Puccinia graminis hình th nh nhiều dạng chuyên hoá, chủng sinh lý, nòi sinh học khác tính gây bệnh, tính chuyên hoá, tính độc khác biểu giống khác Tính chuyên hoá thể tính chuyên hoá mô, chuyên hoá quan, chuyên hoá phận : có kí sinh hại gốc thân, có kí sinh phá rễ, có kí sinh lại tập trung phá hoa v hay Một số kí sinh lại thể phá hoại mang tính chuyên hoá giai đoạn hay tính chuyên hoá tuổi sinh lý Bệnh phá hoại non hay gi 2.6 Những khái niệm ký chủ Cây ký chủ: nh đ định nghĩa kí chủ l m ®ã kÝ sinh lÊy chÊt dinh d−ìng ®Ĩ sèng, ph¸t triển v sinh sản Cây kí chủ thờng đợc gọi tên theo khái niệm khác nhau: kí chủ chÝnh, c©y kÝ chđ phơ, c©y kÝ chđ trung gian v kí chủ dại Ví dụ: Bệnh bạc lúa hại lúa v v i cỏ, nhng lúa đợc coi l kí chủ v gọi tên l bệnh lúa lúa l c©y cã ý nghÜa kinh tÕ cao nhÊt số bị bệnh Cây cỏ đợc coi l kí chủ dại Bệnh gỉ sắt ngô sinh nhiều dạng b o tử v b o tử thờng buộc phải sống khác Giai đoạn b o tử hạ v b o tử đông sống ngô, giai đoạn b o tử xuân sống chua me đất (Oxalis sp.) Cây chua me đất đợc coi l kí chủ trung gian Trư ng đ i h c Nơng nghi p – Giáo trình B nh đ i cương - 14 Ký chđ phơ th−êng dùng để trồng có giá trị kinh tế thấp nh bệnh hại lúa mì có cao lơng cao lơng đợc coi l ký chủ phụ III CHẩN ĐOáN BệNH CÂY 3.1 Mục đích Chẩn đoán bệnh nhằm xác định nguyên nhân gây bệnh v biểu bên ngo i bệnh, phân biệt rõ với tợng bệnh ký sinh khác v môi trờng gây nên, từ có biện pháp phòng trừ đắn 3.2 Các điều kiện cần thiết để chẩn đoán bệnh a) Ngời l m công tác chẩn đoán: Để chẩn đoán đợc bệnh ngời l m công tác chẩn đoán phải l ngời đợc đ o tạo quy môn bệnh v có 3-5 năm tham gia hoạt động điều tra, nghiên cứu bệnh b) Thông tin v khu vực cần chẩn đoán: phải biết rõ chất đất, chế độ chăm sóc, đậc điểm giống cây, giai đoạn sinh trởng, điều kiện khí hậu thời tiết, mùa vụ, biện pháp phòng trừ đ thực hiện, trồng vụ trớc c) Cần có trang thiết bị v t i liệu tối thiểu để chẩn đoán bệnh chÝnh x¸c nh−: kÝnh hiĨn vi quang häc, c¸c trang thiết bị khác để nuôi cấy vi sinh vật Tối thiểu có Kit ELISA để xác định (nếu l bệnh virus) có hoá chất cần thiết giúp cho chẩn ®o¸n nhanh v chÝnh x¸c 3.3 Kh¸i qu¸t vỊ c¸c bớc chẩn đoán bệnh Bớc1: Quan sát bao quát ®ång rng ®Ĩ ®¸nh gi¸ møc ®é phỉ biÕn cđa bệnh v giống bị hại chủ yếu, mức độ hại v thêi gian xt hiƯn bƯnh B−íc 2: Ph©n biƯt triệu chứng bệnh đặc biệt khác với bệnh ký sinh khác v môi trờng gây Tìm đợc điểm đặc thù phận bị hại Bớc 3: Xác định đợc vi sinh vật gây bệnh v đặc điểm chúng để đến khả phòng trừ có hiệu v kinh tế Chẩn đoán bệnh phức tạp, lý chủ yếu l bệnh buộc phải tồn v phát triển điều kiện sinh thái môi trờng biến động Tình trạng bệnh lý lại phụ thuộc lo i, giống, tuổi v chất vi sinh vật gây bệnh Do đó, cần có tác phong linh hoạt v đặc biệt không bỏ qua chi tiết đặc biệt thu đợc hiệu cao 3.4 Các phơng pháp chẩn đoán bệnh a Phơng pháp chẩn đoán triệu chứng bên ngo i Dù chẩn đoán phơng pháp n o nữa, cuối kết luận triệu chứng bên ngo i l phơng pháp quan trọng chẩn đoán bệnh Thông qua biĨu hiƯn b»ng triƯu chøng bªn ngo i, chóng ta hiểu biết nhiều nguyên nhân gây bệnh bên v ngợc lại Điều quan trọng chẩn đoán triệu chứng Tr ng ủ i h c Nơng nghi p – Giáo trình B nh ñ i cương - 15 l phải tìm đặc điểm riêng biệt loại nhóm bệnh v loại nguyên nhân gây bệnh để so sánh chúng với nhau, tránh mắc phải nhầm lẫn Luôn phải lu ý tợng: nguyên nhân gây bệnh gây nhiều dạng triệu chứng khác v ngợc lại - triệu chứng nhiều nguyên nhân khác gây Triệu chứng bệnh phụ thuộc v o mức độ nặng nhẹ bệnh gây phụ thuộc v o giống khác nhau, chăm sóc khác v điều kiện sinh thái v khí hậu khác v o chất nguyên nhân gây bệnh khác đặc biệt l tính độc vi sinh vật khác Chẩn đoán b»ng triƯu chøng lu«n rÊt quan träng, rÊt kinh tÕ v mang lại hiệu cao Tuy nhiên, chẩn đoán bệnh sử dụng phơng pháp phiến diện nên ngời ta thờng dùng nhiều phơng pháp phối hợp để kết luận nguyên nhân gây bệnh cách xác b Phơng pháp chẩn đoán kính hiển vi quang học thông thờng Nh÷ng vi sinh vËt cã thĨ kiĨm tra b»ng kÝnh hiĨn vi bao gåm nÊm, x¹ khn, vi khn…Virus, phytoplasma, viroide kh«ng thĨ sư dơng kÝnh hiĨn vi th−êng m phải dùng kính hiển vi điện tử phóng đại h ng vạn đến h ng chục vạn lần để quan sát chúng nhỏ bé Muốn chẩn đoán vi sinh vËt b»ng kÝnh hiĨn vi th−êng ph¶i cã mét số điều kiện sau: - Phải nắm vững phơng pháp sư dơng kÝnh hiĨn vi quang häc - Thu mÉu nấm, vi khuẩn ngo i đồng phải l mẫu có vết bệnh phát triển hình th nh Nếu lấy vết bệnh đ cũ dễ nhầm nguyên nhân gây bệnh với vi sinh vật hoại sinh, phụ sinh rơi ngẫu nhiên v mọc tạp bề mỈt vÕt bƯnh - NÕu vÕt bƯnh míi ch−a cã b o tử hay dịch b o tử cần để mẫu bệnh (thân, c nh, quả) v o hép Èm petri cã lãt giÊy Èm ®Ĩ ®iỊu kiện nhiệt độ phòng hay tủ ấm nhiệt độ ấm (300C) h ng ng y phát sợi nấm v b o tử xuất bề mặt vết bệnh để lấy mẫu quan sát - Có thể quan sát trực tiếp b o tử vết bệnh dới kính hiển vi: hình dạng, m u sắc, đo kích thớc b o tử, dùng phơng pháp nhuộm methylen xanh, nitrat bạc 10% từ 3-5 phút, thấm khô nhẹ nhuộm tiếp v o dung dịch KOH 10%, hay nhuộm KMnO4 5%, Fucsin Fenolđể phát thể sợi nấm hay vi khuẩn có mô bƯnh - Khi quan s¸t vi khn cã thĨ thùc kỹ thuật chẩn đoán nhanh nh ngâm đầu bệnh v o dung dịch NaCl 1% 15 - 30 phút v quan sát giọt dịch vi khuẩn xuất đầu nhô lên mặt nớc Nhuộm gram, nhuộm lông roi, xem kính dầu độ phóng đại 400 lần v mô tả hình dạng, m u sắc, đo đếm kích thớc, vi khuẩn mét Trư ng đ i h c Nơng nghi p – Giáo trình B nh đ i cương - 16 c¸ch chÝnh x¸c Tế b o vi khuẩn đợc quan sát rõ kính hiển vi huỳnh quang dùng phơng pháp nhuộm kháng thể huỳnh quang vi khuẩn c Phơng pháp chẩn đoán sinh học Với vi sinh vật chủ yếu l nấm v vi khuẩn cần phải phân lập môi trờng dùng mẩu nhỏ mô nhiễm bệnh Cắt phần gần vết bệnh cấy v o môi trờng, dùng phơng pháp pha lo ng v cấy truyền để phân ly Các loại môi trờng thờng dùng l : môi trờng Water Agar (WA) (th−êng dïng 20g Agar v 1000ml n−íc cÊt) Sau l môi trờng phân lập nấm (mPDA, CLA, PDA, CMA) môi trờng phân lập vi khuẩn (SPA, Kings B, TZC, Wakimoto, PS, PG, PGA) Trong môi trờng, có môi trờng gọi l môi trờng tổng hợp (tất chất biết rõ th nh phần hoá học, thờng l môi trờng lỏng) Môi trờng bán tổng hợp l môi trờng có số chất chất không rõ th nh phần hoá học Ví dụ: môi trờng PGA: Khoai tây : 200g - cha rõ th nh phần hoá học Glucose : 20g Agar : 15g - ch−a râ th nh phÇn hoá học Nớc cất : 1000ml Có môi trờng gọi l môi trờng thiên nhiên (không biết th nh phần hoá học chất tạo môi trờng) Ví dụ : môi trờng củ khoai tây, môi trờng củ c rốt, môi trờng khoai tây - Agar tính chất vật lí Môi trờng chia th nh dạng môi trờng lỏng v môi trờng đặc (khi dùng Agar) Nuôi cấy vi sinh vật môi trờng lỏng thiếu oxy thờng phải dùng máy lắc để tăng lợng oxy cho môi trờng d Phơng pháp dùng kháng huyết chẩn đoán bệnh Kháng huyết để chẩn đoán bệnh hại đ đợc thử nghiệm dựa tợng có chất lạ (kháng nguyên) v o thể, thể có khả kháng lại cách tạo đáp ứng miễn dịch hình th nh kháng thể Lúc đầu, phơng pháp n y sử dụng cho bệnh virus nhng phổ biến chẩn đoán vi khuẩn v số bệnh khác Kháng thể đa dòng (Polyclonal antibody) Khi ta tiêm dịch virus đợc l m tinh khiết từ thị bị nhiễm bệnh v o thể động vật, thể động vật thực đáp ứng miễn dịch Trong trờng hợp n y thể động vật đ tạo nên nhiều kháng thể nhiều dòng tế b o B tạo Đó l polyclonal antibody hay gọi l kháng thể đa dòng Trong chẩn đoán bệnh kháng thể đa dòng có hiệu cao việc loại trừ bị bệnh dù chúng chủng n o thc cïng mét lo i vi sinh vËt g©y bƯnh Kháng thể đơn dòng (Monoclonal antibody) L kháng thể không nhân lên thể động vật m nhân lên tế b o ung th đợc nuôi cấy plastic Tóm tắt phơng pháp tạo kháng thể đơn dòng Tr ng ủ i h c Nụng nghi p – Giáo trình B nh đ i cương - 17 ... i h c Nơng nghi p – Giáo trình B nh đ i cương - Chơng I Khái niệm chung bệnh I BệNH CÂY Và SảN XUấT NÔNG NGHIệP 1. 1 Lịch sử khoa học bệnh Khoa học bệnh đợc hình th nh... khoai tây A Mayer (18 86), D Ivanopski (18 92), M Bayerinck (18 98) t×m virus khảm thuốc Nocar v Roux (18 98) phát Mycoplasma ë ®éng vËt Schulrt v Folsom (19 17 - 19 21) tìm thấy bệnh củ khoai tây có... giíi nh−: ë H Lan (18 91) , Mü (19 08), Nhật Bản (19 16), Canada (19 30), ấn Độ (19 47) Hội nghị nghiên cứu bệnh lần thứ đ tập hợp nhiều nh nghiên cứu bệnh Luân Đôn (Anh) v o 8 /19 68 mở đầu cho hoạt