Giới thiệu một số kỹ thuật bảo quản vi sinh vật (tt) 5. Một số phương pháp phổ biến sử dụng trong bảo quản các nhóm vi sinh vật cụ thể: 5.3. Các phương pháp dùng cho bảo quản nấm sợi: Chuẩn bị: 1, Chuẩn bị dung dịch glycerol 10% (3 ml trong ống nghiệm) khử trùng ở 121 o C trong 15 phút. Ống nhựa nút xoáy (2 ml), rửa sạch trong sonic cleaner, khử trùng ở 170 o C trong 3 giờ. 2, Chuẩn bị mẫu nấm sợi trên môi trường thạch đĩa có lượng bào tử lớn. Cách tiến hành: 1, Dùng pipet pasteur hút khoảng 0,3 ml glycerol đã thanh trùng vào ống nhựa đựng mẫu. Sau đó dùng dao vô trùng cắt lấy 1 miếng nhỏ môi trường chứa cả sợi và bào tử nấm sợi cho vào ống nhựa. Lượng glycerol đủ để phủ lên miếng thạch mẫu, đậy nút và bao băng parafil sau đó dán nhãn. 2, Mẫu trước tiên phải để ở 5 o C (tạo điều kiện cho glycerol đi vào tế bào), sau đó được làm lạnh sâu tử 25 o C xuống -55 o C với tốc độ -1 o C/phút. Trong trường hợp không có thiết bị làm lạnh thì có thể để - 20 o C trong 3 giờ, sau đó chuyển sang -80 o C hay nitơ lỏng (-196 o C). Chú ý: Việc bảo quản theo phương pháp lạnh sâu thích hợp với hầu hết các nấm sợi sinh bào tử và tế bào có vách ngăn. Nhưng phương pháp này tỏ ra không thích hợp với các nấm sợi không sinh bào tử và không có vách ngăn. Trong trường hợp này cần nuôi cấy nấm sợi trên môi trường thích hợp để tạo bào tử. Nếu không khắc phục được thì phải tiến hành nuôi trên môi trường dịch thể để thu lấy sinh khối và giữ trong glycerol 10% như trên. Đánh giá khả năng sống của mẫu bảo quản: 1, Làm tan mẫu (mẫu lấy từ tủ lạnh sâu -80 o C hoặc nitơ lỏng - 196 o C) trong bể ổn nhiệt 37 o C trong 2 phút. 2, Dùng que cấy lấy các miếng môi trường thạch đặt vào 3 vị trí khác nhau trên môi trường thạch đĩa thích hợp. Để ở nhiệt độ thích hợp và xem khả năng mọc sau thời gian thích hợp (2-4 ngày). Chú ý khi lấy mẫu cần lấy cả sợi nấm để đưa vào môi trường thạch đĩa. Một số điều chú ý đối với bảo quản nấm sợi: - Ảnh hưởng của ánh sáng với quá trình hình thành bào tử: Phần lớn trường hợp thì sự thành công của phương pháp bảo quản phụ thuộc vào số lượng bào tử. Ánh sáng là một tác nhân quan trọng đối với quá trình hình thành bào tử của nấm sợi, ánh sáng có bước sóng ngắn có tác dụng kích thích quá trình hình thành bào tử, ánh sáng gần vùng cực tím (3100 – 4000 nm) có tác dụng thay đổi màu sắc và kích thước khuẩn lạc. - Thành phần môi trường: Nói chung các môi trường có thành phần dinh dưỡng nghèo thì thường cho lượng bào tử lớn. - Tránh nhiễm tạp các con mạt (mite), các chủng nấm sợi lưu giữ thường bị mạt phá hoại. Đầu tiên chúng ăn chủng giống và làm hỏng, sau đó gây tạp nhiễm do mang bào tử và vi khuẩn trên cơ thể từ ống này sang ống khác. Vì lý do trên mà cần có biện pháp hạn chế mạt, thông thường các chủng giống phải được bảo quản ở nơi sạch, nhiệt độ 4-8 o C. Vietsciences- Dương Văn Hợp, Nguyễn Lân Dũng . Giới thiệu một số kỹ thuật bảo quản vi sinh vật (tt) 5. Một số phương pháp phổ biến sử dụng trong bảo quản các nhóm vi sinh vật cụ thể: 5.3. Các phương pháp dùng cho bảo quản. đĩa. Một số điều chú ý đối với bảo quản nấm sợi: - Ảnh hưởng của ánh sáng với quá trình hình thành bào tử: Phần lớn trường hợp thì sự thành công của phương pháp bảo quản phụ thuộc vào số. Chú ý: Vi c bảo quản theo phương pháp lạnh sâu thích hợp với hầu hết các nấm sợi sinh bào tử và tế bào có vách ngăn. Nhưng phương pháp này tỏ ra không thích hợp với các nấm sợi không sinh