y tế Vụ khoa học đào tạo Kiểm nghiệm dợc phẩm (Sách dùng đào tạo dợc sĩ đại học) Mà số: đ.20.Z.08 Nhà xuất Y học Hà nội - 2005 Chủ biên PGS.TS Trần Tử An Tham gia biên soạn PGS.TS Trần Tử An CN Trần Tích DS Nguyễn Văn Tuyền TS Chu Thị Lộc ThS.Nguyễn Thị Kiều Anh Tham gia tổ chức thảo ThS Phí Văn Thâm â Bản quyền thuộc Bộ Y tế (Vụ Khoa học Đào tạo) Lời nói đầu Thực Nghị định 43/2000/NĐ-CP ngày 30/8/2000 Chính phủ quy định chi tiết hớng dẫn triển khai Luật Giáo dục, Bộ Giáo dục & Đào tạo Bộ Y tế đà phê duyệt, ban hành chơng trình khung cho đào tạo Dợc sỹ đại học Bộ Y tế tổ chức thẩm định sách tài liệu dạy học môn sở chuyên môn theo chơng trình nhằm bớc xây dựng sách chuẩn công tác đào tạo dợc sĩ đại học Ngành Y tế Kiểm nghiệm khâu quan trọng hệ thống quản lý chất lợng toàn diện dợc phẩm Nó có mặt công đoạn sản xuất (kiểm nghiệm nguyên liệu, bán thành phẩm kiểm nghiệm sản phẩm cuối cùng), tồn trữ, lu thông sử dụng thuốc Các kỹ thuật đợc sử dụng kiểm nghiệm phong phú đa dạng thuộc lĩnh vực vật lý, hoá học sinh học Chính kiến thức cuả môn - đặc biệt môn học chuyên ngành nh hoá phân tích, hoá lý, vi sinh - thực sở cho môn học kiểm nghiệm dợc phẩm cần phải đợc nghiên cứu trớc Tuy nhiên, việc lựa chọn kỹ thuật cho đánh giá chất lợng nguyên liệu chế phẩm thuốc không phụ thuộc vào đặc điểm kỹ thuật phân tích mà phụ thuộc vào đặc điểm đối tợng phân tích dợc phẩm, kiến thức hoá dợc, dợc liệu, bào chế cần thiết cho kiểm nghiệm dợc phẩm Trong thực hành kiểm nghiệm dợc phẩm ngời ta sử dụng hầu hết kỹ thuật phân tích, phép đo vật lý nh đo điểm chảy, điểm sôi, số khúc xạ, áp suất thẩm thấu, kỹ thuật thờng gặp Tuy nhiên, giáo trình vật lý năm thứ nhất, nội dung đà đợc trình bày chi tiết lý thuyết thực hành Vì nội dung không đa vào chơng trình Kiểm nghiệm dợc phẩm Các phơng pháp hóa học hóa lý đợc sử dụng phổ biến: từ loại thực hành đơn giản nh chuẩn độ thể tích, so màu, đến loại đòi hỏi thiết bị đại nh sắc ký, quang phổ, khối phổ Nhng với thời lợng đơn vị học trình lý thuyết cho sinh viên năm thứ nên mục tiêu môn học đợc hạn chế vấn đề: Giải thích đợc nguyên lý số phơng pháp hoá học, hoá lý vi sinh thờng dùng kiểm nghiệm Trình bày đợc hệ thống đảm bảo chất lợng thuốc vị trí công tác kiểm nghiệm hệ thống Cuốn sách đợc chia làm chơng Sau chơng giới thiệu sơ lợc hệ thống đảm bảo chất lợng thuốc vai trò kiểm nghiệm, chơng trình bày nhóm phơng pháp hoá học, hoá lý sinh học Cơ sở lý thuyết phơng pháp kiểm nghiệm đà đợc nghiên cứu môn sở nh: phân tích, hoá lý, vi sinh chủ yếu giới thiệu nguyên tắc ứng dơng cđa chóng nh−: hiƯu chn thiÕt bÞ, kü tht xác định nồng độ, giảm thiểu sai số kiểm nghiệm Do hạn chế thời lợng môn học nên đề cập đến số phơng pháp thờng dùng nh: chuẩn độ môi trờng khan, quang phổ phân tử, HPLC Chơng trình bày sơ lợc nội dung kiểm nghiệm dạng bào chế: thuốc viên, thuốc tiêm, thuốc dùng Nhằm mục đích cung cấp cho sinh viên số kiến thức tính bền vững thuốc, làm sở giải thích bất thờng gặp trình kiểm nghiệm đánh giá chất lợng, giới thiệu thêm sơ lợc chơng cuối cùng: độ ổn định tuổi thọ thuốc Kết phân tích đánh giá chất lợng sản phẩm thực hành Kiểm nghiệm dợc phẩm Vì sản phẩm nh bao loại sản phẩm khác lu hành xà hội phải có chất lợng thỏa mÃn nhu cầu ngời tiêu dùng Để đảm bảo chất lợng kết quả, cần thực nhiều biện pháp đồng Đó là: Trang thiết bị phòng thí nghiệm, Kỹ kiểm nghiệm viên, Qui trình kỹ thuật kiểm nghiệm Thực hành tốt phòng thí nghiệm (GLP) sở để thực biện pháp nêu Những nội dung đợc giới thiệu chơng trình cao học thuộc chuyên ngành Kiểm nghiệm dợc phẩm độc chất Về cách tiếp cận nội dung, sách không nhắc lại qui trình kỹ thuật đà có Dợc điển mà cung cấp kiến thức cần thiết để sinh viên giải thích đợc qui trình thực hành kiểm nghiệm cho kết tin cậy Sách Kiểm nghiệm dợc phẩm đợc giảng viên Bộ môn Hoá Phân tích Trờng Đại học Dợc Hà Nội biên soạn Sách đà đợc Hội đồng chuyên môn thẩm định sách giao khoa tài liệu dạy học chuyên ngành Dợc Bộ Y tế thẩm định đợc Bộ Y tế ban hành làm tài liệu dạy – häc chÝnh thøc cđa Ngµnh Y tÕ giai đoạn Vụ Khoa học Đào tạo xin chân thành cảm ơn giảng viên Bộ môn Hoá Phân tích Trờng Đại học Dợc tham gia biên soạn sách Vì lần đầu xuất nên chắn nhiều thiếu sót, mong nhận đợc ý kiến đóng góp đồng nghiệp sinh viên để sách ngày hoàn thiện Vụ khoa học Đào tạo Bộ Y tế Mục lục Lời nói đầu Chơng Đại cơng Trần Tích 1.1 1.2 1.3 Chất lợng thuốc đảm bảo chất lợng 1.1.1 Thuốc yêu cầu chất l−ỵng 1.1.2 KiĨm tra chÊt l−ỵng thc 12 1.1.3 HƯ thèng tỉ chøc kiĨm tra chÊt l−ỵng thc 14 Công tác tiêu chuẩn hoá 16 1.2.1 Khái niệm 16 1.2.2 Công tác xây dựng tiêu chuẩn 18 1.2.3 Công tác áp dụng tiêu chuẩn thực tế 22 1.2.4 Giới thiệu Dợc điển Việt Nam 23 Kiểm nghiệm thuốc theo tiªu chn 26 1.3.1 LÊy mÉu kiĨm tra 26 1.3.2 TiÕn hµnh kiĨm nghiƯm 31 1.3.3 Néi dung chÝnh thực hành tốt phòng kiểm nghiệm (GLP) 34 Tài liệu tham khảo 36 Câu hỏi tự lợng giá 36 Chơng Kiểm nghiệm thuốc phơng pháp hoá học * Trần Tích, Trần Tử An 2.1 Các phản ứng định tính 37 2.2 Thử giới hạn tạp chất thuốc 48 2.2.1 Mục đích 48 *Phần 2.1 & 2.2 TrÇn TÝch, phÇn 2.3 & 2.4.: TrÇn Tư An 2.2.2 Phơng pháp xác định giới hạn tạp chÊt thuèc 48 2.2.3 Mét sè thuèc thö phản ứng hoá học để xác định giới hạn tạp chất 50 Chuẩn độ acid - base môi trờng khan 51 2.3.1 Vai trò dung môi 51 2.3.2 Khái niệm pH 52 2.3.3 Xác định điểm tơng đơng 53 2.3.4 ứng dụng kiểm nghiệm thuốc 54 Xác định hàm lợng nớc thuốc thải Karl fischer 58 2.4.1 Nguyên tắc 58 2.4.2 Pha chế xác định độ chuẩn 58 2.4.3 Xác định điểm tơng đơng 59 2.4.4 ứng dụng 59 2.5 Định lợng số chất hữu đa chức thuốc thử periodat 60 2.6 ứng dụng cặp ion kiểm nghiệm thuốc 61 Tài liệu tham khảo 65 Câu hỏi tự lợng giá 66 2.3 2.4 Chơng phơng pháp hoá lý kiểm nghiệm thuốc Nguyễn Văn Tuyền 3.1 3.2 Phơng pháp quang phỉ ph©n tư 68 3.1.1 Quang phỉ hÊp thơ UV − VIS 68 3.1.2 Quang phỉ hång ngo¹i (IR) 79 3.1.3 Quang phổ huỳnh quang 82 Phơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 84 3.2.1 Các thông số đặc trng trình sắc ký 84 3.2.2 M¸y HPLC 86 3.2.3 C¸c kü thuËt HPLC 88 3.2.4 H−íng dÉn chän kü tht HPLC 94 3.2.5 Chn ho¸ cột HPLC 100 3.2.6 Định lợng phơng pháp HPLC 102 3.2.7 Các phơng pháp định lợng 104 Tài liệu tham khảo 111 Câu hỏi tự lợng giá 111 Chơng Kiểm nghiệm thuốc phơng pháp sinh học Chu Thị Lộc 4.1 Mở đầu 115 4.1.1 Nguyên tắc 115 4.1.2 Chất chuẩn 116 4.1.3 Đánh giá kết 116 4.2 Kiểm nghiệm thuốc phơng pháp thử động vật 116 4.3 Kiểm nghiệm thuốc phơng pháp thử vi sinh vật 117 4.3.1 Đại cơng vi sinh vËt 117 4.3.2 M«i tr−êng nu«i cÊy vi sinh vËt 121 4.3.3 Thư v« trïng 124 4.3.4 Thư giíi hạn vi sinh vật 128 4.3.5 Xác định hoạt lực kháng sinh phơng pháp thử vi sinh vật 131 Tài liệu tham khảo 137 Câu hỏi tự lợng giá 138 Chơng Kiểm nghiệm dạng bào chế Nguyễn ThÞ KiỊu Anh 5.1 KiĨm nghiƯm thc bét 140 5.2 KiĨm nghiƯm thc viªn nang 145 5.3 KiĨm nghiƯm thc viªn nÐn 147 5.4 KiĨm nghiƯm thc tiªm, thc tiªm trun 149 5.5 KiĨm nghiƯm thc nhá m¾t 153 5.6 KiĨm nghiƯm thc ng d¹ng láng 154 5.7 KiĨm nghiƯm thuốc mỡ 157 5.8 Kiểm nghiệm thuốc đạn, thuốc trứng 159 5.9 Thử độ hoà tan viên nén viên nang 160 5.10 Thử độ rà viên nén viên nang 166 Tài liệu tham khảo 169 Câu hỏi tự lợng giá 169 Chơng Độ ổn định tuổi thọ thuốc Trần Tử An 6.1 Quá trình phát triển nghiên cứu độ ổn định thuốc 171 6.2 Đại cơng độ ổn định thuốc 172 6.2.1 Định nghĩa 172 6.2.2 Một số thuật ngữ liên quan 173 6.2.3 Mục tiêu đánh giá độ ổn định 174 6.2.4 Tiêu chuẩn đánh giá độ ổn định 175 6.2.5 Phân vùng khí hậu 176 Động hoá học dung dịch 177 6.3.1 Bậc phản ứng 177 6.3.2 ảnh hởng nhiệt độ 181 Xác định độ ổn định thuốc 182 6.4.1 Lấy mẫu 182 6.4.2 Phơng pháp thử cấp tốc 183 6.4.3 Phơng pháp thử dài hạn 185 6.4.4 Phơng pháp phân tích đánh giá kết 185 Các dợc chất bền vững 186 Tài liệu tham khảo 188 Câu hỏi tự lợng giá 189 6.3 6.4 6.5 Chơng Đại cơng Mục tiêu học tập Trình bày đợc hệ thống đảm bảo chất lợng thuốc vị trí công tác kiểm nghiệm hệ thống Trình bày đợc nhiệm vụ chủ yếu công tác kiểm nghiệm 1.1 Chất lợng thuốc đảm bảo chất lợng 1.1.1 Thuốc yều cầu chất lợng ã Khái niệm thc: Theo Tỉ chøc y tÕ thÕ giíi, thc lµ chất hay hỗn hợp chất đợc sản xuất đem bán, cung cấp để bán hay giới thiệu sử dụng nhằm mục đích: Điều trị, làm giảm, phòng hay chẩn đoán bệnh tật, tình trạng thể bất thờng triệu chứng bệnh; khôi phục, hiệu chỉnh, thay đổi chức hữu thể ngời (hay ®éng vËt - thc thó y) VËn dơng vµo ViƯt Nam, "Điều lệ thuốc phòng bệnh, chữa bệnh" ban hành 24/1/1991 qui định: Thuốc sản phẩm có nguồn gốc từ động vật, thực vật, khoáng vật, hay sinh học đợc sản xuất để dùng cho ngời nhằm: Phòng bệnh, chữa bệnh Phục hồi, điều chỉnh chức thể Làm giảm triệu chứng bệnh Chẩn đoán bệnh Phục hồi nâng cao sức khoẻ Làm cảm giác phận hay toàn thân Làm ảnh hởng trình sinh sản Làm thay đổi hình dáng thể Vật liệu dùng khoa răng, băng, khâu y tế, đợc coi thuốc Thuốc lu hành thị trờng đa phần tân dợc thuốc y học cổ truyền (là thuốc đợc sản xuất theo phơng pháp y học cổ truyền) Trong có nhiều thuốc dới dạng biệt dợc (biệt dợc thuốc mang tên riêng gọi tên thơng mại riêng sở sản xuất hay 6.2.5 Ph©n vïng khÝ hËu Ti thä cđa thc phơ thuộc vào vùng khí hậu mà thuốc lu hành Để nghiên cứu độ ổn định ngời ta chia giới vïng khÝ hËu: − Vïng 1: KhÝ hËu ôn hoà Đó nớc bắc Âu, Anh, Canada, Nga Vùng 2: Khí hậu nhiệt đới có độ ẩm cao nh Mỹ, Nhật bản, nớc nam Âu (Hy lạp, Bồ Đào Nha) Vùng 3: KhÝ hËu nãng kh« nh− Iran, Irac, Sudan − Vùng 4: Khí hậu nóng ẩm Đó số nớc nam Mỹ (Brazil, Nicaragua, ), Đông nam (Việt Nam, Philippin, Indonesia, ) Bảng 6.2 tóm tắt giá trị trung bình bốn thông số vùng khí hậu Bảng 6.3 cho ta điều kiện bảo quản chế phẩm nghiên cứu độ ổn định dài hạn Điều lu ý thông số nhiệt độ đợc chọn tối thiểu 210C vùng có nhiệt độ thấp trị số Bảng 6.2 Nhiệt độ độ ẩm vùng khí hậu Vùng Trị số đo đợc trời Trị số đo đợc kho Nhiệt độ (0C) Độ ẩm (%) Nhiệt độ (0C) Độ Èm (%) 10,9 75 18,7 45 17,0 70 21,1 52 24,4 39 26,0 54 26,5 77 28,4 70 Bảng 6.3 Thông số khí hậu tính toán điều kiện bảo quản cho thử dài hạn Vùng Thông số khí hậu tính toán Điều kiện bảo quản Nhiệt độ NĐT Độ ẩm ** m bar * Nhiệt ®é §é Èm ** 20,0 20,0 42 9,9 21 45 21,5 22,0 52 13,5 25 60 26,4 27,9 35 11,9 30 35 26,7 27,4 76 26,6 30 70 * áp suất nớc riêng phần khí ** Độ ẩm tơng đối tính % WHO khuyến cáo nhà sản xuất: Nếu chế phẩm đợc lu hành vùng nên nghiên cứu độ ổn định điều kiện bảo quản vùng Nếu chế phẩm đợc lu hành vùng vùng nên nghiên cứu độ ổn định điều kiện bảo quản vùng 176 Cần lu ý với số chế phẩm việc nghiên cứu độ ổn định phải đợc tiến hành nhiệt độ dới 00C, điều kiện lạnh (+20C đến 80C) Với số khác phải xem xét tác động ánh sáng 6.3 Động hóa học dung dịch Dới tác động điều kiện bên ngoài, nguyên liệu chế phẩm dẫn đến bị phân huỷ, hàm lợng hoạt chất giảm dần theo thời gian Quá trình phân huỷ động học phức tạp, vì: Nhiều yếu tố tác động đồng thời, Nhiều loại tơng tác diễn ra: tơng tác vật lý, phản ứng hóa học, trình sinh học, Chế phẩm tồn nhiều dạng khác nhau: dung dịch nớc, dung dịch dầu, nhũ dịch, hỗn dịch, bột rắn, Chế phẩm thờng có nhiều thành phần: nhiều hoạt chất, loại tá dợc Chính độ ổn định thuốc không đồng nghĩa với động hóa học Trong trình bảo quản có số phản ứng hóa học phân huỷ dợc chất đợc mô tả phơng pháp động hóa học Vì trớc nghiên cứu độ ổn định thuốc ôn tập vài vấn đề động hóa học dung dịch 6.3.1 Bậc phản ứng Tốc độ phản ứng đợc xác định ba thông số: Nồng độ chất phản ứng, Nhiệt độ xảy phản ứng, Sự có mặt chất xúc tác, Cho phản ứng: A+B P (6.1) Tốc độ v phản ứng đợc xác định theo định luật Vant Hoff: v= dC = −k( m + n ) [ A]m [ B]n dt (6.2) C nồng độ chất nghiên cứu, móc vuông nồng độ A B, k số tốc độ (độc lập với nồng độ C), n m bậc riêng A B tơng ứng, n + m = p bậc tổng cộng phản ứng 177 Trong nghiên cứu độ ổn định ngời ta quan tâm đến bậc tổng cộng p Nó bậc không, bậc bậc hai 6.3.1.1 Phản ứng bậc không v = dC = k dt (6.3) Phơng trình tốc độ cho phản ứng bậc không Tích phân phơng trình ta đợc C = C0 k t (6.4) hc C0 (1 − a) = k0 ta (6.5) a phân số mol lại thêi ®iĨm ta ë thêi ®iĨm t1/ , tøc lµ Ct = 0,5C0 ta cã t t 1/2 = C0 2k (6.6) Thêi gian b¸n hủ t1/2 phơ thuộc vào nồng độ ban đầu C0 Thứ nguyên số k mol/ đơn vị t Trong thực tế có phản ứng động hóa học bậc không 6.3.1.2 Phản ứng bậc dC dt = k 1C ( ) Tốc độ phản ứng phụ thuộc vào nồng độ ln C = k 1t C ( ) Dạng tích phân ln a = − k t a ( ) Phân số mol a lại thời điểm ta Trong nghiên cứu động học phân huỷ thuốc bậc ngời ta lu tâm thêm thời điểm t0,9 Đó thời điểm mà tỷ số [C/ C0] = 0,9 kt1/2 = - 0,693 (6.10) kt0,9 = -0,105 (6.11) Thứ nguyên số k t -1 178 Khi nghiên cứu độ ổn định cần kiểm tra nồng độ hoạt chất tạp chất phân huỷ Nếu hệ có tạp chất phân hủy, việc xác định tỷ số C/ Co đơn giản Ngời ta xác định nồng độ hoạt chất tạp chÊt ë thêi ®iĨm t ®Ĩ tÝnh h»ng sè tèc độ Vấn đề trở nên phức tạp hệ tạo hai hay nhiều sản phẩm phân huỷ Hai trờng hợp sau gặp thực tế nghiên cứu độ ổn định Phản ứng bậc Có trờng hợp phản ứng phân huỷ ban đầu không ổn định Ta có sơ đồ phản ứng sau: A B k1 C (6.12) k2 NÕu c¶ ba chất hệ đợc xác định thời ®iĨm tỉng sè mol cđa ba chÊt b»ng sè mol ban đầu A Các phản ứng diễn theo qui luật động học bậc nhất, ta có phơng trình tốc độ: d[ A ] = k 1[ A ] dt ( 13 ) d[ B ] = − k [ B ] + k 1[ A ] dt ( 14 ) d[C ] = k [B ] dt ( 15 ) Giải phơng trình vi phân ta có [A] = A0 exp(−k1t) [B] = A0 [k1/ (k2 − k1)][exp(−k1t) − exp(−k2t)] (6.16) (6.17) ⎤ ⎡ k1 k2 exp( − k t ) ⎥ exp( − k t ) + [ C ] = A ⎢1 − k − k1 k − k1 ⎣ ( 18 ) A0 nồng độ mol ban đầu A Để tính C, nhiều trờng hợp ngời ta tính [C] thời điểm theo phơng trình [C] = A0 [A] [B] (6.19) Bảng 6.4 minh hoạ quang phân cefotaxim b»ng hai ph¶n øng bËc nhÊt kÕ tiÕp (Lerner 1988) 179 Bảng 6.4 Quang phân Cefotaxim Thời gian (giờ) Cefotaxim A (% mol) B (% mol) C (hiÖu sè) 0,00 100 0 0,25 82 10 0,50 70 15 15 0,75 55 18 27 1,00 43 19 38 1,50 28 18 54 2,00 20 15 65 3,00 10 10 80 4,00 5 90 Cét C cuèi cïng tính theo phơng trình (6.19) Phản ứng bậc song song Nếu A phân huỷ tạo hai sản phẩm đồng thời B C A B A k1 C (6.20) k2 Phơng trình tốc độ có dạng: d[A]/ dt = −k1[A] − k2[A] (6.21) ln[A/ A0] = −(k1 + k2)t (6.22) ë thêi ®iĨm bÊt kú tû lệ hai sản phẩm tạo thành B C không đổi [B] / [C] = k1/ k2 (6.23) Trong thực tế phản ứng song song diễn không đồng thời Trong dung dịch nớc muối Cefotaxim natri phân huỷ theo sơ đồ sau: Cefotaxim Lacton k2 Cefotaxim k3 s¶n phÈm cuèi k1 180 sản phẩm cuối Kết nghiên cứu (Fabre 1984) ví dụ minh hoạ phức tạp nghiên cứu động học phân huỷ thuốc 6.3.1.3 Phản øng bËc hai Cho ph¶n øng A + B C (6 24) Tốc độ phản ứng v = d[A]/ dt = k2[A][B] (6 25) Nếu nồng độ ban đầu A B a b, lợng C tạo thành thời điểm t x dx/ dt = −k2(a − x)(b − x) (6 26) dới dạng tích phân: ( a b ) k t = ln (a − b)k t = ln b(a − x ) a (b − x ) ( 27 ) b a−x + ln b−x a Rõ ràng thứ nguyên k2 (thời gian x nồng độ)-1 Nếu phản ứng diễn a>>b, lợng A tham gia phản ứng coi nh không đáng kể so với lợng ban đầu nên [A] coi nh không đổi phơng trình (6.25) có dạng v = k2[A][B] = k2[B] (6 28) Trong trờng hợp này, ta gọi phản ứng bậc giả 6.3.2 ảnh hởng nhiệt độ Hằng số k phơng trình ®éng häc phơ thc vµo nhiƯt ®é Khi nhiƯt ®é tăng, số k tăng theo Kết thực nghiệm cho thấy: nhiệt độ tăng lên 100C số tốc độ k tăng lên xấp xỉ lần Định luật Arrhenius Năm 1889 Arrhenius đà nhận thấy kết thực nghiệm đợc biểu diễn hệ thức kinh nghiÖm: ln k = C1 − C2/ T (6.29) 181 C1 vµ C2 lµ hai h»ng sè vµ C2 luôn dơng Phơng trình (6.29) giống phơng trình Vant Hoff dới dạng tích phân: ln k = C H0/ (RT) (6.30) H0 đại lợng không phụ thuộc vào nhiệt độ Đặt C2 = E0/ R, viết phơng trình Arrherius dới dạng ln k = C1 E0/ (RT) (6.31) E0 lợng hoạt hóa đợc xác định cách vẽ đồ thị ln k theo 1/T (T lµ 0K = 0C + 273,15) Cã thể viết phơng trình (6.31) dới dạng hàm số mũ k = A exp(E0/ RT) (6 32) ln A = C1 6.4 Xác định độ ổn định thuốc Khi đánh giá độ ổn định cần xem xét đến yếu tố: Tính chất đặc điểm cđa d−ỵc chÊt chÕ phÈm, − Vïng khÝ hËu cho thuốc lu hành, Tài liệu đà công bố liên quan đến độ ổn định thuốc cần nghiên cứu Những yếu tố định số mẫu thử, thời gian tần số thử nghiệm 6.4.1 Lấy mẫu Với dợc chất tơng đối ổn định, cần lấy hai mẫu hai lô sản xuất khác Nếu dợc chất bền có tài liệu đà công bố, cần lấy ba mẫu ba lô khác Các mẫu cần lấy đại diện cho qui trình sản xuất Đối với nghiên cứu độ ổn định cách liên tục qui mô công nghiệp việc lấy mẫu lô đợc tiến hành theo chơng trình đà định trớc, ví dụ: Với công thức ổn định, hai năm lấy mẫu lô Trong trờng hợp ngợc lại, năm lấy mẫu lô 182 Đối với công thức đà nghiên cứu xong độ ổn định, thờng đến năm kiểm tra lại độ ổn định lần 6.4.2 Phơng pháp thử cấp tốc Điều kiện thử Bảng 6.5 tóm tắt điều kiện thử cho vùng II vùng IV Bảng 6.5 Điều kiện thử cấp tốc Vùng Nhiệt độ (0C) Độ ẩm (%) Thêi gian thư (th¸ng) II 40 ± 75 ± IV 40 ± 75 ± Với chế phẩm có hoạt chất bền, có tài liệu nghiên cứu đợc công bố, thời gian thử kéo dài tháng so với qui định Ngời nghiên cứu lựa chọn nhiệt độ cao thời gian ngắn hơn, ví dụ 45 ®Õn 500C th¸ng víi ®é Èm 75% NÕu trình nghiên cứu, chế phẩm có thay đổi quan trọng cần thực phép thử nghiệm bổ sung điều kiện ôn hoà hơn, ví dơ ë 30 ± 20C, ®é Èm (60 ± 5)% Những dấu hiệu chứng tỏ có thay đổi quan trọng là: Giảm hàm lợng hoạt chất từ 5% trở lên so với trị số ban đầu Có sản phẩm phân huỷ với lợng cao trị số cho phép pH nằm giới hạn qui định Tốc độ hoà tan 12 viên nén viên nang thấp giá trị tiêu chuẩn Thay đổi đặc tính vật lý thuốc nh: biến màu, tách pha, khó rÃ, Việc thử cấp tốc thờng đợc tiến hành buồng vi khí hậu kiểm soát đợc nhiệt độ ( 20C) độ ẩm ( 5%) Một số chế phẩm không thích hợp víi thư nghiƯm cÊp tèc nh−: chÕ phÈm sinh häc, thuốc đạn, thuốc trứng, Ví dụ: Nghiên cứu chế phẩm có hàm lợng theo công thức 100 mg Thư cÊp tèc thêi gian th¸ng ë ba nhiệt độ 350C, 450C 550C Kết có bảng 6.6 Tính số tốc độ tuổi thä cđa thc b¶o qu¶n ë 300C 183 B¶ng 6.6 Sự thay đổi hàm lợng (mg) chế phẩm Hàm lợng Hàm lợng Thời gian 350C 450C Thêi gian ë 550C (th¸ng) (th¸ng) 105 105 105 103 102 102 102 100 99 101 97 97 99 94 94 91 Giải: Vẽ đồ thị lnCt t(th¸ng) TÝnh håi qui bËc nhÊt, ta cã h»ng sè tốc độ: - 350C: k35 = 0,00623 tháng -1 (r = 0,993) - ë 450C: k45 = 0,0123 th¸ng -1 (r = 0,997) - ë 550C: k55 = 0,0280 tháng -1 (r = 0,997) Để tính tuổi thọ nhiệt độ 300C cần tính k30 Vẽ đồ thị lnk 1/T (0K) theo phơng trình (6 31) NhiƯt ®é (0 C) k ln k (1/ T) 1000 35 0,0062 − 5,083 3,246 45 0,0123 − 4,398 3,145 55 0,0280 − 3,576 3,049 − TÝnh håi qui bËc nhÊt ln k = C1 − E0/ RT = 19,7 − 7642 / T − TÝnh h»ng sè k30 theo phơng trình (6.32) ln k30 = 19,7 7642 / (30 + 273,15) = − 5,52 k 30 = 0,00411 184 Tuổi thọ thuốc khoảng thời gian để hoạt chất lại 90% so với trị số ban đầu (phơng trình 6.11), nên: t 0,9 = 0,105/ k30 = 25,5 tháng Đây ví dụ thử độ ổn định cấp tốc để dự báo tuổi thọ thuốc Trị số cần đợc khẳng định phơng pháp thử dài hạn 6.4.3 Phơng pháp thử dài hạn Theo hớng dẫn WHO điều kiện thực nghiệm phơng pháp thử dài hạn phải gần với điều kiện bảo quản thực tế thuốc, tức vùng khí hậu mà thuốc dự kiến đợc lu hành (bảng 6.3) Tuy nhiên số tác giả đề xuất điều kiện thử dài hạn nhiệt độ 25 20C, độ ẩm tơng đối 60 5% Nghiên cứu độ ổn định dài hạn cần đợc tiến hành suốt thời hạn bảo quản thuốc Thời gian kiểm tra hàm lợng mẫu: Năm đầu thời điểm 0, 12 tháng, Từ năm thứ 2: lần cho năm Với công thức ổn định cần kiểm tra hai lần: lần đầu sau năm; lần thứ cuối hạn dùng Với chế phẩm ổn định, số lần kiểm tra nhiều hơn: Năm thứ nhất: tháng/ lần Năm thứ 2: tháng/ lần Từ năm thứ 3: 12 tháng/ lần Đối với chế phẩm có yêu cầu bảo quản đặc biệt nh: chế phẩm vaccin, hormon, thuốc có hoạt chất không ổn định, ngời nghiên cứu cần chọn điều kiện thích hợp Kết thực nghiệm đợc chấp nhận nếu: Không có thay ®ỉi c¸c tÝnh chÊt vËt lý, hãa häc, sinh häc Chế phẩm đáp ứng yêu cầu tiêu chuẩn Phơng pháp thử dài hạn nhiều thời gian, nhng cho kết tin cậy Phép thử giúp ngời nghiên cứu khẳng định tuổi thọ đà dự báo theo phép thử cấp tốc 6.4.4 Phơng pháp phân tích đánh giá kết Lựa chọn phơng pháp phân tích Việc lựa chọn phơng pháp định lợng hoạt chất (hoặc) tạp chất phân huỷ phụ thuộc vào: 185 − TÝnh chÊt lý hãa cđa ho¹t chÊt, t¹p chất, Hàm lợng chúng chế phẩm, Yêu cầu thử nghiệm Các phơng pháp phân tích cần đợc thẩm định: kiểm tra độ đúng, độ lặp lại, độ tái hiện, giới hạn định lợng Riêng phơng pháp xác định tạp chất liên quan, tạp chất phân huỷ cần đợc kiểm tra tính đặc hiệu độ nhạy Xử lý số liệu Số liệu nghiên cứu cần đợc xử lý thống kê để thu đợc thời hạn bảo quản tạm thời Thời hạn đợc ngoại suy sở thử ổn định cấp tốc Một thời hạn bảo quản tạm thời 24 tháng đợc chấp nhận khi: Hoạt chất đợc coi ổn định, Thử nghiệm cấp tốc thay đổi rõ rƯt, − Sè liƯu hiƯn cã chøng minh r»ng nh÷ng công thức tơng tự có thời hạn bảo quản 24 tháng Nhà sản xuất tiến hành thử độ ổn định dài hạn trình bảo quản đà đề xuất Sau đánh giá độ ổn định, nhà sản xuất cần ghi rõ điều kiện bảo quản nhÃn thuốc: Bảo quản điều kiện thờng, Bảo quản khoảng + 20C đến 80C (tủ lạnh), Bảo quản dới 80C (tủ lạnh), Bảo quản khoảng 50C đến 200C (tủ đá), Bảo quản dới 180C (tủ đá) Điều kiện thờng theo WHO là: nhiệt độ 15 đến 250C, đến 300C, khô ráo, ánh sáng trực tiếp chiếu vào Điều kiện thờng đợc qui định theo quốc gia Điều lu ý lời giải nh: bảo quản nơi khô ráo, bảo quản tránh ánh sáng không đợc sử dụng nhằm mục đích che dấu ổn định thuốc 6.5 Các dợc chất bền vững Năm 1986 WHO thực đề tài :Nghiên cứu độ ổn định cấp tốc dợc chất thờng dùng điều kiện nhiệt đới Điều kiện thử cấp tốc: Bảo quản 30 ngày 500C, độ ẩm 100% Nếu dấu hiệu phân huỷ: tăng nhiệt độ lên 700C thời gian đến ngày 186 Kết cho thấy khoảng 100 dợc chất cần đợc lu ý độ ổn định: chúng đợc coi chất bền vững (bảng 6.7) Bảng 6.7 Các dợc chất bền vững TT Tên dợc chất TT Tên dợc chÊt Acid acetyl salicylic 50 Hexyl resorcinol Acid ascorbic 51 Hydralazin, HCl Acid undecylenic 52 Hydrocortizon (Na succinat) Aminophyllin 53 Hyoscyamin sulfat Amitryptilin, HCl 54 Lidocain, HCl Amoni clorid 55 Melarsoprol Amphotericin 56 Metrifonat Ampicillin (muèi natri) 57 Naloxon, HCl Ampicillin trihydrat 58 Natri calci edetat 10 Antimon tartrat 59 Natri lactat 11 B¹c nitrat 60 Natri nitrit 12 Bacitracin 61 Natri p aminosalicylat 13 Bacitracin (muèi kÏm) 62 Natri stibogluconat 14 Benzathin benzylpenicillin 63 Neomycin sulfat 15 Benzylpenicillin (muèi Na, K) 64 Nystatin 16 Bephenium hydronaphtoat 65 Orciprenalin sulfat 17 Calci gluconat 66 Oxytetracyclin, HCl 18 Calci p.aminosalicylat 67 Paromomycin sulfat 19 Carbenicillin (muèi Na) 68 Penicillamin 20 Cephalexin 69 Pethidin, HCl 21 Cloral hydrat 70 Phenobarbital (muèi Na) 22 Cloramphenicol (Na succinat) 71 Phenoxymethyl penicillin (mi Na hc K) 23 Clorphenamin hydrogeno- maleat 72 Phentolamin mesilat 24 Clorpromazin, HCl 73 Phenyl butazon 25 Clortetracyclin, HCl 74 Pilocarpin, HCl 26 Cloxacillin (muèi Na) 75 Pilocarpin nitrat 27 Codein phosphat 76 Procain amid, HCl 28 Colecalciferol 77 Procain benzyl penicillin 187 TT Tên dợc chất TT Tên dợc chất 29 Dapson 78 Procain, HCl 30 Dexametason (d¹ng Na phosphat) 79 Procarbazin, HCl 31 Dicloxacillin (muèi Na) 80 Promazin, HCl 32 Dietyl carbamazin citrat) 81 Prometazin, HCl 33 Doxycylin hydrat 82 Pyridoxin , HCl 34 Ephedrin 83 Quinin, bisulfat 35 Ephedrin sulfat 84 Quinin, 2HCl 36 Epinephrin 85 Retinol (vitamin A) 37 Epinephrin hydro-geno tartrat 86 Salbutamol sulfat 38 Ergocalciferol 87 Sulfacetamid (muèi Na) 39 Ergometrin hydrogenotartrat 88 Sulfadiazin (muèi Na) 40 Ergotamin maleat 89 Sulfadimidin (muèi Na) 41 Ergotamin tartrat 90 Tetracain , HCl 42 Etho suximid 91 Tetracyclin, HCl 43 Ethyl morphin, HCl 92 Thiamin, HCl 44 Fe(II) sulffat 93 Thiamin mononitrat 45 Fluphenazin decanoat 94 Thiopental (muèi Na) 46 Fluphenazin, HCl 95 Thuỷ ngân oxyd vàng 47 Formaldehyd dung dÞch 96 Tolbutamid 48 Gentamycin sulfat 97 Warfarin (muèi Na) 49 Guanethidin sulfat (dihydrogeno tài liệu tham khảo Bureau of Food & Drug (1998) Training course drug and cosmetic quality control, Filinvest Corporate city, Philippines Carstensen J.T (1995) Drug stability Principles & Practices, 2nd edition, Marcel Dekker Inc , USA 188 Didier R : Chimie minerale Technique et Documentation, Lavoisier, Ve edition, Paris Bản dịch tiếng Việt, tập II, NXB Giáo dục, Hà nội 1997 OMS (1998) Assurance de la qualitÐ des produits pharmaceutiques, Vol 1, GenÌve Skoog D A , West D M , Holler F J (1988) Fundamental of Analytical Chemistry, 5th edition, chapter 22, pp 578- 597 Saunders College Publishing c©u hái tự lợng giá 6.1 Tại cần đặt vấn đề đánh giá độ ổn định thuốc 6.2 Giải thích yếu tố tác động đến độ ổn định thuốc 6.3 Phân tích phép thử độ ổn định dài hạn độ ổn định cấp tốc Tại cần tiến hành hai phép thử đó? 6.4 Những chế phẩm không thích hợp với phép thử cấp tốc? Tại sao? 6.5 Tại phải phân thành vùng khÝ hËu nghiªn cøu ti thä cđa thc Theo anh (chị) vùng khí hậu ảnh hởng nhiều đến độ ổn định thuốc? 6.6 Giải thích vai trò động hóa học đánh giá tuổi thọ thuốc 6.7 Trình bày nguyên tắc sử dụng phơng trình Arrhenius để tính tuổi thọ thuốc phơng pháp thử cấp tốc 6.8 Những phản ứng thờng xảy làm giảm độ ổn định thuốc? Cho ví dụ 6.9 Khi xác định tuổi thọ thuốc dựa vào số liệu hàm lợng hoạt chất, cần thẩm định: độ đúng, độ xác giới hạn định lợng Giải thích? 6.10 Giải thích lý xác định tạp chất liên quan, tạp chất phân hủy cần kiểm tra tính đặc hiệu độ nhạy phơng pháp thực nghiệm? 6.11 Đánh giá vai trò kỹ thuật phân tích nghiên cứu độ ổn định thuốc 6.12 Ngời ta đánh giá độ ổn định chế phẩm viên nén hàm lợng 200 mg phơng pháp lÃo hóa cấp tốc thời hạn tháng hai nhiệt độ 400C 600C Số liệu thực nghiệm đợc trình bày bảng sau: 189 Hàm lợng (%) 400C 600C 102,1 102,1 101,5 101,6 101,1 101,1 100,6 99,5 100,1 98,9 99,5 98,3 98,8 97,6 Thời gian (tháng) HÃy tính tuổi thọ viên nén 200 mg 190