Đang tải... (xem toàn văn)
Quy trình nhân giống in vitro cây hoa dạ yến thảo Đề tài nghiên cứu “Ảnh hưởng của nồng độ NaOCl, BA, IBA, NAA trong khử trùng mẫu, nhân chồi và tạo rễ cây hoa dạ yến thảo (petunia hybrida) trong nuôi cấy in vitro” đã được tiến hành tại phòng cấy mô thuộc Khu thực nghiệm Bộ môn Di truyền – Chọn Giống Khoa Nông học. Trường Đại học Nông Lâm Thành phố Hồ Chí Minh từ tháng 022023 đến tháng 082023. Các thí nghiệm được bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên 2 yếu tố, 3 lần lặp lại với mục đích xác định được phương pháp khử trùng mẫu và môi trường dinh dưỡng phù hợp cho cây dạ yến thảo trong các giai đoạn khác nhau: khử trùng mẫu, nhân nhanh cụm chồi và hình thành rễ. Kết quả thu được như sau: Khi khử trùng mẫu đoạn thân mang mắt ngủ của cây hoa dạ yến thảo bằng NaOCl với nồng độ 5% trong thời gian 10 phút cho kết quả tỉ lệ sống đạt cao nhất là 70,7 %. Môi trường MS có bổ sung 0,5 mgl BA kết hợp với 0,1 mgl IBA cho kết quả nhân nhanh tốt nhất với hệ số nhân chồi đạt 22,7 lần, trọng lượng chồi đạt 3,6g, hệ số láchồi đạt 4,6, chiều cao chồi đạt 3,0 cm. Môi trường MS có bổ sung nồng độ 0,1 mgl NAA cho kết quả hình thành rễ tốt nhất với chiều dài rễ đạt 7,0 cm, số rễ đạt 32,1 rễchồi, chiều cao chồi đạt 6,3 cm, chỉ số láchồi đạt 18
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA NƠNG HỌC KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP THIẾT LẬP QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG IN VITRO CÂY HOA DẠ YẾN THẢO (Petunia hybrida) NGÀNH : NƠNG HỌC KHĨA : 2019 - 2023 SINH VIÊN THỰC HIỆN : HỶ NHẬT HÀO Thành phố Hồ Chí Minh, tháng năm 2023 THIẾT LẬP QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG IN VITRO CÂY HOA DẠ YẾN THẢO (Petunia hybrida) Tác giả HỶ NHẬT HÀO Khóa luận đệ trình để đáp ứng yêu cầu cấp kỹ sư ngành Nông học Hướng dẫn khoa học Th.S Nguyễn Thị Thanh Duyên Thành phố Hồ Chí Minh, tháng 8/2023 LỜI CẢM ƠN Để hồn thành khóa luận, ngồi nỗ lực thân cịn có giúp đỡ động viên người Tôi xin bày tỏ biết ơn sâu sắc đến: Con muốn giành biết ơn sâu sắc tới bố mẹ, gia đình người thân sinh thành, nuôi dạy, động viên, giúp đỡ tạo điều kiện cho suốt trình học tập để hồn thành chương trình học tập thực khóa luận tốt nghiệp Xin trân trọng cảm ơn Ban giám hiệu nhà trường Đại học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh, Ban chủ nhiệm khoa Nơng học, Bộ môn Di truyền – Chọn giống trồng với quý thầy cô giáo truyền đạt kiến thức, giúp đỡ trình học tập thực khóa luận Cơ Th.S Nguyễn Thị Thanh Duyên tận tình, hướng dẫn, theo dõi, dạy cho em suốt q trình học tập góp ý để thực thí nghiệm q trình thực đề tài Xin trân trọng cảm ơn anh Châu Đức Tài – chủ vườn giống hoa Dạ Yến Thảo Q9 Thành Phố Hồ Chí Minh tạo điều kiện để thực khóa luận hồn thành khóa luận Lời cảm ơn đến bạn thực khóa luận phịng ni cấy mơ, mơn Di Truyền Chọn Giống Cây Trồng - Thúy Vy, An Khang, Minh Đức, Anh Hào, Tú Trinh, đồng hành, chia sẻ kinh nghiệm, giúp đỡ hồn thành khóa luận Lời cảm ơn đến bạn lớp DH19NHB - Quyền Cước, Phi Yến, Thanh Thương, Quỳnh Chi, chia sẻ, giúp đỡ tơi nhiệt tình suốt thời gian làm khóa luận Thành Phố Hồ Chí Minh, tháng năm 2023 Sinh viên thực Hỷ Nhật Hào TÓM TẮT Đề tài nghiên cứu “Ảnh hưởng nồng độ NaOCl, BA, IBA, NAA khử trùng mẫu, nhân chồi tạo rễ hoa yến thảo (petunia hybrida) nuôi cấy in vitro” tiến hành phịng cấy mơ thuộc Khu thực nghiệm Bộ mơn Di truyền – Chọn Giống Khoa Nông học Trường Đại học Nơng Lâm Thành phố Hồ Chí Minh từ tháng 02/2023 đến tháng 08/2023 Các thí nghiệm bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên yếu tố, lần lặp lại với mục đích xác định phương pháp khử trùng mẫu môi trường dinh dưỡng phù hợp cho yến thảo giai đoạn khác nhau: khử trùng mẫu, nhân nhanh cụm chồi hình thành rễ Kết thu sau: Khi khử trùng mẫu đoạn thân mang mắt ngủ hoa yến thảo NaOCl với nồng độ 5% thời gian 10 phút cho kết tỉ lệ sống đạt cao 70,7 % Mơi trường MS có bổ sung 0,5 mg/l BA kết hợp với 0,1 mg/l IBA cho kết nhân nhanh tốt với hệ số nhân chồi đạt 22,7 lần, trọng lượng chồi đạt 3,6g, hệ số lá/chồi đạt 4,6, chiều cao chồi đạt 3,0 cm Mơi trường MS có bổ sung nồng độ 0,1 mg/l NAA cho kết hình thành rễ tốt với chiều dài rễ đạt 7,0 cm, số rễ đạt 32,1 rễ/chồi, chiều cao chồi đạt 6,3 cm, số lá/chồi đạt 18 MỤC LỤC Tran Trang tựa i Lời cảm ơn ii Tóm tắt iii Mục lục iv Danh sách chữ viết tắt vi Danh sách bảng vii Danh sách hình ix MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Mục tiêu, yêu cầu giới hạn đề tài Mục tiêu Yêu cầu Giới hạn đề tài Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu yến thảo 1.1.1 Phân loại đặc điểm thực vật học 1.1.2 Phân bố địa lý 1.1.3 Tình hình trồng nhân giống cảnh yến thảo Việt Nam 1.2 Nuôi cấy mô tế bào thực vật 1.2.1 Cơ sở khoa học nuôi cấy mô tế bào thực vật 1.2.2 Lịch sử nuôi cấy mô giới 1.2.3 Lịch sử nuôi cấy mô tế bào thực vật Việt Nam 1.3 Nhân giống in vitro 1.3.2 Ưu nhược điểm phương pháp nhân giống in vitro 1.3.2 Quy trình ni cấy in vitro .9 1.4 Chất khử trùng mẫu số chất điều hòa sinh trưởng nuôi cấy mô 11 1.5 Những yếu tố ảnh hưởng đến kỹ thuật nhân giống vơ tính in vitro 13 1.6 Một số kết nghiên cứu nuôi cấy mô yến thảo 16 Chương PHƯƠNG PHÁP VÀ NỘI DUNG THÍ NGHIỆM 18 2.1 Nội dung thí nghiệm 18 2.2 Thời gian địa điểm nghiên cứu .18 2.3 Vật liệu thí nghiệm 18 2.3.1 Giống 18 2.3.2 Thiết bị dụng cụ 19 2.3.3 Điều kiện nuôi cấy in vitro .19 2.3.4 Mơi trường ni cấy thí nghiệm 19 2.4 Bố trí thí nghiệm 21 2.4.1 Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng nồng độ NaOCl thời gian khử trùng lên đốt thân yến thảo 21 2.4.2 Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng BA IBA đến khả nhân nhanh cụm chồi từ đốt thân yến thảo in vitro 24 2.4.3 Thí nghiệm 3: Ảnh hưởng NAA đến trình hình thành rễ mẫu Dạ yến thảo .26 2.4 Phương pháp xử lý số liệu 28 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .29 3.1 Ảnh hưởng nồng độ NaOCl thời gian khử trùng lên mẫu thân yến thảo 29 3.2 Ảnh hưởng BA IBA đến khả nhân nhanh cụm chồi đốt thân yến thảo 35 3.3 Ảnh hưởng NAA đến trình hình thành rễ mẫu chồi yến thảo… 45 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 52 TÀI LIỆU THAM KHẢO .53 PHỤ LỤC 56 DANH SÁCH CHỮ VIẾT TẮT ANOVA Analysis of variance (Phân tích phương sai) BA - benzyladenine CRD Completely Randomized Design CV Hệ số biến động (Coeficient of Variation) ĐHST Điều hòa sinh trưởng ctv Cộng tác viên IBA Indo – - butyric acid LLL Lần lặp lại MS Musrashige and Skoog (1962) NaClO Natri hypochlorite NSC Ngày sau cấy NAA – Naphthalene acetic acid NT Nghiệm thức World Health Organization (Tổ chức y tế WHO giới) DANH SÁCH CÁC BẢNG trang Bảng 2.1 Thành phần mơi trường sử dụng thí nghiệm 20 Bảng 2.2 Các nghiệm thức thí nghiệm 22 Bảng 2.3 Các nghiệm thức thí nghiệm 24 Bảng 2.4 Các nghiệm thức thí nghiệm Bảng 3.1 Ảnh hưởng nồng độ NaOCl thời gian khử trùng đến tỉ lệ sống mẫu yến thảo qua thời điểm 30 Bảng 3.2 Ảnh hưởng nồng độ NaOCl thời gian khử trùng đến tỉ lệ nhiễm mẫu yến thảo qua thời điểm 32Y Bảng 3.3 Ảnh hưởng tổ hợp BA IBA đến hệ số nhân chồi (lần) hoa yến thảo qua thời điểm 37 Bảng 3.4 Ảnh hưởng tổ hợp BA IBA đến chiều cao chồi (cm) hoa yến thảo qua thời điểm .39 Bảng 3.5 Ảnh hưởng tổ hợp BA IBA đến số lá/chồi hoa yến thảo qua thời điểm 41 Bảng 3.6 Ảnh hưởng tổ hợp BA IBA đến trọng lượng chồi (g) hoa yến thảo qua 42 ngày sau cấy Bảng 3.7 Ảnh hưởng NAA đến chiều cao chồi (cm) hoa yến thảo qua thời điểm 45 Bảng 3.8 Ảnh hưởng NAA đến hệ số (lá/chồi) hoa yến thảo thời điểm qua thời điểm 46 Bảng 3.9 Ảnh hưởng NAA đến tỉ lệ rễ (%) hoa yến thảo qua thời điểm 50 Bảng 3.10 Ảnh hưởng NAA đến chiều dài rễ (cm) số rễ (rễ/chồi) hoa yến thảo qua thời điểm Bảng PL4.1 Số liệu chuyển đổi Arsin% tỉ lệ mẫu sống (%) hoa yến thảo 63 Bảng PL4.2 Số liệu chuyển đổi Arsin% tỉ lệ mẫu nhiễm (%) hoa yến thảo 64 Bảng PL4.3 Số liệu chuyển đổi Arsin% tỉ lệ mẫu chết (%) hoa yến thảo 65 Bảng PL4.4 Số liệu chuyển đổi Arsin% tỉ lệ rễ (%) hoa yến thảo .66 Biểu đồ 3.1 Tỉ lệ mẫu bệnh, mẫu nhiễm, mẫu chết sau thí nghiệm thời điểm 21 NSC 60 Biểu đồ 3.2 Tốc độ tăng trưởng số chồi mẫu yến thảo thí nghiệm 61 Biểu đồ 3.3 Tốc độ tăng trưởng chiều cao chồi mẫu yến thảo thí nghiệm 61 Biểu đồ 3.4 Tốc độ tăng trưởng số trung bình (lá) yến thảo qua thời điểm thí nghiệm 62 Biểu đồ 3.5 Tốc độ tăng trưởng chiều cao yến thảo (cm) qua thời điểm thí nghiệm 62 DANH SÁCH CÁC HÌNH tra Hình 1.1 Hoa Yến Thảo 3Y Hình 2.1 Cây đoạn thân mang mắt ngủ yến thảo 19 Hình 2.2 Đoạn thân dùng để làm vật liệu khởi đầu cho thí nghiệm 21 Hình 2.3 Sơ đồ bố trí thí nghiệm 22 Hình 2.4 Vật liệu thí nghiệm .24 Hình 2.5 Sơ đồ thí nghiệm 25 Hình 2.6 Vật liệu thí nghiệm .26 Hình 2.7 Sơ đồ bố trí thí nghiệm Hình 3.1 Ảnh hưởng BA IBA đến phát triển của cụm chồi mẫu yến thảo thời điểm 42 NSC .44 Hình 3.2 Ảnh hưởng NAA đến phát triển mẫu yến thảo thời điểm 32NSC Hình PL1 Mẫu nhiễm nấm 57 Hình PL2 Mẫu nhiễm khuẩn 57 Hình PL3 Mẫu sạch, sống sau 21 NSC 57 Hình PL4 Mẫu chết .57 Hình PL5 Mẫu chồi yến thảo sau ngày ni cấy 58 Hình PL6 Mẫu chồi yến thảo sau 14 ngày nuôi cấy 58 Hình PL7 Mẫu chồi yến thảo sau 21 ngày nuôi cấy 58 Hình PL8 Mẫu chồi yến thảo sau 28 ngày nuôi cấy 58 Hình PL9 Tồn cảnh khu thí nghiệm 58 Hình PL10 Mẫu yến thảo khơng bổ sung NAA sau 7NSC 59 Hình PL11 Mẫu yến thảo bổ sung 0,4 mg/l NAA sau 7NSC .59 Hình PL12 Hiện tượng xoắn rễ nồng độ 0,3 mg/l NAA mẫu yến thảo thời điểm 21NSC .59