1 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÂY NGUYÊN NGUYỄN NHƯ TRUNG NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM DỊCH TỄ HỌC, XÁC ĐỊNH SỰ CÓ MẶT CỦA PROTEIN 125 TRONG BỆNH DỊCH TẢ LỢN TẠI HUYỆN KRÔNG PĂK TỈNH ĐĂK LĂK LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP BUÔN MA THUỘT, NĂM 2010 2 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÂY NGUYÊN NGUYỄN NHƯ TRUNG NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM DỊCH TỄ HỌC, XÁC ĐỊNH SỰ CÓ MẶT CỦA PROTEIN 125 TRONG BỆNH DỊCH TẢ LỢN TẠI HUYỆN KRÔNG PĂK TỈNH ĐĂK LĂK Chuyên ngành: Thú y Mã số: 60.62.50 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS. CAO VĂN HỒNG BUÔN MA THUỘT, NĂM 2010 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam ñoan ñây là công trình nghiên cứu luận văn Thạc sĩ ngành Thú y của tôi. Các số liệu, kết quả có trong luận văn này là trung thực và chưa ñược ai công bố trong bất kỳ một công trình nào khác. Người cam ñoan Nguyễn Như Trung ii LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành ñề tài này, tôi xin chân thành cảm ơn: Lãnh Đạo Trường Đại Học Tây Nguyên, Lãnh Đạo Phòng Đào tạo Sau Đại học Trường Đại Học Tây Nguyên Lãnh Đạo Khoa Chăn nuôi Thú y, cùng các thầy cô trong khoa Chăn nuôi Thú y Trường Đại học Tây Nguyên, Ban Thú y các xã Ea Kuăng, Ea Phê, Hòa An,… cùng Lãnh ñạo Trạm Thú y huyện Krông Păk tỉnh Đăk Lăk, Phòng Thống kê huyện Krông Păk - tỉnh Đăk Lăk, Phòng chẩn ñoán, xét nghiệm Công ty Nam Lâm – TP.HCM, Kỹ thuật viên phòng thí nghiệm Bộ môn thú y Chuyên ngành và Bộ môn Cơ sở thú y ñã tạo ñiều kiện giúp ñỡ tạo ñiều kiện thuận lợi nhất cho tôi thực hiện ñề tài này. Tôi xin bày tỏ lòng chân thành cảm ơn tới sự giúp ñỡ hướng dẫn tận tình của Thầy Tiến sĩ Cao Văn Hồng ñã giúp ñỡ tôi trong suốt quá trình thực hiện ñề tài. Cuối cùng tôi xin cảm ơn gia ñình, người thân cùng bạn bè ñã giúp ñỡ ñộng viên tôi trong suốt quá trình học và thực hiện ñề tài. Xin trân trọng cảm ơn! iii MỤC LỤC Đầu mục Trang LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH SÁCH CÁC TỪ VIẾT TẮT vii DANH MỤC BẢNG BIỂU viii DANH MỤC BIỂU ĐỒ VÀ ĐỒ THỊ ix MỞ ĐẦU 1 CHƯƠNG 1 2 TỔNG QUAN NGHIÊN CỨU 2 1.1. Những nghiên cứu về bệnh dịch tả lợn 2 1.1.1. Ở thế giới 2 1.1.2. Ở trong nước 4 1.2. Dịch tễ học bệnh dịch tả lợn 8 1.2.1. Căn bệnh 8 1.2.2. Loài mắc bệnh 11 1.2.3. Lứa tuổi và mùa xảy ra bệnh 12 1.2.4. Đường xâm nhập và lây lan 12 1.2.5. Cơ chế sinh bệnh học 13 1.2.6. Triệu chứng của bệnh dịch tả lợn 15 1.2.6.1. Thể quá cấp tính 15 1.2.6.2. Thể cấp tính 15 1.2.6.3. Thể mãn tính 16 1.2.6.4. Thể không ñiển hình (thể tiềm ẩn) 17 1.2.7. Bệnh tích của bệnh dịch tả lợn 18 iv 1.2.7.1. Bệnh tích ñại thể 18 1.2.7.2. Bệnh tích vi thể 20 1.3. Chẩn ñoán bệnh 20 1.3.1. Chẩn ñoán virus học 21 1.3.1.1. Tiêm ñộng vật thí nghiệm 21 1.3.1.2. Phương pháp tăng cường ñộc lực của virus Newcastle 21 1.3.1.3. Thí nghiệm trung hòa trên thỏ 22 1.3.2. Chẩn ñoán huyết thanh học 22 1.3.2.1. Phản ứng miễn dịch ñánh dấu ELISA 22 1.3.2.2. Phản ứng kết tủa khuyếch tán trên thạch 23 1.3.2.3. Phản ứng ngưng kết hồng cầu gián tiếp 23 1.3.2.4 Phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu gián tiếp 23 1.3.2.5. Phản ứng miễn dịch huỳnh quang 24 1.3.3. Kỹ thuật PCR: polymerase chain reaction 25 1.3.4. Chẩn ñoán bằng phản ứng hóa học màu 25 1.4. Phòng bệnh 25 1.4.1. Khi chưa có dịch 25 1.4.2. Khi có dịch xảy ra 25 1.4.3. Phòng bệnh bằng vaccine hiện nay 25 1.5. Kháng nguyên HCV.Ag (P125) 27 CHƯƠNG 2 29 ĐỐI TƯỢNG – NỘI DUNG – PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 29 2.1. Đối tượng, thời gian và ñịa ñiểm nghiên cứu 29 2.2. Nội dung nghiên cứu 29 2.3. Phương pháp nghiên cứu 29 2.3.1. Phương pháp thu thập số liệu 29 v 2.3.2. Phương pháp ñiều tra dịch tễ học 29 3.3.3. Phương pháp chọn mẫu 29 2.3.4. Sơ lược về ñịa bàn chọn mẫu ñiều tra 29 2.3.5. Lấy mẫu bệnh phẩm và bảo quản 30 2.3.6. Các phương phương pháp chẩn ñoán bệnh 30 2.4. Phương pháp tính toán số liệu 31 2.5. Xử lý số liệu 31 CHƯƠNG 3 32 KẾT QUẢ THẢO LUẬN 32 3.1. Một số ñặc ñiểm tự nhiên kinh tế xã hội của huyện Krông Păk 32 3.1.1. Đặc ñiểm tự nhiên 32 3.1.2. Đặc ñiểm kinh tế xã hội 33 3.1.2.1. Tình hình chăn nuôi lợn tại huyện Krông Păk 34 3.1.2.2. Công tác thú y 35 3.2. Kết quả nghiên cứu dịch tễ học 38 3.2.1. Kết quả nghiên cứu trên ñàn lợn mắc bệnh 38 3.2.1.1. Xác ñịnh tỷ lệ mắc bệnh dịch tả lợn 38 3.2.1.2. Kết quả nghiên cứu xác ñịnh tỷ lệ mắc bệnh theo lứa tuổi 39 3.2.2. Tỷ lệ mắc bệnh theo giống 41 3.2.3. Kết quả nghiên cứu xác ñịnh tỷ lệ tử vong ở các lứa tuổi 43 3.3. Kết quả nghiên cứu về triệu chứng, bệnh tích 44 3.3.1 Kết quả xác ñịnh triệu chứng của bệnh dịch tả lợn 44 3.3.2. Kết quả bệnh tích của bệnh dịch tả lợn 46 3.4. Kết quả nghiên cứu tỷ lệ mắc bệnh theo thời gian 49 3.4.1. Kết quả xác ñịnh hệ số năm dịch 49 3.4.2. Kết quả xác ñịnh hệ số mùa dịch 51 vi 3.5. Kết quả chẩn ñoán bệnh dịch tả lợn thông qua xác ñịnh P125 53 3.5.1. Kết quả chẩn ñoán HVC.Ag (P.125) trên những lợn nghi 54 3.5.2. Kết quả chẩn ñoán HVC.Ag (P.125) theo lứa tuổi 55 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 57 Kết luận 57 Đề nghị 58 TÀI LIỆU THAM KHẢO 59 A - TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT 59 B - TÀI LIỆU NƯỚC NGOÀI 61 C - TÀI LIỆU THAM KHẢO TỪ CÁC Website 61 MỘT SỐ PHỤ LỤC - Mẫu phiếu ñiều tra và mổ khám - Qui trình xét nghiệm ELISA tìm P125 - Một số hình ảnh chẩn ñoan bệnh - Một số ứng dụng phần mền dịch tễ Win Episcope 2.0 - Giây xác nhận vii DANH SÁCH CÁC TỪ VIẾT TẮT - AAHL : Australian Animal Health Laboratory - AND : Acid deoxyribonucleic - ARN : Acid ribonucleic - CPE : Cytopathologenie effect - CFE : Case fatality rate - DTL : Dịch tả lợn - ĐDL : Đóng dấu lợn - EC : European Community - ELISA : Enzyn linked immuno sorbent assay - END : Exaltation of Newcastle Disease virus - FATST : Fuorescent antibody tissue section technique - FACCT : Fluorescent antibody cell culture technique - MCAS : Monoclonal antibodies - PCR : Polymerasa chain reaction - PK : Pig kidney - PTH : Phó thương hàn - P125 : Protein 125 - Rnase : Ribonuclease - rPAV : Recombinant procine Adenovirus - RT : Reverse Transcriptase - RT- Npcr : Reverse Transcription - nested Polymerase Chain Reaction - SK6 : Swine Kidney 6 - SMEDI : Stillbirth, mummification, embryonic death and infertility of swine - TCTD : Tissue culture infected dose - TCID 50 : Tissue Culture Infectious Dose 50 - THT : Tụ huyết trùng viii DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 1.1. Các loại vaccin thường sử dụng tại Việt Nam 27 Bảng 3.1. Tổng số ñàn lợn nuôi và sản lượng thịt của huyện 34 Bảng 3.2. Tổng ñàn lợn tại các năm ở các xã nghiên cứu 35 Bảng 3.3. Điều tra về mạng lưới thú y huyện Krông Păk 36 Bảng 3.4. Kết quả tiêm phòng bệnh dịch tả lợn từ 2005 - 2010 37 Bảng 3.5. Tỷ lệ mắc bệnh DTL từ năm 2005 ñến 2010 38 Bảng 3.6. Tỷ lệ mắc bệnh theo lứa tuổi 39 Bảng 3.7. Tỷ lệ mắc bệnh DTL theo giống 41 Bảng 3.8. Tỷ lệ tử vong qua các lưa tuổi lứa tuổi ở các năm 43 Bảng 3.9. Triệu chứng của bệnh dịch tả lợn 45 Bảng 3.10. Bệnh tích của bệnh dịch tả lợn 47 Bảng 3.11. Hệ số năm dịch của bệnh DTL từ 2005 - 2009 50 Bảng 3.12. Hệ số mùa dịch 51 Bảng 3.13. Chi tiết lây mẫu và kết quả xét nghiệm 53 Bảng 3.14. Kết quả chẩn ñoán HVC.Ag (P.125) trên những lợn 54 Bảng 3.15. Kết quả chẩn ñoán HVC.Ag (P.125) trên các ñối 55 [...]... ng vi c nghiên c u d ch t c a b nh DTL t i huy n Krông Păk – t nh ó chúng tôi ti n hành nghiên c u t h c, xác ăk Lăk không kém ph n quan tr ng Do tài: Nghiên c u m t s c i m d ch nh s có m t c a protein 125 trong b nh d ch t l n t i huy n Krông Păk, t nh ăk Lăk 2 M c tiêu c a - Xác tài nh m t s c i m d ch t h c c a b nh d ch t l n t i huy n Krông Păk – t nh ăk Lăk - Xác nh ư c chính xác s có m t c... Hưng b nh DTL làm ch t 227 l n nuôi, trong ó có 74 l n con theo m , 128 l n cai s a, 16 l n th t và 9 l n nái [15] Năm 1990 b nh x y ra trên 1.800 con l n t i lò m Huỳnh Thúc Kháng - t nh Th a Thiên Hu (C c Thú y, 1990) Trong nh ng năm g n ây ã có nhi u tác gi trong nư c i vào nghiên c u b nh DTL nhi u góc khác nhau như nh ng nghiên c u v d ch t h c c a b nh, các nghiên c u v áp ng mi n d ch sau khi... phân b c a virus trong bào thai cũng gi ng như trong cơ th l n trư ng thành b nhi m b nh DTL i v i ch ng virus có c l c trung bình thì s nhân lên c a virus trong t bào l i th p hơn Còn nh ng ch ng virus có c l c th p khi gây b nh ngư i ta th y chúng có th xu t hi n trong máu ho c không, thư ng các ch ng này thư ng gi i h n các t bào bi u mô quanh m ch [38] T i các cơ quan nhi m virus có s hi n tư ng... 41 - 420C có kèm theo nh ng tri u ch ng th n kinh như gi y gi a, co gi t trư c khi ch t, vùng da m ng phía trong ùi, phía dư i b ng nh ng ng lên L n ch t trong vòng 24 - 48 gi và không có b nh tích, t l ch t có th lên n 100% [17] Có m t s tài li u g i ây là b nh DTL tr ng 1.2.6.2 Th c p tính L n b b nh ã có y nh ng tri u ch ng lâm sàng và b nh tích i n hình c a b nh (th này thư ng ti n tri n trong vòng... phát hi n kháng nguyên trong các t ch c nhu mô b nh ph m Nguyên lý c a phương pháp này là khi nghi n t ch c nhu mô v i kháng huy t thanh trong i u ki n hóa băng nên có th làm v t bào nh các tinh th nư c á hình thành trong và ngoài t bào ch t N u trong t ch c nhu mô ó có kháng nguyên, thì kháng nguyên ó s k t h p c hi u v i kháng th trong kháng huy t thanh, làm cho hi u giá kháng th trong kháng huy t thanh... [18] N u có kháng nguyên và kháng th tương ng, t c là có virus DTL trong b nh ph m thì có th k t h p c hi u gi a kháng nguyên và kháng th huỳnh quang và t h p này ư c lưu l i trên phi n kính ngay c sau khi phi n kính ư c r a Kháng nguyên ư c nhu m màu huỳnh quang s phát sáng rõ r t dư i kính hi n vi huỳnh quang Phương pháp FATST có ưu i m là ch n oán nhanh, có th hoàn thành trong hai gi Tuy v y, trong. .. l i, có th th i loét ra r i bong v y Viêm k t m c d n n ch y nư c m t cũng xu t hi n s m, m t có ghèn c như m tr ng, che m t làm con v t không th y ư c [17] Virus tác ng n b máy tiêu hóa làm l n nôn ra d ch vàng ch a d ch m t L n b táo bón giai o n s t cao, nhưng n nh ng ngày giai o n cu i c a b nh có tiêu ch y n ng có khi có c máu tươi, phân l ng có 16 mùi hôi th i c bi t Niêm m c mi ng, m t, trong. .. tính th n l n v n bình thư ng, khi m khám trong th n thư ng có hi n tư ng huy t ho c có c c máu ông - B nh tích ư ng tiêu hóa: niêm m c ư ng tiêu hóa thư ng có hi n tư ng xu t huy t, d dày c bi t vùng h v nh y Ph n ru t non xu t huy t, c bi t van h i manh tràng có nhi u n t loét có b do fibrin ng l i t o ra các ư ng tròn ph y ch t b a ng tâm [14] Các n t loét này có hình gi ng chi c cúc áo nên thư ng ư... nh tranh nhưng có nh y gi m so v i ELISA thông d ng (Clavijo và CS, 2001) Kháng th ơn dòng cho ph n ng v i hai lo i glycoprotein v (gp48 và gp53) thì có th trung hòa virus gây b nh L n nhi m b nh có th t o kháng th v i glycoprotein c u trúc c a virus, nh ng protein này tương t “kháng nguyên hòa tan” áp ng kháng th v i polypeptid khác, k c p14 c a nucleocapsid thì r t y u ho c không có [30] Nh ng l... Phương Duyên và c ng s (1999) khi nghiên c u xác nh vai trò virus DTL trong h i ch ng s t, b ăn l n t i m t s t nh mi n Trung cho bi t t năm 1995 - 1997 t i các t nh Ninh Thu n, Khánh Hòa, Phú Yên, Bình nh, Qu ng Ngãi và Qu ng Nam u có l n b b nh d ch t , b nh x y ra l t nhưng thư ng xuyên [08] Nguy n H nh Chi (1999), xác nh vai trò virus DTL trong h i ch ng tiêu ch y kéo dài trong các tr i chăn nuôi t p . NHƯ TRUNG NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM DỊCH TỄ HỌC, XÁC ĐỊNH SỰ CÓ MẶT CỦA PROTEIN 125 TRONG BỆNH DỊCH TẢ LỢN TẠI HUYỆN KRÔNG PĂK TỈNH ĐĂK LĂK Chuyên ngành: Thú y Mã số: 60.62.50. hành nghiên cứu ñề tài: Nghiên cứu một số ñặc ñiểm dịch tễ học, xác ñịnh sự có mặt của protein 125 trong bệnh dịch tả lợn tại huyện Krông Păk, tỉnh Đăk Lăk . 2. Mục tiêu của ñề tài - Xác. NGUYÊN NGUYỄN NHƯ TRUNG NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM DỊCH TỄ HỌC, XÁC ĐỊNH SỰ CÓ MẶT CỦA PROTEIN 125 TRONG BỆNH DỊCH TẢ LỢN TẠI HUYỆN KRÔNG PĂK TỈNH ĐĂK LĂK LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA