VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Đề tài: Phân lập và định danh một số chủng vi khuẩn có khả năng sinh tổng hợp AIA  Người hướng dẫn : PGS.TS Phạm Việt Cường NSVTH : Nguyễn Thị Hải Anh Lớp : KS CNSH 10-04 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU NỘI DUNG NGHIÊN CỨU TỔNG QUAN TÀI LIỆU KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3 ĐẶT VẤN ĐỀ 1 ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3 3 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4 PHẦN 1. ĐẶT VẤN ĐỀ • Phân bón vi sinh (PBVS) có nhiều ưu điểm nổi trội so với phân bón hóa học, ngoài tác dụng nâng cao năng suất và chất lượng cây trồng, tiết kiệm, giảm chi phí sản xuất thì PBVS còn góp phần quan trọng trong việc bảo vệ môi trường và phát triển nền nông nghiệp bền vững. Tuy nhiên tình hình sản xuất PBVS ở nước ta vẫn chưa đáp ứng đủ nhu cầu thực tiễn sản xuất của nền nông nghiệp do quy mô sản xuất nhỏ, chất lượng sản phẩm chưa hoàn thiện và ổn định. Do đó, nghiên cứu để hoàn thiện và nâng cao chất lượng PBVS là việc làm hết sức cần thiết. Trong đó, việc tuyển chọn, đánh giá hoạt tính của các chủng VSV là khâu đầu tiên và quan trọng trong quy trình tạo ra chế phẩm • Ngày nay thực vật sử dụng một số hoocmon để điều chỉnh quá trình sinh trưởng và phát triển của mình, trong đó nhóm hoocmon gọi là Auxin được tìm thấy ở hầu hết ở các loài(chất kích thích sinh trưởng ở thực vật). Chính vì đặc điểm quan trọng đó để ứng dụng rộng rãi trong việc tạo các chế phẩm PBVS với mục đích làm tăng năng suất cây trồng cũng như năng cao chất lượng của ngành nông nghiệp. • Xuất phát từ lý do trên chúng tôi chọn đề tài: “Phân lập và tuyển chọn một số chủng VK có khả năng sinh tổng hợp AIA từ đất ” nhằm tìm ra các chủng VK có hoạt tính để ứng dụng cho nền nông nghiệp nước ta PHẦN 2. ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1. Đối tượng nghiên cứu • Vi khuẩn được phân lập từ các mẫu ở Đak Lak-Tây Nguyên 2.2. Nội dung nghiên cứu • Phân lập các chủng vi khuẩn thuần chủng có khả năng sinh tổng hợp AIA • Xác định được một số đặc điểm sinh học của các chủng vi khuẩn phân lập được. 2.3. Phương pháp nghiên cứu • Phương pháp vi sinh • Phương pháp vật lý • Phương pháp hoá sinh • Phương pháp xử lý số liệu Phương pháp vi sinh • Phân lập vi sinh vật bằng phương pháp đổ đĩa • Phương pháp làm sạch, nuôi cấy tăng sinh,giữ chủng giống • Phương pháp nhuộm Gram • Phương pháp định lượng AIA Phương pháp vật lý • Đo OD Phương pháp hoá sinh • Phương pháp tách DNA tổng số • Phản ứng kéo dài chuỗi trùng hợp ( PCR) • Phương pháp điện di trên gel agarose Phương pháp xử lí số liệu • Phương pháp đựng đường chuẩn AIA Pha AIA ở các nồng độ 10,20,30,40,50µg/ml ở môi trường kiềm,mỗi nồng độ AIA nói trên lấy 2ml cho vào các ống nghiệm chứa 8ml thuốc thử salkowski’s cải tiến,so mẫu ở bước sóng 530nm.Đối chứng 2ml nước cất,thêm 8ml thuốc thử.Dựa vào chỉ số OD và nồng độ AIA dựng được đường chuẩn: Dungdịchchuẩn C(mg/l) A 1 10 0.091 2 20 0.22 3 30 0.328 4 40 0.435 5 50 0.521 PHẦN 3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 1. Kết quả phân lập Bảng 3.1. Đặc điểm hình thái khuẩn lạc của vi khuẩn Kí hiệu chủng Đặc điểm hình thái khuẩn lạc Đặc điểm hình thái tế bào Nhuộm gram BX-B4 Tròn, màu trắng đục, bề mặt trơn, bóng, kích thước nhỏ Hình que dài,cỡ nhỏ,đơn độc - BX-B2 Hình dạng không đều, màu vàng, bề mặt trơn ,lồi ,kích thước trung bình Hình que ngắn,cỡ nhỏ,đơn độc + Ti-B6 Tròn, màu trắng đục,bề mặt trơn, hơi lồi, kích thước nhỏ Hình que ngắn,cỡ trung bình,đơn độc - CF-B3 Tròn, màu trắng đục, bề mặt trơn bóng, lồi,kích thước rất nhỏ Hình que ngắn,cỡ tb,đơn độc - Bx-B6 Hình dạng không đều,màu trắng đục ,bề mặt trơn,lồi,kích thước trung bình Hình que dài,cỡ tb,đơn độc + Chủng BX-B2 Chủng BX-B6 Hình 3.1. Hình thái khuẩn lạc và hình dạng tế bào của các chủng vi khuẩn phân lập được [...]... có khả năng sinh tổng hợp AIA trong môi trường có bổ sung Trp Trong đó có 5 chủng có khả năng sinh tổng hợp AIA mạnh nhất.Lượng Trp bổ sung vào môi trường ảnh hưởng tới hàm lượng AIA đạt được, trong 3 nồng độ Trp nghiên cứu, ở nồng độ càng cao, hàm lượng AIA thu được càng cao • 2 Trong các chủng nghiên cứu, 1chủng BX-B2 có khả năng sinh tổng hợp AIA mạnh nhất • 3 Trong quá trình nuôi cấy, sinh khối tế... aryabhattai strain IHB B 6821 98% 4.2 Kiến nghị 1 Trên cơ sở nghiên cứu khả năng sinh tổng hợp và định danh các chủng nghiên cứu, chúng tôi kiến nghị nghiên cứu tiếp các chủng có khả năng sinh AIA cao và ứng dụng chúng vào sản xuất phân bón vi sinh cung cấp thêm cho cây trồng một nguồn hoocmon sinh trưởng thực vật quí giá từ vi sinh vật, giúp cây trồng phát triển mạnh hơn Xin chân thành cảm ơn quý thầy...2.K ết qu ả d ựng đ ờ ng chu ẩn ư Biểu đồ 3.1 : Đường chuẩn và phương trình tương quan giữa chỉ số OD và nồng độ của dung dịch IAA 3.A nh h ư ̉ ng cua nông đô ̣ Try ptophan ̉ ơ ̉ ̀ trong môi tr ư ng lên ham l ư ̣ ng A IA ờ ̀ ơ trong dich nuôi cây cua cac chung ̣ ́ ̉ ́ ̉ nghiên c ưu ́ Hình 3.2 Đồ thị biểu thị sự thay đổi hàm lượng... Tryptophan ở các nồng độ khác nhau Hình 3.2 Đồ thị biểu thị sự thay đổi hàm lượng AIA của chủng BXB2 khi bổ sung Tryptophan ở các nồng độ khác nhau 3.1 Kết quả kiểm tra chủng vi khuẩn BX-B2 sau khi tách DNA tổng số và tiến hành PCR bằng cặp mồi 16S.Sản phẩm PCR được chạy kiểm tra trên bản gel agarose 1% thể hiện hình 3.3 1 M 1500bp Hình 3.3 Điện di đồ kết quả chủng BX-B2 nghiên cứu • 3.2 Kết quả giải trình... ̀ •1 Sucrose 10g 0,41g •2 KH2PO4 0,52g •3 K2HPO4 0,2g •4 CaCl2 0,005g •5 Na2SO4 0,1g •6 MgSO4 0,005g •7 FeSO4.7H2O •8 Na2MoO4.2H2O 0,0625g •9 Agar 20g •pH =7 Dung dịch • Dung dịch dùng trong tách ADN tổng số: Đệ TE pH8 (Tris-Cl: m 10mM, pH8; EDTA 1 mM pH8) SDS: 10% NaCl 5M CTAB/ NaCl (CTAB: 10%; NaCl 0,7M Hoà 4,1g NaCl trong 80 ml H2O và thêm từ từ 10g CTAB trong khi vừa đun vừa khuấy Dẫn H2O đế 100 . lập và định danh một số chủng vi khuẩn có khả năng sinh tổng hợp AIA  Người hướng dẫn : PGS.TS Phạm Việt Cường NSVTH : Nguyễn Thị Hải Anh Lớp : KS CNSH. đồ 3.1 : Đường chuẩn và phương trình tương quan giữa chỉ số OD và nồng độ của dung dịch IAA 3 .Anh h ng cua nông ô Tryptophan ̀̉ ưở ̉ đ ̣ trong môi tr ng lên ham l ng AIA ̀ ̀ươ ượ trong dich