HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC -*** KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU ĐỊNH DANH VÀ ĐẶC TÍNH ĐỐI KHÁNG CỦA CHỦNG VI KHUẨN VK5 VỚI MỘT SỐ CHỦNG NẤM GÂY BỆNH TRÊN CHUỐI HÀ NỘI - 2022 HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC -*** KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU ĐỊNH DANH VÀ ĐẶC TÍNH ĐỐI KHÁNG CỦA CHỦNG VI KHUẨN VK5 VỚI MỘT SỐ CHỦNG NẤM GÂY BỆNH TRÊN CHUỐI Sinh viên thực : PHAN QUẾ ANH Lớp : K63CNSHD MSV : 637301 Chuyên ngành : CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giảng viên hướng dẫn : PGS.TS NGUYỄN XUÂN CẢNH HÀ NỘI - 2022 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu khoa học thực thời gian từ tháng 03/2022 - 09/2022 hướng dẫn PGS.TS Nguyễn Xuân Cảnh, Bộ môn Công nghệ Vi sinh, Khoa Công nghệ Sinh học, Học viện Nông nghiệp Việt Nam Các số liệu kết nghiên cứu khóa luận trung thực chưa công bố nghiên cứu khác Các tài liệu trích dẫn khố luận nêu mục tài liệu tham khảo Hà Nội, ngày 08 tháng năm 2022 Sinh viên Phan Quế Anh i LỜI CẢM ƠN Lời cho cảm ơn đến ban Giám đốc Học viện, đội ngũ giảng viên, cán giảng dạy công tác Học viện Tôi vô biết ơn đến thầy cô khoa Công nghệ sinh học giảng dạy, hướng dẫn tạo điều kiện để tơi hồn thành chương trình học, thực tập nghề nghiệp khoá luận tốt nghiệp Đặc biệt hơn, tơi xin bày tỏ kính trọng biết ơn sâu sắc đến PGS.TS Nguyễn Xuân Cảnh định hướng nghiên cứu hướng dẫn tận tình tơi thời gian thực khố luận Tơi xin cảm ơn đến thầy cô môn Công nghệ vi sinh thầy PGS.TS Nguyễn Văn Giang, cô Th.S Trần Thị Hồng Hạnh, cô Th.S Nguyễn Thanh Huyền, cô Th.S Trần Thị Đào chị nghiên cứu viên Nguyễn Thị Thu giúp đỡ hỗ trợ thời gian thực khố luận Cuối tơi xin cảm ơn đến bạn bè thực khố luận mơn Cơng nghệ vi sinh gia đình khuyến khích, động viên giúp đỡ để tơi hồn thành khố luận tốt nghiệp Tơi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 08 tháng năm 2022 Sinh viên Phan Quế Anh ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT v DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH .vii TÓM TẮT KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU viii PHẦN I: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích nghiên cứu 1.3 Nội dung nghiên cứu PHẦN II: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan số bệnh hại nấm bệnh gây chuối số trồng 2.1.1 Tổng quan bệnh thán thư nấm Colletotrichum gloeosporioides 2.1.2 Tổng quan bệnh héo Panama Fusarium oxysporum f sp cubense 2.2.3 Tổng quan bệnh bạc lá, bệnh đốm nấm Alternaria alternata 11 2.2.4 Tổng quan bệnh nấm Corynespora cassiicola 12 2.2 Tổng quan chủng vi khuẩn VK5 14 2.2.1 Nguồn gốc phân lập, đặc điểm hình thái phản ứng sinh lý, sinh hóa chủng vi khuẩn VK5 14 2.2.2 Khả sinh enzyme ngoại bào 15 2.2.3 Khả đối kháng nấm C musae chủng VK5 15 PHẦN III ĐỐI TƯỢNG, VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 3.1 Đối tượng, vật liệu nghiên cứu 17 3.1.1 Thời gian, địa điểm nghiên cứu 17 3.1.2 Đối tượng nghiên cứu 17 3.1.3 Thiết bị hoá chất 17 3.1.4 Môi trường sử dụng nghiên cứu 18 iii 3.2 Phương pháp nghiên cứu 18 3.2.1 Khảo sát khả kháng nấm phổ rộng chủng vi khuẩn VK5 18 3.2.2 Phương pháp đánh giá ảnh hưởng dịch nuôi cấy vi khuẩn đến phát triển hệ sợi nấm bệnh 19 3.2.3 Phương pháp đánh giá ảnh hưởng dịch nuôi cấy vi khuẩn đến tỷ lệ nảy mầm bào tử nấm bệnh 20 3.2.4 Phương pháp tách chiết DNA 21 3.2.5 Phương pháp chạy điện di gel Agarose 22 3.2.6 Kỹ thuật PCR 23 3.2.7 Xây dựng phân loài 23 PHẦN IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 24 4.1 Kết khảo sát khả kháng nấm phổ rộng vi khuẩn 24 4.2 Kết ảnh hưởng dịch nuôi cấy vi khuẩn VK5 đến phát triển hệ sợi nấm C musae 26 4.3 Kết ảnh hưởng dịch nuôi cấy chủng vi khuẩn VK5 đến tỷ lệ nảy mầm nấm C musae 29 4.4 Định danh chủng vi khuẩn VK5 32 PHẦN V KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 35 5.1 Kết luận 35 5.2 Kiến nghị 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO 36 PHỤ LỤC 43 iv DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Diễn giải chữ viết tắt CLF Bệnh rụng Corynespora cs Cộng CT Công thức CTAB Cetyltrimethylammonium bromide ĐC Đối chứng EDTA Ethylene Diamine Tetraacetic Axit LB Lysogeny Broth MT Môi trường PDA Potato Dextrose Agar PSA Potato Sugar Agar TAE Tris-Acetate-EDTA TN Thí nghiệm v DANH MỤC BẢNG Bảng Khả đối kháng chủng vi khuẩn VK5 với số chủng nấm phổ biến gây bệnh chuối 25 Bảng Ảnh hưởng dịch lọc vi khuẩn VK5 đến sinh trưởng, phát triển tản nấm C musae 27 Bảng Khả nảy mầm nấm C musae 29 vi DANH MỤC HÌNH Hình Các phận chuối bị nhiễm bệnh thán thư Hình 2 Hình thái khuẩn lạc bào tử chủng VK5 14 Hình Khả kháng số chủng nấm chủng vi khuẩn VK5 môi trường PDA sau 07 ngày nuôi cấy 24 Hình Ảnh hưởng dịch lọc vi khuẩn VK5 đến sinh trưởng, phát triển tản nấm C musae sau 168h nuôi cấy 26 Hình Hình ảnh độ phóng đại 40x hệ sợi nấm Colletotrichum musae ngày thứ mẫu đối chứng mẫu xử lý với dịch lọc VK5 28 Hình 4 Ảnh hưởng dịch ni cấy VK5 đến nảy mầm bào tử nấm Colletotrichum musae 30 Hình Hình ảnh độ phóng đại 400 lần bào tử C musae ban đầu nảy mầm mẫu đối chứng mẫu xử lý với dịch lọc VK5 31 Hình Kết điện di DNA tổng số sản phẩm PCR VK5 33 Hình Cây phân loại chủng VK5 34 vii TÓM TẮT KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Đề tài khảo sát khả đối kháng nấm phổ rộng vi khuẩn VK5 04 chủng nấm bệnh phân lập từ phận nhiễm bệnh chuối Kết chủng VK5 có khả đối kháng đồng thời 04 chủng nấm bệnh, tỷ lệ đối kháng 04 chủng nấm đạt 50% Các thử nghiệm dịch nuôi cấy chủng VK5 cho thấy, dịch ni cấy chủng VK5 có hiệu ức chế phát triển hệ sợi tỷ lệ nảy mầm bào tử C musae Dịch nuôi cấy chủng VK5 tỷ lệ 1:10 tác động tới đường kính tản nấm, tỷ lệ đối kháng 59,57 ± 2,1%; ngày thứ quan sát kính hiển vi độ phóng đại 400 lần, sợi nấm quăn rụt teo lại, phân nhánh, thành tế bào sợi mỏng, không phát triển cuống sinh bào tử, ngày thứ nhiều sợi nấm bị đứt gãy Dịch nuôi cấy chủng VK5 nồng độ dịch 100% ức chế nảy mầm bào tử, tỷ lệ ức chế 89,80% so với mẫu đối chứng; hình thái bào tử nấm bị biến dạng so với bào tử mẫu đối chứng Kết định danh chủng vi khuẩn VK5 có quan hệ gần gũi với chủng Paenibacillus polymyxa (cịn gọi Bacillus polymyxa) dựa phân tích trình tự 16S rDNA viii Marker VK5 Marker VK5 ~1500 bp A B Hình Kết điện di DNA tổng số sản phẩm PCR VK5 A DNA tổng số B Sản phẩm PCR khuếch đại đoạn gen 16S rRNA Xây dựng phân loại Sản phẩm PCR tinh giải trình tự Sau nhận trình tự, tiến hành so sánh trình tự thu với trình tự khác ngân hàng gen nhờ công cụ BLAST, kết cho thấy vi khuẩn VK5 phân lập từ Yên Linh, Dân Tiến, Khối Châu, Hưng n thuộc lồi Paenibacillus polymyxa với độ tương đồng 99%, thực xây dựng phân loại cho chủng VK5 phần mềm MEGA11 Kết thể hình 4.7 33 Hình Cây phân loại chủng VK5 Dựa vào Hình 4.7 thấy chủng vi khuẩn VK5 nằm nhánh với chủng Paenibacillus polymyxa strain DP-11 với giá trị bootstrap 81 Bên cạnh đó, kết trình tự nucleotide công cụ NCBI BLAST cho thấy mức độ tương đồng (Indentity) chủng vi khuẩn VK5 so với chủng Paenibacillus polymyxa strain DP-11 98% mức độ bao phủ (Query coverage) 99% Xét mặt giá trị tin cậy, mức độ tương đồng mức độ bao phủ hai chủng có quan hệ gần gũi với Ngoài dựa vào đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh hóa nghiên cứu, tơi nhận thấy chủng vi khuẩn VK5 có nhiều đặc điểm giống với chủng Paenibacillus polymyxa strain DP-11 ngân hàng gen 34 PHẦN V KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Chủng VK5 có khả kháng nấm phổ rộng nhiều loại nấm gây bệnh chuối dựa kết đối kháng với 04 loại nấm C.gloeosporioides, Foc TR4, C cassiicola, A alternata M3 môi trường PDA theo phương pháp đồng nuôi cấy, tỷ lệ đối kháng mẫu nấm bệnh cho kết 50% Dịch lọc vi khuẩn VK5 có khả ức chế sinh trưởng, phát triển tản nấm hệ sợi C musae Với tỷ lệ hỗn dịch 1:10 (dịch lọc VK5/môi trường), sau 07 ngày ni cấy, đường kính tản nấm giảm rõ rệt, tỷ lệ ức chế đạt 59,57±2,1% Quan sát kính hiển vi thấy sợi nấm cong, xoắn lại, đốt, thành tế bào sợi mỏng, sợi nấm bị đứt gãy nhiều Dịch lọc vi khuẩn VK5 có khả ức chế nảy mầm bào tử C musae, tỷ lệ 1: (mix dịch bào tử nấm C.musae dịch nuôi cấy vi khuẩn VK5), tỷ lệ ức chế nảy mầm bào tử nấm C musae đạt 89,80±1,2 % Nồng độ dịch lọc cao chiều dài ống mầm ngắn, làm thay đổi hình dạng bào tử so với đối chứng bào tử ban đầu Dựa vào kết định danh đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh hóa nghiên cứu, tơi nhận thấy chủng vi khuẩn VK5 có nhiều đặc điểm giống với chủng Paenibacillus polymyxa strain DP-11 ngân hàng gen 5.2 Kiến nghị - Tách chiết tinh hoạt chất kháng nấm vi khuẩn VK5 - Tiến hành thử nghiệm tái lây nhiễm sử dụng dịch lọc kháng nấm điều kiện in vivo - Thử nghiệm lên men vi khuẩn VK5 phục vụ nghiên cứu chế phẩm sinh học kháng bệnh nấm chuối 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt: Bùi Mai Hương (2013) Nghiên cứu đặc điểm sinh vật học bệnh khô Cẩm lai vú Tạp chí KH&CN Lâm nghiệp (VNUF Journal Article), 1-2013 Lê Thanh Long, Nguyễn Thị Nga, Nguyễn Cao Cường, Trần Ngọc Khiêm, Nguyễn Thị Thủy Tiên (2015) Khả ức chế nanochitosan Colletotrichum acutatum L2 gây hại cà chua sau thu hoạch Tạp chí Khoa học công nghệ nông nghiệp (Viện Khoa học Nông nghiệp VN), 13(8): 1481-1487 Lương Đức Phẩm (2004) Công nghệ vi sinh NXB Nông nghiệp Hà Nội Nguyễn Xuân Cảnh, Hồ Tú Cường, Nguyễn Thị Định, Phạm Thị Hiếu (2016) Nghiên cứu chủng xạ khuẩn có khả đối kháng với vi khuẩn Vibrio parahaemolyticus gây bệnh tôm Tạp chí KH Nơng nghiệp Việt Nam 2016, 14 (11): 1809-1816 Tiếng Anh: Aerts JMFG, Boot RG, Renkema GH & cs (1996) Chitotriosidase - A human macrophage chitinase that is a marker for Gaucher disease manifestation In: Muzzarelli RAA, editor Chitin Enzymology, Vol Atec Edizioni- Grottammare, 1996 p 3–10 Agarwal, G., & Ghosh, K (1979) Post infection changes in ascorbic acid content in lemon, musambi and orange fruits induced by Colletotrichum gloeosporioides Indian phytopathology Ajay Kumar, G (2014) Colletotrichum gloeosporioides: biology, pathogenicity and management in India J Plant Physiol Pathol, 2(2): 2-11 Alam, M W., Malik, A., Rehman, A., Hameed, A., Tahir, U., Sarwar, M., Hussain, M., Hussain, D., & Shafeeq, T (2021) First record of Colletotrichum gloeosporioides causing Anthracnose of banana in Pakistan Plant Disease, 105(7): 2013 36 Ash, G., & Lanoiselet, V (2001) First report of Alternaria alternata causing late blight of pistachio (Pistacia vera) in Australia Plant Pathology, 50(6) Bailey, J A., & Jeger, M J (1992) Colletotrichum: biology, pathology and control Benslim, A., Mezaache-Aichour, S., Haichour, N., Chebel, S., & Zerroug, M (2016) Evaluation of inhibition of fungal spore germination by rhizospheric bacterial extracts Annu Res Review Bio 11 (5): 1–7 Brown, K (1998) Preliminary studies on endophytic fungal communities of Musa acuminata species complex in Hong Kong and Australia Fung Divers., 1: 27-51 Bubici, G., Kaushal, M., Prigigallo, M I., Gómez-Lama Cabanás, C., & Mercado-Blanco, J (2019) Biological control agents against Fusarium wilt of banana Frontiers in microbiology, 10: 616 10 Chen, A., Sun, J., Matthews, A., Armas-Egas, L., Chen, N., Hamill, S., Mintoff, S., Tran-Nguyen, L T., Batley, J., & Aitken, E A (2019) Assessing variations in host resistance to Fusarium oxysporum f sp cubense race in Musa species, with a focus on the subtropical race Frontiers in microbiology, 10: 1062 11 Chithra, S., Jasim, B., Sachidanandan, P., Jyothis, M., & Radhakrishnan, E (2014) Piperine production by endophytic fungus Colletotrichum gloeosporioides isolated from Piper nigrum Phytomedicine, 21(4): 534-540 12 Dale, J., James, A., Paul, J.-Y., Khanna, H., Smith, M., Peraza-Echeverria, S., Garcia-Bastidas, F., Kema, G., Waterhouse, P., & Mengersen, K (2017) Transgenic Cavendish bananas with resistance to Fusarium wilt tropical race Nature communications, 8(1): 1-8 13 Deighton, F (1936) Preliminary list of fungi and diseases of plants in Sierra Leone Bulletin of Miscellaneous Information (Royal Botanic Gardens, Kew, 1936(7): 397-424 37 14 Dong, X., Wang, M., Ling, N., Shen, Q., & Guo, S (2016) Effects of iron and boron combinations on the suppression of Fusarium wilt in banana Scientific reports, 6(1): 1-11 15 Encinas-Basurto, D., Valenzuela-Quintanar, M I., Sánchez-Estrada, A., Tiznado-Hernández, M E., Rodríguez-Félix, A., & Troncoso-Rojas, R (2017) Alterations in volatile metabolites profile of fresh tomatoes in response to Alternaria alternata (Fr.) Keissl 1912 infection Chilean journal of agricultural research, 77(3): 194-201 16 Escott GM, Walters CE, Ingham E, Adams DJ (1996) Expression of chitinase activity during monocyte differentiation In: Muzzarelli RAA, editor Chitin Enzymology, Vol Grottammare: Eur Chitin Soc, 1996 p 11–20 17 Fan, H., Guo, Z., Bai, T., Xu, S., Yang, P., Yin, K., & Zeng, L (2018) Biological characteristics of pathogenic bacteria causing banana leaf spot disease Journal of Southern Agriculture, 49(3), 481-487 18 Feldberg, R S., Chang, S., Kotik, A., Nadler, M., Neuwirth, Z., Sundstrom, D., & Thompson, N (1988) In vitro mechanism of inhibition of bacterial cell growth by allicin Antimicrobial agents and chemotherapy, 32(12): 1763-1768 19 Florence, U (2018) Corynespora leaf fall of Hevea brasilensis: Challenges and prospect African Journal of Agricultural Research, 13(40): 2098-2103 20 Fu, B., Zhang, Z., Wang, L., Li, G., Zhang, J., & Zhang, Y (2014) First report of leaf spot caused by Alternaria alternata on Chinese dwarf banana in China Plant Disease, 98(5): 691-691 21 Intan Sakinah, M., Suzianti, I., & Latiffah, Z (2013) First report of Colletotrichum gloeosporioides causing anthracnose of banana (Musa spp.) in Malaysia Plant Disease, 97(7): 991-991 38 22 Khleekorn, S., & Wongrueng, S (2014) Evaluation of antagonistic bacteria inhibitory to Colletotrichum musae on banana J Agric Technol, 10(2): 383390 23 Kumar, K V K., Reddy, M., Kloepper, J., Lawrence, K., Yellareddygari, S., Zhou, X., Sudini, H., Reddy, E S., Groth, D., & Miller, M (2011) Screening and selection of elite plant growth promoting rhizobacteria (PGPR) for suppression of Rhizoctonia solani and enhancement of rice seedling vigor J Pure Appl Microbiol, 5(2): 1-11 24 Lamsal, K., Kim, S W., Kim, Y S., & Lee, Y S (2012) Application of rhizobacteria for plant growth promotion effect and biocontrol of anthracnose caused by Colletotrichum acutatum on pepper Mycobiology, 40(4): 244-251 25 Lima, C B d., Rentschler, L L A., Bueno, J T., & Boaventura, A C (2016) Plant extracts and essential oils on the control of Alternaria alternata, Alternaria dauci and on the germination and emergence of carrot seeds (Daucus carota L.) Ciência Rural, 46: 764-770 26 Liyanage, A d S., Jayasinghe, C., Liyanage, N., & Jayaratne, A (1986) Corynespora leaf spot disease of rubber (Hevea brasiliensis)-a new record J Rubber Res Inst Sri Lanka, 65: 47-50 27 Lopez, D., Ribeiro, S., Label, P., Fumanal, B., Venisse, J.-S., Kohler, A., De Oliveira, R R., Labutti, K., Lipzen, A., & Lail, K (2018) Genome-wide analysis of Corynespora cassiicola leaf fall disease putative effectors Frontiers in microbiology, 9: 276 28 Maiti, C K., Sen, S., Paul, A K., & Acharya, K (2007) First report of leaf blight disease of Gloriosa superba L caused by Alternaria alternata (Fr.) Keissler in India Journal of General Plant Pathology, 73(5): 377-378 29 Meena, M., Gupta, S K., Swapnil, P., Zehra, A., Dubey, M K., & Upadhyay, R S (2017) Alternaria toxins: potential virulence factors and genes related to pathogenesis Frontiers in microbiology, 8: 1451 39 30 Meng, X., Li, J., Bi, F., Zhu, L., & Ma, Z (2015) Antifungal activities of crude extractum from Camellia semiserrata Chi (Nanshancha) seed cake against Colletotrichum musae, Colletotrichum gloeosporioides and Penicillium italicum in vitro and in vivo fruit test The plant pathology journal, 31(4): 414 31 Murmu, S B., & Mishra, H N (2018) Post-harvest shelf-life of banana and guava: Mechanisms of common degradation problems and emerging counteracting strategies Innovative Food Science & Emerging Technologies, 49: 20-30 32 Muzzarelli, RAA, Ilari P, Tarsi R, Dubini B, Xia W (1994) Chitosan from Absidia coerulea Carbohydr Polym 1994;25:45–50 33 Muzzarelli, RAA Chitin (1977) Oxford: Pergamon Press, 1977 34 Parkunan, V., Li, S., Fonsah, E., & Ji, P (2013) First report of Alternaria leaf spot of Banana caused by Alternaria alternata in the United States Plant Disease, 97(8): 1116-1116 35 Paull, R E., Nishijima, W., Reyes, M., & Cavaletto, C (1997) Postharvest handling and losses during marketing of papaya (Carica papaya L.) Postharvest biology and technology, 11(3): 165-179 36 Pegg, K G., Coates, L M., O’Neill, W T., & Turner, D W (2019) The epidemiology of Fusarium wilt of banana Frontiers in Plant Science, 10: 1395 37 Photita, W., Lumyong, S., Lumyong, P., McKenzie, E., & Hyde, K (2004) Are some endophytes of Musa acuminata latent pathogens? Fungal diversity 38 Prabakar, K., Raguchander, T., Parthiban, V., Muthulakshmi, P., & Prakasam, V (2005) Post harvest fungal spoilage in mango at different levels marketing Madras Agric J, 92(1-3): 42-48 39 Rahman, M., Begum, M., & Alam, M (2009) Screening of Trichoderma isolates as a biological control agent against Ceratocystis paradoxa causing pineapple disease of sugarcane Mycobiology, 37(4): 277-285 40 40 Ranjitham Thangamani, P., Kuppusamy, P., Peeran, M F., Gandhi, K., & Raguchander, T (2011) Morphological and physiological characterization of Colletotrichum musae the causal organism of banana anthracnose World Journal of Agricultural Sciences, 7(6): 743-754 41 Rathod, G (2010) Studies on postharvest diseases of papaya 42 Riera, N., Ramirez-Villacis, D., Barriga-Medina, N., Alvarez-Santana, J., Herrera, K., Ruales, C., & Leon-Reyes, A (2019) First report of banana anthracnose caused by Colletotrichum gloeosporioides in Ecuador Plant Disease, 103(4): 763-763 43 Sharma, M., & Kulshrestha, S (2015) Colletotrichum gloeosporioides: an anthracnose causing pathogen of fruits and vegetables Biosciences Biotechnology Research Asia, 12(2): 1233-1246 44 Shu, C., Chen, Q., Pi, L., Zhang, D., Panhwar, Q A., & Zhou, E (2017) Identification and antifungal activity analysis of two biocontrol antagonists to Colletotrichum musae Journal of Phytopathology, 165(7-8): 554-561 45 Sid, A., Ezziyyani, M., Egea-Gilabert, C., & Candela, M E (2003) Selecting bacterial strains for use in the biocontrol of diseases caused by Phytophthora capsici and Alternaria alternata in sweet pepper plants Biologia plantarum, 47(4), 569-574 46 Tripathi, L., Ntui, V O., & Tripathi, J N 2022 Control of Bacterial Diseases of Banana Using CRISPR/Cas-Based Gene Editing International Journal of Molecular Sciences, 23(7): 3619 47 Van der Waals, J E., Pitsi, B E., Marais, C., & Wairuri, C K (2011) First report of Alternaria alternata causing leaf blight of potatoes in South Africa Plant Disease, 95(3): 363-363 48 Weir, B., Johnston, P., & Damm, U (2012) The Colletotrichum gloeosporioides species complex Studies in mycology, 73: 115-180 49 Whan, J A., Dann, E K., Smith, L J., & Aitken, E A (2008) AcibenzolarS-methyl-induced alteration of defence gene expression and enzyme activity 41 in cotton infected with Fusarium oxysporum f sp vasinfectum Physiological and molecular plant pathology, 73(6): 175-182 50 Xu, Z., Wang, M., Du, J., Huang, T., Liu, J., Dong, T., & Chen, Y (2020) Isolation of Burkholderia sp HQB-1, a promising biocontrol bacteria to protect banana against Fusarium wilt through phenazine-1-carboxylic acid secretion Frontiers in microbiology, 11, 605152 51 Yamada, Y., & Azuma, K (1977) Evaluation of the in vitro antifungal activity of allicin Antimicrobial agents and chemotherapy, 11(4): 743-749 52 Zakaria, L., Sahak, S., Zakaria, M., & Salleh, B (2009) Characterisation of Colletotrichum species associated with anthracnose of banana Tropical life sciences research, 20(2): 119 42 PHỤ LỤC Phụ lục Hình ảnh tản nấm hệ sợi nấm C.musae mẫu đối chứng mẫu sau xử lý qua dịch lọc VK5 sau ngày ni cấy Hình ảnh tản nấm hệ sợi nấm C.musae sau ngày nuôi cấy mẫu đối chứng mẫu sau xử lý qua dịch lọc VK5 ĐC 1:50 1:30 1:10 43 Hình ảnh hệ sợi nấm C.musae sau ngày nuôi cấy mẫu đối chứng mẫu sau xử lý qua dịch lọc VK5 ĐC 1:50 1:30 1:10 44 Phụ lục Một số hình ảnh hệ sợi nấm C.musae mẫu đối chứng mẫu sau xử lý qua dịch lọc VK5 sau ngày nuôi cấy Mẫu đối chứng A B A B Mẫu TN 1:50 45 Mẫu TN 1:30 A B A B Mẫu TN 1:10 A Hình ảnh độ phóng đại 400 lần sợi nấm C.musae B Hình ảnh độ phóng đại 1000 lần cuống sinh bào tử bào tử C.musae 46 Phụ lục Kết trình tự vi khuẩn VK5 công cụ NCBI BLAST 47