HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC - - KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA MÔI TRƯỜNG NUÔI TỚI SINH TRƯỞNG CỦA CHỦNG XẠ KHUẨN Streptomyces krainskii XK16 Sinh viên thực : Phạm Thị Hà Thu Mã sinh viên : 637278 Lớp : K63-CNSHC Giảng viên hướng dẫn : TS Nguyễn Trường Sơn : PGS TS Nguyễn Văn Giang Bộ môn : Công nghệ vi sinh HÀ NỘI – 2022 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu thân, số liệu kết nghiên cứu khóa luận trung thực chưa cơng bố cơng trình Tơi xin cam đoan giúp đỡ trình thực khóa luận cảm ơn thơng tin trích dẫn ghi rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày tháng năm 2022 Sinh viên Phạm Thị Hà Thu i LỜI CẢM ƠN Để hồn thành khóa luận này, lời đầu tiên, xin trân trọng cảm ơn quý thầy, cô Bộ môn Công nghệ vi sinh, Khoa Công nghệ sinh học, Học viện Nông nghiệp Việt Nam tạo điều kiện giúp đỡ tơi hồn thành khóa luận tốt nghiệp Tơi xin tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến Thầy TS Nguyễn Trường Sơn, PGS TS Nguyễn Văn Giang quan tâm, bảo, dạy dỗ tơi suốt q trình làm khóa luận tốt nghiệp Tôi xin cảm ơn bạn, anh chị học tập làm việc Bộ môn Công nghệ vi sinh đồng hành giúp đỡ nhiều công việc Cuối cùng, xin bày tỏ lịng biết ơn đến gia đình, bạn bè thân thiết hết lịng động viên, giúp đỡ tơi trình học tập Học viện Hà Nội, ngày tháng năm 2022 Sinh viên Phạm Thị Hà Thu ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH vii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT viii TÓM TẮT ix PHẦN I MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.3 Ý nghĩa 1.3.1 Ý nghĩa khoa học 1.3.2 Ý nghĩa thực tiễn PHẦN II TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan xạ khuẩn 2.1.1 Giới thiệu chung xạ khuẩn 2.1.2 Đặc điểm hình thái cấu tạo kích thước 2.1.3 Sinh sản 2.1.4 Ứng dụng 2.1.4.1 Ứng dụng nông nghiệp 2.1.4.2 Ứng dụng y dược 2.2 Tổng quan lên men xốp 10 2.2.1 Giới thiệu 10 2.2.2 Cơ chất lên men xốp 11 2.2.3 Sinh khối vi sinh vật lên men xốp 12 2.2.4 Các yếu tố ảnh hưởng đến lên men xốp 13 iii 2.2.4.1 Chủng vi sinh vật 13 2.2.4.2 Cơ chất 14 2.2.4.3 Độ ẩm 15 2.2.4.4 pH 16 2.2.4.5 Kích thước hạt 16 2.2.5 Ứng dụng lên men xốp 17 2.2.5.1 Sản xuất enzyme 17 2.2.5.2 Sản xuất axit hữu 17 2.2.5.3 Sản xuất chất chuyển hóa thứ cấp 18 2.2.5.4 Xử lý sinh học 19 2.2.5.5 Nhiên liệu sinh học 19 2.3 Tình hình nghiên cứu nước thuộc lĩnh vực đề tài 20 2.3.1 Tình hình nghiên cứu nước 20 2.3.2 Tình hình nghiên cứu nước ngồi 20 PHẦN III VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 3.1 Thời gian địa điểm thí nghiệm 22 3.2 Phương tiện nghiên cứu 22 3.2.1 Vật liệu 22 3.2.2 Dụng cụ thiết bị 22 3.2.3 Hóa chất 22 3.3 Nội dung phương pháp nghiên cứu 23 3.3.1 Khảo sát ảnh hưởng môi trường nuôi cấy lỏng đến sinh trưởng chủng xạ khuẩn Streptomyces krainskii XK16 23 3.3.1.1 Khảo sát ảnh hưởng môi trường lên men lỏng đến sinh trưởng chủng xạ khuẩn Streptomyces krainskii XK16 23 3.3.1.2 Khảo sát ảnh hưởng pH môi trường lỏng đến sinh trưởng chủng xạ khuẩn Streptomyces krainskii XK16 24 3.3.1.3 Khảo sát ảnh hưởng nguồn cacbon đến sinh trưởng chủng xạ khuẩn Streptomyces krainskii XK16 25 iv 3.3.2 Khảo sát ảnh hưởng môi trường lên men xốp đến sinh trưởng chủng xạ khuẩn Streptomyces krainskii XK16 26 3.3.3 Khả sinh enzyme pectinase 27 3.3.4 Khả phân giải phosphate khó tan xạ khuẩn Streptomyces krainskii XK16 28 PHẦN IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 29 4.1 Khảo sát ảnh hưởng môi trường nuôi cấy lỏng đến sinh trưởng chủng xạ khuẩn Streptomyces krainskii XK16 29 4.1.1 Khảo sát ảnh hưởng môi trường lên men lỏng đến sinh trưởng chủng xạ khuẩn Streptomyces krainskii XK16 29 4.1.2 Khảo sát ảnh hưởng pH môi trường đến sinh trưởng chủng xạ khuẩn Streptomyces krainskii XK16 32 4.1.3 Khảo sát ảnh hưởng nguồn cacbon đến sinh trưởng chủng xạ khuẩn Streptomyces krainskii XK16 34 4.2 Ảnh hưởng môi trường lên men xốp đến sinh trưởng xạ khuẩn Streptomyces krainskii XK16 36 4.3 Khả sinh enzyme pectinase 40 4.4 Khả phân giải phosphate khó tan xạ khuẩn Streptomyces krainskii XK16 42 PHẦN V KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 44 5.1 Kết luận 44 5.2 Kiến nghị 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO 45 PHỤ LỤC 51 v DANH MỤC BẢNG Bảng 4.1 Số lượng khuẩn lạc xạ khuẩn Streptomyces krainskii XK16 môi trường khác 30 Bảng 4.2 Ảnh hưởng chất cám gạo, cám ngô, cám mạch, cám hỗn hợp độ ẩm 50%, 55% 60% đến sinh trưởng xạ khuẩn Streptomyces krainskii XK16 37 vi DANH MỤC HÌNH Hình 4.1 Khối lượng tươi xạ khuẩn Streptomyces krainskii XK16 sau ngày nuôi cấy môi trường lỏng khác 30 Hình 4.2 Khuẩn lạc xạ khuẩn Streptomyces krainskii XK16 hình thành mơi trường ISP-2 thời điểm ngày sau cấy 31 (A) mặt đĩa; (B) mặt đĩa 31 Hình 4.3 Sự hình thành khuẩn lạc xạ khuẩn Streptomyces krainskii XK16 số môi trường khác thời điểm ngày sau cấy 32 (A) mặt đĩa; (B) mặt đĩa; (a1), (a2): môi trường MSSCM; 32 (b1), (b2): môi trường WYE; (c1), (c2): môi trường MT7 32 Hình 4.4 Mật độ tế bào xạ khuẩn Streptomyces krainskii XK16 sau ngày nuôi cấy môi trường ISP-2 lỏng pH khác 33 Hình 4.5 Sinh khối tươi xạ khuẩn Streptomyces krainskii XK16 sau ngày nuôi cấy môi trường ISP-2 lỏng pH khác 34 Hình 4.6 Khuẩn lạc xạ khuẩn Streptomyces krainskii XK16 hình thành mơi trường ISP-2, pH thời điểm ngày sau cấy 34 Hình 4.7 Mật độ tế bào xạ khuẩn Streptomyces krainskii XK16 sau ngày nuôi cấy môi trường ISP-2 lỏng, pH nguồn cacbon khác 35 Hình 4.8 Sinh khối tươi xạ khuẩn Streptomyces krainskii XK16 sau ngày nuôi cấy môi trường ISP-2 lỏng, pH nguồn cacbon khác 35 Hình 4.9 Khuẩn lạc xạ khuẩn Streptomyces krainskii XK16 hình thành mơi trường ISP-2, pH 7, nguồn cacbon D-Glucose thời điểm ngày sau cấy 36 Hình 4.10 Khuẩn lạc xạ khuẩn Streptomyces krainskii XK16 môi trường lên men xốp chứa chất cám hỗn hợp, cám gạo, cám ngô, cám mạch độ ẩm 50%, 55% 60% sau ngày lên men 40 Hình 4.12 Khả phân giải phosphate khó tan xạ khuẩn Streptomyces krainskii XK16 qua ngày nuôi cấy 42 vii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Từ viết tắt Từ viết đầy đủ SSF Solid State Fermentation/lên men xốp ADN Axit Deoxyribonucleic ATP Adenosine Triphosphate LNMS Low Nutrient Mineral Salts Agar Modified ISS Inorganic Salt Starch Agar WYE Water Yeast Extract Agar MSSCM Mineral Salts Starch Casein Agar Modified cs Cộng viii TÓM TẮT Việt Nam nằm vùng khí hậu nhiệt đới với hệ vi sinh vật phong phú, hứa hẹn mang lại ứng dụng vô đa dạng thực tế sống Trong hệ vi sinh vật, chi xạ khuẩn Streptomyces biết đến có khả sản xuất nhiều loại hợp chất có hoạt tính sinh học cao Nghiên cứu khảo sát ảnh hưởng môi trường nuôi tới sinh trưởng chủng xạ khuẩn Streptomyces krainskii XK 16 thực nhằm nghiên cứu ảnh hưởng điều kiện môi trường nuôi tới khả tăng mật độ tạo sinh khối cho trình lên men Trong môi trường nuôi lỏng thử nghiệm, chủng xạ khuẩn Streptomyces krainskii XK 16 sinh trưởng tốt môi trường ISP-2 lỏng, pH 7, sử dụng nguồn cacbon D-Glucose Trong chất cám thử nghiệm lên men xốp (cám gạo, cám ngô, cám mạch, cám hỗn hợp (tỷ lệ cám gạo:cám ngô:cám mạch 1:1:1)), sau ngày lên men, chủng xạ khuẩn Streptomyces krainskii XK 16 sinh trưởng tốt môi trường chứa chất cám hỗn hợp, tỷ lệ tiếp giống 10% với mức độ ẩm từ 50-60 % trì mật độ tế bào/g chế phẩm mức cao Chủng xạ khuẩn Streptomyces krainskii XK 16 có khả sinh enzyme pectinase có khả phân giải phosphate khó tan cao ngày sau nuôi cấy môi trường NBRIP lỏng ix TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Đặng Tất Thành, Nguyễn Thanh Thủy, Vũ Nguyên Thành, George E A & Olsson L (2016) Phân lập đánh giá đặc tính chủng aspergillus brunneoviolaceus fec 156 sinh tổng hợp hệ enzyme thủy phân xylan Tạp chí Khoa học Công nghệ 54(4A): 267-274 Đinh Hồng Thái & Lê Minh Tường (2016) Khảo sát khả đối kháng xạ khuẩn nấm Phytophthora sp gây bệnh cháy lá, thối thân sen Can Tho University Journal of Science Nông nghiệp 2016: 20 Hà Thị Phương & Trần Thị Hải Yến (2019) Nghiên cứu tuyển chọn xạ khuẩn (Actinomycetes) phân lập từ đất rừng ngập mặn huyện Quảng Xương (tỉnh Thanh Hóa) có khả kháng nấm Fusarium oxysporum Tạp chí Khoa học Trường Đại học Hồng Đức 45: 133-143 Lê Thị Hiền, Đinh Văn Lợi, Vũ Thị Vân & Nguyễn Văn Giang (2014) Phân lập tuyển chọn chủng xạ khuẩn (Streptomyces spp.) đối kháng nấm bệnh Khoa học Phát triển 12(5): 656-664 Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến & Phạm Văn Ty (2012) Vi sinh vật học Nhà xuất Giáo dục Việt Nam Ngyễn Văn Giang, Đinh Văn Lợi & Phạm Hồng Hiển (2017) Ảnh hưởng điều kiện nuôi cấy, môi trường dinh dưỡng đến khả sinh trưởng chủng xạ khuẩn GL30 Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Nơng nghiệp Việt Nam 7(80): 47-51 Nguyễn Thu Hương, Trần Thị Thúy Hà & Nguyễn Văn Giang (2018) Phân lập, tuyển chọn vi khuẩn có khả phân giải phosphate khó tan từ đất vùng rễ lúa tỉnh Hải Dương Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Việt Nam 60(8): 18-22 Phạm Thị Ngọc Lan, Ngô Thị Bảo Châu & Ngô Thị Minh Thu (2020) Phân lập tuyển chọn vi khuẩn có khả phân giải pectin từ vỏ số loại trái Tạp chí Khoa học Công nghệ 17(2): 83-91 Trần Ngọc Hùng (2020) Tận dụng lớp nhớt trái Cà phê để nuôi cấy vi sinh thu nhận enzyme pectinase làm rượu vang Journal of Thu Dau Mot University 1(44): 34-43 10 Trương Minh Phụng, Lê Thúy Hằng, Phạm Thị Hảo, Nguyễn Thị Huỳnh My & Nguyễn Hồng Chương (2017) Nghiên cứu hoạt tính kháng khuẩn 45 chủng xạ khuẩn nội sinh Trinh nữ hoàng cung (Crinum latifolium) Tạp chí Phát triển KH&CN 20(5): 69-77 TIẾNG ANH 11 Aidoo K E., Hendry R & Wood B J B (1982) Solid Substrate Fermentations 28: 201-237 12 Alqahtani F S., Aly M M & Bokhari F M (2020) Isolation Characterization and Identification of a Pectinolytic Streptomyces Isolate Prensa Med Argent S2:006 13 Ames B N (1966) Assay of inorganic phosphate, total phosphate and phosphatases Complex Carbohydrate 115-118 14 Aoki Y., Yoshida M., Kawaide H., Abe H & Natsume M (2007) Isolation and Characterization of a Spore Germination Inhibitor fromStreptomycessp CB-1-1, a Phytopathogen Causing Root Tumor of Melon Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry 71(4): 986-992 15 Augustine S K., Bhavsar S P & Kapadnis B P (2005) A non-polyene antifungal antibiotic from Streptomyces albidoflavus PU 23 Journal of Biosciences 30(2): 201-211 16 Auria R., Morales M., Villegas E & Revah S (1993) Influence of Mold Growth on the Pressure Drop in Aerated Solid State Fermentors Biotechnology and Bioengineering 41(11): 1007-1013 17 Baliah N T., Pandiarjan G & Kumar B M (2016) Isolation, identification and characterization of phosphate solubilizing bacteria from different crop soils of Srivilliputtur Taluk, Virudhunagar District, Tamil Nadu Tropical Ecology 57(3): 465-474 18 Basavaraj M V & Shivayageeswar E N (2011) Production and Optimisation of Tetracycline by Various Strains of Streptomyces under Solid State Fermentation using Pineapple Peel as a Novel Substrate Recent Research in Science and Technolog 3(2): 01-08 19 Bhavana M., Talluri V P., Kumar K S & Rajagopal S V (2014) Optimization of culture conditions of streptomyces carpaticus (mtcc-11062) for the production of antimicrobial compound International Juornal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences 6(8): 281-285 20 Bizuye A., Moges F & Andualem B (2013) Isolation and screening of antibiotic producing actinomycetes from soils in Gondar town, North West Ethiopia Asian Pacific Journal of Tropical Disease 3(5): 375-381 21 Boubekri, K., Soumare, A., Mardad, I., Lyamlouli, K., Hafidi, M., Ouhdouch, Y., & Kouisni, L (2021) The Screening of Potassium- and Phosphate-Solubilizing Actinobacteria and the Assessment of Their Ability to Promote Wheat Growth Parameters Microorganisms 9(3): 470-486 46 22 Bussari, B., Saudagar, P S., Shaligram, N S., Survase, S A., & Singhal, R S (2007) Production of cephamycin C by Streptomyces clavuligerus NT4 using solid-state fermentation Journal of Industrial Microbiology & Biotechnology, 35(1): 49-58 23 Chaiharn M., Pathom-aree W., Sujada N & Lumyong S (2018) Characterization of phosphate solubilizing Streptomyces as a Biofertilizer Chiang Mai Journal of Science 45(2): 701-716 24 Chater K F (2013) Streptomyces 10.1016/b978-0-12-374984-0.01483-2: 565-567 25 Chouyia F E., Romano I., Fechtali T., Fagnano M., Fiorentino N., Visconti D., Idbella M., Ventorino V & Pepe O (2020) P-Solubilizing Streptomyces roseocinereus MS1B15 With Multiple Plant GrowthPromoting Traits Enhance Barley Development and Regulate Rhizosphere Microbial Population Frontiers in plant Science 11: 1137 26 Couto S R & Sanromán M Á (2006) Application of solid-state fermentation to food industry—A review Journal of Food Engineering 76(3): 291-302 27 Das S., Lyla P S & Ajmal Khan S (2008) Distribution and generic composition of culturable marine actinomycetes from the sediments of Indian continental slope of Bay of Bengal Chinese Journal of Oceanology and Limnology 26(2): 166-177 28 Demain A L (1999) Pharmaceutically active secondary metabolites of microorganisms Applied Microbiology and Biotechnology 52(4): 455463 29 Durand A (2003) Bioreactor designs for solid state fermentation Biochemical Engineering Journal 13(2-3): 113-125 30 El-Enshasy H A., Mohamed N A., Farid M A & El-Diwany A I (2008) Improvement of erythromycin production by Saccharopolyspora erythraea in molasses based medium through cultivation medium optimization Bioresource Technology 99(10): 4263-4268 31 El-Housseiny, G S., Ibrahim, A A., Yassien, M A., & Aboshanab, K M (2021) Production and statistical optimization of Paromomycin by Streptomyces rimosus NRRL 2455 in solid state fermentation BMC microbiology 21(1): 1-13 32 Ferrer C M., Olivete J E., Orias S L., Rocas M R., Juan C S., Dungca J Z., Mahboob T., Barusrux S & Nissapatorn V (2018) A Review on Streptomyces spp as Plant-Growth Promoting Bacteria (PGPB) Asian Journal of Pharmacognosy 2(3): 32-40 33 Fravel D R (2005) Commercialization and Implementation of Biocontrol Annual Review of Phytopathology 43(1): 337-359 34 Gervais P & Molin P (2003) The role of water in solid-state fermentation Biochemical Engineering Journal 13(2-3): 85-101 47 35 Gopalakrishnan S., Srinivas V., Alekhya G & Prakash B (2015) Effect of plant growth-promoting Streptomyces sp on growth promotion and grain yield in chickpea (Cicer arietinum L) Biotech 5(5): 799-806 36 Gopalakrishnan S., Srinivas V., Vidya M S & Rathore A (2013) Plant growth-promoting activities of Streptomyces spp in sorghum and rice Springer Plus 574: 1-8 37 Hao D., Gao P., Liu P., Zhao J., Wang Y., Yang W., Lu Y., Shi T & Zhang X (2010) AC3-33, a novel secretory protein, inhibits Elk1 transcriptional activity via ERK pathway Molecular Biology Reports 38(2): 1375-1382 38 Igarashi Y., Futamata K., Fujita T., Sekine A., Senda H., Naoki H & Furumai T (2003) Yatakemycin, a Novel Antifungal Antibiotic Produced by Streptomyces sp TP-A0356 The Journal of Antibiotics 56(2): 107-113 39 Kapilan R (2015) Solid state fermentation for microbial products : A review Archives of Applied Science Ressarch 7(8): 21-25 40 Karimi A., Shojaosadati S A., Hejazi P., Vasheghani-Farahani E & Hashemi M (2014) Porosity changes during packed bed solid-state fermentation Journal of Industrial and Engineering Chemistry 20(6): 4022-4027 41 Kiranmayi M U., Sudhakar P., Sreenivasulu K & Vijayalakshmi M (2018) Optimization of Culturing Conditions for Improved Production of Bioactive Metabolites by Pseudonocardia sp VUK-10 Mycobiology 39(3): 174-181 42 Krishna C (2005) Solid-State Fermentation Systems—An Overview Critical Reviews in Biotechnology 25(1-2): 1-30 43 Lee G Y., Li W., Chirwa U M & Shi J (2020) Effect of Substrate Characteristics on the Growth and Sporulation of Two Biocontrol Microorganisms during Solid State Cultivation Fermentation 6(3): 69 44 Lloyd A B (1969) Behaviour of streptomycetes in soil Microbiology 56(2): 165-170 45 Lonsane B K., Ghildyal N P., Budiatman S & Ramakrishna S V (1985) Engineering aspects of solid state fermentation Enzyme and Microbial Technology 7(6): 258-265 46 Mahajan G B (2012) Antibacterial Agents from Actinomyces-A review Frontiers in Bioscience E4(1): 240-253 47 Mitchell D A., Berovic M & Krieger N (2002) Overview of solid state bioprocessing Biotechnology Annual Review 183-225 48 Nigam P & Singh D (1994) Solid-state (substrate) fermentation systems and their applications in biotechnology Journal of Basic Microbiology 34(6): 405-423 49 Ooijkaas L P., Weber F J., Buitelaar R M., Tramper J & Rinzema A (2000) Defined media and inert supports: their potential as solid-state fermentation production systems Trends in Biotechnology 18(8): 356-360 48 50 Oskay M., Tamer A U., Karaboz I (2010) Isolation and screening for antimicrobial activities of culturable mesophilic streptomyces strains from north cyprus soils Fresenius Environmental Bulletin 19(2): 154-163 51 Oskay M (2011) Effects of some Environmental Conditions on Biomass and Antimicrobial Metabolite Production by Streptomyces Sp., KGG32 International Journal of Agricultural & Biology 13: 317-324 52 Quinn G A., Banat A M., Abdelhameed A M & Banat I M (2020) Streptomyces from traditional medicine: sources of new innovations in antibiotic discovery Journal of Medical Microbiology 69(8): 1040-1048 53 Rahardjo Y S P., Jolink F., Haemers S., Tramper J & Rinzema A (2005) Significance of bed porosity, bran and specific surface area in solid-state cultivation of Aspergillus oryzae Biomolecular Engineering 22(4): 133139 54 Raimbault M (1998) General and microbiological aspects of solid substrate fermentation Electronic Journal of Biotechnology 1(3): 1-15 55 Raimbault M & Alazard D (1980) Culture Method to Study Fungal Growth in Solid Fermentation Euopean Journal of Applied Microbiology and Biotechnology 9: 199-209 56 Ramachandran S., Singh S K., Larroche C., Soccol C R & Pandey A (2007) Oil cakes and their biotechnological applications – A review Bioresource Technology 98(10): 2000-2009 57 Saratale G D., Saratale R G., Ghodake G S., Jiang Y Y., Chang J S., Shin H S & Kumar G (2017) Solid state fermentative lignocellulolytic enzymes production, characterization and its application in the saccharification of rice waste biomass for ethanol production: An integrated biotechnological approach Journal of the Taiwan Institute of Chemical Engineers 76: 51-58 58 Scotti C T., Vergoignan C., Feron G., Durand A & (2001) Glucosamine measurement as indirect method for biomass estimation of Cunninghamella elegans grown in solid state cultivation conditions Biochemical Engineering Journal 7(1): 1-5 59 Shaprio S & Vining L C (1983) Nitrogen metabolism and chloramphenicol production in Streptomyces venezuelae Canadian Journal of Microbiology 29(12): 1706-1714 60 Sharma A (1999) Streptomyces Food Technology Division 2134-2138 61 Singh L S., Sharma H & Talukdar N C (2014) Production of potent antimicrobial agent by actinomycete, Streptomyces sannanensis strain SU118 isolated from phoomdi in Loktak Lake of Manipur, India BMC Microbiology 14: 278 62 Singh Nee’ Nigam P & Pandey A (2009) Solid-State Fermentation Technology for Bioconversion of Biomass and Agricultural Residues Biotechlonogy for Agro-Industrial Residues Utilisation 10.1007/978-14020-9942-7: 197-221 49 63 Sivaramakrishnan S & Gangadharan D (2009) Edible Oil Cakes Biotechlonogy for Agro-Industrial Residues Utilisation 10.1007/978-14020-9942-7: 253-271 64 Thakur D., Bora T C., Bordoloi G N & Mazumdar S (2009) Influence of nutrition and culturing conditions for optimum growth and antimicrobial metabolite production by Streptomyces sp 201 Journal de Mycologie Médicale 19(3): 161-167 65 Vastrad B M & Neelagund S E (2014) Optimization of Medium Composition for the Production of Neomycin by Streptomyces fradiae NCIM 2418 in Solid State Fermentation Biotechnology Research International 2014: 1-11 66 Velusamy P., Immanuel J E., Gnanamanickam S S & Thomashow L (2006) Biological control of rice bacterial blight by plant-associated bacteria producing 2,4-diacetylphloroglucinol Canadian Journal of Microbiology 52(1): 56-65 67 Villegas E., Aubague S., Alcantara L., Auria R & Revah S (1993) Solid state fermentation: Acid protease production in controlled CO2 and O2 enviroment Biotechlonogy Advances 11(3): 387-397 68 Xu, X., Song, Z., Yin, Y., Zhong, F., Song, J., Huang, J., & Wang, P (2021) Solid-state fermentation production of chitosanase by Streptomyces with waste mycelia of Aspergillus niger Advances in Enzyme Research 9(01): 10 69 Yoo J C., Kim J H., Ha J W., Park N S., Sohng J K., Lee J W., Park S C., Kim M S & Seong C N (2007) Production and Biological Activity of Laidlomycin, Anti-MRSA/VRE Antibiotic from Streptomyces sp CS684 Journal of Medical Microbiology 45(1): 6-10 70 Zepf F & Jin B (2013) Bioconversion of grape marc into protein rich animal fedd by microbial fungi Chemical Engineering & Process Techniques 1(2): 1011 71 Riti Gupta (2020) How to Calculate CFU from dilution Truy cập trừ https://sciencing.com/calculate-cfu-dilution-7806269.html ngày 28/8/2022 50 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Ảnh hưởng môi trường lỏng đến sinh trưởng xạ khuẩn Streptomyces krainskii XK16 sau ngày nuôi 51 Phụ lục 2: Khuẩn lạc xạ khuẩn Streptomyces krainskii XK16 hình thành môi trường khác MSSCM MT7 ISP-2 Gause I WYE ISS LNMS Phụ lục 3: Ảnh hưởng pH môi trường lỏng đến sinh trưởng xạ khuẩn Streptomyces krainskii XK16 52 pH pH pH pH pH 53 Phụ lục 4: Ảnh hưởng nguồn cacbon đến sinh trưởng xạ khuẩn Streptomyces krainskii XK16 D-Glucose D-Galactose Dextrin D-Fructose α-Lactose 54 Phụ lục 5: Cơ chất cám ban đầu chưa lên men sau lên men ngày độ ẩm khác Cơ chất cám chưa lên men xốp Cơ chất cám lên men xốp ngày độ ẩm 60% Cơ chất cám lên men xốp ngày độ ẩm 55% Cơ chất cám lên men xốp ngày độ ẩm 50% 55 Phụ lục 6: Cơ chất cám khác mức độ ẩm khác lên men ngày 56 Phụ lục 7: Khuẩn lạc xạ khuẩn Streptomyces krainskii XK16 môi trường lên men xốp chứa chất cám gạo, cám ngô, cám mạch độ ẩm 50%, 55%, 60% sau ngày tồn trữ 50% 50% 55% 55% 60% 60% 50% 55% 60% 57 Phụ lục Độ ẩm chất tương đối loại cám sau sấy lò qua đêm 105℃ Cơ chất G1 (g) G2 (g) G (g) Độ ẩm tương đối (%) Cám gạo 12,5 11,71 10 7,9 Cám ngô 12,51 11,53 10 9,8 Cám mạch 12,32 11,77 10 5,5 Cám hỗn hợp 12,25 11,5 10 7,5 * Cơng thức tính độ ẩm tương đối: (dựa theo TCVN 9934:2013 (ISO1666:1996) Tinh bột - Xác định độ ẩm - Phương pháp dùng tủ sấy) G1 – G2 G1 – G0 ω= x 100% Trong đó: G1 khối lượng giấy cân cám trước sấy (g) G2 khối lượng giấy cân cám sau sấy (g) G0 khối lượng giấy không (g) G = G1 – G0 khối lượng chất cám trước sấy (g) 58 Phụ lục 9: Ảnh chụp phản ứng màu với thuốc thử Xanh Molipden xạ khuẩn ngày nuôi cấy 59