KỸ THUẬT XÁC ĐỊNH CÁC ALCALOID CHÍNH CỦA THUỐC PHIỆN I. MỤC TIÊU 1. Chuẩn bị đầy đủ dụng cụ, hoá chất, môi trường, mẫu thử. 2. Tiến hành đúng thao tác kỹ thuật phân tích. 3. Nhận xét kết quả đã làm : Đúng? Sai? II. NỘI DUNG: 1. Nguyên tắc: Alcaloid độc của Thuốc phiện trong các mẫu thử được chiết tách từ cắn B qua các phản ứng màu, test thử nhanh, sắc ký lớp mỏng, đo quang phổ UV. 2. Quy trình kỹ thuật: 2.1 Chuẩn bị: - Dụng cụ: Khay sứ, đũa thuỷ tinh, Bản mỏng Silicagel G hoặc 60GF254, Bình triển khai sắc ký, đầu côn nhỏ, đầu phun sương, quả bóp, máy sấy, máy đo UV, test thử nhanh ma tuý. - Hoá chất: Acid acetic 2%, Thuốc thử Frohde, Marqui, HNO 3 đặc, FeCl 3 10%, Toluen, Aceton, Ethanol, Amoniac, Methanol, H 2 SO 4 10%, Dragendoff… - Mẫu thử: Mẫu thử được chiết theo quy trình chung bằng Ether. 2.2 Tiến hành. 2.2.1 Phản ứng màu: - Cho vào khay sứ 2-3 giọt cặn chiết B, sấy khô. Acid hoá bằng acid acetic 2% sau đó cho phản ứng với 1 sồ thuốc thử theo bảng sau: Thuốc thử Hợp chất Frohde Marqui HNO 3 đặc FeCl 3 10% Morphin Tím Đỏ tím Đỏ Xanh Codein Không màu Đỏ tím Không màu Không màu Heroin Tím Đỏ tím Vàng Không màu Papaverin Hồng Đỏ hồng Nacotin Xanh lục Tím 2.2.2 Que thử nhanh( test thử) áp dụng cho nước tiểu. - Lấy nước tiểu vào trong chén( khoảng ¼ chén) - Xé bao đựng que thử. - Đặt que thử vào chén đựng nước tiểu chú ý đặt đúng chiều mũi tên chỉ xuống và mặt nước tiểu không vượt quá vạch dưới mũi tên. - Chờ 5 phút đọc kết quả. Kết quả: - Nếu chỉ có 1 vạch hồng tại khu vực “C” , kết quả này chứng tỏ nồng độ opiat 300ng/mL hoặc cao hơn. Nghĩa là có sử dụng ma tuý(dương tính). - Nếu có cả 2 vạch ở khu vực “C” và “T” chứng tỏ nồng độ opiat dưới 300ng/mL. nghĩa là không sử dụng ma tuý( âm tính). 2.2.2 Sắc ký lớp mỏng. - B1: Pha dung môi khai triển Toluen- Aceton- Ethanol- Amoniac với tỉ lệ tương đương 45:45:7:3 hoặc Methanol- Aminiac tỉ lệ 49:1. Lắc đều rồi đổ vào bình triển khai( chú ý đổ 1 lượng không quá 1cm chiều cao trong bình triển khai) đậy nắp lại để dung môi hoà trộn đều trước khi đặt bản sắc ký vào ít nhất 15 phút. - B2: Dùng đầu côn nhỏ chấm khoảng 15µL mẫu thử lên bản mỏng. Đồng thời chấm mẫu chuẩn đối chiếu cách mẫu thử khoảng 1cm. Chú ý chấm cách mép dưới bản mỏng khoảng 1cm và vết chấm càng gọn càng tốt, vừa chấm ta vừa sấy khô. - B3: Đặt bản mỏng vào trong bình triển khai đã có sẵn dung môi ở trên. Chờ dung môi ngấm dần lên tới khi cách mép trên 1cm ta nhấc bản mỏng ra. Có thể để khô tự nhiên hoặc sấy khô. - B4: Soi qua đèn tử ngoại để nhận biết sơ bộ. - B5: Phun thuốc thủ hiện màu là Dragendoff bằng đầu phun hơi sương. Sau đó tăng độ nhậy bằng acid sulfuric 10% Để khô tự nhiên hoặc sấy khô. Kết quả: mẫu thử cho các vết màu vàng cam và có Rf tương đương mẫu chuẩn B1 Mor Co He Nar Pa . hoặc cao hơn. Nghĩa là có sử dụng ma tuý( dương tính). - Nếu có cả 2 vạch ở khu vực “C” và “T” chứng tỏ nồng độ opiat dưới 300ng/mL. nghĩa là không sử dụng ma tuý( âm tính). 2.2.2 Sắc ký lớp mỏng. -. côn nhỏ, đầu phun sương, quả bóp, máy sấy, máy đo UV, test thử nhanh ma tuý. - Hoá chất: Acid acetic 2%, Thuốc thử Frohde, Marqui, HNO 3 đặc, FeCl 3 10%, Toluen, Aceton, Ethanol, Amoniac, Methanol,. acid acetic 2% sau đó cho phản ứng với 1 sồ thuốc thử theo bảng sau: Thuốc thử Hợp chất Frohde Marqui HNO 3 đặc FeCl 3 10% Morphin Tím Đỏ tím Đỏ Xanh Codein Không màu Đỏ tím Không màu Không