Viện khoa học và công nghệ việt nam Viện tài nguyên và môi trờng biển =========000========= Đề tài cấp nhà nớc kc-09-19 Điều tra, nghiên cứu tảo độc, tảo gây hại ở một số vùng nuôi trồng thuỷ sản tập trung ven biển, đề xuất giải pháp phòng ngừa, giảm thiểu những tác hại do chúng gây ra Chủ nhiệm đề tài: TS. Chu Văn Thuộc Báo cáo chuyên đề Hàm lợng độc tố gây liệt cơ (PSP) trong động vật thân mềm hai mảnh vỏ ở một số vùng nuôi thủy sản tập trung miền Bắc và bắc trung bộ Ngời thực hiện: ThS. Nguyễn Thị Minh Huyền, CN. Phạm Thế Th, ThS. Nguyễn Thị Thu, CN. Trần Mạnh Hà Phòng Sinh vật phù du và Vi sinh vật Biển, Viện Tài nguyên và Môi trờng Biển Tel. (031) 565 495 Fax. (031) 761 521 e-mail: Planktondept@imer.ac.vn 6132-14 02/10/2006 Hải Phòng, tháng 2/2006 Báo cáo chuyên đề - Đề tài KC-09-19: Điều tra, nghiên cứu tảo độc, tảo gây hại ở một số vùng nuôi trồng thuỷ sản tập trung ven biển, đề xuất giải pháp phòng ngừa, giảm thiểu những tác hại do chúng gây ra Viện Tài nguyên và Môi trờng Biển, 246 Đà Nẵng, Hải Phòng 1 I. đặt vấn đề Một trong các trờng hợp nhiễm độc đầu tiên của con ngời sau khi ăn phải độc tố tảo giáp đợc tích luỹ trong thân mềm hai vỏ từ năm 1793, khi thuyền trởng George Vancouver và đội thuỷ thủ của ông lên đất liền ở British Columbia, ngày nay đợc biết là Poison Cove. Ông đã ghi lại các bộ lạc ở vùng ấn độ nghiêm cấm ăn nhuyễn thể hai vỏ khi nớc biển phát quang do sự nở hoa của tảo roi [Dale và Yentsch, 1978]. Nguyên nhân gây lên bởi các độc tố nhóm kiềm, bây giờ đợc gọi là nhóm độc tố gây liệt cơ (PSP), độc tố này sẽ gây ảnh hởng đến ngời và các sinh vật khác khi tích luỹ một lợng nhất định (khoảng 500àg) trong 100g thịt động vật thân mềm hai mảnh vỏ (ĐVTMHMV). Trên phạm vi toàn cầu, đã thống kê đợc khoảng 2000 trờng hợp ngời bị nhiễm độc (15% tử vong) thông qua ăn phải cá và thân mềm hai vỏ đợc báo cáo hàng năm và nếu không đợc kiểm soát, các tổn thất kinh tế sẽ xảy qua việc giảm tiêu thụ địa phơng và giảm xuất khẩu các sản phẩm thuỷ sản. Cá voi và cá heo cũng có thể trở thành các nạn nhân khi chúng nhận độc tố thông qua chuỗi thức ăn đợc tích luỹ trong động vật nổi và cá [Geraci và cộng sự, 1989]. Hiện tợng ngộ độc PSP xảy ra trên thế giới ở các vùng nớc lạnh và nớc ấm. Các trờng hợp ngộ độc PSP ở ngời đã đợc đề cập từ những năm của thập kỷ 1700 ở Bắc Mỹ, nhng nguyên nhân gây ra vẫn cha đợc biết đến cho đến tận cuối thập niên 1920 và 1930, khi các nhà nghiên cứu của California tìm thấy mối quan hệ họ hàng của độc tố trong động vật thân mềm hai vỏ bị nhiễm độc với các loài tảo Giáp ở khu vực đó thuộc chi Alexandrium. Sommer và các cộng sự của ông thậm chí còn cho các loài thân mềm ăn các loài tảo giáp có độc để kiểm tra lại nguyên nhân và đờng đi của độc tính, và sau đó ông cho thân mềm ăn tảo giáp không độc để cho phép thân mềm lọc sạch độc tính. Ngày nay, 12 loài tảo Giáp thuộc chi Alexandrium, Pyrodinium, Gonyaulax và Gymnodinium sản sinh độc tố PSP. Thêm vào đó, một số loài vi khuẩn, tảo xanh lục và tảo đỏ có khả năng sản sinh cùng loại độc tố có liên quan với neurotoxin, saxitoxin và các dẫn xuất của nó. Các sinh vật trên sản sinh trên 18 loại độc tố đã biết, các độc tố bị biến đổi qua lại và sửa chữa cấu trúc [Oshima và cộng sự, 1984, 1990]. Từng loài tảo Gíap riêng biệt không chứa tất cả các độc tố, chúng chỉ chứa các độc tố phù hợp và sự kết hợp giữa các loại độc tố tạo nên khả năng gây độc tính khác nhau. Độc tính mạnh yếu có thể khác nhau, phụ thuộc vào vị trí địa lý nơi thu mẫu phân lập và điều kiện môi trờng nơi các loài tảo này sinh sống [Anderson 1990]. Theo lịch sử, các hiện tợng PSP trong nớc biển chủ yếu đã đợc xác định bởi các loài Alaxandrium (= Protogonyaulax); tuy nhiên, trong vòng 10 năm trở lại đây, sự Báo cáo chuyên đề - Đề tài KC-09-19: Điều tra, nghiên cứu tảo độc, tảo gây hại ở một số vùng nuôi trồng thuỷ sản tập trung ven biển, đề xuất giải pháp phòng ngừa, giảm thiểu những tác hại do chúng gây ra Viện Tài nguyên và Môi trờng Biển, 246 Đà Nẵng, Hải Phòng 2 bùng nổ PSP do Pyridinium bahmense var. compressum và Gymnodinium catenatum đã đợc xem xét là nguyên nhân gây tử vong cho con ngời và các vấn đề có liên quan đến sức khoẻ. Không có các loài mới đợc quan sát, nhng chúng là các loài gốc đã đợc mô tả, không có các dấu hiệu chứng tỏ chúng là các sinh vật nở hoa độc. Ngày nay phần lớn các hiện tợng tử vong của con ngời từ sự bùng nổ PSP, hoặc các sự kiện độc tố thân mềm khác có độc đợc tích luỹ từ tảo Giáp, thờng xuất hiện ở những nơi không có các chơng trình quan trắc quốc gia. Các chơng trình quan trắc thông thờng sẽ bảo vệ những ngời sử dụng thân mềm làm thực phẩm bằng các quy định trong các bãi khai thác động vật thân mềm hai mảnh vỏ (ĐVTMHMV) khi các loài tảo Giáp độc có mặt hoặc khi độc tính trong thịt ĐVTMHMV vợt quá mức quy định đã đợc cho phép trong sử dụng đảm bảo an toàn thực phẩm. Các nớc không có các chơng trình quan trắc bị rơi vào sự bất ngờ khi các sự kiện tảo giáp độc là nguyên nhân làm ĐVTMHMV trở lên độc và khi các hiện tợng này xảy ra, các cơ quan chức năng không kịp chuẩn bị thu mẫu, kiểm tra và thông báo các kết quả đã kiểm tra một cách kịp thời cho ngời tiêu dùng. Tỷ lệ tử vong của ngời bị nhiễm độc tố ở các nớc này đã đợc thống kê khoảng 20%. Độc tố PSP không chỉ tìm thấy trong bọn hai vỏ ăn lọc, chúng còn đợc đề cập đến trong các cơ thể sống khác, thực phẩm hải sản trong vùng nuôi, nh cua, ốc, cá thu Và khi ăn cá nuôi ở một số các vùng nuôi, ngời ăn có thể bị ốm hoặc chết, phụ thuộc vào độc tính và hiệu lực của các thành phần chứa trong ruột và sống trong cá. Sự tiêu thụ các hải sản đã bị nhiễm độc tố tảo có thể gây ra hàng loạt các triệu chứng bệnh lý về hệ thần kinh ở ngời. Các bệnh lý và các triệu chứng lâm sàng quan trọng đợc tóm tắt trong các bảng dới. Hiện nay, không có thuốc giải đặc hiệu cho các hiện t ợng ngộ độc từ độc tố tảo, nhng việc cung cấp các thiết bị hô hấp nhân tạo có thể cứu sống nhiều nạn nhân trong trờng hợp ngộ độc PSP [Hallegraeff và cộng sự, 2004]. Dới đây là một số triệu chứng khi ngời tiêu dùng ăn phải thực phẩm hải sản có hàm lợng độc tố PSP cao. Báo cáo chuyên đề - Đề tài KC-09-19: Điều tra, nghiên cứu tảo độc, tảo gây hại ở một số vùng nuôi trồng thuỷ sản tập trung ven biển, đề xuất giải pháp phòng ngừa, giảm thiểu những tác hại do chúng gây ra Viện Tài nguyên và Môi trờng Biển, 246 Đà Nẵng, Hải Phòng 3 Bảng 1. Một số triệu chứng khi ngộ độc tố PSP Các triệu chứng Hiệu ứng sinh học Thời gian ủ bệnh từ 5 - 90 phút Triệu chứng trờng hợp nhẹ Cảm giác ngứa hoặc tê rần quanh miệng, dần dần lan toả khắp mặt và cổ. - Cảm giác đau nh kim chích ở đầu ngón tay, ngón chân. - Nhức đầu, chóng mặt, buồn nôn, nôn và tiêu chảy Triệu chứng trờng hợp nặng - Liệt cơ - Phát âm và hô hấp khó khăn - Cảm giác bị kích động - Tử vong do liệt cơ hô hấp có thể xảy ra trong vòng 2-24 giờ sau khi ăn. Tỷ lệ tử vong 1-14% (có thể lên tới 20%) Độc tố thần kinh làm tắt nghẽn các ion Na của các tế bào cơ và thần kinh ngăn cản sự khử cực và dẫn truyền khả năng hoạt động Các loài ĐVTMHMV và cá sống rạn là đối tợng chủ yếu tích luỹ độc tố tảo, tuy nhiên một số sinh vật biển khác nh cua, rùa biển cũng có thể tích luỹ các độc tố này [Shumway 1990, Landsberg 2002]. Điều quan trọng là các độc tố tảo không hề gây ra bất cứ mùi vị khác lạ nào cho thực phẩm biển, do đó ng dân hoặc ngời tiêu thụ không thể nào phát hiện ngay lập tức sự có mặt của chúng mà chỉ có thể phát hiện bằng các phơng pháp thử nghiệm sinh học hoặc phân tích hoá học. Một vấn đề quan trọng nữa là các độc tố tảo không bị phá huỷ trong quá trình đun nấu và chính vì vậy chúng có thể tồn tại ở cả các sản phẩm hải sản đóng hộp, cấp đông hoặc các sản phẩm chế biến khác. Các nghiên cứu trớc đây [Falconer I.R., 1993] về khả năng tích luỹ của Điệp (Scallop) đối với độc tố của các loài Alexandrium đã cho thấy mức độ tích luỹ cao và khả năng phân huỷ (tự giải độc) rất tốt nhng khác nhau đối với chuỗi độc tố trong từng bộ phận khác nhau. Chúng đợc chỉ ra dờng nh tăng độc tính trong cơ quan sinh dục trong suốt quá trình giải độc vì sự chuyển gonyautoxin thành saxitoxin. Một vấn đề nói riêng về sự tích luỹ độc tố trong điệp (scallop) đối với độc tố tảo là nhìn chung chỉ có Báo cáo chuyên đề - Đề tài KC-09-19: Điều tra, nghiên cứu tảo độc, tảo gây hại ở một số vùng nuôi trồng thuỷ sản tập trung ven biển, đề xuất giải pháp phòng ngừa, giảm thiểu những tác hại do chúng gây ra Viện Tài nguyên và Môi trờng Biển, 246 Đà Nẵng, Hải Phòng 4 những con trởng thành và cơ quan sinh dục (trứng) là đợc ngời tiêu thụ. Các kết quả nghiên cứu trong mạng lới quan trắc quốc gia của Pháp đã cho thấy đối với độc tố tảo dựa trên cơ sở xác định độc tính trong nội tạng và không xác định trong toàn bộ phần thịt hoặc trong các mô phân chia khác. Giới hạn an toàn cho phép của Quốc tế sử dụng cho toàn bộ phần thịt thân mềm hai vỏ là 80 gSTXeq/100g mô. Một số các nghiên cứu khác cũng khẳng định một điều các độc tố PSP đợc tích luỹ trong điệp (scallop) và chúng đợc đào thải rất chậm [Shumway và cs. 1992]. Đây chính là các nguyên nhân làm tăng sự không an toàn đối với ngời tiêu thụ thực phẩm hải sản. Sự tích luỹ của thân mềm hai vỏ đối với một số loại độc tố nh độc tố ảnh hởng thần kinh gây mất trí nhớ (ASP), độc tố gây tê liệt cơ (PSP) và độc tố gây tiêu chảy (DSP) là nguyên nhân gây tổn hại nghiêm trọng cho sức khoẻ cộng đồng cũng nh ngành thuỷ sản. Điều này đã trở thành một vấn đề đối với toàn cầu về sự gia tăng các trờng hợp ngộ độc và tần xuất, cờng độ lan rộng theo phân bố địa lý của các loài vi tảo có chứa độc tố và các vấn đề này cũng đang xảy ra tại các nớc Đông nam á. ở Việt Nam, ngời bị ngộ độc do ăn phải thân mềm hai vỏ có độc tố cha đợc thống kê và báo cáo. Tuy nhiên sự xuất hiện của các loài tảo tiềm tàng độc hại ở vùng biển Việt Nam đã đợc thống kê và báo cáo [Larsen J. và cs. 2004]. Các nghiên cứu từ trớc đến nay ở Việt Nam về lĩnh vực tảo độc đã cho thấy sự phân bố của các loài vi tảo tiềm tàng độc hại khá phong phú dọc theo các vùng ven biển, trong đó có một số loài bắt gặp với tần xuất xuất hiện nhiều và mật độ cao tại các vùng nuôi trồng thuỷ sản tập trung và một số đầm nuôi tôm, thành phần loài của chi Alexandrium ở vùng biển phía Bắc khá phong phú, theo các nghiên cứu của tác giả Chu Văn Thuộc đã phát hiện đợc hơn 10 loài có mặt [Chu Văn Thuộc, 2002). Nghiên cứu của Yoshida và cs. (2000) lần đầu tiên tìm thấy độc tố trong loài Alexandrium minutum phân lập từ đầm nuôi tôm ở Quảng Ninh, Nguyễn Ngọc Lâm (2004) cũng đã công bố về khả năng sản sinh độc tố của loài Alexandrium affine phân lập từ Vịnh Hạ Long. Nghiên cứu về khả năng tích luỹ độc tố trong một số đối tợng thân mềm hai vỏ cũng đã đợc phòng thí nghiệm Sinh vật phù du của Viện Tài nguyên và Môi trờng biển Hải Phòng bắt đầu thực hiện từ năm 2002 trong khuôn khổ hợp tác với Đại học Kitasato của Nhật Bản. Bên cạnh đó, một số đề tài nhỏ nghiên cứu về độc tố trong thân mềm hai vỏ đã đợc phòng thí nghiệm Sinh hoá Viện Hải dơng học Nha Trang thực hiện dới sự tài trợ của dự án ASEAN-CANADA (năm 1999) v.v Những nghiên cứu này đã phát hiện sự tồn tại của độc tố vi tảo trong đối tợng hai mảnh vỏ, nhng hàm lợng thấp tại vùng biển ven bờ phía bắc nh Hải Phòng, Thái Bình và phía nam nh Nha trang, Phan Thiết mẫu chủ yếu đợc phân tích bằng phơng pháp thử chuột của Yasumoto (1981). Hiện Báo cáo chuyên đề - Đề tài KC-09-19: Điều tra, nghiên cứu tảo độc, tảo gây hại ở một số vùng nuôi trồng thuỷ sản tập trung ven biển, đề xuất giải pháp phòng ngừa, giảm thiểu những tác hại do chúng gây ra Viện Tài nguyên và Môi trờng Biển, 246 Đà Nẵng, Hải Phòng 5 nay, NAFIQUAVED đã tổ chức tại các chi nhánh lớn của một số thành phố các phòng chịu trách nhiệm thực hiện các phân tích độc tố trong thân mềm hai mảnh vỏ trong lĩnh vực kiểm soát an toàn và xuất khẩu thuỷ sản. Trong đó, chỉ có Ngao (Meretrix meretrix), Nghêu (Meretrix lyrata) là đối tợng đợc phân tích độc tố tảo một cách thờng xuyên theo quy định. Độc tố dạng DSP đợc phân tích bằng phơng pháp thử chuột của Yasumoto (1981), độc tố PSP cũng đợc phân tích theo phơng pháp của AOAC (AOAC, 1995) trên chuột và độc tố dạng ASP (domoic acid) đợc phân tích bằng máy sắc ký khí lỏng cao áp HPLC [Lawerence và cs. 1989]. Từ các kết quả nghiên cứu thu đợc ở trên đã gợi ý khả năng tích luỹ độc tố của các sinh vật biển và khả năng bùng phát các hiện tợng ngộ độc ở ngời trong các khu vực đó. Tuy nhiên, mối quan hệ giữa việc xuất hiện các loài tảo độc và việc tích luỹ độc tố trong thân mềm hai vỏ vẫn cha đợc hiểu biết rõ ràng do thiếu hệ thống quan trắc có tính hệ thống trong các vùng này. Hiện tại các nớc phát triển, hàng năm phải chi phí một lợng kinh phí rất lớn cho nguồn kiểm soát thực phẩm từ bờ biển. Phần lớn các nớc kết hợp việc quan trắc giám sát mật độ tảo với tiến hành phân tích, kiểm định độc tố ASP, PSP và DSP trong nhuyễn thể bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC). Trong khuôn khổ của đề tài Nhà nớc với mã số KC-09-19, nội dung nghiên cứu về biến động hàm lợng độc tố vi tảo PSP đợc tích luỹ trong thân mềm hai vỏ tại một số vùng nuôi trồng thuỷ sản trọng điểm đã đợc tiến hành nghiên cứu nhằm tìm hiểu biến động, hàm lợng và mối quan hệ giữa các loài tảo độc và khả năng tích luỹ độc tố của thân mềm hai vỏ nhằm đa ra đợc những cảnh báo về nguy cơ xảy ra các hiện tợng ngộ độc ở ngời tiêu dùng khi sử dụng hải sản làm thực phẩm. II. Phơng pháp nghiên cứu Độc tố gây liệt cơ (PSP) đợc gây nên bởi một nhóm khoảng 24 độc tố thần kinh mạnh (hình ). Các độc tố này đặc biệt đợc gắn vào các vị trí kích thích trên dây thần kinh và các tế bào cơ, kết quả cuối cùng là làm tê liệt cơ và suy kiệt sức khoẻ dẫn đến tử vong khi tiêu thụ thân mềm hai vỏ có tích luỹ độc tố. Bởi vậy, sự phát triển của các phơng pháp phân tích đối với việc định lợng và định tính các loại độc tố đợc xác định cùng PSP là nhiệm vụ rất quan trọng. Nhìn chung việc kiểm soát chất lợng độc tố tích luỹ trong thực phẩm luôn đòi hỏi chính xác việc định lợng của các độc tố PSP cùng với sự quan tâm đến các quy định quốc tế đối với việc bảo vệ sức khoẻ cộng đồng và giao dịch thơng mại quốc tế. Phạm vi độc tính rộng của các độc tố PSP khác nhau Báo cáo chuyên đề - Đề tài KC-09-19: Điều tra, nghiên cứu tảo độc, tảo gây hại ở một số vùng nuôi trồng thuỷ sản tập trung ven biển, đề xuất giải pháp phòng ngừa, giảm thiểu những tác hại do chúng gây ra Viện Tài nguyên và Môi trờng Biển, 246 Đà Nẵng, Hải Phòng 6 [Oshima, 1995], thêm vào là sự đa dạng các nhóm độc tố PSP của tảo Giáp, những loài có khả năng sản sinh độc tố PSP và khả năng vận chuyển sinh học của các độc tố này trong phạm vi sinh học biển [Shumway, 1990], vì thế có sự thay đổi trong phân tích hoá học để phát triển các phơng pháp phân tích chính xác và đáng tin cậy. Phơng pháp nghiên cứu hàm lợng độc tố PSP bằng phơng pháp ELISA hiện đang đợc một số nớc có kỹ thuật tiên tiến thực hiện nh Nhật Bản. Phơng pháp này có u điểm là có thể phát hiện nhanh và rất nhạy đối với độc tố PSP ở hàm lợng rất thấp, thao tác đơn giản, dễ thực hiện, không đòi hỏi các trang thiết bị đắt tiền nh các phòng hoá sinh tiêu chuẩn, trừ một số độc tố chuẩn và các kháng thể phải đợc chuẩn bị ở các phòng thí nghiệm lớn. Nhng lại có nhợc điểm là dựa trên kháng thể với độc tố STX nên sẽ cho sai số nhỏ nếu độc tố PSP có thành phần chính là saxitoxin và các dẫn xuất của nó, sai số sẽ lớn khi thành phần chính của nhóm độc tố không phải là saxitoxin và phơng pháp này chỉ xác định đợc hàm lợng tổng số, không cho thấy đợc tỷ lệ giữa các nhóm độc tố và vai trò cũng nh độc tính của chúng khi tích luỹ trong sinh vật. Phân tích hàm lợng độc tố PSP đợc phân tích bằng phơng pháp ELISA còn gọi là phơng pháp miễn dịch học liên kết enzym (Enzyme Linked Immunosorbant Assay). Nguyên tắc của phơng pháp này là dựa vào các chất kháng thể (đợc chiết xuất từ huyết thanh thỏ) để nhận biết độc tố tảo. Các kháng thể này đợc đánh dấu bằng các chất phóng xạ hoặc huỳnh quang. Hoà dịch chiết thịt nhuyễn thể hai vỏ với các kháng thể đã đợc đánh dấu, tiếp theo dùng máy so màu chuyên dụng để phát hiện tổng lợng phóng xạ hoặc huỳnh quang của hợp chất huyết thanh miễn dịch + chất kháng thể, từ đó tính ra hàm lợng độc tố tảo có trong mẫu theo phơng pháp của Branaa và cộng sự (1999) và Kodama (2003). Các bớc phân tích cụ thể đối với độc tố đợc mô tả ở phần sau. 2.1. Vật liệu nghiên cứu - Đối tợng nghiên cứu: + Vùng biển Hải Phòng: Vẹm xanh (Mytilus sp.) và Ngao (Meretrix meretrix) là những đối tợng thân mềm hai vỏ có giá trị kinh tế đợc nuôi chủ yếu tại hai vùng biển Cát Bà và Đồ Sơn (Hải Phòng) vừa phục vụ xuất khẩu thuỷ sản, vừa phục vụ chế biến đồ ăn hải sản cho khách du lịch tại chỗ. + Vùng biển Thái Bình: Ngao (Meretrix sp.) là đối tợng đợc nuôi chủ yếu tại các vùng ven biển Thái Bình và cũng là đối tợng đợc nghiên cứu hàm lợng các độc tố vi tảo trong khuôn khổ của đề tài KC-09-19. Báo cáo chuyên đề - Đề tài KC-09-19: Điều tra, nghiên cứu tảo độc, tảo gây hại ở một số vùng nuôi trồng thuỷ sản tập trung ven biển, đề xuất giải pháp phòng ngừa, giảm thiểu những tác hại do chúng gây ra Viện Tài nguyên và Môi trờng Biển, 246 Đà Nẵng, Hải Phòng 7 + Vùng biển Lăng Cô (TT Huế): Vẹm xanh (Mytilus sp.) là đối tợng thân mềm hai vỏ đợc nuôi vừa cung cấp thực phẩm cho dân địa phơng vừa là đồ hải sản đợc khách du lịch a chuộng trong các bữa ăn nên đã đợc chọn làm đối tợng nghiên cứu của đề tài. - Tần xuất thu mẫu: + Vẹm xanh và Ngao nuôi tại vùng biển Hải Phòng, đợc thu một tháng 2 lần và thu liên tục trong một năm từ tháng 5/2004 đến hết tháng 4 năm 2005. Tổng số mẫu đợc tiến hành phân tích tại mỗi một điểm nghiên cứu là : Cát Bà 24 mẫu, Đồ Sơn: 24 mẫu. + Ngao nuôi tại Thái Bình và Vẹm xanh nuôi tại vùng biển Lăng Cô (Huế) đợc thu mỗi tháng 1 lần cùng với các mẫu tảo và mẫu hoá nớc tại vùng nghiên cứu. - Ngoài ra còn sử dụng các số liệu đã đợc quan trắc liên tục trong 2 năm 2002- 2004 của dự án JSPS trong khuôn khổ hợp tác song phơng giữa Viện tài nguyên và Môi trờng Biển (thuộc VAST) của Việt Nam và trờng Đại học Kitasato của Nhật Bản. Tham khảo một số kết quả nghiên cứu về độc tố PSP trong Ngao tại vùng biển Thái Bình, Nam Định và Thanh Hoá của nhóm tác giả Nguyễn Văn Nguyên (2004) 2.2. Phơng pháp thu mẫu và xử lý mẫu - Đồ Sơn: Ngao đợc đặt ngời cào hàng tháng trên bãi tự nhiên vào các thời điểm có con nớc trong tháng (tháng thu 2 lần), lựa những con có kích cỡ ổn định, đều nhau hàng tháng. - Cát Bà: Vẹm xanh đợc đặt mua cả chùm to, đặt nuôi cố định trong một lồng nuôi, hàng tháng đến ngày tỉa thu mẫu theo một kích cỡ ổn định. - Thái Bình: Ngao cũng đợc thu trực tiếp ngay trên các vây nuôi hàng tháng theo một kích cỡ ổn định. - Huế: Vẹm xanh đợc thu trực tiếp ngay trong các lồng nuôi theo một kích cỡ ổn định. - Mẫu thân mềm hai vỏ sống sau khi thu, đợc chuyển ngay về phòng thí nghiệm với khoảng thời gian trong ngày và đợc mổ tách lấy nội quan theo quy trình sau: + 2 kg Ngao (hoặc Vẹm) đợc rửa sạch bằng nớc ngọt để loại bùn cát trên vỏ, để ráo nớc. + Mổ, tách thịt và vỏ. + Rửa thịt mẫu dới vòi nớc thật nhẹ nhàng để loại muối. Báo cáo chuyên đề - Đề tài KC-09-19: Điều tra, nghiên cứu tảo độc, tảo gây hại ở một số vùng nuôi trồng thuỷ sản tập trung ven biển, đề xuất giải pháp phòng ngừa, giảm thiểu những tác hại do chúng gây ra Viện Tài nguyên và Môi trờng Biển, 246 Đà Nẵng, Hải Phòng 8 + Sau khi để ráo nớc (trong 5 phút), mổ tách nội quan (phần có mầu nâu hoặc mầu sẫm hơn), cho vào lọ sạch. + Nghiền nội quan bằng máy xay sinh tố hoặc cắt nhỏ rồi đem nghiền bằng cối sứ (loại cối sứ sử dụng trong phòng thí nghiệm). + Sau khi mẫu đợc nghiền đồng nhất + Cân 10g mẫu 10g mẫu + 10mL HCl 0,1N Đun cách thuỷ 5 Để nguội bằng nhiệt độ phòng + 10mL HCl 0,1N Ly tâm (hoặc lọc qua giấy lọc) Bỏ bã Thu phần dịch chiết Bảo quản trong tủ đá (-18 o C là tốt nhất) Phân tích ASP và PSP khi có thể (1ml mẫu = 0,5g mô nội tạng) + Phần còn lại, đựng mẫu trong lọ sạch, nút kín và bảo quản trong tủ đá nhiệt độ càng thấp càng tốt (-18 o C là tốt nhất). - Riêng đối với mẫu Vẹm xanh thu ở Lăng Cô (Huế) do Đại học Huế thực hiện, sau khi mổ theo quy trình trên sẽ thu nội tạng bảo quản trong tủ đá và gửi mẫu cho phòng thí nghiệm của Viện Tài nguyên và Môi trờng Biển để tiến hành xử lý tiếp theo quy trình xử lý mẫu ở trên và phân tích độc tố. 2.3. Phơng pháp phân tích độc tố PSP Độc tố PSP đợc tiến hành phân tích theo phơng pháp của Branaa (1999) và Kodama (2003). Lu ý: quá trình phân tích PSP phụ thuộc vào yếu tố pH, Do thờng bền trong môi trờng có pH=5-7, saxitoxin cùng các dẫn xuất đợc giữ tốt nhất trong pH này dới điều kiện có Argon hoặc nitrogen và để tối. Nếu bảo quản trong một năm có thể để ở 4 o C, còn nếu lâu hơn cần bảo quản ở 80 o C. Báo cáo chuyên đề - Đề tài KC-09-19: Điều tra, nghiên cứu tảo độc, tảo gây hại ở một số vùng nuôi trồng thuỷ sản tập trung ven biển, đề xuất giải pháp phòng ngừa, giảm thiểu những tác hại do chúng gây ra Viện Tài nguyên và Môi trờng Biển, 246 Đà Nẵng, Hải Phòng 9 2.4. Phơng pháp xử lý, tính toán hàm lợng độc tố trong ĐVTMHMV 2.4.1. Tính trung bình các chỉ số OD đo đợc trên máy (mẫu lặp 3 lần) 2.4.2. Phác thảo đồ thị tính toán: Bằng tay, hoặc sử dụng MS-Excel hoặc các phần mềm tính toán khác Phơng trình và đồ thị đờng chuẩn cho tính toán hàm lợng độc tố ASP trong các mẫu thân mềm hai vỏ đã đợc xây dựng dựa trên các nồng độ chất chuẩn của STX y = 28.014e -1.4092x 1 10 0.71.7 y = 35.917e -1.4937x 1 10 0.81.8 y = 20.056e - 2.2377x 1 10 0.31.3 Hình 2.1. Đồ thị đờng chuẩn cho tính toán hàm lợng độc tố PSP trong Ngao và Vẹm xanh nuôi tại 4 vùng nuôi trên dựa trên hàm lợng các chất STX chuẩn 2.4.3, Đánh giá hàm lợng độc tố trong mỗi mẫu thử bằng việc sử dụng bớc 2 = A(nM) = A nmol/L : 1000 = B nmol/mL [...]... Nẵng, Hải Phòng 13 Báo cáo chuyên đề - Đề tài KC-0 9-1 9: Điều tra, nghiên cứu tảo độc, tảo gây hại ở một số vùng nuôi trồng thuỷ sản tập trung ven biển, đề xuất giải pháp phòng ngừa, giảm thiểu những tác hại do chúng gây ra 30 25 20 15 10 Quan trắc năm 200 4-2 005 I-T 4 I-T 3 I-T 2 I-T 1 I-T 10 I-T 11 I-T 12 I-T 9 I-T 8 I-T 7 I-T 6 I-T 5 5 0 I-T 4 ng(STXeq)/g nội tạng Các đỉnh độc tố xuất hiện trong đợt... chuyên đề - Đề tài KC-0 9-1 9: Điều tra, nghiên cứu tảo độc, tảo gây hại ở một số vùng nuôi trồng thuỷ sản tập trung ven biển, đề xuất giải pháp phòng ngừa, giảm thiểu những tác hại do chúng gây ra 2.4.4 Tính tổng hàm lợng độc tố PSP trong 1mL mẫu thân mềm đã xử lý cho phân tích độc tố theo các bớc trên bằng cách: = B (nmol/mL) x MW (trọng lợng phân tử của độc tố) = C(ng/mL) 2.4.5 Tính hàm lợng độc tố trong. .. luỹ hàm lợng độc tố trong Ngao nuôi ở Thái Bình và Vẹm xanh nuôi đầm Lăng Cô (TT Huế) Viện Tài nguyên và Môi trờng Biển, 246 Đà Nẵng, Hải Phòng 19 Báo cáo chuyên đề - Đề tài KC-0 9-1 9: Điều tra, nghiên cứu tảo độc, tảo gây hại ở một số vùng nuôi trồng thuỷ sản tập trung ven biển, đề xuất giải pháp phòng ngừa, giảm thiểu những tác hại do chúng gây ra Bảng 3.2 và hình 3.9, 3.10 cho thấy hàm lợng độc tố. .. Biến động hàm lợng độc tố PSP trong nội tạng Ngao nuôi tại Thái Bình (số liệu quan trắc tháng 5/ 200 4- tháng 4/2005) Viện Tài nguyên và Môi trờng Biển, 246 Đà Nẵng, Hải Phòng 15 Báo cáo chuyên đề - Đề tài KC-0 9-1 9: Điều tra, nghiên cứu tảo độc, tảo gây hại ở một số vùng nuôi trồng thuỷ sản tập trung ven biển, đề xuất giải pháp phòng ngừa, giảm thiểu những tác hại do chúng gây ra Hình 3.7 cho thấy hàm. .. trờng Biển, 246 Đà Nẵng, Hải Phòng 16 Báo cáo chuyên đề - Đề tài KC-0 9-1 9: Điều tra, nghiên cứu tảo độc, tảo gây hại ở một số vùng nuôi trồng thuỷ sản tập trung ven biển, đề xuất giải pháp phòng ngừa, giảm thiểu những tác hại do chúng gây ra 3.4 Biến động hàm lợng độc tố PSP trong Vẹm xanh (Mytilus sp.) nuôi tại Lăng Cô (Huế) ng (STXeq)/g mô nội tạng Vẹm xanh (Mytilus sp.) là đối tợng thân mềm hai vỏ... chuyên đề - Đề tài KC-0 9-1 9: Điều tra, nghiên cứu tảo độc, tảo gây hại ở một số vùng nuôi trồng thuỷ sản tập trung ven biển, đề xuất giải pháp phòng ngừa, giảm thiểu những tác hại do chúng gây ra Thời gian thu mẫu Hàm lợng độc tố ng/g (STX) Hình 3.6 So sánh mối tơng quan giữa hàm lợng độc tố PSP đợc tích luỹ trong Vẹm xanh Cát Bà với mật độ tảo chi Alexandrium (quan trắc năm 200 4-2 005) 3.3 Biến động hàm. .. và Môi trờng Biển, 246 Đà Nẵng, Hải Phòng 22 Báo cáo chuyên đề - Đề tài KC-0 9-1 9: Điều tra, nghiên cứu tảo độc, tảo gây hại ở một số vùng nuôi trồng thuỷ sản tập trung ven biển, đề xuất giải pháp phòng ngừa, giảm thiểu những tác hại do chúng gây ra 3.7 Giải pháp làm giảm tác hại của các độc tố tảo PSP đối với ngời tiêu thụ ĐVTMHMV làm thực phẩm Các kết quả nghiên cứu trên tuy không cho thấy rõ mối tơng... là những tháng quan trắc cho Viện Tài nguyên và Môi trờng Biển, 246 Đà Nẵng, Hải Phòng 24 Báo cáo chuyên đề - Đề tài KC-0 9-1 9: Điều tra, nghiên cứu tảo độc, tảo gây hại ở một số vùng nuôi trồng thuỷ sản tập trung ven biển, đề xuất giải pháp phòng ngừa, giảm thiểu những tác hại do chúng gây ra hàm lợng độc tố PSP thấp Đợt quan trắc I của tháng 11 năm 2004 cho thấy hàm lợng độc tố PSP đạt cao nhất trong. .. KC-0 9-1 9: Điều tra, nghiên cứu tảo độc, tảo gây hại ở một số vùng nuôi trồng thuỷ sản tập trung ven biển, đề xuất giải pháp phòng ngừa, giảm thiểu những tác hại do chúng gây ra 3.5 So sánh khả năng tích luỹ độc tố PSP trong nội quan (gan, tuỵ) của Ngao và Vẹm xanh nuôi tại các vùng thuỷ sản trọng điểm miền Bắc và miền Trung Trong năm 200 2-2 003, tác giả Đào Việt Hà và cs trong khuôn khổ của đề tài cấp Bộ thuỷ. .. cáo chuyên đề - Đề tài KC-0 9-1 9: Điều tra, nghiên cứu tảo độc, tảo gây hại ở một số vùng nuôi trồng thuỷ sản tập trung ven biển, đề xuất giải pháp phòng ngừa, giảm thiểu những tác hại do chúng gây ra Các nghiên cứu trớc của phòng thí nghiệm sinh vật phù du trong khuôn khổ dự án JSPS và của tác giả Nguyễn Văn Nguyên (2004) cũng cho thấy không có mối tơng quan chặt chẽ giữa mật độ của các loài tảo thuộc . chuyên đề - Đề tài KC-0 9-1 9: Điều tra, nghiên cứu tảo độc, tảo gây hại ở một số vùng nuôi trồng thuỷ sản tập trung ven biển, đề xuất giải pháp phòng ngừa, giảm thiểu những tác hại do chúng gây ra. chuyên đề - Đề tài KC-0 9-1 9: Điều tra, nghiên cứu tảo độc, tảo gây hại ở một số vùng nuôi trồng thuỷ sản tập trung ven biển, đề xuất giải pháp phòng ngừa, giảm thiểu những tác hại do chúng gây ra. Đề tài KC-0 9-1 9: Điều tra, nghiên cứu tảo độc, tảo gây hại ở một số vùng nuôi trồng thuỷ sản tập trung ven biển, đề xuất giải pháp phòng ngừa, giảm thiểu những tác hại do chúng gây ra Viện