Đang tải... (xem toàn văn)
SẢN XUẤT SINH KHỐI LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS ĐỂ BỔ SUNG VÀO THỨC ĂN CHO TÔM VÀ XỬ LÝ MÔI TRƯỜNG AO NUÔI
TRƯỜNG ĐẠI HỌC ĐÀ LẠT KHOA SINH HỌC LỚP CSK31 BÁO CÁO THỰC TẬP CHUYÊN ĐỀ SẢN XUẤT SINH KHỐI LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS ĐỂ BỔ SUNG VÀO THỨC ĂN CHO TÔM VÀ XỬ LÝ MÔI TRƯỜNG AO NUÔI Nhóm thực hiện: Nhóm 3 1 TRƯỜNG ĐẠI HỌC ĐÀ LẠT KHOA SINH HỌC LỚP CSK31 SẢN XUẤT SINH KHỐI LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS ĐỂ BỔ SUNG VÀO THỨC ĂN CHO TÔM VÀ XỬ LÝ MÔI TRƯỜNG AO NUÔI GVHD: CN. NGUYỄN VĂN GIANG SVTH: PHẠM NGỌC CHÚC LÊ ĐOÀN VY HẠ NGUYỄN THỊ KHÁNH LY NGUYỄN THỊ THỦY NGÂN ĐẶNG VĂN NGHỊ NGUYỄN XUÂN TOÀN ĐÀM HUYỀN TRANG TRẦN THỊ QUỲNH TRANG 2 TRẦN THỊ THÙY TRANG 3 LỜI CẢM ƠN Với vốn kiến thức hạn hẹp, kỹ năng thực nghiệm chưa thành thạo, để hoàn thành đề tài thực tập này, chúng tôi đã nhận được rất nhiều sự giúp đỡ. Xin chân thành cảm ơn ban chủ nhiệm khoa Sinh học cùng toàn thể các thầy cô đã tận tình giúp đỡ, hướng dẫn, truyền đạt những kiến thức, kinh nghiệm quý báu cho chúng tôi và tạo điều kiện cho chúng tôi hoàn thành đề tài thực tập này Xin gửi lời cảm ơn đến thầy Nguyễn văn Giang, người đã tận tình hướng dẫn, tạo điều kiện về mọi mặt cho chúng tôi trong suốt quá trình làm đề tài. 4 DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1. Thu nhận sinh khối tế bào Hình 2: Chủng Lactobaccilus acidophilus được hoạt hóa Hình 3. Hình thái khuẩn lạc Lactobaccilus acidophilus Hình 4. Sinh khối trên bề mặt thạch Hình 5. Dịch sinh khối tế bào Hình 6. Sinh khối tế bào Hình 7. Sinh khối được cố định trên tá dược Hình 8. Nhuộm soi tế bào vi khuẩn 5 Mục lục LỜI MỞ ĐẦU………………………………………………………1 Phần 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Probiotic…………………………………………………………4 1.1.1 Các nhóm vi sinh vật chủ yếu trong probiotic………………….4 1.1.2 Công dụng của Probiotic trong NTTS…………………………4 1.1.3 Tác hại của probiotic………………………………………….6 1.2 Vi khuẩn Lactic…………………………………………………6 1.2.1 Phân loại vi khuẩn Lactic……………………………………….7 1.2.2 Đặc điểm hình thái……………………………………………7 1.2.3 Đặc điểm sinh lý- sinh hóa…………………………………….8 1.2.3.1 Nhu cầu dinh dưỡng của vi khuẩn lactic……………………8 1.2.3.2 Quá trình trao đổi chất ……………………………………10 1.2.4 Những ứng dụng của vi khuẩn lactic…………………………10 1.2.4.1 Những ứng dụng trong công nghệ thực phẩm………………10 1.2.4.2 Chế biến các sản phẩm sữa…………………………………10 1.2.4.3 Sản xuất bánh mỳ đen………………………………………11 1.2.4.4 Ủ thức ăn gia súc…………………………………………….11 1.2.4.5 Muối chua rau quả…………………………………………11 1.2.4.6 Sản xuất acid lactic và muối lactat………………………….11 1.2.4.7 Sản xuất men tiêu hóa cho người và động vật………………11 1.2.4.8 Một số ứng dụng khác của vi khuẩn lactic…………………12 1.3 Lactobacillus acidophilus 12 1.3.1 Phân loại……………………………………………………….12 1.3.2 Đặc điểm hình thái……………………………………………13 6 1.3.3 Đặc tính nuôi cấy……………………………………………13 1.3.4 Tác dụng của Lactobacillus acidophilus ……………………13 Phần II: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1. Thời gian, địa điểm nghiên cứu………………………………14 2.2. Đối tượng, dụng cụ, thiết bị……………………………………14 2.2.1. Đối tượng nghiên cứu………………………………………14 2.2.2. Dụng cụ và thiết bị……………………………………………14 2.2.3. Môi trường nuôi cấy ………………………………………….14 2.2.4. Khử trùng thiết bị, dụng cụ…………………………………15 2.3. Phương pháp nghiên cứu……………………………………….15 2.3.1. Phương pháp phục hồi chủng……………………………….15 2.3.2. Phương pháp phân tách khuẩn lạc………………………… 15 2.3.3. Phương pháp nhân giống……………………………………15 2.3.4. Phương pháp lên men…………………………………………15 2.3.5. Phương pháp nhuộm gram……………………………………15 2.3.6. Phương pháp thu nhận sinh khối……………………………16 2.3.7. Định lượng sản phẩm…………………………………………16 Phần III: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1. Kết quả hoạt hóa chủng Lactobaccilus acidophilus……………17 3.2. Quá trình tách khuẩn lạc………………………………………17 3.2.1. Quá trình cấy ria………………………………………………17 3.2.2.Hình thái khuẩn lạc………………………………………….17 3.3. Quá trình nhân giống cấp 1…………………………………….18 3.4. Quá trình lên men………………………………………………18 3.5. Quá trình thu nhận sinh khối……………………………………18 3.6. Cố định sinh khối tế bào trên tá dược…………………………20 3.7. Nhuộm gram tế bào vi khuẩn 20 3.8. Định lượng sản phẩm 21 Phần IV: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận 22 Kiến nghị 23 TÀI LIỆU THAM KHẢO 24 7 LỜI MỞ ĐẦU Hiện nay nuôi trồng thủy sản (NTTS) là ngành phát triển rất mạnh trên thế giới, nó đem lại hiệu quả kinh tế cao. Ở Việt Nam, năm 2002 chính phủ quyết định thủy sản là ngành kinh tế ưu tiên, trong đó ngành nuôi tôm là ngành mũi nhọn, nhằm mục đích: tăng kim ngạch xuất khẩu, chuyển đổi cơ cấu kinh tế kém hiệu quả, giảm áp lực khai thác ven bờ, nâng cao hiệu quả sử dụng đất và tạo công ăn việc làm cho người lao động.Tổng giá trị xuất khẩu thủy sản Việt Nam không ngừng tăng trong suốt mấy thập niên vừa qua. Tuy nhiên, đầu tư kí thuật để nâng cao sản lượng thủy sản vẫn chưa đáp ứng kịp với nhu cầu phát triển, ngành NTTS đang gặp khó khăn lớn dẫn đến thất bại ở nhiều cơ sở nuôi trồng. Nguyên nhân chính là do ô nhiễm môi trường nước ao nuôi, dịch bệnh và hệ thống sinh thái bị phá hủy. Vấn đề ô nhiễm nước ao nuôi là do lượng thức ăn thừa tôm không sử dụng được lớn, tôm bài tiết, lột xác nhiều và xác của những động vật thủy sinh phù du trong môi trường nhiều. Khi ao nuôi bị ô nhiễm là cơ hội cho những nhóm vi sinh vật có hại phát triển mạnh mẽ, không kiểm soát được và hậu quả là vật nuôi bị bệnh. Vì vậy, việc xử lý môi trường trong quá trình nuôi nhằm cải thiện môi trường nước và phòng bệnh là cấp thiết. Trước đây, người nuôi thường sử dụng hóa chất, kháng sinh để xử lý môi trường ao nuôi và phòng bệnh. Nhưng dùng nhiều hóa chất và kháng sinh gây ảnh hưởng lớn đến môi trường và con người. Ngoài ra, việc lạm dụng thuốc kháng sinh còn gây ra vấn đề về dư lượng kháng sinh trong vật nuôi vi phạm vấn đề vệ sinh an toàn thực phẩm. Do đó, cần chọn một giải pháp thích hợp để giải quyết vấn đề này là rất quan trọng. Phương pháp sử dụng chế phẩm sinh học có chứa những vi sinh vật mang những đặc tính có lợi – Probiotic : phân hủy các chất hữu cơ thừa, đối kháng với vi khuẩn gây bệnh…đã được áp dụng. Một trong những loài vi khuẩn có những đặc tính này là vi khuẩn lactic. Vi khuẩn lactic mang nhiều những đặc tính có lợi cho người và vật nuôi: hỗ trợ tiêu hoá, tăng cường khả năng miễn dịch, kích thích sự phát triển của vật nuôi…Ngoài ra chúng còn giúp điều trị các bệnh về đường tiêu hoá như: tiêu chảy, táo bón, loạn khuẩn…Bên cạnh đó, vi khuẩn lactic còn có khả 8 năng kìm hãm, ức chế các vi sinh vật gây bệnh: Candida albicans, Bacillus cereus, Staphylococcus aureus…do chúng sinh các chất: bacteriocin, acid lactic…. Với nhiều những đặc tính có lợi như vậy chúng tôi đưa vi khuẩn lactic vào ứng dụng làm chế phẩm cho NTTS. Trong sản xuất công nghiệp với mục tiêu thu sinh khối lớn chúng tôi đã tiến hành đề tài: “Sản xuất sinh khối Lactobacillus acidophilus để bổ sung vào thức ăn cho tôm và xử lý môi trường ao nuôi” Đề tài được triển khai với các nội dung chính là: + Thử nghiệm để hoàn thiện quy trình sản xuất sinh khối Lactobacillus acidophilus ở quy mô phòng thí nghiệm. + Đánh giá các điều kiện thích hợp cho sự phát triển của Lactobacillus acidophilus Trong điều kiện thời gian hạn hẹp, không tránh khỏi những sai sót. Kính mong thầy cô và các bạn đóng góp ý kiến để đề tài được hoàn thiện hơn 9 Phần I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 10 [...]... trên L .acidophilus giúp cân bằng hệ vi sinh vật đường ruột, ngăn ngừa sự tấn cơng của vi sinh vật gây bệnh, làm giảm độc tính của các độc tố, tăng khả năng hấp thụ thức ăn, tăng cường chắc năng bảo vệ niêm mạc ruột - Đối với mơi trường nước: + Có khả năng phân hủy các hợp chất hữu cơ từ thức ăn thừa và chất thải của động thực vật thủy sinh + Có tính cộng sinh cao với động thực vật thủy sinh, khả năng... cho q trình lên men Sinh khối tạo thành lớp mỏng,bám trên bề mặt thạch, có màu trắng đục Hình 4 Sinh khối trên bề mặt thạch 3.5 Q trình thu nhận sinh khối: Tế bào vi khuẩn được tách ra khỏi bề mặt thạch nhờ nước muối sinh lí, thu được dịch sinh khối tế bào Sau khi ly tâm dịch sinh khối tế bào ta thu được sinh khối của tế bào vi khuẩn 27 Hình 5 Dịch sinh khối tế bào 28 Sinh khối tế bào Hình 6 Sinh khối. .. phẩm sinh học làm tăng chất lượng ni trồng thủy sản và tăng hiệu quả xử lý mơi trường 2 Từ quy trình sản xuất ở quy mơ phòng thí nghiệm tiến hành cải tiến và tối ưu hóa các điều kiện để đưa ra sản xuất với quy mơ cơng nghiệp 3 Tiến hành khảo sát lại các điều kiện thích hợp nhất cho sự phát triển của chủng Lactobacillus acidophilus 4 Nghiên cứu và ứng dụng thêm nhiều tá chất thích hợp để cố định Lactobacillus. .. giống Lactobacillus đã phân lập được các lồi sau: Lactobacillus acidophilus Lactobacillus brevis Lactobacillus casei Lactobacillus catenaforme Lactobacillus crispatus Lactobacillus fermentum Lactobacillus gassert Lactobacillus iners Lactobacillus jensenll Lactobacillus jeichmannll Lactobacillus oris Lactobacillus parocasei spp.parocasei Lactobacillus plantarum Lactobacillus rhamnosus Lactobacillus ult Lactobacillus. .. khả năng sống đáy (độ lắng), khả năng bám dính và tạo khuẩn lạc trên nhiều cơ chất nhầy, rắn do đó tăng khả năng phân hủy chất hữu cơ + Cạnh tranh, đối kháng với các vi sinh vật gây ơ nhiễm, gây màu, gây mùi và tạo điều kiện thích hợp cho các chủng vi sinh vật có lợi giúp làm cân bằng hệ vi sinh trong mơi trường nước Do vậy, L .acidophilus khi được bổ sung vào mơi trường nước NTTS sẽ làm giảm lượng... 1.2.4.6 Sản xuất acid lactic và muối lactat 18 Ngồi việc ứng dụng trong các sản phẩm lên men, người ta còn sử dụng các chủng lactic như Lactobacterium coaglulans và Lactobacillus delbrueckii để sản xuất ra một lượng lớn axit lactic và muối lactat dùng làm chất phụ gia thực phẩm 1.2.4.7 Sản xuất men tiêu hóa cho người và động vật Latobacillus và Bifidobacterium là 2 loại vi khuẩn có ích trích từ hệ vi sinh. .. những khả năng đặc biệt: tổng hợp các chất hữu cơ có khả năng phân hủy, diệt khuẩn và là nguồn dinh dưỡng nên rất có lợi khi sử dụng để làm thức ăn và cải tạo mơi trường ni trồng thủy sản Sau khi được sử dụng trên diện tích NTTS, probiotic sẽ phát huy cơng dụng theo những q trình sau: khống chế sinh học (những nhóm vi sinh vật có ích tác động đối kháng lên nhóm vi sinh vật gây bệnh) và xử lý sinh học... Streptococcus lactic để sản xuất sữa chua hay khả năng tạo ra các mùi vị, tạo các chất thơm của chủngLeuconostoc để sản xuất bơ, phomat… 1.2.4.3 Sản xuất bánh mỳ đen Đây là loại bánh mỳ có chất lượng cao bên cạnh q trình lên men bởi nấm men tạo rượu etylic và CO2 Người ta còn sử dụng q trình lên men của vi khuẩn lactic để tạo vị chua và hương thơm đặc trưng cho sản phẩm 1.2.4.4 Ủ thức ăn gia súc Đây là phương... Nước mối sinh lý 0,9% 3000 vòng/phút/10 phút 1 lit SKHD/ 5 kg lactose 38-40oC/50 h PP Koch - Điều kiện thích hợp cho sự phát triển của Lactobacillus acidophilus: nhiệt độ 37oC, độ ẩm 50%, pH mơi trường 7,5 - Tá chất thích hợp để cố định Lactobacillus acidophilus là Lactose 31 KIẾN NGHỊ 1 Tiến hành phân lập, tuyển chọn thêm một số chủng vi sinh vật có những đặc tính có lợi để ứng dụng vào sản xuất các... nhiều chủng Lactobacillus acidophilus đã được phân lập, chúng giống nhau về đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh hóa nhưng khác nhau về một hay một số hoạt tính Mợt sớ chủng Lactobacillus acidophilus Chủng Người phát hiện 19 Lactobacillus acidophilus DDS-1 Nebraska Cultures Lactobacillus acidophilus LA-5 Chr Hansen Lactobacillus acidophilus NCFM Danisco 1.3.2 Đặc điểm hình thái Lactobacillus acidophilus . TRƯỜNG ĐẠI HỌC ĐÀ LẠT KHOA SINH HỌC LỚP CSK31 BÁO CÁO THỰC TẬP CHUYÊN ĐỀ SẢN XUẤT SINH KHỐI LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS ĐỂ BỔ SUNG VÀO THỨC ĂN CHO. THỊ THÙY TRANG 3 LỜI CẢM ƠN Với vốn kiến thức hạn hẹp, kỹ năng thực nghiệm chưa thành thạo, để hoàn thành đề tài thực tập này, chúng tôi đã nhận được rất nhiều sự giúp đỡ. Xin chân thành cảm. dẫn, truyền đạt những kiến thức, kinh nghiệm quý báu cho chúng tôi và tạo điều kiện cho chúng tôi hoàn thành đề tài thực tập này Xin gửi lời cảm ơn đến thầy Nguyễn văn Giang, người đã tận tình