Đang tải... (xem toàn văn)
TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ HÓA BÁO CÁO TIỂU LUẬN KẾT THÚC HỌC PHẦN MÔN PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ ĐỀ TÀI PHÂN TÍCH HÀM LƯỢNG MELAMINE TRONG SỮA BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÍ KHÍ GHÉP KHỐI PHỔ.
TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ HĨA BÁO CÁO TIỂU LUẬN KẾT THÚC HỌC PHẦN MƠN PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ ĐỀ TÀI: PHÂN TÍCH HÀM LƯỢNG MELAMINE TRONG SỮA BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÍ KHÍ GHÉP KHỐI PHỔ (GC-MS) GVHD: Nhóm: 01 Sinh viên: Nguyễn Thị Thoa Lưu Lan Anh: Đào Văn Bách: Trương Quang Chiến: Đồn Tất Đạt: Ngơ Bá Đạt: Phạm Văn Đạt: Lớp: Hóa Phân Tích - K15 Hà Nội, 12-2022 2020603315 2020600292 2020602905 2020601812 2020602220 2020602016 MỤC LỤC MỤC LỤC DANH SÁCH HÌNH DANH SÁCH BẢNG .4 LỜI CẢM ƠN PHẦN 1: MỞ ĐẦU PHẦN 2: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 2.1 Tổng quan 2.1.1 Tổng quan sữa 2.1.2 Tổng quan Melamine 11 2.1.3 Tổng quan phương pháp sắc ký khí 15 2.2 Kết phân tích hàm lượng chất Melamine sữa 18 2.2.1 Kết nghiên cứu tác giả ( nước ) 18 2.2.2 Kết nghiên cứu tác giả ( nước ) 22 2.3 Bàn luận 25 2.3.1 Về điều kiện chạy sắc kí xử lý mẫu .25 Phần 3: KẾT LUẬN VÀ BÀI HỌC KINH NGHIỆM 27 TÀI LIỆU THAM KHẢO 28 DANH SÁCH HÌNH Hình 1: Sơ đồ thiết bị sắc kí khí 15 Hình 2: Pic 17 Hình 3: Kết phân tích 23 DANH SÁCH BẢNG Bảng 1: Phân loại mẫu thực phẩm kiểm tra (n = 1,175) 18 Bảng 2: Tỉ lệ mẫu thực phẩm nhiễm Melamin .18 Bảng 3: Hàm lượng Melamin loại thực phẩm 19 Bảng 4: Kết phân tích mẫu sản phẩm sữa 23 LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành đề tài tiểu luận đạt kết tốt đẹp, lời chúng em xin chân thành cảm ơn Ban Giám hiệu nhà trường, Ban chủ nhiệm khoa Hóa thầy khoa tạo điều kiện cho chúng em suốt trình học Với lòng biết ơn sâu sắc nhất, chúng em xin chân thành cảm ơn cô Nguyễn Thị Thoa – người tận tình giúp đỡ, hướng dẫn tạo điều kiện cho chúng em hoàn thành tiểu luận Được phân công hướng dẫn thầy giáo, nhóm chúng em thực đề tài tiểu luận “ Phân tích hàm lượng melamine sữa phương pháp sắc kí khí ghép khối phổ (GC - MS)” Trong q trình làm báo cáo cịn hạn chế thời gian, kiến thức yếu tố khác nên chắn có nhiều sai sót, mong nhận bảo lời nhận xét thầy bạn để nhóm chúng em trau dồi kiến thức sửa đổi Chúng em xin chân thành cám ơn! PHẦN 1: MỞ ĐẦU Hiện nay, sữa sử dụng phổ biến nguồn cung cấp lượng dưỡng chất cần thiết cho thể Sữa bột sản phẩm sử dụng nhiều trẻ nhỏ nhu cầu sống đại trẻ không bú sữa mẹ đầy đủ chạy theo thông tin quảng cáo nhiều hãng sữa thị trường Mức sống người dân ngày cao, nhu cầu nuôi thú kiểng trở thành thú vui nhiều người, thức ăn cho loại vật nuôi đa dạng Vụ việc nhiễm melamine sữa, thức ăn gia súc gây xôn xao dư luận vào thời điểm cuối năm 2008 đầu năm 2009 Hàng ngàn trẻ em bị bệnh, số thiệt mạng uống sữa nhiễm hóa chất Thức ăn gia súc nhiễm melamine gây sỏi thận suy thận cấp chó mèo Đặt nhu cầu thiết phải có phương pháp xác định xác chất thực phẩm để có giải pháp kịp thời, tránh ảnh hưởng tới sức khỏe người vật nuôi Việc phân tích xác melamine mẫu khơng phải dễ dàng kể khâu tách chiết melamine khỏi mẫu khâu vận hành thiết bị Cho đến nay, việc sử dụng phương pháp ELISA để sàng lọc có ba kỹ thuật tương đối phân tích melamine thực phẩm: phương pháp sắc ký lỏng HPLC với đầu dò UV thích hợp dùng để phân tích hàm lượng melamine tương đối lớn Còn hai phương pháp sắc ký khí ghép khối phổ sắc ký lỏng ghép phối khổ Với phương pháp này, người ta gặp trở ngại khiến kết đạt thấp trị số thực, không giải tốt vấn đề chiết tách melamine khỏi protein thực phẩm Từ thực tế trên, xây dựng quy trình phân tích hàm lượng melamine sữa thức ăn gia súc phương pháp sắc ký khí phép khối phổ (GC-MS), dựa quy trình công bố U.S.FDA, 2008 PHẦN 2: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 2.1 Tổng quan 2.1.1 Tổng quan sữa 2.1.1.1 Khái niệm thành phần sữa a Khái niệm Sữa chất lỏng sinh lý tuyến sữa tổng hợp từ hợp chất có máu, tiết từ tuyến vú động vật nguồn thức ăn để nuôi sống động vật non Sữa có đầy đủ dinh dưỡng cần thiết cho phát triển thể Những chất có khả đồng hố cao từ lâu người biết sử dụng sữa loại thực phẩm bổ dưỡng cho thể trẻ sơ sinh b Thành phần sữa Trong sữa có số thành phần như: lipit, gluxit, protein, chất khống, vitamin, ngồi cịn có chất màu nhiều chất khác 2.1.1.2 Phân loại Sữa tươi nguyên kem (sữa béo) Sữa bán gầy (Semi-Skimmed Milk) Sữa gầy Sữa béo 1% Sữa hữu Sữa có hương liệu Sữa xử lý nhiệt Sữa tiệt trùng 2.1.1.3 Các tiêu đánh giá chất lương sữa a Chỉ tiêu cảm quan Trạng thái Ở điều kiện bình thường sữa tươi khối chất lỏng đồng nhất, khơng vón cục, khơng có lớp chất béo mặt, có độ nhớt khoảng 1.1-2.5 đơn vị (lấy độ nhớt nước đơn vị), khơng có cặn, khơng có tạp chất lạ, khơng có rác bẩn,… Thơng qua trạng thái bên ngồi sữa nhận xét tổng quát chất lượng sữa Chẳng hạn chất protein sữa bị đơng tụ sữa tạo thành vón cục lợn cợn, chất béo sữa độ nhớt sữa thấp, sữa bị biến đổi tác dụng loại vi khuẩn vi khuẩn lactic, vi khuẩn butyric,… làm cho sữa bị vón, độ nhớt thay đổi… Màu sắc Sữa tươi có màu sắc thay đổi từ trắng ngà đến vàng nhạt Qua màu sắc sữa phán đốn sơ chất lượng sữa Sữa có nhiều chất béo màu vàng loại sữa bình thường, ngược lại sữa bị lấy phần chất béo bị pha thêm nước thường có màu vàng nhạt sữa bình thường có màu vàng ánh xanh, sữa có màu xám ánh hồng vú bò bị viêm ảnh hưởng thức ăn lạ Một số loại vi sinh vật phát triển sữa làm thay đổi màu sắc sữa Ví dụ vi khuẩn pseudomonas synantha, Bactricum synxanthum phát triển sữa đun sôi khơng cịn vi khuẩn lactic sinh màu vàng kim loại mặt sữa Mùi vị Sữa tươi có mùi thơm đặc trưng dễ chịu, vị Khi sữa có mùi vị lạ chứng tỏ sữa bị biến đổi chất lượng b Các tiêu lý hoá Tỷ khối Tỷ khối sữa phụ thuộc vào hàm lượng chất khơ có sữa Sữa có nhiều chất khơ tỷ khối sữa cao Nếu hàm lượng chất béo sữa tăng lên tỉ khối sữa giảm đi, ngược lại Tỉ khối sữa tươi thường thay đổi phạm vi 1.028-1.038 Khi sữa tươi bị pha thêm nước tỉ khối giảm xuống Do thành phần hóa học sữa phụ thuộc vào điều kiện thời tiết chăn nuôi chế độ vắt sữa, nên tỉ khối sữa thay đổi theo thời tiết Về mùa lạnh khơ tỉ khối sữa thường lớn mùa nóng ẩm Độ acid Độ acid sữa số ml dung dịch NaOH hay KOH nồng độ 0.1N cần thiết để trung hịa lượng acid có 100ml sữa tươi, với chất thị phenolphthalein Độ acid sữa ký hiệu T Độ acid sữa tươi vắt khoảng 16-180 T, có loại sữa tươi vắt có độ acid thấp 160 T cao 180 T Sau vắt thời gian vi khuẩn lactic sữa phát triển làm tăng lượng acid lactic sữa nên độ acid sữa tăng dần Khi bảo quản hay vận chuyển, điều kiện khí hậu nóng ẩm nước ta, độ acid sữa tăng dần lên, tới 20 250 T hay Đối với sữa tươi dùng để uống trực tiếp thường khống chế độ acid phạm vi không lớn 200 T Đối với sữa tươi dùng để chế biến sản phẩm khác khống chế độ acid lớn chút không sao, tối đa đạt từ 23-250 T Ngồi việc tính độ acid theo độ T người ta cịn tính theo lượng acid hữu đó, chẳng hạn tính độ acid sữa theo số gam acid lactic có 100ml sữa tươi Cách chuyển độ acid theo độ T độ acid tính theo lượng acid lactic sau: Độ acid = Độ T * 0.009(%) c Các tiêu vi sinh Sữa mơi trường thích hợp cho phát triển vi sinh vật, vi sinh vật xâm nhập vào sữa chúng phát triển nhanh chóng, đặc biệt điều kiện khí hậu nóng ẩm nước ta Những vi sinh vật chúng xâm nhập vào sữa gây hư hại như: làm chua sữa, làm biến đổi màu sữa, gây mùi hơi,… Vì thu nhận ngun liệu sữa tươi người ta thường kiểm tra cẩn thận cách thử hoạt lực enzim reductaza phân loại sữa thành nhiều loại tốt, trung bình hay xấu để đưa vào chế biến cho phù hợp có xuất cao Sữa mơi trường thích hợp cho phát triển vi sinh vật, vi sinh vật xâm nhập vào sữa chúng phát triển nhanh chóng, đặc biệt điều kiện khí hậu nóng ẩm nước ta Những vi sinh vật chúng xâm nhập vào sữa gây hư hại như: làm chua sữa, làm biến đổi màu sữa, gây mùi hơi,… Vì thu nhận nguyên liệu sữa tươi người ta thường kiểm tra cẩn thận cách thử hoạt lực enzim reductaza phân loại sữa thành nhiều loại tốt, trung bình hay xấu để đưa vào chế biến cho phù hợp có xuất cao 2.1.1.4 Hiện trạng sử dụng sữa a Thị trường nước Thị trường sữa Việt Nam phát triển nhanh chóng năm gần tiềm tăng trưởng Kết hợp xu cải thiện sức khoẻ tầm vóc người Việt Nam khiến cho nhu cầu tiêu thụ sản phẩm sữa giữ mức tăng trưởng cao b Thị trường sữa giới Báo cáo Công ty nghiên cứu thị trường EMR với tựa đề “Báo cáo Triển vọng thị trường sữa toàn cầu năm 2019-2024” dự báo rằng thị trường sữa và sản phẩm từ sữa toàn cầu tăng trưởng 2,5% năm Cho dù phải đối mặt với nhiều “làn gió ngược," song nhu cầu tiêu thụ không ngừng gia tăng giúp ngành cơng nghiệp chế biến sữa đón nhận triển vọng lạc quan thời gian tới "Mắt xích” quan trọng chuỗi thực phẩm Sữa phần quan trọng chuỗi thực phẩm mà người sử dụng hàng ngày Với diện rộng rãi mặt hàng thực phẩm khác nhau, sữa coi mơ hình thu nhỏ ngành cơng nghiệp thực phẩm, xu hướng ăn uống người sử dụng sữa phần lớn tác động tới loại thực phẩm khác Theo báo cáo EMR, thị trường sữa đà tăng trưởng tích cực, chủ yếu thúc đẩy nhu cầu tiêu thụ sữa giới Nhu cầu sữa, đặc biệt sản phẩm từ sữa bơ, sữa chua, phô mai,… có xu hướng “hồi sinh” nước phát triển nhiều người thay đổi thói quen ăn uống có “thiện cảm” với sản phẩm sữa béo vài năm gần Tại nước phát triển, lượng tiêu thụ sản phẩm từ sữa dự báo tăng nhờ thu nhập người dân cao hơn, dân số phát triển mạnh chế độ ăn uống ngày tồn cầu hóa Ngồi ra, việc quy trình sản xuất sữa ngày hiệu ổn định kinh tế phát triển góp phần hỗ trợ tích cực tới đà tăng trưởng ngành chế biến sữa thị trường Tuy nhiên, mức tiêu thụ sữa sản phẩm từ sữa bình quân đầu người kinh tế dự báo tiếp tục thấp nhiều so với nước phát triển Các sản phẩm sữa tươi tiêu thụ rộng rãi kinh tế Ấn Độ Pakistan, người tiêu dùng nước phát triển có xu hướng chuộng sản phẩm sữa qua chế biến Ở nước phát triển, hầu hết sữa sản xuất chế biến thành phômai, bơ, sữa bột gầy sữa bột nguyên kem (SMP WMP) Châu Á thị trường tiêu thụ sữa chủ lực khu vực định diễn biến thị trường sữa toàn cầu Trung Quốc, Ấn Độ Pakistan thị trường sữa hàng đầu khu vực này, với tốc độ tăng trưởng sản lượng sữa chủ yếu từ Ấn Độ Pakistan Trong đó, Mỹ 10 bố tuyên bố tạm thời khuyến cáo liều 0,5mg/kg trọng lượng thể/ngày tổng melamine chất đồng dạng (ammelaminee, ammelamide, axit cyanuric) Cơng bố EFSA nguy sức khoẻ có melamine sữa sản phẩm sữa khác dành cho trẻ nhỏ Trung quốc công bố vào ngày 24/9 Những giá trị số liệu dựa nghiên cứu thử nghiệm độc tính melamine Vì chưa có nghiên cứu điều tra độc tính kết hợp melamine axit cyanuric với để đưa mức tiêu thụ cho chất, nên người ta khuyến cáo nên sử dụng giá trị TDI khuyến cáo Giả sử melamine khơng thêm vào có chủ định mẫu xét nghiệm có melamine sao? Trường hợp melamine từ bao gói,dụng cụ chứa xâm nhập vào thực phẩm với hàm lượng thấp Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn (Quyết định số 3762/QĐ-BNN-CN),thức ăn chăn nuôi nuôi trồng thủy sản có chất melamine vượt ngưỡng 2,5mg/kg bị cấm nhập khẩu, sản xuất kinh doanh lưu hành sử dụng Ngày 12/12/2008, Bộ Y tế Việt Nam ban hành ngưỡng melamine tối đa mg/kg thực phẩm dành cho trẻ 36 tháng tuổi 2,5 mg với thực phẩm khác 2.1.2.5 Một số phương pháp phân tích Melamine - Phương pháp Kjeldahl: Protein phân hủy H2SO4 tạo (NH4)+ Sau NaOH thêm vào để chuyển (NH4)+ thành NH3 NH3 cho phản ứng với lượng dư acid boric theo phản ứng H3BO3 + NH3 > NH4+ + BO- BO2- baz nên chuẩn lại HCl Từ xác định hàm lượng N hay protein mẫu (VD: mẫu sữa) Phương pháp Dumas: Mẫu đốt cháy hoàn toàn nhiệt độ cao xúc tác tạo nước, CO 2, N2 khí Hỗn hợp khí dẫn qua nhiều cột để hấp thu khí đầu dị dẫn nhiệt đặt cuối để đo hàm lượng N2, từ biết hàm lượng Nitrogen mẫu Phương pháp sắc kí lỏng hiệu cao HPLC phương pháp sắc ký phát triển dựa phương pháp ghi sắc ký cột (column chromatography) Thay để dung mơi nhỏ giọt qua cột ghi sắc ký tác dụng trọng lực, người ta đặt lên dung môi áp suất khoảng 400at để dịch chuyển xảy nhanh hơn.Phương pháp cho phép sử dụng hạt có kích thước nhỏ cột hấp phụ (column packing material) làm tăng bề mặt tiếp xúc pha tĩnh (stationary phase) phân tử qua Điều tăng cường khảnăng phân tích chất có hỗn hợp Phương pháp sắc kí khí khối phổ 14 Hệ thống sắc ký khí ghép phối khổ cấu trúc : nguồn phân phối khí, lị cột, phận tiêm mẫu, cột nghiên cứu phân tích, đầu dị phối khổ, phận ghi nhận tín hiệu phận in tài liệu nghiên cứu phân tích Các cấu tử mẫu nghiên cứu điều tra tách khỏi cột mao quản vào đầu dò khối phổ Tùy thuộc vào thực chất loại chất cần nghiên cứu phân tích mà quy trình ion hóa với kiểu ion hóa khác ( API, ESI hay APPI ) diễn Sau đó, ion ghi nhận đầu dò 2.1.3 Tổng quan phương pháp sắc ký khí 2.1.3.1 Cơ sở lý thuyết Cơ sở để tách sắc kí khí phân bố mẫu thử hai pha: pha tĩnh có bề mặt tiếp xúc lớn, pha động khí thấm qua tồn bề mặt tĩnh Nếu pha tĩnh rắn gọi sắc kí khírắn Chất rắn nhồi cột thường silicagel, rây phân tử than hoạt tính Q trình chủ yếu hấp phụ Nếu pha tĩnh lỏng, ta có sắc kí khí-lỏng Chất lỏng bao bọc quanh bề mặt chất rắn trơ, gọi chất mang, tạo nên lớp phim mỏng Cơ sở cho tách phân bố mẫu lớp phim mỏng 2.1.3.2 Sơ đồ thiết bị Hiện nay, 30 nhà sản xuất cung cấp thị trường khoảng 150 mẫu khác thiết bị sắc kí khí Trong thập niên 70, tích phân kế điện tử xử lý số liệu dựa máy tính trở nên thông dụng Thập niên 80 xuất thiết bị sắc kí khí với thơng số nhiệt độ cột, tốc độ dòng, tiêm mẫu, điều khiển máy tính với giá vừa phải; có lẽ quan trọng phát triển cột có khả tách mẫu phức tạp có chứa nhiều cấu tử khoảng thời gian ngắn 15 Hình 1: Sơ đồ thiết bị sắc kí khí 2.1.3.3 Pha tĩnh cột GC Có loại cột: cột nhồi cột mao quản - Cột nhồi (packed column): pha tĩnh nhồi vào cột, cột có đường kính - 4mm chiều dài - 3m - Cột mao quản (capillary): pha tĩnh phủ mặt (bề dày 0.2-0.5µm), cột có đường kính 0.1-0.5mm chiều dài 30 - 100m Mật độ nhồi có ảnh hưởng rõ rệt đến lưu giữ pha tĩnh Pha tĩnh phủ chất mang sở phần trăm trọng lượng, vật liệu nhồi đặt cột sở thể tích Nếu mật độ nhồi chất mang tăng lên, khối lượng tổng pha tĩnh cột tăng lên Tẩm pha tĩnh lên chất mang có nhiều cách, số dùng máy cất quay chân không Lấy lượng pha tĩnh tính tốn sẵn hịa tan vào dung mơi thích hợp bình đáy trịn, cho tiếp chất mang rắn với lượng tính tốn thích hợp vào Lắp bình vào máy cất quay Quay bình dung mơi bay hết Đun nóng bình cách thủy đèn hồng ngoại Lấy đoạn ống thẳng có chiều dài đường kính mong muốn, nút đầu thủy tinh, đầu lắp phểu, đổ đầy chất mang tẩm pha lỏng vào phểu Lắc cột máy lắc 16 đập nhẹ vào cột đến khơng thấy giảm thể tích chất mang phểu cột nạp đầy Nút đầu cịn lại bơng thủy tinh cuộn ống lại cho thích hợp với lị ổn nhiệt máy GC 2.1.3.4 Các phương pháp định lượng GC 2.1.3.4.1 Phương pháp chuẩn hóa diện tích Đây phương pháp tính thành phần phần trăm mẫu cách đo diện tích pic sắc kí đồ Theo cách đem diện tích pic chất quan tâm A cho tổng diện tích pic: %A = (diện tích pic A/tổng diện tích pic)x100 % Khi phân tích thành phần có điểm sơi sát dãy đồng đẳng, phương pháp dùng để tính tỷ lệ phần trăm khối lượng Phương pháp tất cấu tử rửa giải đáp ứng detector với cấu tử giống Nếu điều kiện thõa mãn phương pháp nhanh hiệu 2.1.3.4.2 Phương pháp đường chuẩn Lập đường chuẩn riêng rẽ cấu tử hỗn hợp cách tiêm thể tích loạt dung dịch hỗn hợp chất chuẩn có nồng độ khác Như loạt nồng độ chất chuẩn phân tích diện tích chúng xác định Một đường chuẩn dựng cho cấu tử với trục nồng độ trục diện tích tương ứng để kiểm tra tuyến tính đáp ứng detector Tiêm thể tích mẫu có cấu tử cần phân tích chạy sắc kí điều kiện chạy chuẩn Từ diện tích thu cấu tử cần phân tích đường chuẩn vừa thiết lập suy nồng độ chúng 2.1.3.4.3 Phương pháp nội chuẩn Phương pháp gọi phương pháp chuẩn hóa tương đối hay gián tiếp Để định lượng cấu tử X ta cần phải chọn chất chuẩn S cho: Nếu trộn lẫn X với S ta phải thu đỉnh riêng biệt sắc kí đồ Pic X S phải gần Sau ta phải pha hỗn hợp có tỷ lệ trọng lượng X S biết trước, chạy sắc kí, đo diện tích pic, lập tỉ số diện tích tương ứng, cuối lập đường chuẩn tương đối 17 Hình 2: Pic Sc/Ss tỉ lệ diện tích cặp cấu tử cần xác định X chất chuẩn nội Wc/Ws tỉ lệ trọng lượng cặp cấu tử cần xác định X chất chuẩn nội Khi phân tích mẫu thật, ta cho lượng biết trước chất chuẩn nội S vào mẫu tiến hành sắc kí hỗn hợp Từ tỉ lệ diện tích đo được, đường chuẩn tương đối vừa dựng ta có tỉ lệ trọng lượng Với trọng lượng chuẩn S thêm vào biết ta tính trọng lượng chất X Phương pháp có ưu điểm: Không cần biết đến đáp ứng detector Khơng cần trì nghiêm ngặt điều kiện tiến hành sắc kí thay đổi loại trừ theo cách tính tỷ số 2.1.3.5 Các loại detector GC Detector đo độ dẫn nhiệt (Thermal conductivity detector) Detector ion hóa lửa Detector bắt electron Detector khối phổ 2.2 Kết phân tích hàm lượng chất Melamine sữa 2.2.1 Kết nghiên cứu tác giả ( nước ) Đặt vấn đề : Gần việc tìm thấy Melamine, chất có hại cho sức khoẻ, có sữa sản phẩm sữa bánh, kẹo…đã gây nhiều lo lắng cho người dân nhà quản lý an toàn vệ sinh thực phẩm, loại thực phẩm phổ biến nhiều người sử dụng, trẻ 18 em Kiểm soát hàm lượng melamine sữa sản phẩm sữa việc cần thiết để bảo vệ sức khoẻ người dân 2.2.1.1 Điều kiện sắc kí Điều kiện vận hành sắc kí khí Các thơng số vận hành coi thích hợp: - cột: 2,5cm*30m - khí mang: nitơ , tốc độ ml/min; - lò cột: giữ nhiệt độ 40oC min, tăng 30oC/min lên nhiệt độ 160oC giữ min; - bơm mẫu: nhiệt độ 250oC, chế độ bơm mẫu khơng chia dịng, thời gian khơng chia dịng min, thể tích bơm ml; - nhiệt độ detector: 250oC Xử lý mẫu: Cân 5mg mẫu cho vào cốc thủy tinh 50ml Hòa tan mẫu 15 ml nước cất, đánh siêu âm mẫu đồng Cho tất dịch mẫu vào bình định mức 50ml, định mức đến vạch acetonitril Sau lọc qua giấy lọc thơ Lấy dịch lọc qua cột SPE amino sau : Hoạt hóa 2ml ethanol ( để chảy từ từ không dùng áp suất ) Cho ml dung dịch lọc qua cột ( để chảy từ từ không dùng áp suất ) Sau mẫu qua cột dùng bơm chân không hút cột cho khô hẳn Dịch chiết qua cột SPE cho vào bình quay 50 ml Cô quay 70 độ khơ hồn tồn Sau cho vào bình quay ml methanol , siêu âm phút, chuyển lượng methanol vào tube 15ml có nắp vặn , đun khí nito thổi khơ hồn tồn dung dịch methanol có chứa Melamin Sau thêm vào tube 100 µm pyridine đậy nắp kỹ tránh bay 19 Kết phân tích Bảng 1: Phân loại mẫu thực phẩm kiểm tra (n = 1,175) STT Loại thực phẩm Sữa bột Sữa dạng lỏng Sữa nguyên liệu Bánh kẹo Phô mai , bơ Kem ăn Các loại khác Tổng cộng Số mẫu 516 165 175 158 85 52 24 1.175 Bảng 2: Tỉ lệ mẫu thực phẩm nhiễm Melamin STT Loại thực phẩm Số mẫu kiểm tra Số mẫu nhiễm Tỉ lệ mẫu nhiễm (%) Sữa bột 516 1,16 Sữa dạng lỏng 165 3,03 Sữa nguyên liệu 175 1,14 Bánh kẹo 158 11 6,96 Phô mai , bơ 85 0 Kem ăn Các loại khác (cà phê, nước tăng lực, nước chấm…) 52 0 24 0 Tổng cộng 1.175 24 2,04 20