Đang tải... (xem toàn văn)
Bài trình bày "Các phương pháp phân tích polyphenols trong nước ép trái cây, trong bia và rượu"
ĐẠI HỌC BÁCH KHOA TP H CHÍ MINH C HỒ KHOA K THUẬT HĨA HỌC KỸ TIỂ LUẬN MƠN HỌC ỂU CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH CƠNG C ƯƠNG NG CỤ ĐỀ TÀI: Các phương pháp phân tích polyphenols ương ng nước ép trái cây, bia r c rượu rư GVHD: TS HUỲNH KHÁNH DUY Họ viên thực hiện: ọc Lê Hà Việt Luân MSHV 13053072 Thành ph Hồ Chí Minh, 12/ 2013 phố Tiểu luận Các phương pháp phân tích cơng cụ MỤC LỤC Tổng quan Cấu trúc polyphenol nho rượu vang Chiết tách phenolics từ nho 3.1 Phương pháp chiết lỏng-rắn 3.2 Tinh chế dịch chiết 10 Phân tích thành phần rượu vang chiết xuất 11 4.1 Xác định tổng lượng hợp chất phenolics 11 4.2 Chiết tách phân tích hợp chất phenolics (kỹ thuật sắc ký) 17 4.2.3 Phân tích, xác định hợp chất phenolic 20 Kỹ thuật tách 26 Kỹ thuật để Thiết lập cấu trúc Tannin (Xác định mức độ trùng hợp) 28 Kết luận 30 Lê Hà Việt Luân Trang Tiểu luận Các phương pháp phân tích cơng cụ Tổng quan Các hợp chất phenolic chất chuyển hóa trung gian phổ biến giới thực vật Các hợp chất có cấu trúc chung bao gồm vòng benzen thơm với nhiều nhóm hydroxyl Cấu trúc đại diện cho nhóm lớn đa dạng phân tử khác chia làm hai họ chính: flavonoids dựa cấu trúc C6C3-C6 khung carbon nhóm non-flavonoids Trong thể thực vật, phenolics đóng vai trò phát triển, sinh sản phản ứng phòng vệ khác thực vật nhằm bảo vệ chống lại tác động bên tia UV đe dọa sinh học động vật ăn thịt tác nhân gây bệnh công Chúng cấu thành thành phần hợp chất sắc tố, tinh chất hương vị thực vật Đa số hợp chất phenolic (như resveratrol , quercetin , rutin , catechin , proanthocyanidins) cơng bố có nhiều hoạt tính sinh học, bao gồm khả bảo vệ tim mạch , chống viêm , chống ung thư , kháng virus kháng khuẩn hợp chất chủ yếu đóng vai trị chất chống oxy hóa ức chế hoạt hóa gốc tự Các hợp chất phenolic đóng vai trị quan trọng cho chất lượng sản phẩm thực phẩm có nguồn gốc từ trồng nhờ vào đặc tính chúng giúp cho ổn định sản phẩm khơng bị oxy hóa tạo nên đặc tính cảm quan Thật vậy, tính chất cảm quan rượu chủ yếu liên quan đến hợp chất phenolic chiết xuất từ nho trình sản xuất rượu vang Trong số hợp chất thuộc nhóm phenolics, flavonoid, bao gồm anthocyanins flavan-3-ols, đóng góp quan trọng cho chất lượng rượu Anthocyanins hợp chất sắc tố tạo màu đặc trưng rượu vang đỏ chất chủ yếu nằm vỏ nho Flavan -3- ols tồn không dạng đơn phân tử mà dạng đa cao phân tử, gọi tannin proanthocyanidins Tannin hợp chất có nguồn gốc từ nho đóng vai trị quan trọng chất lượng rượu vang đỏ đặc tính làm se, tạo vị cay, đắng vai trị chúng ổn định màu sắc lâu dài sản phẩm Cảm giác se vị đắng hai đặc điểm nho yếu tố cảm quan xác định chất lượng tốt sản phẩm rượu Se cảm giác xúc giác, cay, đắng cảm giác vị giác Kích thước phân tử Lê Hà Việt Luân Trang Tiểu luận Các phương pháp phân tích cơng cụ proanthocyanidins ảnh hưởng đến tính cay, đắng tương đối chúng mức độ se Nhìn chung, hợp chất đơn phân tử tạo cảm giác cay, đắng nhiều cảm giác làm se, tính chất ngược lại trường hợp chất dẫn xuất khối lượng phân tử lớn Đối với hợp chất tanin hạt nho, giảm mức độ galloylation làm giảm cảm giác se Việc định danh định lượng thành phần nghiên cứu yếu tố ảnh hưởng đến thành phần chất có hoạt tính sinh học cách sử dụng phương pháp phân tích có độ nhạy cao độ xác đáng tin cậy ưu tiên phát triển hàng đầu Một số cấu trúc chung hợp chất phenolics (catechin, proanthocyanidin, anthocyanin, ) xác định định lượng rượu vang hợp chất khác phenol khối lượng phân tử cao hợp chất hình thành q trình lão hóa rượu vang nghiên cứu Nhiều phương pháp khác cải thiện qua thời gian Nhìn chung, phương pháp cho phép xác định số tổng (ví dụ , "tổng số polyphenol") chủ yếu thực cách phân tích quang phổ, sau tiếp tục thực phép phân tích chi tiết dựa phương pháp phân tách hợp chất polyphenolic khác thực sắc ký lỏng hiệu cao điện di mao quản cấu trúc xác định máy dò khác nhau, UV -vis phổ khối lượng Cấu trúc polyphenol nho rượu vang Thành phần hợp chất phenolics rượu vang phụ thuộc vào nguồn gốc loại nho sử dụng quy trình sản xuất rượu Cấu trúc hợp chất phenolics bao gồm vòng thơm đơn giản với trọng lượng phân tử thấp đến tannin trọng lượng phân tử cao với cấu trúc phức tạp Hai nhóm hợp chất phenolic chia làm hai họ chính: flavonoids dựa cấu trúc C6-C3-C6 khung carbon nhóm nonflavonoids Trong số chất non-flavonoids, hợp chất axit phenolic (axit hydroxybenzoic), axit hydroxycinnamic stilbens Axit hydroxybenzoic có cấu trúc C6Lê Hà Việt Luân Trang Tiểu luận Các phương pháp phân tích cơng cụ C1, bao gồm vịng benzen với nhóm -COOH vòng Các dẫn chất acid khác phân biệt nhóm R1-R4 vịng benzen tương ứng chúng Vanillic, syringic gallic acids hợp chất từ cấu trúc (cấu trúc chúng minh họa hình 1) Một số axit hydroxycinnamic (C6-C3) có mặt nho rượu vang Chúng xác định tồn dạng tự với lượng nhỏ, chủ yếu tồn dạng ester hóa, đặc biệt với axit tartaric Các hợp chất tồn dạng ester glycosides đơn giản glucose Một họ polyphenol cấu trúc phức tạp có mặt nho, gỗ sồi rượu Stilbenes, phân tử có hai vịng benzen, liên kết phân tử ethane, chuỗi ethylene Trong số hợp chất đồng phân dạng trans, resveratrol, 3,5,4 - trihydroxystilben (Hình 1), cho sản xuất dây nho phản ứng tự nhiên bị nhiễm nấm Lê Hà Việt Luân Trang Tiểu luận Các phương pháp phân tích cơng cụ Hình - Cấu trúc số phenolics đơn phân tử quan trọng nho rượu vang Flavonoids, thành phần phenolics nho loại rượu vang, có cấu trúc khung carbon chung, bao gồm ba vòng (A, B, C) Họ phenolics phân chia thành phân nhóm thứ cấp khác bao gồm, flavones , flavonols , flavanones , flavanols anthocyanins phân biệt cấu trúc độ chưa bão hịa vịng carbon nhóm khác tương ứng (Hình 1) Anthocyanins hợp chất đặc trưng phân bố vỏ loại nho có sắc đỏ Cấu trúc chúng phân tử flavylium cation, bao gồm hai vòng benzen liên kết dị vịng có oxy chưa bão hịa dạng cationic, dẫn xuất từ phân tử 2-phenylbenzopyrylium (Hình 1) Chúng dẫn xuất glucosylate hóa năm aglycones anthocyanidins bao gồm: cyanidin , peonidin , petunidin , delphinidin malvidin Lê Hà Việt Luân Trang Tiểu luận Các phương pháp phân tích cơng cụ Flavan-3-ols hình thành phân nhóm flavonoid thứ cấp có cấu trúc phức tạp (Hình 1) Các hợp chất bao gồm đơn phân tử đơn giản (+)-catechin (-)-epicatechin dạng đa phân tử polymer cao phân tử gọi proanthocyanidins chúng bị phân hủy giải phóng anthocyanidins bị nung nóng dung dịch có tính axit (Hình 2) Cấu trúc proanthocyanin khác chất tiểu phân cấu tạo chúng, mức độ trùng hợp ( mDP ) trung bình vị trí liên kết Hình - Cấu trúc proanthocyanidins: flavan-3-ol liên kết vị trí C4-C8 / C4-C6 Các hợp chất phân bố tất phần nho phần vỏ có chứa lượng proanthocyanidins thấp hạt đặc điểm cấu trúc chúng khác Proanthocyanidins hạt nho bao gồm procyanidin (tiểu phân cấu thành từ (+)-catechin (C) (-)-epicatechin (EC)), proanthocyanidins phần vỏ nho bao gồm prodelphinidins procyanidinsand [tiểu phân cấu thành từ ()-epigallocatechin (EGC)] Proanthocyanidins phần vỏ nho có mDP cao có tỷ lệ tiểu phân galloylated thấp hạt Tannin hợp chất có nguồn gốc từ nho đóng vai trị quan trọng chất lượng rượu vang đỏ đặc tính làm se, tạo vị cay, đắng vai trò chúng ổn định màu sắc lâu dài sản phẩm Lê Hà Việt Luân Trang Tiểu luận Các phương pháp phân tích cơng cụ Chiết tách phenolics từ nho Để phân tích cấu trúc đặc trưng hợp chất phenolics, thành phần anthocyanins tannin trước tiên cần chiết tách từ mẫu nho Trong trường hợp sản phẩm rượu vang, số tác giả đề nghị mẫu rượu không cần qua xử lý đặc biệt trước mà bơm trực tiếp vào thiết bị phân tích tác giả khác cho việc chiết tách, định lượng định danh cho kết tốt thực số bước tinh chế mẫu trước phân tích (điểm trình bày kỹ phần phương pháp phân tích) 3.1 Phương pháp chiết lỏng-rắn Hạt nho phần vỏ tách riêng trước chiết dung môi acetone dung môi nước tiếp tục chiết tách với dung dịch methanol Anthocyanins anthocyanidins thường chiết từ phần vỏ phần pomaces với dung mơi hữu axit hóa, thường methanol Hiện nay, phương pháp chiết tách rắn - lỏng thay kỹ thuật chiết chất lỏng nén áp suất cao, phương pháp siêu âm, điện hỗ trợ vi sóng Những kỹ thuật giúp rút ngắn thời gian chiết, giảm lượng dung môi tiêu thụ, làm tăng hiệu trình chiết tách Phương pháp chiết chất lỏng nén áp suất cao (PLE) thương mại gọi phương pháp chiết dung mơi tăng tốc (ASE) Mơ hình hệ thống mơ tả Hình Phương pháp cho phép chiết tách nhanh chóng hợp chất cần phân tích mơi trường kín trơ áp lực cao (3,3-20,3 MPa) nhiệt độ từ 40200 °C Ưu điểm kỹ thuật dung mơi trạng thái lỏng nhiệt độ cao nhiệt độ sôi chúng, điều cho phép việc chiết tách thực nhiệt độ cao làm tăng khả hịa tan chất cần phân tích dung môi giải hấp động học nhanh từ hỗn hợp ban đầu Lê Hà Việt Luân Trang Tiểu luận Các phương pháp phân tích cơng cụ Hình - Mơ hình hệ thống thiết bị PLE Do đó, dung mơi chiết tách bao gồm nước (ít hiệu sử dụng chiết tách chất thực vật nhiệt độ thấp) hiệu nhiều áp dụng phương pháp PLE Trong nghiên cứu mình, Ju Howard cho thấy phương pháp PLE: nhiệt độ cao (80-100 °C) sử dụng nước axit hóa mang lại hiệu chiết tách tương đương sử dụng methanol 60 % axit hóa chiết tách anthocyanin từ vỏ trái nho Trong nghiên cứu khác, hiệu suất chiết tổng lượng polyphenol flavonoid từ vỏ trái nho Pinot thu tiến hành 150 °C cao hợp chất flavonoids có xu hướng phân hủy thời gian chiết kéo dài (hơn 210 phút) Bên cạnh đó, Pineiro đồng nghiệp cho thấy thí nghiệm chiết tách hạt nho PLE sử dụng methanol dung môi cho kết độ thu hồi catechin epicatechin đặc biệt cao so với trường hợp thu phương pháp khuấy từ chiết tách hỗ trợ sóng siêu Một phương pháp chiết khác kỹ thuật hỗ trợ điện áp trình chiết tách Boussetta đồng nghiệp nhận thấy trình chiết tách vỏ trái nho Chardonnay với hỗ trợ xung điện trường (PEF) điện áp cao (HVED) giúp tăng tốc trình chiết tách chất tan polyphenol nước 20 °C mặt độc học Kỹ thuật HVED giải thích có khả tạo sóng xung kích giúp hỗ trợ phá vỡ Lê Hà Việt Luân Trang Tiểu luận Các phương pháp phân tích cơng cụ mơ vách tế bào trái nho, phóng thích polyphenols làm tăng tốc trình khuếch tán polyphenols Tuy nhiện, số thông số quan trọng phải tối ưu hóa phương pháp chiết tách hỗ trợ điện áp tiến hành lâu ảnh hưởng làm phân hủy polyphenols dẫn đến giảm nồng độ chúng dịch chiết Hơn nữa, nghiên cứu thực chủ yếu catechin tổng lượng phenols chưa áp dụng cho việc chiết tách hợp chất dễ bị oxy hóa anthocyanins Cuối cùng, phương pháp chiết tách có hỗ trợ vi sóng giúp thúc đẩy q trình truyền lượng tồn mơi trường chiết (dung môi chất nền) cách hiệu đồng Ứng dụng điều kiện tối ưu để chiết hạt nho Cabernet-Sauvignon, Shiraz, Sauvignon blanc Chardonnay công bố khoảng 92 % tổng số polyphenol chiết tách, kết thu tốt so với phương pháp chiết khác (siêu âm, ) 3.2 Tinh chế dịch chiết Sản phẩm thu từ phương pháp chiết tách rắn - lỏng trình bày hỗn hợp thô mà độ tinh khiết nâng cao phương pháp tinh chế Vì vậy, phương pháp chiết lỏng/ lỏng phân đoạn khác sử dụng nhằm làm tinh khiết tách phân đoạn procyanidin khác khối lượng phân tử Như vậy, sau loại bỏ chất ưa dầu chloroform, Lorrain đồng nghiệp sử dụng ethyl acetate để phân tách phần proanthocyanidin đơn đa phân tử pha hữu với phần proanthocyanidin cao phân tử pha nước Các phân đoạn tinh (bảy phần từ DPM 3-12) thu cách tiếp tục thực chiết lỏng / lỏng với tỷ lệ tăng dần chloroform methanol Ngồi ra, làm giàu chiết tách phần dịch chiết thô phương pháp sắc ký lỏng pha thuận (C18) phương pháp tách chiết pha rắn sử dụng chất hấp thụ đa dạng C18 , XAD PVPP Lê Hà Việt Luân Trang 10 Tiểu luận Các phương pháp phân tích cơng cụ 4.2 Chiết tách phân tích hợp chất phenolics (kỹ thuật sắc ký) Kỹ thuật HPLC sử dụng rộng rãi cho việc chiết tách định lượng hợp chất phenolic Các công cụ hỗ trợ khác nhau, pha động, cột thiết bị đầu dị để phân tích anthocyanins, procyanidin, flavonol, flavan-3-ols, axit phenolic Một số phương pháp tập trung ứng dụng lĩnh vực thực phẩm, viết tập trung đến tiến gần liên quan đến phân tích nho rượu 4.2.1 Chuẩn bị mẫu Đối với mẫu rượu vang, bước chuẩn bị mẫu trước phân tích đơi cần thiết tính phức tạp sắc ký đồ Phương pháp chiết lỏng-lỏng chiết pha rắn sử dụng rộng rãi để đơn giản hóa sắc ký đồ mẫu rượu Porgaly Büyüktuncel cho thấy chiết lỏng-lỏng rượu vang với ethyl acetate pH thực cải thiện liệu sắc ký thu họ Ngược lại, nhiều cơng trình, loại mẫu rượu vang lọc tiêm mà không cần chuẩn bị mẫu trước Độ phân giải đỉnh hợp chất ln ln chấp nhận Liên quan đến nho từ chiết xuất, phương pháp đơn giản hịa tan bột khơ dung mơi thích hợp, bước lọc trước tiêm vào thiết bị phân tích 4.2.2 Cột Sắc ký lỏng đảo pha C18 pha tĩnh tương đương thích hợp phương pháp phổ biến sử dụng cho việc tách anthocyanins hợp chất phenolic (proanthocyanidins, flavonol, axit phenolic Các cột thường chứa chặt hạt hình cầu silica liên kết nhờ chuỗi octadecyl (C18) Tuy nhiên, phân tích sắc ký thường nhiều thời gian phải bắt đầu bước dọn rửa dũng cụ trước phân tích tốn thời gian Trong quan điểm này, phương pháp sử dụng cột đơn khối cho việc nhồi cột đề xuất phân tích phenolic Các tính đặc trưng vật liệu không hạt nhân vật liên tục xương, đáp ứng đầy đủ phòng tách biệt Do cấu trúc cứng xốp vật liệu này, chúng cho phép dịng dung mơi chảy qua cột nhanh hơn, thời gian thí nghiệm ngắn Lê Hà Việt Luân Trang 17 Tiểu luận Các phương pháp phân tích cơng cụ cột nhanh chóng tái cân chạy Một số nghiên cứu chứng minh ưu điểm loại cột Ví dụ, Castellari et al báo cáo cột nguyên khối hoạt động vận tốc dòng chảy cao so với dịng chảy cột RP thơng thường với sụt giảm áp lực giảm thời gian rửa ngắn tái cân nhanh Một kết chiết tách nhanh (36 phút) hợp chất phenol monomeric cải thiện tín hiệu / nhiễu đạt nhờ sử dụng loại cột Liazid đồng nghiệp phát triển phương pháp nhanh chóng (8 phút) cho phép tách định lượng 13 họ polypheno rượu vang cách sử dụng cột nguyên khối RP-18E Các tác giả cho thấy phương pháp họ cung cấp kết đáng tin cậy, độ phân giải cao có tính lặp áp dụng cho mẫu thực có chứa họ khác hợp chất phenolics Phương pháp LC pha đảo cung cấp thơng tin cụ thể nhóm chất khác chất phenolics rượu vang đỏ giới hạn khả phương pháp phân tích hợp chất có khối lượng phân tử cao Kennedy Waterhouse đề nghị sử dụng phương pháp sắc ký pha thuận (NP-LC) cho phép phân tích proanthocyanidins cao phân tử có diện anthocyanin Họ phát triển phương pháp sử dụng cột silica pha thuận rửa giải cột với pha động methylen clorua, metanol, axit fomic axit heptanesulfonic, mà không cần làm tinh khiết thêm Dựa thứ tự rửa giải proanthocyanidins anthocyanins, phenol rửa giải theo tăng dần khối lượng phân tử Trong so sánh phương pháp phân tích xác định phenolics, De Beer đồng nghiệp nhấn mạnh NP-HPLC phương pháp phổ biến cho polymer định lượng, polyme với khối lượng phân tử khác tách Mặt khác, để phân tích favan-3-ols, kỹ thuật thích hợp đỉnh tín hiệu "monomer" bị nhiễu bao gồm nhiều hợp chất đơn phân tử họ flavanol Các giới hạn tương tự gặp phải phân tích hợp chất anthocyanins monomer với lý hợp chất riêng biệt tồn tại đỉnh tín hiệu Tuy nhiên, NP-HPLC cơng cụ hữu ích cho việc phân tích tuổi loại rượu vang kể nồng độ Lê Hà Việt Luân Trang 18 Tiểu luận Các phương pháp phân tích cơng cụ hai nhóm chất monomer polyphenol trọng lượng phân tử thấp bị giảm xuống liên quan đến độ tuổi rượu Việc sử dụng phương pháp tiên tiến cột đảo pha trao đổi ion hỗn hợp ứng dụng Vergare đồng nghiệp Các cột có cấu trúc đặt biệt, cấu tạo nhóm chất điện tích dương nhúng chuỗi kỵ nước cho thấy kết đầy hứa hẹn cho việc chiết tách anthocyanin, bao gồm pyranoanthocyanidins rượu vang Cabernet Sauvignon-và loại rượu khác Trong nghiên cứu này, Vergara đồng ghiệp cho thấy anthocyanins pyranoanthocyanins xuất giai đoạn rửa giải khác chọn lọc so với trường hợp dịch chiết thu trường hợp sử dụng C-18 làm pha tĩnh Mặc dù thời gian phân tích gần gấp đơi thời gian phương pháp phân tích cổ điển, kỹ thuật cho phép rửa giải riêng biệt rõ ràng anthocyanins monoglucosides, sau dẫn xuất acetyl chúng, dẫn xuất coumaroyl Pyranoanthocyanins xuất dẫn xuất coumaroyl cuối đỉnh tín hiệu hợp chất cao phân tử, xuất tương quan với tuổi rượu vang Cuối cùng, cột lõi vỏ thử nghiệm để phân tích thành phần hợp chất phenolic nước trái rượu vang sản xuất từ giống nho lai Như kỹ thuật thay cho UHPLC (sắc ký lỏng hiệu suất cao), công nghệ cột lõi vỏ thiết kế để hoạt động công cụ tiêu chuẩn HPLC hầu hết trường hợp Trong thiết kế này, số phương pháp thông qua cột lõi vỏ đánh giá để đạt phân tích tốt thành phần phenolic khơng điển anthocyanins diglucoside tìm thấy giống nho lai Kết cho thấy cột lõi vỏ C18 PFP (pentafluorophenyl) cải thiện độ chọn lọc đáng kể Như vậy, anthocyanin / anthocyanidin, hợp chất đơn phân tử không thuộc họ anthocyanins tannin sau phloroglucinolysis hóa, thiết bị phân tích dạng cột lõi vỏ cung cấp kết nhanh chóng, tiêu thụ dung mơi hơn, ngưỡng nồng độ phát thấp độ lập lại kết phân tích Lê Hà Việt Luân Trang 19 Tiểu luận Các phương pháp phân tích cơng cụ 4.2.3 Phân tích, xác định hợp chất phenolic Các phương pháp phát khác áp dụng song song kết hợp với HPLC cho hợp chất phenolic Phenolics rượu thường phát phổ UV-vis (tia cực tím nhìn thấy), mảng photodiode (DAD), huỳnh quang phân tích khối lượng phương pháp UV cịn thơng dụng hợp chất phenolic có phổ hấp thu đặc trưng vùng UV Thật vậy, anthocyanins thấy hai dải hấp thụ maximain 265-275 nm vùng 465-560 nm flavanol cho hai dải hấp thụ 210 nm 278 nm Các tính chất sử dụng, việc phát định lượng hợp chất tiến hành 520 nm 546 nm cho anthocyanins 280 nm cho flavanol Tuy nhiên, phát tia cực tím khơng đặc trưng cho proanthocyanidin có diện polyphenol khác Phương pháp thay bao gồm phát huỳnh quang đề xuất Bằng cách kết hợp thiết bị dò phổ hấp thu phổ huỳnh quang, Porgaly Büyüktuncel đồng thời xác định 14 hợp chất phenolic rượu vang đỏ phân biệt đỉnh tín hiệu bị chồng chéo thường xuyên gặp phân tích rượu Guerrero sử dụng kết hợp phát UV (ở 320 nm) tín hiệu huỳnh quang (bước sóng kích thích = 290 nm, bước sóng phát xạ = 320 nm) đặc trưng cho axit hydroxycinnamic flavan-3-ols, tương ứng Silva cộng trình bày phương pháp nhanh chóng đơn giản cho việc định lượng flavan-3-ols rượu vang Bởi phổ huỳnh quang, họ xác định số lượng đơn phân tử flavanol, nhị phân chất tam phân (bước sóng kích thích = 280 nm, bước sóng phát xạ = 320 nm) (-)-epicatechin gallate procyanidin B2-gallate, hai hợp chất không định lượng cách phát sử dụng bước sóng kích thích / phát xạ tương ứng (270 nm / 377 nm) (Hình 6) Lê Hà Việt Luân Trang 20 Tiểu luận Các phương pháp phân tích cơng cụ Hình - Phổ HPLC-Fluo chromatograms rượu vang Merlotand a Sauvignon Thông tin cấu trúc để xác định hợp chất phenolic thu nhờ sử dụng khối phổ (MS) Sự phát triển thông tin sẵn có sắc ký lỏng ghép khối phổ (LC-MS) phổ khối lượng nhiều (MS / MS MSN) cung cấp cơng cụ hữu ích để nghiên cứu cấu trúc polyphenol chế mà chúng có liên quan đến q trình lão hóa rượu ESI (electrospray ion hóa) phương pháp đặc biệt hiệu kỹ thuật sử dụng để phân tích flavan-3-ols anthocyanin phương thức ion dương âm Chế độ ion hóa trở thành lựa chọn tốt để FAB (nhanh bắn phá nguyên tử) sử dụng vào đầu năm 1990, địi hỏi thiết phải có bước làm tinh khiết hòa tan mẫu phân cực Như vậy, năm 1997, Cheynier đồng nghiệp nghiên cứu tannin (oligome polyme flavan-3-ols) chiết xuất hạt nho sử dụng hệ thống LC-MS trang bị với nguồn ESI hoạt động chế độ ion âm máy phân tích khối tứ cực Họ xác định loạt đỉnh tín hiệu procyanidin khơng có nhóm từ trimers đến hexadecamers dẫn xuất acyl hóa chúng có chứa một, hai ba dư lượng acid galic Gần đây, NP-HPLC-ESI-MS cho phép Nunez đồng nghiệp xác định hợp chất khơng galloylate hóa monogalloylate hóa flavan-3-ols lên đến octamers, di-và Lê Hà Việt Luân Trang 21 Tiểu luận Các phương pháp phân tích cơng cụ trigalloylated flavan-3-ols đến heptamers chiết xuất từ hạt nho Graciano, Tempranillo Cabernet Sauvignon Họ quan sát thấy nồng độ monogalloylated flavan-3-ols thấp gấp 10 lần non-galloylated flavan-3-ols: tượng giảm nồng độ quan sát tất mẫu kết giảm hiệu q trình ion hóa dạng galloylate hóa so với dạng khơng galloylate hóa Tuy nhiên, thiếu mẫu galloylate hóa tiêu chuẩn, giả thuyết khơng thể kiểm tra Dựa so sánh tương đối nồng độ, người ta nhận thấy phân bố flavan-3-ols hạt giống bị chi phối yếu tố di truyền, bị ảnh hưởng điều kiện khí hậu Các cơng trình khác gần kết hợp kỹ thuật ESI-MS ESI-song song (MS / MS) ứng dụng cho việc xác định / định lượng procyanidin galloylate hóa hạt nho Thật vậy, khối phổ song song cho phép có thông tin cấu trúc cụ thể hợp chất đặc biệt hai giai đoạn phân tích khối lượng Các ion kích thích, tạo thành từ bước ion hóa lập giá trị m / z đặc trưng chúng sau lại bị phân mảnh xách định bước phân tích thứ hai Tandem MS thực hai quang phổ kế khối lượng lắp ráp song song (ví dụ: hai quadrupoles) thiết bị phân tích khối lượng có khả lưu trữ ion (ví dụ: ion bẫy tứ cực) Trong cơng trình Guerrero đồng nghiệp, MS-MS phân mảnh có hiệu để phân biệt số hợp chất quercetin-3-glucuronide isorhamnetin-3 glucoside mà có khối lượng ion mẹ (m / z = 477) phân biệt ion phổ khối lượng sau (301 cho quercetin-3-glucuronide 315 cho isorhamnetin-3glucoside) Gần (năm 2012), Delcambre Saucier chứng minh hiệu suất UHPLC kết hợp với ESI Q-TOF (thời gian bay gấp lần) chế độ MS / MS để xác định cấu trúc Phổ khối lượng thời gian bay dựa nguyên tắc tách khối lượng đơn giản Xem xét loại ion hóa vị trí tương tự thời gian tăng tốc trường tĩnh điện đồng không đổi, vận tốc chúng cách rõ ràng liên quan đến tỷ lệ khối lượng điện tích thời gian đến trực tiếp Lê Hà Việt Luân Trang 22 Tiểu luận Các phương pháp phân tích cơng cụ máy dị cho thấy khối lượng chúng Các công cụ thiết bị sở hữu số lợi đặc biệt hầu hết loại máy phân tích khối lượng Về mặt lý thuyết, kỹ thuật cho phép xác định phạm vi khối lượng rộng khơng cần chùm tia ion quét, cho phép có quang phổ khối lượng đầy đủ cho q trình ion hóa Độ truyền cao, độ nhạy cao cần thiết sử dụng lượng mẫu nhỏ (