Nghiên cứu quy trình xác định nhanh vi khuẩn lao và lao kháng thuốc bằng kỹ thuật sinh học phân tử

200 1.1K 1
Nghiên cứu quy trình xác định nhanh vi khuẩn lao và lao kháng thuốc bằng kỹ thuật sinh học phân tử

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

Thông tin tài liệu

Đề tài này được đặt ra nhằm vào các mục tiêu sau: 1. Đặc điểm dịch tễhọc phân tửcủa vi khuẩn lao và vi khuẩn lao kháng đa thuốc. 2. Xây dựng qui trình xác định nhanh các chủng vi khuẩn lao và lao kháng thuốc bằng kỹ thuật sinh học phân tử. 3. Xây dựng qui trình chế tạo các bộ kit xác định nhanh các chủng vi khuẩn lao và lao kháng thuốc ởViệt Nam. 3 CHƯƠNG I. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1. VI KHUẨN LAO VÀ BỆNH LAO Bệnh lao là bệnh truyền nhiễm đã xuất hiện h

BỘ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ BỘ QUỐC PHÒNG CHƯƠNG TRÌNH KHCN CẤP NHÀ NƯỚC KC.10 BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ ĐỀ TÀI TÊN ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH XÁC ĐỊNH NHANH VI KHUẨN LAO LAO KHÁNG THUỐC BẰNG KỸ THUẬT SINH HỌC PHÂN TỬ Mã số: KC.10.15/06-10 Cơ quan chủ trì đề tài: Học viện Quân Y Chủ nhiệm đề tài: TS. Nguyễn Thái Sơn 8507 Hà Nội – 2010 BỘ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ BỘ QUỐC PHÒNG CHƯƠNG TRÌNH KHCN CẤP NHÀ NƯỚC KC.10 BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ ĐỀ TÀI TÊN ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH XÁC ĐỊNH NHANH VI KHUẨN LAO LAO KHÁNG THUỐC BẰNG KỸ THUẬT SINH HỌC PHÂN TỬ Mã số: KC.10.15/06-10 Chủ nhiệm đề tài/dự án: Cơ quan chủ trì đề tài/dự án: TS. Nguyễn Thái Sơn PGS.TS. Hoàng Văn Lương Ban chủ nhiệm chương trình Bộ Khoa học Công nghệ Hà Nội – 2010 MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ 1 CHƯƠNG I. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3 1.1. VI KHUẨN LAO BỆNH LAO 3 1.1.1. Vi khuẩn lao 3 1.1.2. Bệnh lao 9 1.2. DỊCH TỄ PHÂN TỬ CỦA VI KHUẨN LAO LAO KHÁNG THUỐC 21 1.3. CÁC PHƯƠNG PHÁP CHẨN ĐOÁN VI KHUẨN LAO 26 1.3.1. Các phương pháp truyền thống 26 1.3.2. Các phương pháp miễn dịch 28 1.3.3. Các phương pháp sinh học phân tử 29 1.4. CÁC PHƯƠNG PHÁP CHẨN ĐOÁN VI KHUẨN LAO KHÁNG THUỐC 35 1.4.1. Phương pháp xác định kiểu hình 35 1.4.2. Phương pháp xác định kiểu gen 38 CHƯƠNG II. VẬT LIỆU PH ƯƠNG PHÁP 47 2.1. VẬT LIỆU 47 2.1.1. Các chủng vi khuẩn lao, mẫu bệnh phẩm vector 47 2.1.2. Các primer probe 48 2.1.3. Các hóa chất, nguyên liệu khác 49 2.1.4. Các môi trường, hoá chất sử dụng trong nuôi cấy xác định vi khuẩn lao 50 2.2. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 51 2.2.1. Nghiên cứu đặc điểm dịch tễ học phân tử vi khuẩn lao vi khuẩn lao kháng thuốc 51 2.2.1.1. Thu thập, bảo quản các chủng vi khuẩn lao mẫu bệnh phẩm 51 2.2.1.2. Phương pháp thuần nhất mẫu bệnh phẩm đờm 53 2.2.1.3. Nuôi cấy vi khuẩ n lao 53 2.2.1.4. Phương pháp kháng sinh đồ xác định tính kháng thuốc 55 2.2.1.5. Tách chiết ADN vi khuẩn lao 56 2.2.1.6. Khuếch đại các đoạn gen đích bằng PCR 57 2.2.1.7. Phương pháp spoligotyping 59 2.2.1.8. Tách dòng gen rpoB katG phục vụ cho giải trình tự 60 2.2.1.9. Phát hiện đột biến liên quan kháng đa thuốc bằng các phương pháp sinh học phân tử 61 2.2.2. Xây dựng quy trình chẩn đoán phát hiện nhanh vi khuẩn lao vi khuẩn lao kháng thuốc bằng kỹ thuật sinh học phân tử 62 2.2.2.1. Tạo panel mẫu chuẩn 63 2.2.2.2. Thiết kế các primer nhân các đoạn gen đích 63 2.2.2.3. Thiết kế probe phát hiện tính kháng thuốc 66 2.2.3. Tạo các bộ kit xác định nhanh các chủng vi khuẩn lao lao kháng thuốc ở Việt Nam 66 2.2.3.1. Tạo bộ kit multiplex PCR chẩn đoán nhanh vi khu ẩn lao 66 2.2.3.2. Tạo bộ kit multiplex realtime PCR phát hiện nhanh vi khuẩn lao kháng đa thuốc 69 CHƯƠNG III. KẾT QUẢ BÀN LUẬN 71 3.1. ĐẶC ĐIỂM DỊCH TỄ PHÂN TỬ VI KHUẨN LAO LAO KHÁNG THUỐC 71 3.1.1. Thu thập các chủng vi khuẩn lao trên toàn quốc 71 3.1.2. Đặc điểm phân tử vi khuẩn lao ở Việt Nam 72 3.1.3. Đặc điểm phân typ vi khuẩn lao ở Việt Nam 76 3.1.3.1. Mô hình phân tử chủng lao khu vực miền Bắc (spoligotype) 77 3.1.3.2. Mô hình phân tử chủng lao khu vực miề n Trung 79 3.1.3.3. Mô hình phân tử chủng lao khu vực miền Nam 81 3.1.4. Đặc điểm phân tử của vi khuẩn lao kháng thuốc ở Việt Nam 83 3.1.4.1. Đặc điểm phân tử của vi khuẩn lao nhạy cảm thuốc 83 3.1.4.2. Đặc điểm phân tử của vi khuẩn lao kháng đơn thuốc 86 3.1.4.3. Đặc điểm phân tử của vi khuẩn lao kháng đa thuốc 89 3.1.4.4. Đặc điểm phân tử của vi khuẩn lao siêu kháng thuốc 91 3.1.5. Dịch tễ học phân tử của vi khuẩn lao Việt Nam 92 3.1.5.1. Phân bố dòng theo khu vực nghiên cứu của vi khuẩn lao Việt Nam 92 3.1.5.2. Phân bố dòng theo đặc điểm kháng thuốc của vi khuẩn lao Việt Nam 95 3.1.5.3. Phân bố dòng theo đặc điểm kháng thuốc theo khu vực của vi khuẩn lao Việt Nam 97 3.1.5.4. Phân bố chủng lao Việt Nam theo tuổi giới tính bệnh nhân theo khu vực 100 3.1.5.5. Phân bố chủng lao Việt Nam theo tuổi bệnh nhân mức độ kháng thuốc 103 3.1.5.6. Mối liên quan giữa phân bố dòng vi khuẩn lao Việt Nam tuổi bệnh nhân 105 3.1.5.7. Mức độ kháng thuốc của vi khuẩn lao Việt Nam theo dòng 108 3.1.5.8. Mức độ kháng thuốc của vi khuẩn lao Việt Nam theo dòng theo khu vực 110 3.1.6. Đặc điểm đột biến ở các gen liên quan kháng thuốc của vi khuẩn lao ở Việt Nam 111 3.1.6.1. Phát hiện đột biến trên gen katG 112 3.1.6.2. Phát hiện đột biến trên gen rpoB 117 3.2. XÂY DỰNG QUY TRÌNH CHẨN ĐOÁN NHANH VI KHUẨN LAO LAO KHÁNG THUỐ C BẰNG KỸ THUẬT SINH HỌC PHÂN TỬ 124 3.2.1. Xây dựng quy trình chẩn đoán nhanh vi khuẩn lao 124 3.2.1.1. Xây dựng quy trình tách chiết ADN của vi khuẩn lao 124 3.2.1.2. Tạo panel mẫu chuẩn 127 3.2.1.3. Quy trình multiplexPCR chẩn đoán nhanh vi khuẩn lao 129 3.2.2. Xây dựng quy trình chẩn đoán nhanh vi khuẩn lao kháng thuốc 141 3.2.2.1. Quy trình chẩn đoán vi khuẩn lao kháng thuốc bằng giải trình tự ADN 141 3.2.2.2. Quy trình chẩn đoán nhanh vi khuẩn lao kháng thuốc bằng realtime PCR 150 3.3. XÂY DỰNG QUY TRÌNH CHẾ TẠO CÁC BỘ KIT XÁC ĐỊNH NHANH CÁC CHỦNG VI KHUẨN LAO LAO KHÁNG THUỐCVI ỆT NAM 163 3.3.1. Xây dựng quy trình chế tạo bộ kit xác định nhanh vi khuẩn lao 163 3.3.1.1. Tạo master mix 163 3.3.1.2. Nghiên cứu thử nghiệm độ nhạy, độ đặc hiệu ngưỡng phát hiện của phản ứng multiplex PCR trên panel mẫu 163 3.3.1.3. Đánh giá hiệu quả chẩn đoán của kit mPCR trên mẫu bệnh phẩm lâm sàng 166 3.3.2. Kết quả chế tạo thử nghiệm kit multiplex PCR 171 3.3.3. Kiểm tra tính ổn định của kit multiplex PCR 172 3.3.4. Chứng nhận bảo hộ quyề n sở hữu trí tuệ 175 3.3.5. Xây dựng quy trình sản xuất kit chẩn đoán phát hiện nhanh vi khuẩn lao kháng đa thuốc 176 3.3.5.1. Chế tạo thử nghiệm kit realtime PCR 176 3.3.5.2. Nghiên cứu thử nghiệm, đánh giá kit realtime PCR trên panel mẫu chuẩn 178 CHƯƠNG IV. KẾT LUẬN 183 4.1. Dịch tễ học phân tử vi khuẩn lao lao kháng thuốc 183 4.2. Xây dựng được một số quy trình chẩn đoán nhanh vi khuẩn lao vi khuẩn lao kháng thuốc 183 4.3. Chế tạo được một số bộ kit chẩn đoán nhanh vi khuẩn lao vi khuẩn lao kháng thuốc 184 CÁC KẾT QUẢ KHÁC 184 KIẾN NGHỊ 184 TÀI LIỆU THAM KHẢO 185 1 MỞ ĐẦU Lao là một bệnh truyền nhiễm đã từng được Tổ chức y tế thế giới (WHO) khuyến cáo về tình trạng khẩn cấp toàn cầu. Vi khuẩn lao (Mycobacterium tuberculosis) hiện đang gây nhiễm cho khoảng 1/3 dân số thế giới (hơn 2 tỷ người) ước tính mỗi năm có khoảng 8 triệu trường hợp nhiễm mới 2 triệu người chết [70]. Việt Nam đứng thứ 12 trong số 22 quốc gia có gánh nặng bệnh nhân lao cao trên thế giới. Một trong những nhân tố góp phần gia tăng bệnh lao là những khó khăn trong quá trình chẩn đoán. Phát hiện nhanh vi khuẩn lao dựa vào phương pháp nhuộm Ziehl-Neelsen các mẫu bệnh phẩm nghi lao, nhiều trường hợp cho âm tính giả khi số lượng vi khuẩn lao ≤ 10 4 vi khuẩn/ml. Nuôi cấy vi khuẩn lao được coi là tiêu chuẩn vàng để chẩn đoán nhưng trên môi trường Lowenstein phải mất khoảng 4-8 tuần mới cho kết quả. Trên hệ thống nuôi cấy cải tiến MGIT, BACTEC mất khoảng 2 tuần, nếu làm kháng sinh đồ mất thêm ít nhất 2 tuần nữa, do vậy khó đáp ứng yêu cầu giám sát thanh toán bệnh lao [62]. Hiện nay, nhờ áp dụng các phương pháp sinh học phân tử vào chẩn đoán vi khuẩn lao vi khuẩn lao kháng thuốc, kh ắc phục được đặc điểm mọc rất chậm của vi khuẩn lao, rút ngắn thời gian chẩn đoán lao từ 4-8 tuần theo cách nuôi cấy tự nhiên xuống còn 2-4 ngày. Kỹ thuật sinh học phân tử được sử dụng rộng rãi nhất là phản ứng PCR khuếch đại gen đích IS6110, đây là một trình tự chèn (IS - Insertion Sequence) có nhiều bản copy (khoảng 4-20 bản copy) đặc hiệu cho chủng Mycobacterium tuberculosis complex. Việt Nam hiện có một vài công ty xây dự ng kít thương phẩm chẩn đoán vi khuẩn lao sử dụng gen đích là IS 6110 như công ty Nam Khoa, Việt Á. Tuy nhiên, một số nghiên cứu gần đây cho thấy có khoảng 5-8% chủng lao tại Đông Nam châu Á, Việt Nam Ấn Độ khuyết đoạn gen này trong bộ gen [24] [27] [63] [37] [68], vậy một số xét nghiệm cho kết quả âm tính giả. Nhằm khắc phục tình trạng trên, một số tác giả trên thế giới đề xuất sử dụng mộ t số gen đích khác trong PCR chẩn đoán vi khuẩn lao như IS1081; 23S rDNA [24] [68] [62]. Nhưng cho đến nay chưa có tác giả nào trong nước đề xuất hoặc công bố quy trình PCR mới cho chẩn đoán vi khuẩn lao ở Việt Nam. Đặc biệt, tình hình kháng thuốc của vi khuẩn lao tại Việt Nam đang là một vấn đề đáng lo ngại. Theo Chương trình Chống lao Quốc gia năm 2006, 2 tỷ lệ kháng thuốc tiên phát là 32,5% vào loại cao trên thế giới. Tỷ lệ kháng đa thuốc chung là 4%, trong đó tỷ lệ đa kháng thuốc thứ phát là 19,3%, tỷ lệ đa kháng thuốc tiên phát là 2,7%. Ước tính đến 2015, số ca tử vong do lao khoảng 14.000 người. Trong đó kháng với rifampicin isoniazid được quan tâm nhất, đây là những kháng sinh chủ lực trong phác đồ điều trị lao. Việc chẩn đoán điều trị lao kháng thuốc gặp rất nhi ều khó khăn, tốn kém cả về vật chất, công sức thời gian. Trên thế giới, một số kít thương phẩm chẩn đoán nhanh vi khuẩn lao kháng thuốc như INNO-LIPA RMP TB kit (Bỉ); Geno type MTB assay kit (Đức)… Tuy nhiên hiện nay chưa có dữ liệu đầy đủ về đặc điểm phân tử của vi khuẩn lao kháng đa thuốc ở Việt Nam nên không có cơ sở để sử dụng kit này, hơn nữa giá thành các bộ kít thương mạ i này không phù hợp với điều kiện kinh tế Việt Nam. Hiện trong nước chưa có kit thương phẩm chẩn đoán vi khuẩn lao kháng thuốc, do vậy việc nghiên cứu phát triển kit chẩn đoán lao lao kháng thuốc ở Việt Nam là cần thiết. vậy, đề tài này được đặt ra nhằm vào các mục tiêu sau: 1. Đặc điểm dịch tễ học phân tử của vi khuẩn lao vi khuẩn lao kháng đa thuốc. 2. Xây dự ng qui trình xác định nhanh các chủng vi khuẩn lao lao kháng thuốc bằng kỹ thuật sinh học phân tử. 3. Xây dựng qui trình chế tạo các bộ kit xác định nhanh các chủng vi khuẩn lao lao kháng thuốc ở Việt Nam. 3 CHƯƠNG I. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1. VI KHUẨN LAO BỆNH LAO Bệnh lao là bệnh truyền nhiễm đã xuất hiện hàng nghìn năm nay, nhưng phải đến ngày 24/3/1882 nhà bác học người Đức- Robert Koch lần đầu tiên phát hiện ra vi khuẩn lao (Mycobacterium tuberculosis) (vì vậy còn được gọi là Bacilie de Kock- BK). Đây là một mốc quan trọng trong lịch sử y học bởi đã tìm ra nguyên nhân của căn bệnh vô cùng nguy hiểm cho cả thế giới vào thời điể m đó. Sau này, ngày 24/3 hàng năm được lấy làm ngày phòng chống lao trên toàn thế giới. 1.1.1. Vi khuẩn lao 1.1.1.1. Giới thiệu vi khuẩn lao Vi khuẩn lao có tên khoa học là Mycobacterium tuberculosis. Thực chất tác nhân gây bệnh lao là một phức hợp gồm nhiều loài được gọi chung là Mycobacterium tuberculosis complex. Các loài trong phức hợp này là tác nhân gây nên bệnh lao trên các vật chủ khác nhau. Khả năng gây bệnh của các loài là khác nhau, trong đó loài gây bệnh thường xuyên trên người là Mycobacterium tuberculosis. Vi khuẩn lao trên kính hiển vi quang học Vi khuẩn lao trên kính hiển vi điện tử Hình 1.1. Hình ảnh vi khuẩn lao * Đặc điểm hình thể, cấu trúc Vi khuẩn lao có hình trực mảnh, kích thước dài 2-4 µm, rộng 0,3-1,5 µm, đứng riêng lẻ hoặc xếp thành hình chữ N, Y, V hoặc thành dãy phân nhánh 4 như cành cây. Tuy nhiên cũng tùy thuộc vào điều kiện nuôi cấy thời gian nuôi cấy mà vi khuẩn có kích thước hình dạng thay đổi, từ cầu trực khuẩn đến trực khuẩn dài [67]. Vi khuẩn không di động, không sinh bào tử, khó bắt màu các thuốc nhuộm thông thường do có lớp sáp ở thành tế bào. Mycobacterium tuberculosis được xếp vào nhóm vi khuẩn Gram dương, tuy nhiên khi nhuộm Gram vi khuẩn bắt màu rất yếu hoặc không giữ được màu thuốc nhuộm. Thường nhuộ m theo phương pháp Ziehl - Neelsen, trực khuẩn lao không bị cồn acid làm mất màu của carbonfuchsin, bắt màu đỏ. Trực khuẩn lao có cấu trúc rất phức tạp, hoàn hảo, ít vi sinh vật nào có được. Dưới kính hiển vi điện tử trực khuẩn lao có cấu trúc như sau: - Cấu trúc vách tế bào Lớp vách của trực khuẩn có vai trò rất quan trọng. Cấu trúc của lớp này ngoài đảm bảo cho sự tồn tại của trực khuẩn, làm cho trực khuẩ n bền vững đối với hiện tượng thực bào, khi xâm nhập vào cơ thể trực khuẩn lao khó bị tiêu diệt, ảnh hưởng rất lớn đến khả năng gây bệnh của trực khuẩn [38]. Mycobacterium tuberculosis có cấu trúc vách tế bào phức tạp, chia thành 4 lớp, lớp trong cùng là cấu trúc màng có thành phần chủ yếu là các phospholipid. Các phân tử phospholipid lại bao gồm hai nhóm, nhóm ưa nước hướng về bên trong nhóm kị nước hướng về bên ngoài, quay ra phía vỏ . Lớp tiếp theo là peptidoglican liên kết với đường arabinose các phân tử mycolic acid tạo nên một bộ khung định hình cho vi khuẩn đảm bảo cho vỏ vi khuẩn có độ cứng nhất định. Lớp ngoài là lớp được tạo nên bởi sự liên kết giữa các mycolic acid các chất lipid phức tạp, đây là lớp tạo nên độc tính của vi khuẩn lao có cấu trúc làm tăng khả năng chống thấm nước của thành vi khuẩn giúp trực khuẩn t ồn tại lâu với môi trường bên ngoài, chống khả năng bị huỷ diệt bởi đại thực bào các tế bào miễn dịch. Lớp ngoài cùng có cấu trúc peptidoglycolipid, đây là lớp chỉ thấy ở vi khuẩn lao phát triển bên trong tế bào, nó có tác dụng tăng cường như một lớp áo giáp cho các vi khuẩn nằm [...]... kỷ mới 1.1.2.3 Bệnh lao kháng thuốc cơ chế kháng thuốc của vi khuẩn lao * Bệnh lao kháng thuốc Vi khuẩn lao kháng thuốc đang là một trở ngại lớn đối với công tác phòng chống lao toàn cầu Theo thông báo của WHO năm 2007 [71, 73], tỷ lệ lao kháng đa thuốc là 4,8% Tỷ lệ lao kháng thuốc tiên phát với ít nhất 1 loại thuốc là 17% (từ 0% đến 56,3%), kháng isoniazid là 10,3%, kháng đa thuốc thay đổi từ 0%... tễ học phân tử bệnh lao (Molecular Epidemiology of Tuberculosis) Đây có thể được hiểu là vi c sử dụng các công cụ, kỹ thuật sinh học phân tử trong nghiên cứu dịch tễ học bệnh nhiễm khuẩn [74] Dịch tễ học phân tử cho phép lần theo dấu vết phân tử để tháo gỡ những vấn đề quan trọng như nguồn lây, tình trạng lan truyền, phân bố các type phân tử của vi khuẩn lao [11, 25] Bằng cách này, các nhà dịch tễ học. .. nhiễm chéo phòng thí nghiệm nhờ vào vi c nghiên cứu phân tích đặc điểm phân tử của chủng lao phân lập, từ đó hỗ trợ đánh giá hiệu quả của chương trình chống lao, giúp thiết lập các biện pháp phòng chống cần thiết hiệu quả [25, 28, 42, 65] Hiện nay, có nhiều phương pháp sinh học phân tử được sử dụng trong nghiên cứu dịch tễ phân tử vi khuẩn lao lao kháng thuốc, trong đó các phương pháp như... vi khuẩn lao không có sự chuyển gen kháng thuốc giữa các vi khuẩn thông qua các gen nhảy hoặc plasmid, Các chủng vi khuẩn lao kiểu dại không tiếp xúc với các thuốc chống lao sẽ không bao giờ xuất hiện tính kháng thuốc ngoại trừ tính kháng thuốc tự nhiên của các loài vi khuẩn với một số thuốc như M bovis kháng pyrazinamide, M tuberculosis kháng penicillin, Trong quá trình nhân lên của trực khuẩn lao, ... lao thông thường, trong khi tỷ lệ thành công với bệnh nhân mắc lao kháng thuốc là 20 - 30 %, thậm chí còn không điều trị được khi mắc lao kháng đa thuốc kháng thuốc phổ rộng mặc dù đã dùng kết hợp đến năm loại kháng sinh điều trị lao vậy, vi c phát hiện ngăn chặn sự lan truyền các chủng lao đa kháng thuốc là vấn đề quan trọng nhất trong điều trị lao hiện nay Tính kháng thuốc của vi khuẩn lao. .. reductase Flavinmonooxygenase Transcriptional repressor inhA21, 94, 44 1.2 DỊCH TỄ PHÂN TỬ CỦA VI KHUẨN LAO LAO KHÁNG THUỐC Trước sự nguy hiểm lây lan nhanh chóng của bệnh lao, các nhà khoa học trên thế giới đã đề ra những chiến lược mới nhằm khống chế bệnh lao một cách hiệu quả hơn Một trong những thành công đạt được là vi c áp dụng sinh học phân tử trong nghiên cứu dịch tễ học bệnh lao hay còn... trong phân tích tích đa dạng di truyền của M tuberculosis ở các cấp độ khác nhau trong nghiên cứu phân nhánh tiến hóa [56] Tác giả Sonal S Munsiff cộng sự (2002) đã nghiên cứu tình hình dịch tễ học phân tử của lao kháng đa thuốc ở thành phố New York từ năm 1995 đến năm 1997, tác giả cũng sử dụng kỹ thuật DNA genotyping dựa trên IS6110 kỹ thuật xác định kiểu gen thứ yếu bằng spoligotyping đọc trình. .. bị giới hạn của vi khuẩn lao mà còn ở mức độ ổn định trong mô hình phân định Trong khi đó ở Vi t Nam chưa có một nghiên cứu nào về tình hình dịch tễ học phân tử vi khuẩn lao lao kháng thuốc 1.2.3 Phương pháp Spoligotyping Spoligotyping là phương pháp định týp dựa trên sự đa dạng ADN của những vùng lặp lại trực tiếp (direct repeat - DR) chỉ tìm thấy trên nhiễm sắc thể của vi khuẩn lao, lần đầu tiên... hiện lao kháng đa thuốc mở rộng Theo ước tính của WHO, tỷ lệ lao kháng đa thuốc mở rộng tăng từ 1 triệu ca đến 1,5 triệu ca trong khoảng thời gian từ 2-3 năm Vi khuẩn lao kháng đa thuốc đang là một thách thức lớn cho toàn cầu Trong khi thuốc chống lao hàng đầu chỉ có 5 thuốc, thì thuốc chống lao loại hai thường có độc tính cao giá thành rất đắt Những người mắc bệnh lao với chủng vi khuẩn kháng đa thuốc. .. kháng sinh, các chủng vi khuẩn lao mẫn cảm thuốc phát triển lấn át các chủng kháng thuốc Sự có mặt của thuốc kháng sinh trong điều trị đã cung cấp một áp lực chọn lọc cho các chủng vi khuẩn lao Các chủng mẫn cảm bị ức chế sinh trưởng, thậm chí bị tiêu diệt, các chủng kháng thuốc trở thành ưu thế hình thành tính kháng thuốc thu được, đặc biệt là trong các bệnh nhân có chứa một lượng lớn trực khuẩn lao . điểm dịch tễ học phân tử của vi khuẩn lao và vi khuẩn lao kháng đa thuốc. 2. Xây dự ng qui trình xác định nhanh các chủng vi khuẩn lao và lao kháng thuốc bằng kỹ thuật sinh học phân tử. 3. Xây. XÂY DỰNG QUY TRÌNH CHẨN ĐOÁN NHANH VI KHUẨN LAO VÀ LAO KHÁNG THUỐ C BẰNG KỸ THUẬT SINH HỌC PHÂN TỬ 124 3.2.1. Xây dựng quy trình chẩn đoán nhanh vi khuẩn lao 124 3.2.1.1. Xây dựng quy trình tách. phân tử của vi khuẩn lao kháng đơn thuốc 86 3.1.4.3. Đặc điểm phân tử của vi khuẩn lao kháng đa thuốc 89 3.1.4.4. Đặc điểm phân tử của vi khuẩn lao siêu kháng thuốc 91 3.1.5. Dịch tễ học phân

Ngày đăng: 12/04/2014, 16:31

Từ khóa liên quan

Tài liệu cùng người dùng

  • Đang cập nhật ...

Tài liệu liên quan