bộ giáo dục đào tạo quốc phòng Công trình đợc hoàn thành Học viện Quân y học viƯn qu©n y -Ng−êi h−íng dÉn khoa häc: PGS.TS Phạm Ngọc Bùng Tô Minh Hùng PGS.TS Nguyễn Văn Minh Phản biện 1: PGS.TS Nguyễn Văn Long nghiên cứu bo chế mng đặt nhn khoa indomethacin tác dụng kéo di Phản biện 2: GS.TS Đào Văn Phan Phản biện 3: PGS.TS Trần Thị Nguyệt Thanh Chuyên ngành: Bào chế Mà số: 62.73.01.05 Luận án đợc bảo vệ trớc Hội đồng chấm luận án cấp Nhà nớc họp Học viện Quân y vào hồi 14 00 ngày 05 tháng năm 2008 tóm tắt luận án tiến sĩ dợc học Có thể tìm hiểu luận án tại: Th viƯn Qc gia ViƯt nam Th− viƯn Häc viƯn Qu©n y Hà nội 2008 danh mục công trình CủA TáC GIả đ công bố có liên quan đến luận án Tô Minh Hùng, Nguyễn Văn Minh, Thái Minh Dũng, Phạm Ngọc Bùng (2006), " Nghiên cứu lựa chọn phơng pháp đánh giá in vitro khả giải phóng hoạt chất màng đặt nhÃn khoa indomethacin", Tạp chí Y - Dợc học quân sự, 31 (Số Đặc san), tr 146 - 152 Tô Minh Hùng, Nguyễn Văn Minh, Phạm Ngọc Bùng (2007), "ảnh hởng polymer hydroxypropylmethylcellulose, polyvinyl alcol, polyvinylpyrrolidon tíi sù hÊp thu indomethacin qua giác mạc thỏ", Tạp chí Y- Dợc học quân sự, 32 (6), tr 12-19 Tô Minh Hùng, Nguyễn Văn Minh, Phạm Ngọc Bùng (2008), "Nghiên cứu định lợng indomethacin thủy dịch mắt thỏ phơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao", Tạp chí Kiểm nghiệm thuốc, 6, (1), tr 16-19 1 số chữ viết tắt FDA : Đặt vấn đề Food and Drug Administration Thuốc nhỏ mắt dạng bào chế thuốc nhÃn khoa dùng (Tổ chức quản lý thuốc thực phẩm) chỗ đợc sử dụng phổ biến giới vµ n−íc, chiÕm tû lƯ High Performance Liquid Chromatography 70% so với dạng bào chế thuốc nhÃn khoa khác u điểm (Sắc ký lỏng hiệu cao) thuốc nhỏ mắt kỹ thuật bào chế đơn giản, giá thành thấp, tác dụng HPMC : Hydroxypropylmethylcellulose nhanh bệnh nhân dễ dàng tự điều trị theo định thầy PEG : Polyethylen glycol thuốc Tuy nhiên, nhợc điểm thuốc nhỏ mắt sinh khả PVA : Polyvinyl alcol dụng thấp, tác ®éng cđa nhiỊu u tè nh− hƯ thèng n−íc m¾t, co PVP : Polyvinylpyrrolidon cơ, chớp mắt, ngăn cản hấp thu giác mạc, kết mạc SKD : Sinh khả dụng HPLC : Với mục tiêu kéo dài thời gian lu thuốc mắt để nâng cao sinh khả dụng cho thuốc nhÃn khoa dùng chỗ, khắc phục nhợc điểm thuốc nhỏ mắt, ngời ta đà nghiên cứu nhiều dạng bào chế nh thuốc mỡ, gel, dung dịch tạo gel, kính tiếp xúc mềm mang thuốc, hệ tiểu phân hệ điều trị đặt mắt Nhiều công trình đà chứng minh dạng bào chế kéo dài thời gian lu thuốc mắt, làm tăng sinh khả dụng, tăng hiệu điều trị giảm tác dụng phụ toàn thân so với dung dịch thuốc nhÃn khoa thông thờng Trong số đó, hệ điều trị đặt mắt có nhiều u điểm nh thời gian giải phóng dợc chất kéo dài tốc độ giải phóng ổn định Đây hệ điều trị rắn thờng đợc dùng cách đặt vào túi kết mạc Dợc chất đợc giải phóng từ từ, kéo dài đợc hấp thu nhiều qua giác mạc Indomethacin dợc chất thuộc nhóm thuốc giảm đau chống viêm không steroid, đà đợc sử dụng từ lâu để điều trị bệnh viêm khớp, đau lng, đau dây thần kinh Trong nhÃn khoa, indomethacin đợc dùng phổ biến dới dạng dung dịch, hỗn dịch nhỏ mắt để chống viêm, giảm đau ức chế co đồng tử, phẫu thuật mắt Tuy nhiên, dung dịch hỗn dịch nhỏ mắt indomethacin có nhợc điểm chung thuốc nhỏ mắt sinh khả Những đóng góp luận án dụng thấp bệnh nhân phải nhỏ thuốc nhiều lần ngày Do đó, nhiều tác giả đà tập trung nghiên cứu nhằm khắc phục nhợc - Đà xây dựng đợc công thức tối u bào chế màng nhÃn khoa điểm thuốc nhỏ mắt indomethacin Một số dạng bào chế indomethacin giải phóng dợc chất kéo dài 7- mắt thỏ qui indomethacin nh dung dịch tạo gel, hệ tiểu phân, hệ điều trị cấy mô phòng thí nghiệm vào mắt đà đợc quan tâm nghiên cứu Màng nhÃn khoa - Đà xây dựng đợc tiêu chuẩn sở phong pháp đánh giá cho indomethacin dạng hoà tan đà đợc Karatas A Baykara T chế phẩm nghiên cứu Tuy nhiên, tác giả nghiên cứu chế giải - Đà đánh giá độ ổn định màng 15 tháng phóng dợc chất in vitro, cha nghiên cứu sâu thiết kế công thức - Đà đánh giá sinh khả dụng tác dụng chống viêm chế phẩm thử nghiệm in vivo mắt thỏ so sánh với dung dịch qui ớc Để góp phần nâng cao sinh khả dụng cho thuốc nhÃn khoa indomethacin giảm số lần dùng thuốc cho bệnh nhân, tiến hành đề tài: "Nghiên cứu bào chế màng đặt nhÃn khoa indomethacin tác dụng kéo dài " Mục tiêu luận án - Xây dựng công thức bào chế màng nhÃn khoa indomethacin tác dụng kéo dài - Đánh giá sinh khả dụng màng nhÃn khoa indomethacin mắt thỏ - Đánh giá khả dung nạp tác dụng chống viêm màng nhÃn khoa indomethacin mắt thỏ 5 Chơng Cấu trúc luận án Gồm 125 trang, 35 bảng, 13 hình, sơ đồ, 150 tài liệu tham khảo tiếng Việt tiếng Anh Bố cục nh sau: Đặt vấn đề TổNG QUAN Phần tổng quan chia làm phần chính: Sơ lợc hệ điều trị đặt mắt sơ lợc indomethacin dùng nhÃn khoa trang; Phần nội dung gồm: tổng quan 35 trang, đối tợng phơng Phần sơ lợc hệ điều trị đặt mắt bao gồm định nghĩa, pháp nghiên cứu 16 trang, kết nghiên cứu 43 trang, bàn luận 27 phân loại, u nhợc điểm, thành phần phơng pháp bào chÕ hƯ trang, kÕt ln trang, ®Ị xt trang, danh mục công trình điều trị đặt mắt Ngoài ra, phần đợc tổng hợp thêm tác giả đà công bố có liên quan đến luận án trang, tài liệu tham số vấn đề liên quan đến sinh khả dụng hệ điều trị đặt mắt nh khảo 17 trang; luận án có phụ lục kèm theo với bảng yếu tố ảnh hởng tới sinh khả dụng, phơng pháp đánh giá hình sinh khả dụng in vitro in vivo, thẩm định phơng pháp phân tích nghiên cứu sinh khả dụng thuốc nhÃn khoa Phần sơ lợc indomethacin dùng nh·n khoa bao gåm c«ng thøc hãa häc cđa indomethacin, tính chất lý hóa, dợc động học, tác dụng, định, chống định indomethacin nhÃn khoa Ngoài ra, phần trình bày tóm lợc số phơng pháp định lợng indomethacin số công trình nghiên cứu dạng bào chế indomethacin dùng nhÃn khoa Chơng Đối tợng, thiết bị v phơng pháp nghiên cứu 2.1 Đối tợng thiết bị nghiên cứu Nguyên liệu gồm hóa chất, dung môi đạt tiêu chuẩn dợc điển đạt tinh khiết dùng phân tích Thỏ thí nghiệm khỏe mạnh, cân nặng từ 2,5 - 3,5 kg, đợc cung cấp từ ban cung cấp động vật thí nghiệm - Học viện quân y 7 Thiết bị phân tích gồm máy HPLC, máy khuấy từ, đợc trang bị phóng thấm dợc chất in vitro Tìm công thức tối u theo tiêu Trung tâm đào tạo- nghiên cứu dợc - Học viện quân y chuẩn sau: 2.2 Phơng pháp nghiên cứu - Tốc độ thấm dợc chất cao Phơng pháp nghiên cứu bao gồm nhóm - Tốc độ giải phóng dợc chất kéo dài - 2.2.1 Phơng pháp định lợng indomethacin dung dịch đệm - Tốc độ giải phóng dợc chất gần với động học bậc không thủy dịch mắt thỏ 2.2.2.2 Phơng pháp đánh giá in vitro tốc độ giải phóng thấm Pha dung dịch indomethacin có nồng độ thích hợp dung dịch đệm thủy dịch mắt thỏ Tiến hành khảo sát tìm indomethacin qua giác mạc * Phơng pháp đánh giá in vitro tốc độ giải phóng indomethacin điều kiện sắc ký để định lợng indomethacin Thẩm định phơng Dùng phơng pháp hòa tan cốc, không khuấy trộn pháp phân tích ®é chän läc, ®é tun tÝnh, ®é ®óng, ®é lỈp lại, giới Màng indomethacin đợc thấm ớt dung dịch đệm ép nhẹ hạn định lợng độ ổn định mẫu theo hớng dẫn FDA vào mét lam kÝnh (kÝch th−íc 10 x 10 x 1mm), thả vào cốc thuỷ tinh số tài liệu hớng dẫn Viện kiểm nghiệm thuốc Trung ơng (đờng kính 2,5 cm, cao 3,5 cm) chøa ml dung dÞch đệm ổn định 2.2.2 Phơng pháp nghiên cứu bào chế màng nhn khoa nhiệt độ 35 10C Sau giờ, dùng panh gắp nhẹ nhàng lam kính indomethacin cho sang cèc míi cịng chøa ml dung dÞch đệm nh Tiếp tục 2.2.2.1 Phơng pháp xây dựng công thức làm nh thời gian Lợng indomethacin giải phóng Công thức màng đợc sàng lọc qua giai đoạn * Giai đoạn 1: Khảo sát lựa chọn tá dợc - Dựa tài liệu đà công bố, nghiên cứu tìm công thức đợc định lợng phơng pháp HPLC * Phơng pháp đánh giá in vitro tốc độ thấm indomethacin Tiến hành dựa mô hình bình Franz - Dùng phần mềm Modde 5.0 thiết kế công thức Pha dung dịch - Chuẩn bị mẫu giác mạc: Thỏ đợc mổ lấy nhÃn cầu (sử dụng nhÃn có thành phần nh công thức đợc thiết kế Đánh giá dung dịch cầu vòng sau giết thỏ) Dùng kéo cong để cắt tách tiêu tốc độ thấm dợc chất qua giác mạc in vitro để lựa riêng phần giác mạc suốt, để lại viền củng mạc xung quanh chọn tá dợc cho tốc độ thấm dợc chất cao giác mạc để dễ kẹp bình Franz Ngâm, rửa giác mạc nhẹ nhàng * Giai đoạn 2: Xây dựng công thức tối u dung dịch đệm phosphat cho thuỷ dịch Sau đà lựa chọn đợc tá dợc phù hợp, qui hoạch thực - Dụng cụ thử: Bình Franz nghiệm cách dùng phần mềm Modde 5.0 thiết kế công thức - Tiến hành: Đặt giác mạc vào vị trí bình Franz, dùng kẹp để theo mức định lợng (mức bản, mức thấp, mức cao) Bào chế kẹp lại Cho vào ngăn dới ml dung dịch đệm phosphat que màng theo công thức khảo sát tiêu tốc độ giải khuấy từ Ngăn cho ml dung dịch đệm phosphat Bình Franz đợc đặt vào cốc thuỷ tinh chứa nớc cất để điều nhiệt toàn 10 thiết bị đợc đặt máy khuấy từ Điều chỉnh nhiệt độ 35 1oC 2.2.2.5 Phơng pháp đánh giá độ ổn định màng nhÃn khoa tốc độ khuấy định indomethacin Khi hệ thống đà ổn định, cho màng indomethacin vào ngăn Màng nhÃn khoa indomethacin đợc đóng gói đơn liều bình Franz Tại thời điểm 1, 2, 3, 4, 5, 6, giê, hót lä thủ tinh mµu nâu, nút kín đợc bảo quản nhiệt độ thực (30 ml dung dịch từ ngăn dới, đồng thêi bỉ sung b»ng ml dung 20C, ®é ẩm 70 5%) 15 tháng Sau định kỳ tháng, kiểm dịch đệm phosphat Dung dịch hút đợc lọc qua màng 0,45m nghiệm màng theo tiêu chuẩn sở để đánh giá độ ổn định định lợng indomethacin phơng pháp HPLC 2.2.3 Phơng pháp đánh giá sinh khả dụng màng Khi đánh giá tốc độ thấm dợc chất từ dung dịch indomethacin dùng ml dung dịch thử cho vào ngăn thay cho indomethacin thỏ so với dung dịch nhỏ mắt indomethacin Sử dụng thời điểm 06 thỏ Mỗi thỏ đợc đặt màng màng nhÃn khoa dung dịch đệm indomethacin vào túi mắt Mắt lại đợc nhỏ dung dịch 2.2.2.3 Phơng pháp xây dựng tiêu chn mµng nh·n khoa indocollyre 0,1% víi liỊu nh− sau: Nhỏ lần, lần giọt (50 l), indomethacin khoảng cách lần nhỏ 2,5 Sau 15 phút, giết thỏ Dùng Tiến hành dựa hớng dẫn Dợc điển Việt nam III bơm tiêm 1ml hút 100 - 150 l thuỷ dịch cho vào lọ đựng mẫu, nút 2.2.2.4 Phơng pháp đánh giá tơng quan in vitro - in vivo vỊ tèc ®é kÝn Bảo quản mẫu tủ lạnh -200C không tuần Định lợng giải phóng dợc chất từ màng nhÃn khoa indomethacin indomethacin phơng pháp HPLC đà nghiên cứu Tiến hành Màng đợc đánh giá tốc độ giải phóng dợc chất in vitro nh tơng tự nh nhng lấy mẫu thời điểm 30 phút; 1h; 2h; 3h; phần Đồng thời, đánh giá tốc độ giải phãng d−ỵc chÊt in vivo 4h; 5h; 5,5h; 6h; 7h; 8h; 9h 10h Các thông số dợc động học nh mắt thỏ theo mô hình đà đợc nhiều tác giả sử dụng nh sau: Đặt Cmax, Tmax AUC đợc tính toán quan sát trực tiếp số liệu màng vào túi kết mạc mắt thỏ Sau 1h, lÊy mµng hoµ tan thùc nghiƯm nhờ trợ giúp phần mềm Kinetica 4.4 10 ml dung dịch đệm phosphat Lọc qua màng 0,45m định lợng 2.2.4 Phơng pháp đánh giá khả dung nạp tác dụng indomethacin phơng pháp HPLC Tính tỷ lệ % indomethacin chống viêm màng nhn khoa indomethacin đà giải phóng 1h Tiến hành tơng tự nh trên, nhng lấy mẫu 2.2.4.1 Phơng pháp đánh giá khả dung nạp màng thời ®iĨm 2h, 3h, 4h, 5h, 6h, 7h So s¸nh tû lệ phần trăm indomethacin đợc giải phóng in Khả dung nạp màng đợc đánh giá thỏ hai tiêu: thử kích ứng mắt phơng pháp Draize test thử vitro với giải phóng in vivo thời điểm tơng ứng Phân tích khả màng bị đẩy khỏi mắt phơng trình hồi qui tuyến tính y = a.x + b để đánh giá tơng quan 2.2.2.5 Phơng pháp đánh giá tác dụng chống viêm màng (Trong y tỷ lệ % dợc chất đợc giải phóng in vivo, x tỷ lệ% dợc chất đợc giải phóng in vitro) Gây viêm mắt cách tiêm vào dịch kính dung dịch huyết bò Sau ngày gây viêm, quan sát tổn thơng mắt để 11 12 chấm điểm mức độ viêm theo tiêu đà xây dựng Tiến hành 3.1.2 Kết thẩm định phơng pháp phân tích chia thỏ làm nhóm Nhóm điều trị màng nhÃn khoa 3.1.2.1 Phơng pháp phân tích indomethacin dung dịch đệm indomethacin với liều đặt màng/ngày Nhóm điều trị dung * Độ chọn lọc: pic indomethacin đợc tách riêng sắc ký đồ dịch indocollyre 0,1% với liều nhỏ mắt lần x giọt (50 l)/ngày, * Độ tuyến tính: hệ số tơng quan r đạt từ 0,99996 - 0,99999 lần nhỏ cách Mỗi thỏ đợc điều trị mắt, mắt lại * Khoảng đo mẫu: 0,1 - 10 g/ml để kiểm tra Thời gian điều trị ngày * Độ lặp lại: Hệ số biến thiên đạt từ 5,48 - 0,17% Chấm điểm viêm mắt thời điểm sau ngày ngày điều trị * Độ đúng: 6,5 - 0,20% để so sánh mức độ giảm viêm nhóm * Giới hạn định lợng: 0,1g/ml 2.2.5 Phơng pháp xử lý số liệu 3.1.2.2 Phơng pháp phân tích indomethacin thủy dịch - Các đại lợng thống kê nh giá trị trung bình, độ lƯch chn, hƯ sè * §é chän läc: pic indomethacin đợc tách riêng sắc ký đồ tơng quan r đợc xử lý chơng trình MS-EXCEL 2003 * Độ tuyến tính: hệ số tơng quan r đạt từ 0,99930 - 0,99978 - So sánh số trung bình phân tích phơng sai (ANOVA) đơn * Khoảng đo mÉu: 0,1 - 10 μg/ml yÕu tè MS-EXCEL 2003 * Độ lặp lại: Hệ số biến thiên đạt từ 15,32 - 4,07% - Thiết kế tối u công thức bào chế phần mềm Modde 5.0 * Độ đúng: 14,24 - 3,13% - Tính thông số dợc động học phần mềm Kinetica 4.4 * Giới hạn định lợng: 0,1g/ml * Độ ổn định mẫu sau ngày bảo quản -200 C: Hàm lợng Chơng KếT QUả NGHIÊN CứU indomethacin lại 96,67% (nồng ®é 0,1 μg/ml) vµ 97,80% (nång ®é 10 μg/ml) KÕt thẩm định đạt tiêu chuẩn theo hớng dẫn FDA 3.1 Kết nghiên cứu phơng pháp định lợng indomethacin thẩm định phơng pháp phân tích dợc chất dịch sinh học dung dịch đệm thủy dịch mắt thỏ 3.2 Kết nghiên cứu bào chế màng nhÃn khoa indomethacin 3.1.1 Kết điều kiện sắc ký 3.2.1 Công thức Cột C18, kÝch th−íc 150 mm x 4,6 mm x 5μm Tốc độ dòng: 1ml/phút Qua tham khảo tài liệu nghiên cứu thăm dò, tìm đợc công thức bào chế màng indomethacin 0,15 mg nh sau: ThĨ tÝch mÉu tiªm: 20 μl Indomethacin 1% Detector UV, bớc sóng phát 266 nm Chất hoá dẻo 15% Pha động: Acetonitril - Dung dịch đệm phosphat 0,01M Hỗn hợp natri alginat polyme phối hợp 84% (30:70) Tỷ lệ natri alginat polyme phối hợp 10: 90 13 14 Trong đó: 3.2.2.2 Kết đánh giá in vitro tốc độ thấm indomethacin qua giác - Chất hoá dẻo đóng vai trò tạo thể chất mềm dẻo cho màng Chúng mạc chọn chất hoá dẻo đa vào nghiên cứu: PEG 400, glycerin - Tốc độ thấm indomethacin qua giác mạc chậm Tổng lợng propylen glycol indomethacin đa vào ngăn bình Franz 150 μg Sau giê, - Natri alginat lµ polyme có tính trơng nở hoà tan chậm, đợc lợng indomethacin đợc thấm vào ngăn dới 2,9 - 5,02g Sau chọn làm tá dợc để kéo dài thời gian giải phóng dợc chất giờ, lợng indomethacin đợc thấm 23,76 - 53,26 g, cha đạt - Polyme phối hợp: Sử dụng polyme PVA, HPMC PVP phối đợc mức cân nồng độ dợc chất ngăn hợp natri alginat để tạo màng - Lợng indomethacin đợc thấm qua giác mạc tỷ lệ tuyến tính với Để lựa chọn đợc tỷ lệ loại polyme chất hóa dẻo tối thời gian, hệ số tơng quan tơng đối cao (r từ 0,9939 đến 0,9994) u, tiến hành nghiên cứu sàng lọc công thức qua giai - Khi phối hợp polyme HPMC, PVP PVA với natri alginat đoạn: Giai đoạn khảo sát lựa chọn tá dợc giai đoạn xây dựng làm tăng tốc độ thấm indomethacin qua giác mạc so với công công thức tối u thøc chØ cã natri alginat, trõ tr−êng hỵp CT1 (chøa HPMC, natri 3.2.2 Kết khảo sát lựa chọn tá dợc alginat glycerin) có tốc độ thấm thấp 3.2.2.1 ThiÕt kÕ thÝ nghiƯm: nh− b¶ng 3.8 - Tèc độ thấm indomethacin (J) từ công thức có PVA phối hợp Bảng 3.8: Các công thức thực nghiệm Hóa Lợng Loại polyme Lợng dẻo natri Công phối hợp indomethacin (225 alginat thøc (1134 mg) (mg) mg) (mg) CT1 15 126 HPMC Gly CT2 15 126 HPMC PEG CT3 15 126 HPMC Pro CT4 15 126 PVA Gly CT5 15 126 PVA PEG CT6 15 126 PVA Pro CT7 15 126 PVP Gly CT8 15 126 PVP PEG CT9 15 126 PVP Pro CT10 15 126 Natri alginat Gly CT11 15 126 Natri alginat PEG CT12 15 126 Natri alginat Pro với natri alginat đạt giá trị cao so với công thức có phối Dung dịch đệm võa ®đ 100 ml 100 ml 100 ml 100 ml 100 ml 100 ml 100 ml 100 ml 100 ml 100 ml 100 ml 100 ml hỵp cđa HPMC, PVP với natri alginat công thức có natri alginat 3.2.3 Kết xây dựng công thức tối u 3.2.3.1 Kết thiết kế thí nghiệm Qua phần sàng lọc sơ giai đoạn 1, thấy dung dịch có PVA cho tốc độ thấm indomethacin qua giác mạc cao Do PVA đợc chọn phối hợp với natri alginat để nghiên cứu tiếp, loại bỏ HPMC PVP Ba chất hoá dẻo glycerin, PEG propylen glycol có ảnh hởng cha rõ ràng tới tốc độ thấm dợc chất qua giác mạc nên ba chất hoá dẻo đa vào nghiên cứu tiếp Mục đích nghiên cứu đánh giá ảnh hởng tá dợc công thức tới tốc độ giải phóng thấm indomethacin từ màng nhÃn khoa indomethacin Trên sở đó, tìm công thức tối u thoả 15 16 mÃn mục tiêu: Indomethacin đợc giải phóng đặn, kéo dài 7- Bảng 3.19: Bảng thiết kế thí nghiệm tốc độ thấm phải đạt mức cao Do đó, thí nghiệm đợc thiết kế nh sau: * Các biến độc lập: Gồm biến định lợng biến định tính đợc trình bày bảng 3.16 3.17 Bảng 3.16: Các biến định lợng Biến định lợng Tỷ lệ % chất hoá dẻo Tỷ lệ natri alginat/PVA Ký hiƯu X1 X2 Møc thÊp Møc c¬ së Møc cao (-1) (0) (+1) 15 25 5/95 10/90 15/85 (5) (10) (15) Bảng 3.17: Biến định tính Biến định tính Loại chất hoá dẻo Ký hiệu X3 Mà ho¸ Glycerin PEG Propylen glycol (A) (B) (C) * C¸c biến phụ thuộc: Vì thuốc đối chiếu nên sử dụng mô hình động học bậc không ®Ĩ tÝnh C¸c biÕn phơ thc bao gåm: Y1 - Y7 tơng ứng với tỷ lệ % indomethacin đợc giải phãng sau - giê, biÕn Yf2 lµ chØ số f2so với mô hình động học bậc không biến Yt tốc độ thấm indomethacin qua giác mạc in vitro Dïng phÇn mỊm Modde 5.0 thiÕt kÕ thí nghiệm kết hợp với ô vuông latin gồm 27 công thức Làm thêm thí nghiệm tâm Tổng số 29 công thức đợc ghi bảng 3.19 STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 CT CT13 CT14 CT15 CT16 CT17 CT18 CT19 CT20 CT21 CT22 CT23 CT24 CT25 CT26 CT27 CT28 CT29 CT30 CT31 CT32 CT33 CT34 CT35 CT36 CT37 CT38 CT39 CT40 CT41 X1 15 25 15 25 15 25 15 25 15 25 15 25 15 25 15 25 15 25 15 15 X2 5 10 10 10 15 15 15 5 10 10 10 15 15 15 5 10 10 10 15 15 15 10 10 X3 Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly PEG PEG PEG PEG PEG PEG PEG PEG PEG Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Gly Gly Ghi chó: "Gly: glycerin, Pro: Propylen glycol" 3.2.3.2 TiÕn hµnh bào chế màng Bào chế màng theo 29 công thức thiết kế phơng pháp tráng màng 17 3.2.3.3 Kết xác định đồng hàm lợng dợc chất màng 18 3.2.3.6 Kết dự đoán công thức tối u Trớc đánh giá tốc độ giải phóng thấm dợc chất từ Với mục đích tìm công thức màng có khả giải phóng màng nhÃn khoa indomethacin, tiến hành xác định độ đồng indomethacin gần với động học bậc không, kéo dài giải phóng 7- hàm lợng dợc chất màng 29 công thức để đảm bảo dợc chất giải phóng đợc thấm nhiều nhất, kết tính đồng nghiên cứu Kết cho thấy hàm lợng indomethacin toán từ phần mềm Modde 5.0 cho biết thành phần dự đoán công tơng đối đồng màng Độ lệch cao 7,44% thức tối u nh sau: 3.2.3.4 Kết đánh giá màng tốc độ giải phóng indomethcin Indomethacin 1% in vitro Glycerin 15,16% Hỗn hợp natri alginat PVA 83,84% Tỷ lệ natri algianat PVA 15/85 Tốc độ giải phóng indomethacin từ màng nhanh so với tiêu mô hình động học bậc không Trong đà giải phóng đợc từ 30,95 - 53,84%, sau đà giải phóng đợc từ 68,1 89,59% ChØ sè f2 so víi ®éng häc bËc không đa số công 3.2.3.7 Bào chế công thức tối u Tiến hành bào chế màng theo công thức dự đoán tối u thức nhỏ 50 Chỉ số f2 đạt cao đợc 59,71 Bào chế mẻ, mẻ 1600 màng công thức số 16 Đây nhợc điểm màng dạng hoà tan đà đợc 3.2.3.8 Kết khảo sát số tính chất màng nhiều tác giả đa Kết cho thấy màng có dạng hình tròn, mềm dẻo, đờng 3.2.3.5 Kết đánh giá màng tốc độ thấm indomethcin qua kính 5,9 - 6,1 mm, dày 0,4 - 0,5 mm Hàm lợng indomethacin đạt giác mạc in vitro 99,64 2,17% Đồng hàm lợng đạt 92,6 - 107,3% Đồng Mặc dù tốc độ giải phóng nhanh nhng tốc độ thấm khối lợng đạt 0,19 - 14,8% Mất khối lợng làm kh«: 3,52 ± indomethacin diƠn rÊt chËm Trong giê có 1,59 - 1,03% Độ vô khuẩn đạt theo Dợc điển Việt nam III 8,51g indomethacin đợc thấm qua giác mạc, đà có 3.2.3.9 Đánh giá công thức tối u tốc độ giải phóng thấm 20,83 - 35,89 g indomethacin đợc giải phóng Sau giờ, lợng indomethacin qua giác mạc mắt thỏ in vitro indomethacin đợc thấm qua giác mạc đạt từ 37,14 - Để kiểm tra kết tính tóan từ phần mềm Modde 5.0, chúng 59,22g, tơng đơng với 21 - 40% tổng lợng indomethacin đợc bào chế mẻ theo công thức dự đoán Tiến hành đánh giá tốc độ giải phóng ngăn bình Franz, cha đạt đợc nồng độ giải phóng thấm indomethacin qua giác mạc Tính toán so sánh dợc chất cân ngăn giá trị thực tế giá trị dự đoán Kết cho thấy giá trị Lợng indomethacin đợc thấm từ - giê cã quan hÖ tuyÕn biÕn tÝnh toán từ thực nghiệm lệch không nhiều so với giá trị dự đoán tính chặt chẽ theo thời gian với hệ số tơng quan r đạt từ 0,9872 - ( lệch từ 0,01-10,66%) Nh vậy, công thức dự đoán tối u đợc chọn 0,9996 Tốc độ thấm thay đổi từ 5,01 - 8,27 g/cm2/h làm công thức bào chế chÝnh thøc mµng nh·n khoa indomethacin 19 20 3.2.3.10 KÕt đánh giá tơng quan in vitro - in vivo giải phóng * Độ vô khuẩn: Phải vô khuẩn dợc chất từ màng nhÃn khoa indomethacin * Định lợng: Hàm lợng indomethacin (C19H16ClNO4) màng - Phơng trình hồi qui: y = 1,0511 x - 0,4335 phải đạt từ 90-110% so với hàm lợng ghi nhÃn (y tỷ lệ % indomethacin đợc giải phóng in vivo, x tỷ lệ % * Kết đánh giá độ ổn định màng indomethacin đợc giải phóng in vitro) Kết cho thấy màng nhÃn khoa indomethacin ổn định - Hệ số tơng quan r = 0,997 điều kiện thực khoảng thời gian nghiên cứu (15 tháng) - Chỉ số f2 giống đờng cong giải phóng in vivo in 3.3 Kết đánh giá sinh khả dụng màng nhÃn khoa vitro đạt 70,75 indomethacin so với dung dịch nhỏ mắt indomethacin 0,1% Chứng tỏ phơng pháp đánh giá tốc độ giải phóng dợc chất Kết đợc trình bày hình 3.13 in vitro có tơng quan tốt với giải phóng dợc chất in vivo mắt 3.5 thỏ Do đó, phơng pháp in vitro đợc đa vào xây dựng tiêu chuẩn 3.2.3.11 Kết xây dựng tiêu chuẩn sở màng * Hình thức: Hình tròn, màu vàng nhạt, mềm dẻo, đờng kính 5,8 6,2 mm * Mất khối lợng làm khô: Không 10% N g đ (m ồn ộ cg/m l) sở cho màng nhÃn khoa indomethacin 2.5 1.5 0.5 * Định tính: Màng nhÃn khoa 320 nm Tỷ lệ indomethacin đợc giải phóng sau giờ: 30 - 40% Tỷ lệ indomethacin đợc giải phóng sau giờ: 55 - 70% Tỷ lệ indomethacin đợc giải phóng sau giờ: 70 - 80% Tỷ lệ indomethacin đợc giải phóng sau giờ: > 80 % * Độ đồng hàm lợng: 85 - 115% * Độ đồng vỊ khèi l−ỵng: 85 - 115% 10 Dung dịch nhỏ mắt Hình 3.13: Tốc độ mức độ hấp thu indomethacin phần định lợng phải giống * Độ hoà tan: Phải đáp ứng tiêu chuẩn sau đây: Thời gian (h) - Phổ tử ngoại kho¶ng 300 - 350 nm ph¶i cã cùc đại hấp thụ - Sắc ký đồ: Thời gian lu mẫu chuẩn mẫu thử sắc ký đồ vào thuỷ dịch mắt thỏ Nhận xét: - Về thêi gian hÊp thu thuèc: Sau nhá m¾t dung dịch indomethacin 0,1% lần, lần giọt vào thời điểm giờ, 2,5 nồng độ indomethacin bắt đầu định lợng đợc thuỷ dịch 15 phút sau dùng thuốc, đạt cực đại (Cmax) thời điểm 30 phút, 5,5 giờ, tơng ứng với 30 phút sau lần 21 22 nhỏ thuốc Dợc chất trì đợc thuỷ dịch kéo dài nhóm chứng nhóm dùng dung dịch indomethacin 0,1% (p < 0,01) Trong đó, đặt màng nhÃn khoa indomethacin nồng độ Điểm giảm viêm nhóm dùng màng lớn gấp 2,2 lần so với nhóm indomethacin bắt đầu định lợng đợc thuỷ dịch 15 dïng dung dÞch indomethacin 0,1% ( p < 0,01) sau dùng thuốc, nhng đạt cực đại sau trì kéo - Sau ngày, mức độ giảm viêm mắt không đợc điều trị dài thuỷ dịch cha nhiều Trong đó, mắt đợc điều trị dung dịch nhỏ - Về nồng độ thuốc thuỷ dịch: Trong 30 phút đầu sau nhỏ mắt màng nhÃn khoa indomethacin đà giảm viêm mạnh Mức giảm mắt (hoặc đặt thuốc), nồng độ indomethacin thuỷ dịch viêm nhóm dùng màng lớn gấp 1,4 lần so với nhóm dùng dung nhóm tơng đơng (p > 0,05) Các thời điểm từ đến giờ, dịch indomethacin 0,1% (p < 0,01) Cả hai nhóm đợc ®iỊu trÞ b»ng nång ®é indomethacin thủ dÞch cđa nhóm dùng màng cao dung dịch indomethacin 0,1% màng nhÃn khoa indomethacin rõ rệt (p < 0,01) Cmax cđa nhãm dïng mµng lµ 2,2535 μg/ml, cao gÊp giảm viêm khác biệt so với nhóm không dùng thuốc (p < 0,01) 3,9 lÇn Cmax cđa nhãm dïng dung dịch nhỏ mắt (0,6572g/ml) Các KếT LUậN thời điểm từ 5,5 giê ®Õn giê, nång ®é indomethacin thủ dịch nhóm tơng đơng (p > 0,05) - Về sinh khả dụng: SKD màng cao gấp 2,9 lần SKD thuốc Chúng đà hoàn thành mục tiêu đề tài luận án, là: nhỏ mắt indomethacin 0,1% Đà xây dựng đợc công thức bào chế màng nhÃn khoa 3.4 Kết đánh giá khả dung nạp tác dụng chống viêm indomethacin 0,15mg tác dụng kéo dài dạng ăn mòn - hòa tan từ màng nhÃn khoa indomethacin polyme thân nớc 3.4.1 Kết đánh giá khả dung nạp màng Kết cho thấy màng nhÃn khoa indomethacin đợc dung Công thức bào chế màng đợc xây dựng sàng lọc qua giai đoạn Các tiêu đánh giá bao gồm tốc độ giải phóng tốc độ nạp tốt mắt thỏ Không gây kích ứng mắt thấm dợc chất qua giác mạc bóc tách từ nhÃn cầu mắt thỏ Các thí 3.4.2 Kết đánh giá tác dụng chống viêm màng nghiệm đợc thiết kế tối u hóa đồng thời nhiều mục tiêu dựa - Hai ngày sau gây viêm thực nghiệm, mức độ viêm mắt nặng trợ giúp phần mềm Modde 5.0 Đặc điểm màng nh sau: đồng lô thỏ - Công thức: - Hai ngày tiếp theo, mắt không đợc điều trị bị viêm mức độ Indomethacin 1% nặng Mắt đợc điều trị dung dịch indomethacin 0,1% giảm Glycerin 15,16% viêm cha nhiều so với mắt đối chứng, điểm giảm viêm khác Hỗn hợp natri alginat PVA 83,84% cha có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) Trong đó, mắt đợc điều trị Tỷ lệ natri algianat PVA 15/85 màng nhÃn khoa indomethacin đà giảm viêm khác biệt so với 23 24 - Thời gian giải phóng dợc chất in vitro in vivo mắt thỏ kéo - Tác dụng chống viêm đợc đánh giá dựa mô hình gây viêm mắt dài - thực nghiệm cách tiêm huyết bò vào dịch kính Theo dõi - Tốc độ giải phóng dợc chất gần với động học bậc không (chỉ số f2 điều trị ngày đánh giá tác dụng thuốc thông qua việc so với động học bậc không đạt từ 50,59 ± 3,99 ®Õn 57,18 ± 5,66) chÊm ®iĨm møc độ viêm mắt Kết cho thấy màng nhÃn khoa - Tốc độ thấm dợc chất in vitro qua giác mạc mắt thỏ từ 6,98 0,33 indomethacin có hiệu chống viêm cao so với dung dịch nhỏ ®Õn 7,66 ± 0,40 μg/cm /h m¾t indomethacin 0,1% ®ang lu hành thị trờng (cao 2,2 - Độ ổn định: 15 tháng điều kiện thực (30 C, độ ẩm 70 5%) lần sau ngày điều trị 1,4 lần sau ngày điều trị) Hơn nữa, màng Đà đánh giá sinh khả dụng màng nhÃn khoa indomethacin cần đặt lần/ngày, dung dịch indomethacin 0,1% 0,15mg mắt thỏ, so sánh với sinh khả dụng thuốc nhỏ phải nhỏ mắt lần/ngày mắt indomethacin 0,1% lu hành thị trờng đề xuất - Qui trình đánh giá sinh khả dụng đợc xây dựng thẩm định từ giai đoạn lấy mẫu thủy dịch víi thĨ tÝch nhá (100 - 200 μl), b¶o qu¶n mẫu đến giai đoạn xử lý mẫu định lợng indomethacin Đánh giá tác dụng lâm sàng màng đặt nhÃn khoa phơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao Các tiêu độ chọn lọc, độ indomethacin tuyến tính, độ lặp lại độ đạt qui định quan Triển khai bào chế màng nhÃn khoa indomethacin với qui mô lớn quản lý thuốc thực phẩm Mỹ (FDA) thẩm định phơng pháp phân tích dợc chất dịch sinh học Giới hạn định lợng 0,1 g/ml, khoảng nồng ®é ®o tõ 0,1 - 10 μg/ml - KÕt qu¶ đánh giá sinh khả dụng mắt thỏ cho thấy màng đặt nhÃn khoa indomethacin có thời gian tác dụng kéo dài có diện tích dới đờng cong nồng độ dợc chất thủy dịch - thời gian (AUC) cao gấp 2,9 lần so với dung dịch thuốc nhỏ mắt indomethacin 0,1% (nhỏ lần, lần1 giọt 50 l cách 2,5 giờ) Đà đánh giá khả dung nạp tác dụng chống viêm màng nhÃn khoa indomethacin mắt thỏ - Khả dung nạp đợc đánh giá phơng pháp Draize test Kết cho thấy màng nhÃn khoa indomethacin không gây kích ứng đợc dung nạp tốt  ... tài: "Nghiên cứu bào chế màng đặt nhÃn khoa indomethacin tác dụng kéo dài " Mục tiêu luận án - Xây dựng công thức bào chế màng nhÃn khoa indomethacin tác dụng kéo dài - Đánh giá sinh khả dụng màng. .. nạp tác dụng chống viêm indomethacin 0,15mg tác dụng kéo dài dạng ăn mòn - hòa tan từ màng nhÃn khoa indomethacin polyme thân nớc 3.4.1 Kết đánh giá khả dung nạp màng Kết cho thấy màng nhÃn khoa. .. ngày Do đó, nhiều tác giả đà tập trung nghiên cứu nhằm khắc phục nhợc - Đà xây dựng đợc công thức tối u bào chế màng nhÃn khoa điểm thuốc nhỏ mắt indomethacin Một số dạng bào chế indomethacin giải