TCNCYH 27 (1) - 2004 số lợng lympho bào b máu ngoại vi và khả năng đáp ứng tạo kháng thể chống vacxin viêm gan b của ngời katu Văn Đình Hoa Đại học Y Hà Nội Số lợng lympho bào B (CD19) và khả năng đáp ứng tạo kháng thể của các lympho bào B đợc hoạt hóa là hai thông số quan trọng để đánh giá khả năng đáp ứng miễn dịch thể dịch của cơ thể bình thờng hoặc bị bệnh. Để góp phần nghiên cứu đặc điểm sinh học của các dân tộc ít ngời ở vùng cao, chúng tôi nghiên cứu khả năng đáp ứng tạo kháng thể chống vacxin viêm gan B và số lợng lympho bào B máu ngoại vi của ngời Katu sống ở huyện Nam Đông -Huế. Số lợng lympho bào B đợc xác định trên 22 ngời Katu bình thờng bằng kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang trực tiếp và 64 ngời Katu có HbsAg (-), kháng thể chống HbsAg (-) đợc đánh giá khả năng đáp ứng tạo kháng thể chống vaccin viêm gan B với kỹ thuật ELISA. Nhóm chứng là ngời Kinh có cùng tiêu chuẩn. Kết quả thu đợc: - Số lợng lympho bào B trong 1mm 3 máu: 354,9+101,1; thấp hơn so với ngời Kinh cùng lứa tuổi, cùng nghề nghiệp với p<0,05. - Khả năng đáp ứng tạo kháng thể chống vacxin viêm gan B ở mức tốt: 84,4%; cao hơn ngời Kinh nhng p>0,05. i. Đặt vấn đề Lympho bào B chịu trách nhiệm về miễn dịch thể dịch (Humoral Immunity), lympho bào T chịu trách nhiệm về miễn dịch qua trung gian tế bào (CMI: Cell Mediated Immunity). Đó là hai hệ thống đáp ứng miễn dịch đặc hiệu của cơ thể chống lại các yếu tố "lạ". Lympho bào B chiếm khoảng 5-15% tổng số lympho bào tuần hoàn trong máu. Lympho bào B là một phân nhánh của tế bào gốc định hớng dòng lympho (LSC: Lymphoid Stem Cell). ở ngời, lympho bào B đợc sinh ra, phân chia, biệt hóa thành lympho bào B trởng thành ở tủy xơng nhờ yếu tố sinh trởng tế bào B (BCGF: B Cell Growth Factor). Tại tủy xơng, thoạt đầu trên bề mặt của lympho bào B có phân tử MHC, các kháng nguyên biệt hóa CD34, CD10 (CD34 là kháng nguyên trên bề mặt của tế bào gốc đa năng: Multipotential Stem Cell. CD10 còn có tên là kháng nguyên bạch cầu dòng lympho cấp ở trẻ em CALLA: Common Acute Lymphoblastic Leukemia Antigen). Lympho bào B trởng thành vào máu trên bề mặt có kháng nguyên CD19, CD20. Đặc trng trên bề mặt của lympho bào B trởng thành có kháng nguyên: CD19, CD20. Nhờ kỹ thuật tạo tế bào lai (hybridom), ngời ta đã sản xuất đợc nhiều loại kháng thể đơn clon (Monoclonal antibody), trong đó có kháng thể đơn clon chống CD19, CD20. Nhờ vậy, để phát hiện lympho bào B ngời ta tìm cách bộc lộ sự có mặt của CD19, CD20. Lympho bào B trởng thành từ hệ tuần hoàn vào trú ngụ tại các mô lympho ngoại 6 TCNCYH 27 (1) - 2004 vi: hạch bạch huyết, lách, các mô lympho không có vỏ bọc ở ruột (GALT: Gut Associated Lymphoid Tissue), họng (vòng Waldeyer), khí phế quản (BALT: Bronchus Associated Lymphoid Tissue). Khi đợc kháng nguyên kích thích, lympho bào B biệt hóa thành các tơng bào (Plasma Cell) sản xuất ra các globulin miễn dịch (Ig: Immunglobulin: IgG, IgA, IgM, IgD, IgE) [1]. Xác định số lợng lympho bào B ở máu ngoại vi, khả năng đáp ứng tạo kháng thể của chúng khi tiếp xúc với một kháng nguyên nào đó là 2 điểm cơ bản để đánh giá khả năng đề kháng miễn dịch thể dịch của cơ thể [4]. Một số công trình nghiên cứu của tác giả trong nớc đã công bố về số lợng lympho bào B, hàm lợng các Ig trong máu ngoại vi ở ngời Kinh [2, 3], rất tiếc còn ít các nghiên cứu về đặc điểm sinh thể của các dân tộc ít ngời, nhất là các thông số giúp đánh giá về khả năng phòng vệ cơ thể trong đó có các thông số miễn dịch. Vì vậy, chúng tôi tiến hành nghiên cứu 2 thông số cơ bản về miễn dịch thể dịch ở ngời Katu có sức khỏe bình thờng nhằm góp phần từng bớc nghiên cứu đặc điểm sinh thể của một số dân tộc nớc ta ở vùng cao và có thể để dùng làm tham chiếu cho các công trình nghiên cứu tiếp theo khác. Mục tiêu: - Xác định số lợng lympho bào B (CD19) ở máu ngoại vi. - Đánh giá khả năng đáp ứng tạo kháng thể chống vacxin viêm gan B của ngời Katu sống ở huyện Nam Đông-Huế. ii. Đối tợng và phơng pháp nghiên cứu 1. Đối tợng: - Xác định số lợng lympho bào B ở máu ngoại vi: 22 ngời dân tộc Katu gồm 12 nam và 10 nữ lao động nông nghiệp tuổi từ 18 đến 50 đợc khám sức khỏe và kết luận hiện có sức khỏe bình thờng tại Trung tâm y tế huyện Nam Đông, Huế. - Khả năng đáp ứng tạo kháng thể chống vacxin viêm gan B: 64 ngời có HBsAg (-), kháng thể chống HBsAg (-). Sau khi tiêm đủ 3 mũi vacxin viêm gan B (EngerixB của Bỉ), tiến hành định lợng kháng thể chống HBsAg. - Để có t liệu so sánh với ngời Katu trong cùng điều kiện nghiên cứu chúng tôi tiến hành xác định số lợng lympho bào B máu ngoại vi của 19 ngời Kinh có sức khoẻ bình thờng cùng độ tuổi, cùng nghề nghiệp ở ngoại thành Hải Phòng và 48 ngời Kinh đợc tiêm chủng vacxin Engerix B nh ngời Katu. 2. Phơng pháp: - Xác định số lợng lympho bào B máu ngoại vi bằng kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang trực tiếp với bộ kit Simultest của hãng Becton Dickinson. - Xác định HBsAg bằng kỹ thuật ELISA, bộ kit của hãng Organon. - Tiêm chủng vacxin phòng viêm gan B của Bỉ (vacxin Engerix B của Bỉ). Tiêm 3 mũi ở các thời điểm 0-1-2 tháng, mỗi mũi 20àg. - Định lợng kháng thể chống HBsAg bằng kỹ thuật ELISA, bộ kit của hãng Pharmatech. iii. Kết quả 1. Số lợng lympho bào B của ngời Katu: Bảng 1: Số lợng lympho bào B trong 1mm 3 máu Giới n X SD p Nam 12 365,6 125,35 Nữ 10 342,0 65,6 p > 0,05 Chung 22 354,9 101,1 Nhận xét: 7 TCNCYH 27 (1) - 2004 Số lợng lympho bào B trong 1mm 3 máu của nam và nữ không khác biệt nhau p > 0,05. Tính chung cả nam và nữ: 354,9 +101,1. 2. Đáp ứng tạo kháng thể chống vacxin viêm gan B sau 3 mũi tiêm: Bảng 2: Nồng độ kháng thể chống HBsAg Đáp ứng không tốt Đáp ứng tốt Đáp ứng kém Không đáp ứng 1 1,6 9 14,0 n = 64 % 54 84,4 n=10 %=15,6 Đáp ứng tốt khi: nồng độ anti HbsAg > 10mUI/ml Đáp ứng kém khi: 1 < anti HBsAg < 10mUI/ml Không đáp ứng khi: anti HbsAg < 1mUI/ml Nhận xét: Khả năng đáp ứng tạo kháng thể sau khi tiêm vacxin Engerix B: có 84,4% các đối tợng đáp ứng ở mức tốt, nghĩa là họ đợc bảo vệ để phòng bệnh viêm gan virus B. 3. Số lợng lympho bào B và đáp ứng tạo kháng thể chống vacxin viêm gan B của ngời Kinh: Bảng 3: Số lợng lympho bào B ở máu ngoại vi Giới n X SD p Nam 13 470,85 160,3 Nữ 6 533,5 76,3 p > 0,05 Chung 19 490,6 140,2 Bảng 4: Nồng độ kháng thể chống HBsAg Đáp ứng không tốt Đáp ứng tốt Đáp ứng kém Không đáp ứng 9 18,7 3 6,3 n: 48 % 36 75 n=12 %=25 Bảng 5: Số lợng lympho bào B và đáp ứng tạo kháng thể của ngời Katu và ngời Kinh Số lợng lympho B / 1mm 3 Đáp ứng tốt tạo kháng thể chống HBsAg n X SD n % Katu Kinh 22 19 354,9+101,1 490,6+140,2 54/64 36/48 84,4 75 p < 0,05 > 0,05 Nhận xét: Số lợng lympho bào B của ngời Katu thấp hơn so với ngời Kinh với p <0,05. Khả năng đáp ứng tạo kháng thể của ngời Katu lại cao hơn ngời Kinh nhng p>0,05. vi. Bàn luận Quá trình đáp ứng của cơ thể phụ thuộc nhiều yếu tố, đáng chú ý là trạng thái cơ thể, môi trờng sống và chế độ dinh dỡng. Cũng nh lympho bào T, lympho bào B muốn trởng thành phát triển, để có đủ về số lợng và làm tốt về chức năng tiêu diệt các yếu tố "lạ" thì cơ thể vật chủ phải có sự toàn vẹn của hệ thống các cơ quan và các tế bào chịu trách nhiệm miễn dịch, sự hoạt động bình thờng của các cơ quan, có chế độ dinh dỡng đủ về số lợng và cân đối về chất lợng. 8 TCNCYH 27 (1) - 2004 Sản phẩm của lympho bào B sau khi đợc hoạt hóa là các kháng thể (Ig) lu hành trong các dịch của cơ thể [4, 6]. Chức năng sinh học của các kháng thể dịch thể: kết hợp với kháng nguyên, tập trung kháng nguyên (nhất là các kháng nguyên còn nằm ngoài các tế bào của vật chủ), huy động các tế bào miễn dịch khác để loại trừ kháng nguyên. Cụ thể: - Kết hợp đặc hiệu với kháng nguyên tơng ứng: trung hòa độc tố, giảm độc tính của độc tố, ngng kết vi khuẩn, virus, ngăn không cho các vi sinh bám vào các tế bào của cơ thể. - Hoạt hóa hệ thống bổ thể để hình thành phức hợp tấn công màng (MAC: Membrane attack complex) để ly giải các tế bào (vi khuẩn, virus ). - Tơng tác với các tế bào miễn dịch khác: trên một số tế bào: Mastocyte, bạch cầu ái kiềm, bạch cầu ái toan, đại thực bào, tế bào diệt tự nhiên (NK) có các thụ thể với Fc nên Ig có tác dụng tăng cờng chức năng của các tế bào này nh: tăng khả năng thực bào, tăng khả năng tiếp cận tiêu diệt tế bào đích (ADCC: antibody dependent cell cytotoxicity) Nh vậy, nếu thay đổi số lợng lympho bào B, rối loạn chức năng đáp ứng tạo kháng thể thì khi gặp kháng nguyên sẽ gây ra rối loạn miễn dịch thể dịch, nghĩa là làm thay đổi khả năng tự phòng vệ của cơ thể. Kết quả nghiên cứu ở ngời Katu có sức khỏe bình thờng, chúng tôi thu đợc: - Số lợng lympho bào B (Bảng 1): 354,9 +101,1/1mm 3 máu. So với số lợng lympho bào B của ngời Kinh cùng lứa tuổi, cùng nghề nghiệp và tiến hành cùng kỹ thuật (bảng 3, bảng 5) thì số lợng lympho bào B máu ngoại vi của ngời Katu thấp hơn ngời Kinh với p < 0,05. Đối chiếu với giá trị trung bình của lympho bào B trong cuốn: "Các giá trị sinh học ngời Việt Nam bình thờng thập kỷ 90" [2] thì lympho bào B máu ngoại vi của ngời Katu còn thấp hơn nhiều (254,9 +101,1 so với 419 +207), tuy vậy vẫn nằm trong giới hạn sinh học. Là thông số sinh học, cho nên cũng nh các thông số sinh học khác của ngời bình thờng đã đợc các tác giả công bố đều có một khoảng dao động khá rộng thể hiện ở SD của các kết quả nghiên cứu. - Khả năng đáp ứng tạo kháng thể đặc hiệu chống kháng nguyên bề mặt của virus viêm gan B: đáp ứng tạo kháng thể dịch thể không những phụ thuộc vào số lợng và chức năng của lympho bào B mà còn phụ thuộc vào tính phản ứng của cơ thể, phụ thuộc vào loại vacxin và phơng thức sử dụng [5]. Kết quả ở bảng 2: sau 3 lần tiêm vacxin Engerix B theo quy trình tiêm chủng thì khả năng đáp ứng tốt ( >10MUI/ml) của ngời Katu: 84,4%. Engerix B là vacxin tái tổ hợp của Bỉ, chất lợng quốc tế đợc nhiều quốc gia trên thế giới sử dụng để tiêm phòng viêm gan B [7]. So với ngời Kinh (bảng 4, 5) thì khả năng đáp ứng ở mức tốt của ngời Katu cao hơn ngời Kinh (84,4%, 75%) nhng p >0,05. Số lợng lympho bào B của ngời Katu có thấp hơn nhng có lẽ do ít khi đợc tiêm chủng các loaị vacxin nh ngời Kinh nên khi đợc tiêm chủng vacxin chống viêm gan B thì cơ thể của họ đáp ứng mạnh hơn. v. Kết luận 1. Số lợng lympho bào B (CD19) trong 1mm 3 máu ngoại vi của ngời Katu: 354,9 +101,1, thấp hơn so với ngời Kinh cùng lứa tuổi, cùng nghề nghiệp (p< 0,05). 2. Đáp ứng tạo kháng thể đặc hiệu chống kháng nguyên bề mặt virus viêm gan B (HBsAg) ở mức tốt của ngời Katu: 84,4%, cao hơn ngời Kinh (p>0,05). Sau khi tiêm chủng đúng liều lợng và quy 9 TCNCYH 27 (1) - 2004 trình, các đối tợng có khả năng phòng bệnh viêm gan B. Tài liệu tham khảo 1. Vũ Triệu An, Jean Claude Homberg (2001): Miễn dịch học. Nhà xuất bản y học, 105-125, 190-210. 2. Các giá trị sinh học ngời Việt Nam thập kỷ 90 (2003): NXB Y học, 88-96. 3. Nguyễn Thu Vân (1996): Đáp ứng miễn dịch của trẻ sơ sinh sau khi tiêm vacxin viêm gan B theo liều tiêm khác nhau. Tạp chí Vệ sinh phòng dịch, tập 6, số 4, 34-36. 4. Abul K. Abbas (2001): B cell activation and antibody production - Cellular and Molecular Immunology, W.B. Saunders Company,Fourth Edition, 182- 207. 5. Hoffnagle J.H. (1997): Update on Hepatitis B. International symposium on viral hepatitis and prospectives from the ASEAN region. Bangkok, Thailand, 10-12. 6. Pistoia V. (1997): Production of cytokin by human B cell in health and disease. Immunology Today, Vol 18 (7), 343-350. 7. WHO (1997): Prevention of viral hepatitis A and B. Hepatitis World, Vol 2, No.2. Summary Amount of lymphocyte B in peripheral blood and the responding capacity to create antibody against hepatitis B vaccine of Katu minority The amount of lymphocyte B and the responding capacity to create antibody of activated lymphocyte B are two important parameters to assess the humoral-immunity responding capacity of healthy and unhealthy bodies. To contribute to study biological characteristic of minority people in mountainous region, we studied the responding capacity to create antibody against hepatitis B vaccine and amount of lymphocyte B in peripheral blood of the Katu minority living in Nam Dong district, Hue. The amoun of lymphocyte B were determined in 22 healthy Katu minority with technique direct immuno-fluorescein. 64 Katu people have HbsAg (-) and anti-HbsAg (-), who were studied the responding capacity to create antibody against hepatitis B vaccine with technique ELISA. The control group are Kinh people of the same criterion. Results: - The amount of lymphocyte B in 1mm 3 blood: 354.9+101.1; lower than that of the Kinh people of the same age, same occupation, with p<0.05. - The responding capacity to create antibody against hepatitis B vaccine at good standard, 84,4%, that is higher than that of the Kinh people, however with p>0.05. 10 . gan virus B. 3. Số lợng lympho b o B và đáp ứng tạo kháng thể chống vacxin vi m gan B của ngời Kinh: B ng 3: Số lợng lympho b o B ở máu ngoại vi Giới. năng đáp ứng tạo kháng thể chống vacxin vi m gan B và số lợng lympho b o B máu ngoại vi của ngời Katu sống ở huyện Nam Đông -Huế. Số lợng lympho b o B đợc