GVHD: ThS. Ngô Văn Thanh Nhóm SVTH: Nguyễn Văn Chung Phan Xy Hà Nội - 6/2012 1 Xác định dấu vân tay ADN Khái niệm Cơ sở khoa học Phương pháp tiến hành Các ứng dụng 4 1 2 3 2 Xác định vân tay DNA là gì? Việc phân biệt các cá thể bằng cách dựa vào mô hình lặp lại trong ADN được gọi là xác định dấu vân tay ADN 3 DNA của tất cả mọi sinh vật đều giống nhau Sự khác nhau duy nhất giữa các cá thể trong cùng một loài là trình tự các cặp base Mọi cá thể có thể được nhận dạng duy nhất dựa trên trình tự các cặp base Nhưng có hàng tỷ cặp base Công việc nhận dạng cá thể gặp khó khăn 4 C l i c k t o e d i t M a s t e r t e x t s t y l e s S e c o n d l e v e l T h i r d l e v e l F o u r t h l e v e l F i f t h l e v e l Phương pháp đơn giản hơn ??? D ự a v à o c á c m ô h ì n h l ặ p l ạ i t r o n g A D N D ự a v à o c á c m ô h ì n h l ặ p l ạ i t r o n g A D N 5  Các mô hình lặp lại không biểu diễn “dấu vân tay” của một cá thể  Nhưng chúng có thể khẳng định được rằng liệu hai mẫu DNA là từ một người, từ hai người có liên quan huyết thống hay từ hai người không có quan hệ gì  Các nhà khoa học sử dụng một số lượng nhỏ các trình tự DNA có sự biến đổi giữa các cá thể để phân tích những khả năng liên hệ có thể có 6 * Số base trong một đơn vị lặp lại có thể từ 2 đến hàng trăm. Dựa vào số base trong đơn vị lặp lại chia ra các loại chỉ thị sau: - Số base trong một đơn vị lặp lại nhỏ hơn 5 gọi là chỉ thị SSR (Simple Sequence Repeats, hay Microsatellite) - Số base trong một đơn vị lặp lại từ 5-25 gọi là chỉ thị STR (Short Tandem Repeats) - Số base trong một đơn vị lặp lại lớn hơn 25 gọi là chỉ thị VNTR (Variable Number Tandem Repeats) 7 Dựa vào các ADN tiểu vệ tinh (minisatellite) Dựa vào các ADN vi vệ tinh (microsatellite) Các loại xét nghiệm dấu vân tay ADN 8  AND Minisatellite - Đó là các trình tự base lặp lại trong intron gọi là các tiểu vệ tinh - Có mặt ở trên 1000 vị trí trong hệ gen của con người - Số lần lặp các đoạn là đặc trưng cho từng người - Các ADN minisatellite có đặc trưng là không diễn ra hoạt động phiên mã 9  AND Minisatellite - Các VNTRs này có thể nằm rải rác tại nhiều vị trí trên bộ gen gọi là tiểu vệ tinh đa vị trí (multilocus minisatellite) hoặc có thể nằm tại một vị trí trên bộ gen gọi là tiểu vệ tinh đơn vị trí (single-locus minisatellite) 10 [...]... xuất thước của STR trong mẫu ADN bằng Điện di hiện các allen của các được khuếch đại Tách chiết ADN từ loci STR Dựa vào các vi vệ tinh (STRs) 21 22 23  Xác định mối quan hệ huyết thống • Việc phân tích các mô hình VNTR giữa bố mẹ – con cái đã được áp dụng trong thực tế để giải quyết các trường hợp xác định huyết thống thông thường cũng như các trường hợp phức tạp hơn như xác định quốc tịch, con rơi… •... tình nghi, từ đó xác định được người đó phạm tội hay vô can • Các mô hình VNTR cũng rất hữu ích trong việc xác định thân phận nạn nhân trong các trường hợp giết người, hoặc từ DNA bằng chứng được tìm thấy hoặc từ chính cơ thể nạn nhân 25  Xác định đặc trưng cá thể • Khái niệm về việc sử dụng Dấu vân tay DNA như một loại mã di truyền có tính pháp lý để nhận dạng các cá nhân • Công nghệ này đòi hỏi việc... có nhiều Dấu vân tay DNA” của con cái thì càng thuận lợi trong việc xây dựng VNTR của bố mẹ cũng như mức độ tin cậy của mô hình VNTR được xây dựng càng cao 24  Nhận dạng tội phạm và khoa học hình sự • DNA thu được từ các tế bào máu, tóc, da hay những bằng chứng di truyền khác mà tội phạm bỏ lại ở hiện trường được đem so sánh với các mẫu VNTR từ DNA của những người bị tình nghi, từ đó xác định được... trình tự base lặp lại 17 18  Dựa vào các vi vệ tinh (microsatellite) - Xét nghiệm dấu vân tay DNA dựa trên STRs được thực hiện bằng kỹ thuật PCR, nhờ đó mà các mẫu thử dù chứa ít DNA vẫn có thể nhân lên thành nhiều bản sao giống hệt nhau - Chính nhờ ưu điểm có thể thực hiện thử nghiệm trên mẫu nhỏ, kết quả có độ chính xác cao mà xét nghiệm STRs hiện nay được áp dụng trong nhiều lĩnh vực của pháp y 19... dài đoạn lặp khác nhau ở hai NST tương đồng …CGTAGCCTTGCATCCTTCTCTCTCTCTCTCT ATCGGTACTACGTGG… … CGTAGCCTTGCATCCTTCTCTCTCTCTCTCTCTCTATCGGTACTACGTGG … 14  Dựa vào các tiểu vệ tinh(VNTRs) - Xét nghiệm dấu vân tay DNA phát hiện các tiểu vệ tinh đa vị trí bằng kỹ thuật phát hiện sự đa hình về chiều dài các đoạn DNA của bộ gen bị cắt bởi enzyme giới hạn gọi là kỹ thuật RFLP (Restriction Fragments Lenght Polymorphism)... 12  Các loại trình tự của ADN Microsatellite: Trong mỗi cơ thể sẽ tồn tại hai trạng thái của các đoạn trình tự lặp là đồng hợp và dị hợp: • Đồng hợp tử ( Homozygous ) : Số lần lặp ở locus satellite là giống nhau do đó chiều dài đoạn lặp là như nhau …CGTAGCCTTGCATCCTTCTCTCTCTCTCTCTATCGGTACTACGTGG… …CGTAGCCTTGCATCCTTCTCTCTCTCTCTCTATCGGTACTACGTGG… 13  Các loại trình tự của ADN Microsatellite: • Dị hợp... ADN Microsatellite - Số base trong một đơn vị lặp lại nhỏ hơn 5 gọi là chỉ thị SSR (Simple Sequence Repeats, hay Microsattelite) - Số base trong một đơn vị lặp lại từ 5-25 gọi là chỉ thị STR (Short Tendem Repeats) 11  ADN Microsatellite • Khối các đoạn lặp 2 Nu là phổ biến nhất ( 0,5% genome ) : trong đó lặp... trong file và sau đó phân tích hàng triệu mô hình VNTRs 26  Trong chuẩn đoán bệnh • Vì ADN Microsatellite thay đổi về chiều dài trong sự phát triển của một số bệnh ung thư, chúng là những marker rất hữu ích trong việc dò tìm, phát hiện ung thư sớm Bởi vì tính đa hình của chúng hữu ích trong sự nghiên cứu các liên kết để định vị những Gen chiụ trách nhiệm về nhiều sự mất trật tự di truyền học 27 Xin chân . Hà Nội - 6/2012 1 Xác định dấu vân tay ADN Khái niệm Cơ sở khoa học Phương pháp tiến hành Các ứng dụng 4 1 2 3 2 Xác định vân tay DNA là gì? Việc. biệt các cá thể bằng cách dựa vào mô hình lặp lại trong ADN được gọi là xác định dấu vân tay ADN 3 DNA của tất cả mọi sinh vật đều giống nhau Sự khác