Đang tải... (xem toàn văn)
Bộ môn Hóa Sinh - Đại Học Y Dược Cần Thơ BS Trần Kim Cúc
ĐỊNH LƯỢNG ACID URIC, UREA, CREATININ MÁU VÀ NƯỚC TIỂU SỬ DỤNG GIẤY NHÚNG NT VÀ 10 THÔNG SỐ BS.Trần Kim Cúc MỤC TIÊU BÀI GIẢNG Nêu nguyên tắc pư ĐL viết pư xảy (nếu có) Thực pư ĐL theo kỹ thuật nêu Tính nồng độ chuyển đổi đơn vị chất theo công thức Trình bày vai trị số thuốc thử Biện luận KQ phân tích giá trị bệnh lý xét nghiệm NỘI DUNG Gồm phản ứng • Thí nghiệm 1: Định lượng Acid Uric • Thí nghiệm 2: Định lượng Urê • Thí nghiệm 3: Định lượng Creatinin • Thí nghiệm 4: Sử dụng giấy nhúng TS • Thí nghiệm : Sử dụng giấy nhúng TS Thí nghiệm Định lượng Acid Uric * MẪU THỬ: • HT • Ht: chống đơng heparin hay EDTA • NT: pha lỗng tỉ lệ NT + 10 Nước cất I NGUYÊN TẮC Acid uric mẫu thử ĐL theo pư sau : Uricase Acid Uric + H2O + O2 Allantoin + CO2 + H2O2 H2O2 + 3,5 dichloro -2 -hydroxybenzen - Sulfonic acid + - aminoantipyrin Peroxidase Chromogen + HCl + H2O ( Đỏ tím ) II THUỐC THỬ • Thuốc thử 1: Acid Uric chuẩn (Standard): 476 mol/L (8 mg/dl) • Thuốc thử 2: Thuốc thử Enzym Phosphat buffer pH 7.0 50 mmol/L 3,5 dichloro - - hydroxy benzen mmol/L - Aminophenazone 0,3 mmol/L Uricase > 200 U/L Peroxidase 1000U/L Chuẩn bị thuốc thử: Thuốc thử enzym DD chuẩn sẵn sàng sử dụng mà khơng cần pha III TIẾN HÀNH Ống trắng Thuốc thử A.uric chuẩn ( 80mg/L) Mẫu thử ( Huyết thanh) Ống chuẩn Ống thử 1000l 1000l 20l 1000l 20l - Lắc nhẹ cho - Ủ t = 370C phút, 20 - 250C 10 ph - Đo mật độ quang bước sóng = 520 nm - Màu tồn 15 phút, tránh ánh sáng mặt trời trực tiếp IV CÁCH TÍNH KẾT QUẢ OD thử C ( nồng độ ) = x n OD chuẩn + Huyết thanh, huyết tương: mol /L: n = 476 mg/dl: n = + Nước tiểu: KQ x độ pha loãng (11 lần) + Lượng acid uric / NT / 24 = (mg) [ acid uric ] / NT x V NT /24 (mg/dl) (dl ) V BIỆN LUẬN • Acid uric sản phẩm thối hóa bazơ purin • Là thông số dùng để kiểm tra sức khỏe cho người 40 tuổi, kiểm tra chức thận nguy XVĐM (acid uric, Cholesterol, Triglycerid, urê, Glucose, Creatinin) Acid uric máu: a Giá trị bình thường: • Nam: 200 - 420 mol /L (3,4 - 7,0 mg /dl) • Nữ : 140 - 340 mol /L (2,4 - 5,7 mg /dl) b Thay đổi sinh lý: + Giảm: - Theo tuổi - Phụ nữ có thai - Chế độ ăn nghèo purin - Dùng thuốc ngừa thai, estrogen, Vit C, Salicylat liều cao Độ thải Creatinin ( Clearance = C) Nam: 98 - 156 ml/ phút Nữ: 95 - 160 ml / phút - Bình thường: C > 100 ml /phút ( >1,66ml/ giây) - Dựa vào C: tiên lượng tình trạng suy thận: C > 50/ phút: suy thận phục hồi C: 50 - 30 / phút: thận bù tốt C: 30-10 /phút: suy thận nặng C < 10 ml/phút: phải loại bỏ ghép thận TN : SỬ DỤNG GIẤY NHÚNG NƯỚC TIỂU THÔNG SỐ Dùng loại giấy thử URITEST gồm có thơng số : pH- Glucose - Protein Công thức : Thông số pH : Methyl red 0,03 mg Bromothymol blue 1,3 mg Thông số Glucose : Glucose oxydase 0,48 mg Peroxydase 0,57 ml Thông số Protein : Tetra Bromophenol blue 0,3 mg Citric acid 32 mg Sodium citrate 5,7 mg Chỉ định • Để chẩn đốn theo dõi bệnh tiểu đường bệnh liên quan đến thận đường tiết niệu Cách dùng • Mẫu NT : Thường nước tiểu , lắc , chưa quay ly tâm • Nhúng tồn băng giấy thử vào nước tiểu giây , lấy để hóa chất khơng bị tan vào nước tiểu Kéo nhẹ đầu băng thử thành ống cho hết giọt nước tiểu thừa • Lấy băng thử đọc kết : So sánh màu băng thử với gamme màu chuẩn in hộp đựng giấy thử vào thời gian ấn định • PH Protein đọc liền sau nhúng • Glucose đọc sau nhúng phút • Chú ý : Phải tôn trọng thời gian đọc kết Sau phút , độ đậm màu phản ứng khơng cịn xác để chẩn đốn kết Xác định kết pH : màu vàng cam nâu thị màu tùy theo pH nước tiểu Ở người bình thường , nước tiểu có pH khoảng từ - Glucose :Khi nước tiểu có Glucose : vùng thị màu chuyển từ trắng ngà hồng ( âm tính ) sang màu tím ( dương tính ) Màu tím đậm nồng độ đường cao Chú ý : - Kết yếu giả âm : Tỉ trọng nước tiểu cao Nồng độ ceton cao BN dùng nhiều Vitamin C • Kết giả dương dụng cụ đựng nước tiểu có lẫn chất sát trùng có Javel, xà bơng , bột giặt Protein : Khi nước tiểu có protein vùng thị chuyển từ màu vàng sẫm ( âm tính ) sang màu xanh rêu ( dương tính ) Chú ý : Kết giả dương : • Có Alcol nước tiểu ( màu khơng bền ) • Dụng cụ chứa nước tiểu có Acetat amonium • Ở số bệnh nhân sau dùng thuốc QUININ Cách bảo quản • Đậy chặt nắp lại sau lấy băng thử khỏi hộp • Bảo quản nơi khô ( độ ẩm < 60 % ) , nhiệt độ < 30 0C Tránh ánh sáng , không cất giữ tủ lạnh • Không lấy chất hút ẩm khỏi hộp • Không sờ tay hay làm bẩn vùng băng thử tẩm hóa chất • Khơng sử dụng băng giấy thử hết hạn dùng Biện luận kết pH : • BT: 5- 6, thay đổi từ - • Thấp lúc sáng sớm ( chưa ăn ) cao sau bữa ăn • < : acid mạnh • > : kiềm Protein : • NT BT: chứa lượng nhỏ albumin globulin , thông thường số lượng thấp khơng đủ để tạo phản ứng dương tính giấy nhúng nước tiểu • Khi XN đạm niệu ( protein nước tiểu ) điều quan trọng nước tiểu phải cô đặc cách đầy đủ , nước tiểu lần tiểu vào buổi sáng sớm tốt • Độ nhạy : > 0,15 g albumin /L nước tiểu Biện luận kết Glucose • BT: khơng có nước tiểu • Có : bệnh lý sau : Tiểu đường , Stress , viêm tụy cấp , hội chứng Cushing , sau gây mê • Độ đặc hiệu : Chuyên biệt cho Glucose • Độ nhạy cảm : >4 mmol Glucose /L nước tiểu(0,5g/L) TN 5: XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN CỦA NƯỚC TIỂU BẰNG MÁY PTNT TỰ ĐỘNG(CLINITEK 50 ) I.NGUYÊN TẮC HOẠT ĐỘNG CỦA MÁY Là máy quang kế sử dụng để đo bán định lượng 10 thông số nước tiểu cách sử dụng nhúng nước tiểu Nguyên tắc phản ứng xét nghiệm riêng biệt thử • Que thử 10 thông số : Glucose bilirubin cetone tỉ trọng máu pH protein urobilinogen nitrite bạch cầu Test cc thông tin liên quan tới : - tình trạng chuyển hóa đường - chức gan , thận , thăng kiềm toan nhiễm trùng đường tiểu Độ nhạy vùng thử • • • • • • • Glucose 4-7 mmol/L ( 75 – 125 mg/dl ) Bilirubin 7-14 mol /L ( 0,4-0,8 mg/dl ) Ceton 0,5-1,0 mmol /L ( 5-10mg/dl ) Máu 50-620 g / L ( 0,015-0,062 mg/dl ) Protein 0,15-0,30 g /L ( 15-30mg/dl ) Nitrite 13-22 mol /L ( 0,06 – 0,1 mg/dl ) Bạch cầu 5-15 Tế bào / l II CÁCH SỬ DỤNG : bước Bước : Bật công tắc máy , thử nghiệm thực hình lên chữ READY FOR TEST ( Lưu ý : Loại que thử phải phù hợp với máy ) Bước 2: Lấy que thử từ chai đựng que thử đậy chặt nắp lại Bước 3: Nhúng sâu que thử vào mẫu nước tiểu cần thử lấy lên Bước 4: Ấn nút xanh ngón tay trái Bước 5: Đồng thời thấm giọt nước tiểu dư cách dựng nghiêng que thử lên giấy thấm mềm Bước 6: Đặt que thử lên bàn thử theo hướng vị trí Khay thử tự động kéo vào bên máy PTNT Chú ý : Bước phải thao tác nhanh vòng 10 giây Bước 7: Khi thử nghiệm kết thúc , bỏ que thử sử dụng , lau khay thử thấy cần giấy mềm Bước 8: Ghi kết ... THÀNH PHẦN CỦA NƯỚC TIỂU BẰNG MÁY PTNT TỰ ĐỘNG(CLINITEK 50 ) I.NGUYÊN TẮC HOẠT ĐỘNG CỦA MÁY Là máy quang kế sử dụng để đo bán định lượng 10 thông số nước tiểu cách sử dụng nhúng nước tiểu Nguyên... nghiệm 4: Sử dụng giấy nhúng TS • Thí nghiệm : Sử dụng giấy nhúng TS Thí nghiệm Định lượng Acid Uric * MẪU THỬ: • HT • Ht: chống đơng heparin hay EDTA • NT: pha lỗng tỉ lệ NT + 10 Nước cất I... Mẫu NT : Thường nước tiểu , lắc , chưa quay ly tâm • Nhúng tồn băng giấy thử vào nước tiểu giây , lấy để hóa chất khơng bị tan vào nước tiểu Kéo nhẹ đầu băng thử thành ống cho hết giọt nước tiểu