Chương PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH VI SINH VẬT TRONG NƯỚC VÀ THỰC PHẨM PHƯƠNG PHÁP LẤY MẪU THỰC PHẨM 1.1 Kế hoạch lấy mẫu Mật độ vi sinh vật thực phẩm qui địnhgiới hạn với số lượng nhật định tuỳ theo nhóm vi sinh vật cần phân tích yêu cầu đối tượng thực phẩm luật vệ sinh an toàn thực phẩm Đối với vi sinh vật gây bệnh thông thường yêu cầu không diện khối lượng thực phẩm xác định Số lựơng vi sinh vật xác định thực phẩm khơng phản ánh xác số lượng vi sinh vật thực tế có mẫu, khoảng giới hạn theo thông lệ thiết lập để nhận biết mẫu thực phẩm đạt hay không đạt yêu cầu vi sinh vật Thông thường khoảng giới hạn mật độ vi sinh vật thực phẩm xác định khoảng sau: Khoảng chấp nhận mật độ vi sinh vật nằm thông số chấp nhận (m), khoảng sát mép giới hạn mật độ vi sinh lớn giới hạn chấp nhận nhỏ giới hạn (M) Khoảng không chấp nhận mật độ cao giới hạn M Giới hạn M thường cao 10 lần so với thông số giới hạn m Ví dụ tổng số vi sinh vật sản phẩm trứng trùng Pasteur có yêu cầu sau: n = 5, c = 2, m = x 104, M = 106 Trong n số mẫu thử nghiệm, c số mẫu phép nằm khoảng sát mép m M Kế hoạch lấy mẫu loại dùng cho thử nghiệm phân tích vi sinh vật gây bệnh Theo kế hoạch này, số mẫu lấy 5,10, 20, 25 hay nhiều để phân tích định tính nhằm phát có hay khơng có diện vi sinh vật khối lượng mẫu thử nghiệm Sẽ khơng chấp nhận có số mẫu có diện vi sinh vật gây bệnh (n = 5,10,20 hay nhiều hơn, c = n = 0) Số lượng mẫu thử phụ thuộc vào mối nguy hiểm loại thực phẩm có diện vi sinh vật gây bệnh Thực phẩm có mối nguy hiểm cao loại thực phẩm không qua gia nhiệt trước sử dụng hay thực phẩm có tính nhạy cảm cao, ví dụ thực phẩm dành cho người già trẻ em … Lấy mẫu cho việc phân tích Salmonella: Số lượng đơn vị mẫu để phân tích Salmonella phụ thuộc vào yếu tố đặc trưng loại thực phẩm, chia thành nhóm thực phẩm sau: - Nhóm thực phẩm dùng cho đối tượng nhạy cảm với Salmonella không qua trình chế biến trước sử dụng, ví dụ thực phẩm dành cho người già, dành cho người bệnh hay dành cho trẻ em Trong nhóm số lượng đơn vị mẫu phải lấy khoảng 60 đơn vị mẫu - Nhóm thực phẩm dành cho người trưởng thành Số lượng đơn vị mẫu lấy thường 30 đơn vị - Nhóm thực phẩm mà chế biến q trình có qua giai đoạn tiêu diệt Salmonella Bước chế biến diển q trình sản xuất hay chế biến gia đình Trong nhóm này, số lượng mẫu lấy thường 15 đơn vị Mỗi đơn vị mẫu lấy 100g, thông thường lấy nguyên đơn vị sản phẩm Đơn vị mẫu lấy ngãu nhiên cho mẫu đại diện cho lơ sản phẩm Trong trường hợp phải tách mẫu vào vật dụng lấy mẫu phải lấy mẫu kiểm chứng để đảm bảo điểu kiện bảo quản mẫu tương tự với điều kiện lấy mẫu Nếu đơn vị sản phẩm không đủ khối 53 lượng mẫu cần thiết, trường hợp đơn vị sản phẩm đóng gói nhỏ 100g, đơn vị mẫu phải lấy nhiều đơn vị sản phẩm Tại phịng thí nghiệm, chuyên viên phân tích lấy đại diện 25g (hay khối lượng theo yêu cầu phân tích) từ đơn vị mẫu để phân tích Salmonella Trong trường hợp số đơn vị sản phẩm nhiều số đơn vị mẫu, đơn vị sản phẩm tổ hợp cách vơ trùng phân tích viên lấy đại diện khối lượng mẫu phân tích 1.2 Phương pháp lấy mẫu bảo quản Giá trị kết phát hành phịng thí ngiệm phân tích phụ thuộc nhiều vào phương pháp qui trình lấy mẫu Kế hoạch lấy mẫu áp cho trường hợp cụ thể để mẫu mang vể phịng thí nghiệm phản ánh tình trạng sản phẩm cần phân tích Trong nhà máy sản xuất, thơng thường mẫu lấy với khối lượng nhỏ nhiều thời điểm công đoạn khác trình sản xuất, khơng nên lấy khối lượng lớn mẫu vị trí hay cơng đoạn Có thể tập trung lấy mẫu cơng đoạn thành phẩm nhiều hơn, số trường hợp cần thiết tập trung lấy mẫu vài cơng đoạn trọng yếu q trình sản xuất Dụng cụ lấy mẫu thùng chứa mẫu: Thường sử dụng bình nhựa có nắp nhơm hay chất dẻo, báo bao nylon để chứa mẫu Không nên sử dụng bình thuỷ tinh để chứa mẫu bị gây nhiễm mẫu hay gây nạn cho người phân tích Dụng cụ lấy mẫu thường làm loại chất liệu khác khác vật dụng dùng để lấy mẫu đông lạnh khoan tay vô trùng, hay dao rửa dung dịch tẩy trùng Không nên lấy vào mảng băng Sử dụng thìa, kéo … mẫu vào bình chứa Đối với thực phẩm đóng gói, lấy mẫu từ gói lớn từ lấy đơn vị bao gói nhỏ Mẫu phải lấy khoảng 100-250g cho mẫu tuỳ theo yêu cầu phân tích, phải lấy nhiều vị trí sản phẩm hay công đoạn cho khối lượng nhỏ mẫu đại diện cho sản phẩm Đối với loại mẫu thịt hay cá, nơi nhiễm vi sinh chủ yếu bể mặt, sử dụng dụng cụ lấy mẫu bể mặt để quét bể mặt sản phẩm hay cắt mẫu bể mặt với độ dày khoảng 2-3mm Vận chuyễn bảo quản mẫu: Các mẫu sau lấy bảo quản độc lập với thùng bảo quản mẫu, làm lạnh bao nước đá Nước đá phải không tan chảy suốt q trình vận chuyển mẫu đến phịng thí nghiệm Tại phịng thí nghiệm mẫu chuyển vào tủ đơng hay phân tích thời gian Nếu khơng thể phân tích ngay, mẫu phải bảo quản –20 oC phân tích Nếu mẫu khơng thể bảo quản đơng, phải bảo quản tủ lạnh 0-4 oC không 36 Các loại thực phẩm đồ hộp, thực phẩm có độ ẩm thấp, hay thực phẩm khó hư hỏng bảo quản nhiệt độ phịng phân tích 1.3 Rã đơng trước phân tích Phải sử dụng kỹ thuật rã đơng điểu kiện vơ trùng trước phân tích mẫu Trong trường hợp phải phối trộn mẫu trước phân tích, mẫu phải rã đông dụng cụ chứa mang đến phòng kiểm nghiệm Tránh trường hợp chuyển mẫu sang bình chứa thứ hai rã đông Thông thường nhiệt độ rả đông 2-5oC khoảng 18 giờ, cần phải rã đơng nhanh thực 45oC vòng 15 phút Khi rã đông ỡ nhiệt độ cao, phải liên tục lắc bình chứa mẫu để tăng tốc độ rã nhiệt độ mẫu đồng 54 1.1 Đồng mẫu Sự phân phối vi sinh vật mẫu khơng đồng Để đảm bảo tính đồng mẫu phân tích, mẫu lỏng lắc kỹ trước phân tích Các mẫu rắn lắc hay đão trộn dụng cụ chuyên dùng điều kiện vô trùng Sau đảm bảo mẫu đồng nhất, lấy lượng mẫu xác định để phân tích tùy theo yêu cầu tiêu cụ thể, ví dụ tiêu định lượng gam, khối lượng mẫu trích để phân tích 10g, tiêu định tính Salmonella khối lượng mẫu trích 25 gam … 1.2 Cân mẫu Cân lượng mẫu xác định để phân tích tuỳ theo tiêu yêu cầu trên, cân xác khối lượng mẫu định, sai số phép cân ±0.1g Lượng mẫu trích để phân tích cho vào bình chứa nhựa hay bao nhựa vơ trùng LẤY VÀ BẢO QUẢN MẪU NƯỚC Tiêu chí việc lấy mẫu mẫu phải đại diện mức cao nước cần phân tích Để đạt mục đích này, người lấy mẫu cần phải tuân thủ qui định qui trình việc lấy mẫu phân tích 2.1 Dụng cụ chứa mẫu Các dụng cụ lấy mẫu nhằm để phân tích vi sinh vật chai lọ đã súc rửa cẩn thận, tráng lại lần cuối nước cất khử trùng trước sử dụng đế lấy mẩu Có thể sử dụng túi nhựa khử trùng để làm dụng cụ chứa mẫu Khử chlorin độc tính kim loại mẫu nước Thêm nhân tố có tính khử vào trong chai lọ dùng đẩ chứa mẫu để khử chlorin hay halogen khác Trong trường hợp khơng có tác nhân khử lọ lấy mẫu, sau thu mẫu nước có chứa chlorin chai lọ lấy mẫu khơng đóng nắp Nhân tố khử thường sử dụng đế khử chlorin nước sodium thiosulphate, chất trung hoà khử các haologen nước nhằm ngăn cản tác động chúng lên vi sinh vật mẫu thời gian vận chuyển Sự loại bỏ nhân tố tác động lên vi sinh vật trình vận vận chuyển bảo quản mẫu để sau phân tích số lượng vi sinh vật phản ánh mật độ chúng lấy mẫu Hàm lượng sodium thiocianate cho vào lọ cho sau lấy mẫu chúng phịng thích vào nước với nồng độ 100mg/l Trong chai lấy mẫu tích 120ml thêm vào 0,1ml dung dịch Na2S2O3 10% trung hoà hết chlorin mẫu với nồng độ 15mg/l nước uống hàm lượng chất khử chlorin sử dụng thấp hơn, khoảng 0,1ml dung dịch Na 2S2O3 nồng độ 3% lọ chứa 120ml mẫu Nồng độ chất khử phóng thích vào mẫu nước 18ml/l trung hoà nổng độ chlorin mẫu 5ml/l Trong trường hợp mẫu nước khử trùng với hàm lượng chlorin cao, nồng độ chất cho vào lọ lấy mẫu phải đạt 100ml/l Các tác nhân khử chlorin cho vào lọ lấy mẫu trước khử trùng Có thể sử dụng phương pháp khử trùng ướt hay khử trùng khô dụng cụ lấy mẫu Ngày có túi lấy mẫu chứa sằn tác nhân khử chlorin bán hàng vật tư phịng thí nghiệm Trong trường hợp mẫu nước chứa kim loại đồng, kẽm kim loại nặng … với hàm lượng cao hay nước thải, dụng cụ lấy mẫu phải cho vào tác nhân khử độc tính kim loại Tác nhân đặc biệt cần thiết thời gian vận chuyển mẫu Chất khử độc tính kim loại nặng sử dụng muối sodium EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid) với hàm lượng phóng thích vào mẫu 372ml/l EDTA 55 điều chỉnh vể pH 6,5 trước dùng EDTA cho vào dụng cụ lấy mẫu trước khử trùng, hàm lượng cho vào 0.3ml dung dịch EDTA 15% chai lấy 120ml mẫu Có thể kết hợp sodium thiocianat với EDTA dụng cụ lấy mẫu Qui trình lấy mẫu Mẫu lấy vào dụng cụ lấy mẫu, không lấy đầy chai mà mà phải chừa khoảng không chai chứa mẫu để đảm bảo mẫu trộn cách lắc trước phân tích Mẫu lấy phải đại diện cho nước thử nghiệm, phải sử dụng biện pháp vô trùng để tránh trường hợp mẫu bị nhiễm từ bên hay nhiễm chéo mẫu với Trong trình lấy mẫu, giữ chặc chai nước đầy chai, giữ nút hay nắp chai không nhiễm lấy mẫu Sau lấy đầy mẫu phải nút miệng chai Cách thực lấy mẫu tiến hành sau: - Lấy mẫu từ nguồn sông, suối, hồ chứa cách cầm chai lấy mẩu tay, gần vị trí đáy chai, đưa cổ chai hướng xuống đưa sâu vào mặt nước Xoay nhẹ để cổ chai nghiên lên bề mặt nước miệng chai hường phía dịng chảy Trong trường hợp khơng có dịng chảy nước hồ hay bồn chứa phải tạo dòng chảy nhân tạo cách xoay chai theo hướng nằm ngang đẩy chai di chuyển phía theo hương miệng chai Trong trường hợp lấy mẫu thuyền, mẫu phải lấy phía trước mũi thuyền Nếu khơng thể lấy cách thức này, buộc vật nặng vào bên đáy chai đưa từ từ vào nước Trong trường hợp tránh chai lấy mẫu tiếp xúc với bờ hay đáy suối hai bồn chứa - Có dụng cụ đặc biệt cho phép mở nắp lấy mẫu bên mặt nước sử dụng để lấy mẫu nước sâu hồ hay bồn chứa Có nhiều bình lất mẫu sâu hoạt động theo nhiều cách khác phổ biến bình lấy mẫu ZoBell-J-Z Các dụng cụ lấy mẫu nước tự động theo yêu cầu ngày bán hàng vật tư phịng thí nghiệm - Lấy mẫu nước sinh hoạt: Nếu lấy mẫu nước từ vòi hệ thống cấp nước dịch vụ, chọn vòi cấp nước trực tiếp từ đường ống chính, khơng nên lấy từ thùng hay bồn chứa Mở vòi nước thật lớn để chảy từ 2-3 phút, thời gian nhằm đề rửa hệ thống vòi nước trước lấy mẫu, giảm vòi nước để lấy mẫu vào bình chứa Trong số trường hợp cần phải làm vòi trước lấy mẫu, dung dịch sodium hypochorite cho chảy qua vòi trước lấy mẫu, sau khử trùng, phải mở nước vòi cho chảy khoàng 2-3 phút trước lấy mẫu vài chai Khơng lấy mẫu từ dịng nước chảy tràng bên ngồi vịi Để ngăn ngừa dịng nước chảy tràn từ bên ngồi vịi vào mẫu, dùng dụng cụ phễu lọc để ngăn ngừa dòng nước tràn từ bên ngồi vào bình chứa mẫu Cũng loại bỏ nhiễm từ bên ngồi dịng nước chảy tràn, cho nước nóng chảy qua vòi khoảng hai phút, làm lạnh từ 2-3 phút sau lấy mẫu vào bình Nếu lấy mẫu nước từ giếng bơm tay, bơm nước để rửa vòi giếng khoảng phút trước lấy mẫu Nếu giếng đào trang bị máy bơm, trực tương tự sau khời động máy Trong trường hợp giếng đào khơng có trang bị máy bơm, mẫu lấy trực tiếp từ giếng cách buộc chai lấy mẫu vào vật nặng bên đáy Phải thật cẩn thận để tránh nhiễm bẩn từ vật nặng hay nước bề mặt giếng Trong trường hợp lấy mẫu nước uống, phải lấy mẫu giai đoạn cuối trình sản xuất, vị trí phân phối mẫu nước uống phải chọn lọc để đảm bảo tích lũy có hệ thống suối tháng Phải xem xét thật kỹ vị trí hệ thống phân bổ mẫu, điểm chiết để đảm bảo chất lượng vi sinh vật thơng qua tồn hệ thống để đảm bào khơng có vị trính nhiểm vi sinh vật hay nhiểm chéo qua trình tiên tục hệ thống tượng bể ống hay giảm áp lực qua trình khử trùng hay nguyên nhân khác Vị trí lấy mẫu 56 vịi nước cơng cộng, nơi kinh doanh ngành thực phẩm, nhà hàng hay giếng nước nhân … Nhưng đặc biệt quan trọng lấy mẫu mạng lưới cung cấp nước cho cộng đồng Sự lấy mẫu, kế hoạch tầng suất vị trí lấy mẫu phải lên chương trình có tham vấn chuyên gia vệ sinh y tế công cộng, ngành cấp nước - Lấy mẫu nguồn cấp nước: Mẫu lấy trực tiếp từ từ sông, suối, lạch, ao, giếng hay hồ chứa cho chúng đại diện cho nguồn nước cung cấp cho người sử dụng Mẫu không nên lấy gần bờ hay xa nơi đặt ống bơm nước, không nên lấy mẫu sâu hay cạn so với vòi ống bơm Mẫu lấy gần miệng ống bơm, đại diện cho nguồn chất lượng nguồn cấp nước Kích cở mẫu: Thể tích mẫu phải đủ để đáp ứng yêu cầu phân tích phịng thí nghiệm Thể tích mẫu phải lấy khơng nhỏ 100ml Mẫu sau lấy phải ghi đầy đủ xác ký hiệu, tên liệu mô tả Không tiến hành phân tích mẫu khơng đầy đủ liệu u cầu Thời gian nhiệt độ bảo quản mẫu: Nếu có thể, phân tích tiêu vi sinh sau lấy mẫu để tránh thay đổi khơng lường trước Nếu mẫu khơng thể phân tích vòng sau lấy mẫu, phải bảo quản thùng lạnh trước vận chuyển đến phịng thí nghiệm Nếu kết phân tích có liên quan đến pháp luật, phải sử dụng phương tiện vận chuyển đặc biệt để chuyển mẫu đến phịng thí nghiệm khoảng thời gian với qui trình bảo quản đặc biệt Nhiệt độ bảo quản nước uống, nước suối, hay nước bị ô nhiễm 10 oC thới gian vận chuyển không Bảo quản tủ lạnh phịng thí nghiệm khơng dược q Trong điều kiện bắt buộc vận chuyển mẫu phịng thí nghiệm nhanh giờ, phải xem xét đến việc trang bị phương tiện phân tích vị trí lấy mẫu hoặt sử dụng qui trình ủ chờ Tuy nhiên yêu cầu khó đáp ứng Trên thực tế tiêu yêu cầu thới gian vận chuyển bào qu ản không 24 Không chấp nhận mẫu gởi đến phịng thí nghiệm đường bưu điện khơng bảo quản theo yêu cầu Thời gian nhiệt độ bảo quản mẫu phải lưu trữ đế sau phân tích dùng vào việc xử lý số liệu ĐỊNH LƯỢNG TỔNG SỐ VI SINH VẬT HIẾU KHÍ 3.1 Định nghĩa Vi sinh vật hiếu khí: vi sinh vật phát triển để hình thành khuẩn lạc điều kiện có diện ơxy phân tử Số đơn vị hình thành khuẩn lạc (cfu – colony forming unit) số khuẩn lạc xuất mơi trường nụơi cấy Số lượng đơn vị hình thành khuẩn lạc cho phép ước đoán số lượng vi sinh vật đơn vị khối lượng thực phẩm Nguyên tắc Để xác định số lượng vi sinh vật đơn vị khối lượng thực phẩm phương pháp đếm số lượng khuẩn lạc phải qua q trình đồng nhất, pha lỗng mẫu thành nồng độ xác định Chuyển thể tích xác định độ pha lỗng đồng vào mơi trường ni cấy Các khuẩn lạc hình thành môi trường sau ủ xem chúng hình thành từ tế bào đơn lẻ Tuỳ theo yêu cầu cụ thể việc phân tích, đĩa môi trường sau cấy mẫu ủ điều kiện nhiệt độ thời gian khác Theo yêu cầu tiêu chuẩn nhiều quốc 57 gia, tiêu ủ 30oC khoảng thời gian khoảng ngày Tuy nhiên số yêu cầu khác ủ nhiệt độ 20 - 22oC thời gian Đếm tất khuẩn lạc xuất đĩa, vào độ pha lỗng thể tích cấy để qui tổng số vi sinh vật đơn vị khối lượng mẫu thực phẩm Chỉ tiêu tổng số vi sinh vật hiếu khí dùng để đánh giá chất lượng mẫu khía cạnh vi sinh vật, qua đánh giá khả hư hỏng, thời hạn bảo quản sản phẩm thực phẩm Tổng số vi sinh vật hiếu khí cịn tiêu đánh giá mức độ vệ sinh trình chế biến, bảo quản thực phẩm, nước uống hay sản phẩm khác 3.3 Mơi trườnng vật liệu phân tích - Mơi trừơng Plate Count Agar có pH 7.0 ± 0.2 Mơi trường phân phối vào bình thuỷ tinh hay ống nghiệm Hấp khử trùng 121 oC 15 phút Bảo quản tủ lạnh từ 2–8oC Trước sử dụng môi trường phải đun chảy làm nguội 45 oC bể điều nhiệt - Dung dịch pha loãng saline pepton water: gồm 8.5 gam NaCl 1.0gam pepton Dung dịch phân phối vào bình chứa 0.5-1.0 lít phân phối vào ống nghiệm với thể tích xác 9.0ml sau khử trùng 3.4 Chuẩn bị mẫu trước phân tích- Dùng dụng cụ kéo, kẹp khữ trùng cân xác 10.0g mẫu vào bao PE Tất điều kiện làm việc thao tác phải tiến hành điều kiện vô trùng Thêm vào lượng mẫu 90 ml dung dịch pha loãng Saline Pepton Water Sau đồng nhận dung dịch mẫu có độ pha loãng 10 -1.- Đồng mẫu máy dập mẫu, thời gian dập mẫu phụ thuộc vào tính chất lý mẫu, không 2,5 phút - Dịch mẫu sau đồng pha loãng theo dãy thập phân cách dùng pipet vô trùng chuyển ml dịch mẫu vào ống nghiệm chứa ml dung dịch pha loãng Saline Pepton Water , tránh tiếp xúc pipet với dung dịch pha loãng, đồng mẫu ống nghiệm máy lắc dùng pipet vô trùng khác hút đảo dịch mẫu lên xuống -10 lần Dùng pipet chuyển ml dịch mẫu vào ống thứ hai chứa ml dung dịch pha loãng Tiếp tục có dung dịch mẫu với độ pha loãng 10 -2; 10-3; 10-4; …cho đến có đủ nồng độ pha lỗng cần thiết 3.5 Cấy mẫu Chọn hai hay ba độ pha loãng liên tiếp cho ml chứa 25-250 tế bào vi sinh vật để cấy Dùng pipet vô trùng chuyển ml dịch mẫu pha loãng chọn vào đĩa petri vô trùng Mỗi nồng độ cấy vào hay đĩa Sau cấy, đổ vào đĩa 10-15 ml môi trường Plate Count Agar đun chảy để ổn định 45 oC.Trộn dịch mẫu với môi trường cách lắc trịn đĩa petri xi ngược chiều kim đồng hồ, chiều 3-5 lần sau đổ môi trường Đặt đĩa mặt phẳng ngang cho agar đông đặc Lật ngược ủ o đĩa tủ ấm nhiệt độ 30.0±1.0 C (hay yêu cầu nhiệt độ khác) thời gian 72 Trong số yêu cầu, nhiệt độ ủ đĩa thời gian ủ thay đổi.3.6 Đếm kết Đếm tất số khuẩn lạc xuất đĩa sau ủ Chọn đĩa có số đếm từ 25 đến 250 để tính kết Số lượng tổng số vi sinh vật gam mẫu tính sau: A= Trong đó: N (cfu/g) n1 x V1 x f1 + … + ni x Vi x fi A: số lượng vi sinh vật gam mẫu N: tất khuẩn kạc đếm đĩa chọn ni: số lượng đĩa cấy độ pha lỗng thứ i V: thể tích dịch mẫu cấy vào đĩa 58 fi: độ pha loãng tương ứng Ví dụ trường hợp phân tích mẫu cụ thể nhận kết sau: Nồng độ pha loãng Kết quả: Đĩa Đĩa A= 235 + 246 + 26 x x 0,001+ x 1x 0.0001 10-3 235 246 10-4 26 21 ≅ 2.4 x 105(cfu/g) Các kết tổng số vi sinh vật hiếu khí thường biểu diển dạng số mũ cùa số thập phân Trường hợp có vi sinh vật mọc loang, tính vết loang khuẩn lạc Nếu số khuẩn lạc loang chiếm 1/3 đĩa phải ghi nhận điều đánh dấu kết nhận Nếu độ pha loãng cao nhất, số khuẩn lạc đếm đĩa >250, ví dụ nồng độ 10 -5 số đếm lớn 250, kết ghi: >2.5 x 10 CFU/g Nếu độ pha loãng thấp nhất, số khuẩn lạc đếm đĩa