Môn: SINH HỌC PHÂN TỬ Đề tài: Kỹ Thuật Tách Chiết Nucleic Acid LỚP : ĐHSH07LT NHÓM : 10 GVHD : Trần Hồng Bảo Quyên Thành Viên Nhóm 2 1. Nguyễn Mậu Hòa Ân 2. Nguyễn Văn Dũng 3. Lương Văn Hải 4. Phạm Thị Bích Liên 5. Trần Thị Kim Ngân 6. Trần Quang Sơn 7. Phan Phúc Thiện 8. Trần Thiện Tuấn  Các bước cơ bản và phương pháp tách chiết nucleic acid.  Các bước tách chiết DNA, RNA, mRNA  So sánh tách chiết DNA/ RNA/ mRNA  So sánh tách chiết DNA từ thực vật, động vật và vi khuẩn. 3 Các bước cơ bản – phương pháp tách chiết ACID NUCLEIC. 4 Các bước tách chiết DNA. Phương pháp tách chiết DNA cơ bản gồm 3 bước BƯỚC 1: Phá vỡ màng tế bào và màng nhân: − Nghiền tế bào và mô trong hỗn hợp tẩy : SDS, protease thủy phân protein, enzym lysozym, EDTA, . Hỗn hợp này sẽ phá vỡ màng tế bào và màng nhân, phóng thích DNA ra môi trường đồng thời protein liên kết với DNA cũng tự bị phân hủy. 5 Phá vỡ màng tế bào và màng nhân 6 Phá vỡ màng tế bào và màng nhân 7 BƯỚC 2: Loại bỏ thành phần không không phải DNA, chủ yếu là protein.  Gây tủa protein bằng dd chloroform: phenol và enzym protein K. Sau khi ly tâm ống nghiệm gồm 3 lớp dd: lớp phenol nằm dưới đáy ống nghiệm, giữa là protein, trên cùng là dịch lỏng chứa DNA. 8 Các bước tách chiết DNA. Các tách chiết DNA. BƯỚC 3: Làm kết tủa acid nucleic 2 cách thông dụng: − Dùng ethanol nồng độ cao (ethanol: mẫu là 2,5: 1) và ở nhiệt độ thấp, trong môi trường có lực ion cao (nồng độ muối cao). − Dùng isopropanol (isopropanol:mẫu là 1:1), không cần sự hiện diện của muối các DNA trọng lượng phân tử thấp không bị kết tủa, loại bỏ khỏi dịch chiết bằng cách này 9 Các bước tách chiết DNA.  Tủa thu nhận bằng 2 cách trên được thu nhận bằng ly tâm. Sau đó, rửa kết tủa vài lần trong ethanol 70% để loại bỏ các muối hoặc các vết isopropanol còn dính trong mẫu, sau đó xử lý bằng RNase để loại bỏ RNA. Thu được DNA  Làm khô và hòa tan trong dd TE hoặc nước khử ion để tiếp tục nghiên cứu 10 [...]... Sắc ký lỏng hiệu suất cao (high performance liquid chromatography) là kỹ thuật mới có độ phân giải cao dùng trong tinh sạch các oligonucleotide có độ phân gỉai 1 nucleotide, plasmid hay các đoạn DNA So sánh tách chiết DNA, RNA và mRNA Sự giống nhau: - Các bước tách chiết cơ bản giống nhau 31 So sánh tách chiết DNA, RNA và mRNA DNA RNA mRNA 1 Phá màng tế bào, màng nhân Chất tẩy (SDS) + siêu âm, Thiocyanate... Hấp phụ trên silica Thu trên màng lọc 32 So sánh tách chiết DNA từ thực vật, động vật và vi khuẩn Giống nhau  Hầu hết tách chiết ở các loại tế bào động vật, thực vật, vsv đều theo nguyên lý cơ bản là gồm 3 bước: phá vỡ màng tế bào, làm biến tính các loại ngoài DNA (protein, RNA, ) để thu dịch có chứa DNA, kết tủa và thu nhận DNA 33 So sánh tách chiết DNA từ thực vật, động vật và vi khuẩn Thực vật Mẫu... bước tách RNA khỏi DNA bằng enzym Dnase Thu được RNA toàn phần 15 Các bước tách chiết mRNA  RNA tế bào gồm: rRNA (80-85%), tRNA(15- 20%), snRNA ( . và phương pháp tách chiết nucleic acid.  Các bước tách chiết DNA, RNA, mRNA  So sánh tách chiết DNA/ RNA/ mRNA  So sánh tách chiết DNA từ thực vật,. khuẩn. 3 Các bước cơ bản – phương pháp tách chiết ACID NUCLEIC. 4 Các bước tách chiết DNA. Phương pháp tách chiết DNA cơ bản gồm 3 bước BƯỚC 1: Phá vỡ màng