TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA THỦY SẢN TRẦN HOA CÚC ẢNH HƯỞNG CỦA ANTISTRESS LÊN KHẢ NĂNG ĐỀ KHÁNG Edwardsiella ictaluri CỦA CÁ TRA (Pangasianodon hypophthalmus) LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH BỆNH HỌC THỦY SẢN 2009 PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA THỦY SẢN TRẦN HOA CÚC ẢNH HƯỞNG CỦA ANTISTRESS LÊN KHẢ NĂNG ĐỀ KHÁNG Edwardsiella ictaluri CỦA CÁ TRA (Pangasianodon hypophthalmus) LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH BỆNH HỌC THỦY SẢN CÁN BỘ HƯỚNG DẪN TS. ĐẶNG THỊ HOÀNG OANH KS. ĐẶNG THỤY MAI THY KS. NGUYỄN THỊ THÚY LIỄU 2009 PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com i TÓM TẮT Thí nghiệm được tiến hành nhằm tìm hiểu ảnh hưởng của Antistress lên khả năng kháng Edwardsiella ictaluri của cá tra thông qua việc phân tích huyết học sau cho ăn Antistress và theo dõi tỉ lệ chết sau cảm nhiễm. Cá tra giống khỏe cho ăn thức ăn đối chứng có hàm lượng 0% Antistress trong 1 tuần. Sau đó, cá được bố trí thành 4 nghiệm thức cho ăn thức ăn có hàm lượng 0%; 0,2%; 0,4%; 0,6% Antistress trong 8 tuần. Cá còn lai sau thu mẫu huyết học được tiêm 0,1ml vi khuần Edwardsiella ictaluri CAF255, nồng độ 1,2x10 6 tb/ml. Kết quả thu được, số lượng hồng cầu tăng có ý nghĩa thống kê ở nghiệm thức bổ sung 0,4%và 0,6% Antistress so với nghiệm thức đối chứng và trước cho ăn. Tổng bạch cầu, tiểu cầu cao nhất ở nghiệm thức bổ sung 0,2% Antistress. Trong khi đó, nghiệm thức bổ sung 0,4% Antistress lại có số lượng bạch cầu trung tính cao nhất; tế bào lympho, bạch cầu đơn nhân lại cao nhất ở nghiệm thức bổ sung 0,6% Antistress. Tuy nhiên, tất cả sự chênh lệch về bạch cầu không có ý nghĩa thống kê giữa các nghiệm thức. Bạch cầu đơn nhân, đại thực bào tăng trong cùng nghiệm thức trước và sau khi gây cảm nhiễm. Trong khi đó, hồng cầu, tổng bạch cầu, tế bào lympho, tiểu cầu lại giảm. Giữa các nghiệm thức sau khi gây cảm nhiễm, số lượng hồng cầu, tổng bạch cầu, tế bào lympho cao nhất ở nghiệm thức bổ sung 0,6% Antistress. Bạch cầu đơn nhân; đại thực bào cao nhất nghiệm thức bổ sung 0,4% Antistress. Bạch cầu trung tính cao nhất ở nghiệm thức bổ sung 0,2% Antistress. Sau cảm nhiễm, thu được tỉ lệ cá chết thấp nhất ở nghiệm thức bổ sung 0,2% Antistress là 83%. Tỉ lệ cá chết cao nhất ở nghiệm thức bổ sung 0,6% Antistress là 100%. PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com ii LỜI CẢM TẠ Chân thành gửi lòng biết ơn sâu sắc đến cô Đặng Thị Hoàng Oanh cùng quý thầy cô Bộ môn sinh học và bệnh Thủy Sản đã hết lòng hướng dẫn cũng như luôn tạo mọi điều kiện thuận lợi trong suốt thời gian học tập, thực hiện và hoàn thành luận văn tốt nghiệp. Xin gửi lời biết ơn chân thành đến cô Đặng Thụy Mai Thy và chị Nguyễn Thị Thúy Liễu đã hướng dẫn, giúp đỡ tận tình, truyền đạt những kinh nghiệm quý báu trong suốt quá trình thực hiện luận văn tốt nghiệp Và cũng xin chân thành biết ơn sâu sắc gia đình và những người thân đã tạo mọi điều kiện, sự động viên, tình yêu thương về vật chất cũng như tinh thần trong suốt thời gian học và hoàn thành luận văn. Gửi lời cảm tạ đến tập thể lớp BHTS - K31 đã hết lòng ủng hộ, quan tâm, giúp đõ trong suốt thời gian qua. Chân thành cảm tạ! PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com iii MỤC LỤC Trang Tóm tắt i Lời cảm tạ ii Mục lục iii Danh sách hính v Danh sách bảng vi Danh mục từ viết tắc vii Chương 1: Giới thiệu 1 Chương 2: Lược khảo tài liệu 3 2.1 Sơ lược về vi khuẩn Edwardsiella ictaluri gây bệnh mủ gan trên cá tra 3 2.2 Bệnh lí và sự thay đổi các chỉ tiêu huyết học 3 2.3 Một số thí nghiệm gây cảm nhiễm gần đây 6 2.4 Sản phẩm Antitress và vai trò của vitamin, chất khoáng đối với sức khỏe của cá. 7 Chương 3: Vật liệu và phương pháp nghiên cứu 9 3.1 Thời gian thực hiện đề tài 9 3.2 Địa điểm nghiên cứu 9 3.3 Vật liệu nghiên cứu 9 3.4 Phương pháp nghiên cứu 9 3.5 Phương pháp xử lý số liệu 13 Chương 4: Kết quả và thảo luận 14 4.1 Thí ngiệm 1 14 4.1.1 Về hồng cầu 14 4.1.2 Bạch cầu 15 4.2 Thí nghiệm 2 16 4.2.1 Hồng cầu 16 4.2.2 Các loại bạch cầu 17 4.2.3 Kết quả tỉ lệ chết sau cảm nhiễm 22 PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com iv 4.2.4 Kết quả phân lập vi khuẩn 23 Chương 5: Kết luận và đề xuất 26 5.1 Kết luận 26 5.2 Đề xuất 26 Tài liệu tham khảo 27 Phụ lục 29 PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com v DANH SÁCH HÌNH Hình 2.1 Tế bào hồng cầu 3 Hình 2.2 Tế bào lympho 4 Hình 2.3 Tiểu cầu 4 Hình 2.4 Bạch cầu đơn nhân 5 Hình 2.5 Bạch cầu trung tính 5 Hình 3.1 Thao tác lấy mẫu máu và trải mẫu 12 Hình 3.2 Buồng đếm hồng cầu 12 Hình 4.1 Biểu đồ so sánh số lượng hồng cầu giữa các nghiệm thức sau cho ăn Antistress 14 Hình 4.2 Biểu đồ thể hiện sự biến động số lượng hồng cầu giữa các nghiệm thức trước và sau cảm nhiễm 16 Hình 4.3 Các loại tế bào máu 21 Hình 4.4 Biểu đồ thể hiện tỉ lệ chết giữa các nghiệm thức sau cảm nhiễm E.ictaluri 22 Hình 4.5 Kết quả phân lập vi khuẩn 24 Hinh 4.6 Kết quả nhuộm Gram 24 Hình 4.7 Kết quả test sinh hóa (OF, H 2 S, nitrate, indole) 24 PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com vi DANH SÁCH BẢNG Trang Bảng 4.1 Sự biến đổi số lượng các loại bạch cầu TTN và các NT sau cho ăn .15 Bảng 4.2A Sự biến đổi số lượng các loại bạch cầu của nghiệm thức I trước và sau cảm nhiễm 17 Bảng 4.2B Sự biến đổi số lượng các loại bạch cầu của nghiệm thức II trước và sau cảm nhiễm 18 Bảng 4.2C Sự biến đổi số lượng các loại bạch cầu của nghiệm thức III trước và sau cảm nhiễm 18 Bảng 4.3D Sự biến đổi số lượng các loại bạch cầu của nghiệm thức IV trước và sau cảm nhiễm 19 Bảng 4.3 Sự biến đổi số lượng các loại bạch cầu giữa các nghiệm thức sau cảm nhiễm 20 PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com vii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT Edwardsiella ictaluri (E. ictaluri) Trước cảm nhiễm (TCN) Sau cảm nhiễm (SCN) Trước thí nghiệm (TTN) Đối chứng (ĐC) Nghiệm thức (NT) Tổng bạch cầu (TBC) Hồng cầu (HC) Tiểu cầu (T) Tế bào lympho (L) Tế bào mono (M) Neutrophil (N) Đại thực bào (ĐTB) PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com 1 CHƯƠNG I GIỚI THIỆU Cá tra được xem là loài cá kinh tế được nuôi phổ biến ở các tỉnh Đồng Bằng Sông Cửu Long. Cá thịt không chỉ được tiêu thụ nội địa mà còn là mặt hàng xuất khẩu lớn sang các nước Châu Âu và Mỹ. Hệ quả của việc nuôi cá tra phát triển nhanh không theo quy hoạch dẫn đến hiện trạng bệnh trên cá nuôi hiện nay xảy ra ngày càng nhiều, diễn biến ngày càng phức tạp hơn. Các bệnh thường gặp trên cá tra như: bệnh do ký sinh trùng, vi khuẩn, bệnh do môi trường, dinh dưỡng…trong đó bệnh mủ gan hay còn gọi là gan thận mủ do vi khuẩn Edwardsiella ictaluri gây ra đang rất phổ biến, ảnh hưởng lớn đến giai đoạn cá hương, cá giống và cả cá nuôi thương phẩm với tỉ lệ chết cao (10- 90%), gây thiệt hại lớn cho người nuôi (Từ Thanh Dung và ctv, 2004). Theo tập quán sản xuất của người nuôi cá khi có bệnh là nghĩ ngay đến việc dùng thuốc kháng sinh để điều trị và khi sử dụng lại không chú ý nhiều đến hướng dẫn, công dụng, liều lượng và thời gian sử dụng. Việc sử dụng thuốc kháng sinh trong một thời gian dài dẫn đến hiện tượng kháng thuốc, khi cá phát bệnh sẽ mạnh hơn và việc điều trị khó khăn tốn kém hơn nhiều. Theo điều tra của Nguyễn Tấn Duy Phong, (2008) trên cá tra nuôi ao thâm canh ở hai tỉnh Cần Thơ và An Giang thì chi phí cho thuốc thú y thủy sản là rất lớn (chiếm hơn 7% tổng chi phí sản xuất). Việc lạm dụng kháng sinh và thuốc thú y thủy sản không chỉ tốn kém mà còn làm cho sản phẩm cá tra, basa của Việt Nam gặp nhiều bất lợi khi xuất khẩu sang các thị trường trên thế giới. Để đảm bảo sức khỏe của người tiêu dùng nói chung cũng như đáp ứng tốt các yêu cầu và đòi hỏi ngày càng khắc khe của các thị trường thì việc hạn chế sử dụng kháng sinh, lựa chọn những phương pháp phòng bệnh bằng các giải pháp tích cực làm tăng cường sức đề kháng của cá nuôi đang được nhiều nhà khoa học quan tâm. Do đó, việc cung cấp thức ăn đầy đủ dinh dưỡng cũng như lựa chọn các sản phẩm bổ sung với thành phần chính là các vitamin và chất khoáng để kích thích hệ thống miễn dịch của cá, đặc biệt là hệ thống miễn dịch không đặc hiệu là một hướng đi tích cực trong việc phòng trị bệnh cá ngày nay. Antistress là một hỗn hợp bao gồm vitamin C, β-glucan và khoáng selenium hữu cơ được bổ sung vào thức ăn nhằm tăng cường sức kháng bệnh của cá tra. Vấn đề được đặt ra cho nhà sản xuất là cần có sự đánh giá chính xác về hiệu quả sử dụng cũng như liều lượng Antistress hợp lí cần bổ sung vào thức ăn. Xuất phát từ những thực tế trên đề tài “Ảnh hưởng của Antistress lên khả năng đề kháng Edwardsiella ictaluri của cá tra” được thực hiện. PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com [...]... tìm hiểu ảnh hưởng của Antistress lên khả năng đề kháng Edwardsiella ictaluri của cá tra Nội dung đề tài: 1 Ảnh hưởng của Antistress lên các chỉ tiêu huyết học của cá tra 2 Hiệu quả sử dụng Antistress qua cảm nhiễm với vi khuẩn Edwardsiella ictaluri 2 PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com CHƯƠNG II LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU Sơ lược về vi khuẩn Edwardsiella ictaluri. .. nhất ở nghiệm thức bổ sung 0,2% Antistress 5 Sau cảm nhiễm, thu được tỉ lệ cá chết thấp nhất ở nghiệm thức bổ sung 0,2% Antistress/ tấn thức ăn là 83% 5.2 Đề xuất Tiếp tục bố trí thí nghiệm gây cảm nhiễm kiểm tra khả năng miễn dịch không đặc hiệu của cá tra khi sử dụng Antistress với phương pháp ngâm trong dung dịch vi khuẩn Để đánh giá các thông số huyết học của cá tra giữa các nghiệm thức tại cùng thời... 2006 Khảo sát sự xâm nhập của vi khuẩn gây bệnh mủ gan Edwardsiella ictaluri trên các cơ quan khác nhau của cá tra Luận văn tốt nghiệp Đại Học Khoa Thủy sản Trường Đại Học Cần Thơ 10 Ngô Minh Dung, 2007 Nghiên cứu khả năng gây bệnh của vi khuẩn Edwardsiella ictaluri và Aeromonas hydrophila trên cá tra Luận văn tốt nghiệp Đại Học Khoa Thủy sản Trường Đại Học Cần Thơ 11 Nguyễn Tấn Duy Phong, 2008 Điều tra. .. canh cá tra ao Luận văn tốt nghiệp Đại Học Khoa Thủy sản Trường Đại Học Cần Thơ 12 Nguyễn Thị Thúy Liễu, 2008 Đánh giá các yếu tố miễn dịch không đặc hiệu trên cá tra nuôi trong ao bị bệnh mủ gan Luận văn tốt nghiệp Đại Học Khoa Thủy sản Trường Đại Học Cần Thơ 13 Nguyễn Kim Kha, 2006 Nghiên cứu ảnh hưởng của vitamin C lên khả năng miễn dịch không đặc hiệu của cá tra giống với vi khuẩn Edwardsiella ictaluri. .. lysozyme, Ovà khả năng bảo vệ của huyết thanh chống lại Aeromonas hydrophila Ở chế độ cho ăn glucan 0,1% trên 1 tuần có khả năng nâng cao khả năng miễn dịch không đặc hiệu và kháng bệnh của cá trơn một cách hiệu quả Theo Saurabh and Sahoo (2008) lysozyme là phần tử bảo vệ quan trọng trong hệ thống miễn dịch không đặc hiệu của cá được tìm thấy trong dịch nhày, tế bào lympho, plasma và dịch lỏng ở cá Theo... test sinh hóa (OF, H2S, nitrate, indole) 1: Có khả Oxy hóa 2: Có khả năng lên men 3: Không có khả năng sinh H2S 4: Phản ứng nitrate (+) 5: Không có khả năng tạo sản phẩm indole 24 PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com Kết quả chạy PCR cũng thu được kết quả có vi khuẩn E ictaluri hiện ở vạch 407 pb Các kết quả này giống với ghi nhận của Waltman et al (1986)... các tế bào máu giữa cá tra khỏe và cá tra bị mủ gan Sự thay đổi này biểu thị cho phản ứng bảo vệ không đặc hiệu của cá khi bị mầm bệnh tấn công Số lượng hồng cầu trên cá khỏe là 2,05x106 tế bào/mm3, còn trên cá bệnh là 0,75x106 tế bào/mm3, giảm 63,4% so với cá khỏe Đồng thời có sự xuất hiện hồng cầu nhiều nhân và hồng cầu không nhân ở cá bệnh Số lượng bạch cầu trung tính và bạch cầu đơn nhân trên cá. .. thể cá dễ bị nhiễm bệnh và không có khả năng hồi phục lại chức năng bình thường của cơ thể Vitamin C được ghi nhận là có vai trò quan trọng trong trao đổi chất, nó tham gia vào quá trình 7 PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com sinh trưởng và phát triển của sinh vật bởi việc tạo thành collagen, tăng cường các phản ứng miễn dịch và sức đề kháng bệnh của tôm cá. .. ictaluri gây bệnh mủ gan trên cá tra E ictaluri là vi khuẩn hình que, gram âm, không di động, lên men, không oxy hóa, oxidase âm tính, cho phản ứng catalase dương Các chỉ tiêu sinh hóa của E ictaluri đều âm tính, riêng lysine và glucose cho phản ứng dương tính Cá tra bị bệnh thường không có biểu hiện bất thường bên ngoài Ở giai đoạn sớm cá vẫn còn bắt mồi Tuy nhiên khi bệnh nặng, cá gầy, bơi lờ đờ, da nhợt... nheo bổ sung vitamin C ở các nồng độ khác nhau trong 9 tuần cho kết quả cá có chế độ ăn 1000mg vitamin C/kg thức ăn có khả năng tăng khả năng kháng E ictaluri so với không cho ăn Cá khi cảm nhiễm với E ictaluri có LD50=105cfu/ml ở thí nghiệm không bổ sung vitamin C và LD 50=107cfu/ml ở chế độ bổ sung 1000mg/kg thức ăn Tuy nhiên, ở mức vitamin C cao hơn 2000 và 4000mg/kg thì khả năng này cũng không tăng . tìm hiểu ảnh hưởng của Antistress lên khả năng đề kháng Edwardsiella ictaluri của cá tra. Nội dung đề tài: 1. Ảnh hưởng của Antistress lên các chỉ tiêu. TRẦN HOA CÚC ẢNH HƯỞNG CỦA ANTISTRESS LÊN KHẢ NĂNG ĐỀ KHÁNG Edwardsiella ictaluri CỦA CÁ TRA (Pangasianodon hypophthalmus) LUẬN