thử nghiệm sản xuất giống cá trê vàng đa bội (clarias macrocephalus gunther)

56 900 2
thử nghiệm sản xuất giống cá trê vàng đa bội (clarias macrocephalus gunther)

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

Thông tin tài liệu

1 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA THỦY SẢN HUỲNH TẤN HỒNG THỬ NGHIỆM SẢN XUẤT GIỐNG CÁ TRÊ VÀNG ĐA BỘI (Clarias macrocephalus Gunther) LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH NUÔI TRỒNG THỦY SẢN CÁN BỘ HƯỚNG DẪN Ts. BÙI MINH TÂM 2009 2 Chương I ĐẶT VẤN ĐỀ 1.1. Giới thiệu Nhóm trơn nói chung và trê nói riêng phân bố khá rộng rãi, đặc biệt là vùng nhiệt đới và Á nhiệt đới. Chúng sống được trong nhiều loại hình thủy vực khác nhau kể cả môi trường giàu chất dinh dưỡng. Trong 4 loài trê ở nước ta hiện nay thì trê vàng (Clarias macrocephalus) là loài có giá trị kinh tế nhất, do chất lượng thịt thơm ngon nên được nhiều người ưa chuộng và thịt có màu vàng nghệ trông hấp dẫn hơn nên càng thu hút nhiều thực khách. Do chậm lớn hơn so với giống loài khác nên xu hướng người ta nuôi các loại khác trong họ trê nhiều hơn, chính điều này đã làm sản lượng trê vàng ngày càng cạn kiệt. Với thực tế đó, để khắc phục nhược điểm trên của trê vàng thì một số biện pháp được đặt ra như cho lai tạo giữa các loài trê với nhau. Bên cạnh đó thì cũng có vài nghiên cứu về gây đa bội thể được tiến hành nhưng chưa phổ biến rộng rãi. Kết quả là sản lượng trê tăng lên nhưng lại làm chất lượng thịt cá giảm đi và làm cho nguy cơ con trê vàng bị tuyệt chủng do sự phát triển lấn át của các loài khác. Từ vấn đề này nên đề tài “Thử nghiệm sản xuất trê vàng (Clarias macroephalus Gunther, 1864) đa bội” được thực hiện ở Trại Thực Nghiệm – Bộ môn kỹ thuật nuôi thủy sản nước ngọt – Khoa thủy sản – Trường Đại Học Cần Thơ là rất cần thiết. 1.2. Mục tiêu của đề tài Nhằm tìm ra được thời gian sốc nhiệt hợp lý cho tỷ lệ trê vàng đa bội cao. 1.3. Nội dung của đề tài Tiến hành sốc nhiệt trứng đã thụ tinh sau 15 phút ở 4 o C trong 10, 20, 30 phút. So sánh các chỉ tiêu về tỷ lệ thụ tinh, tỷ lệ nở và tỷ lệ dị hình giữa trê vàng bình thường và trê vàng đa bội. 3 So sánh tỷ lệ sống, tốc độ tăng trưởng về chiều dài và khối lượng giữa sốc nhiệt và bình thường sau khi ương. Xác định tỷ lệ trê vàng đa bội xuất hiện trong các nghiệm thức sốc nhiệt. Theo dõi các yếu tố môi trường như nhiệt độ, pH, hàm lượng oxy hòa tan, NH 3 , NO 2 - . 4 Chương II TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1. Sơ lược đặc điểm sinh học trê vàng 2.1.1. Vị trí phân loại Cá trê vàng có tên khoa học là Clarias macrocephalus Gunther (Nguyễn Bạch Loan, 2003) với vị trí phân loại như sau: Ngành: Chordata Ngành phụ: Verebrata Lớp: Osteichthyes Bộ: Siluriformes Họ: Clariidae Giống: Clarias Loài: Clarias macrocephalus Gunther 2.1.2. Phân bố Cá phân bố rộng trên thế giới, đặc biệt là vùng Á nhiệt đới và nhiệt đới.Chúng có khả năng sống tốt ở vùng nước thiếu oxy và giàu chất hữu cơ.Để nhận dạng trê vàng với các loài trê khác ta dựa vào: trê vàng xương chẩm hình vòng cung, trê trắng xương hình chữ V, trê phi xương chẩm hình chữ M, trê đen xương chẩm tương tự như trê trắng, nhưng gốc của xương chẩm hơi tù hơn. trê vàng mấu xương chẩm có dạng hình vòng cung, chiều rộng gốc mấu xương chẩm lớn hơn 3 lần chiều cao của chính nó (Trương Thủ Khoa và Trần Thị Thu Hương, 1993) 2.1.3. Đặc điểm sinh sản Ngoài tự nhiên có thể sinh sản quanh năm, thành thục lần đầu khi được khoảng 8 tháng tuổi. Cá có hai mùa sinh sản chính là tháng 3-6 và tháng 7-8 hàng năm. Sức sinh sản tương đối của dao động từ 40.000 – 50.000 trứng/kg cái. Trứng trê thuộc loại trứng dính và có tập tính làm tổ đẻ dọc theo các bờ 5 ao, mực nước nông, nhiệt độ cho sinh sản tốt từ 28-30 o C. Sau khi sinh sản xong ta có thể nuôi vỗ tái thành thục khoảng 30 ngày thì có thể tham gia sinh sản trở lại. Phân biệt đực, cái: Cá cái: Bụng to, mềm đều, lỗ sinh dục hình vành khuyên và phồng to thường có màu đỏ nhạt. Lấy ngón tay vuốt nhẹ bụng từ trên xuống thấy có trứng chảy ra, kích cở trứng đồng đều, căng tròn với màu sắc đặc trưng. Cá đực: Có gai sinh dục dài, hình tam giác, phía đầu gai sinh dục nhọn và hơi nhỏ, gai sinh dục màu hồng nhạt. 2.1.4. Đặc điểm dinh dưỡng Cá trê là loài ăn tạp thiên về động vật đáy, thích ăn xác động vật đang thối rữa. Cá trê có đặc tính ăn tạp, thức ăn chủ yếu là động vật. Trong tự nhiên trê ăn côn trùng, giun ốc, tôm, cua, cá, ngoài ra trong điều kiện ao nuôi trê còn có thể ăn các phụ phẩm từ trại chăn nuôi, nhà máy chế biến thủy sản, chất thải từ lò mổ (Dương Nhật Long, 2003). Khả năng sử dụng thức ăn chế biến của cũng rất cao. (Nguyễn Văn Kiểm, 2004). 2.1.5. Điều kiện nuôi Cá trê vàng là loài dễ nuôi, có thể sống và phát triển tốt trong môi trường có hàm lượng hữu cơ cao. Vùng nước ngọt không bị nhiễm phèn hay nhiễm phèn nhẹ, các yếu tố môi trường thích hợp cho sự phát triển của cá. Nhiệt độ thích hợp từ 26-32 o C, chịu nhiệt độ thấp 15 o C và trên 38-40 o C. pH thích hợp 6,5-7 và cũng có thể sống ở những vùng nhiễm phèn trung bình với pH = 5,5. Oxy trên 3 ppm, đặc biệt có cơ quan hô hấp phụ nên có thể chịu đựng môi trường dưỡng khí thấp, trên 2 ppm là đã sống được. N-NH3 0,2 - 2 ppm. 2.1.6 Một số bệnh thường gặp Trong quá trình ương nuôi thì có một số bệnh sau (Đào Hoàng Đẳng, 1992). 6 Bệnh lỡ loét: Bệnh xuất hiện sau những cơn mưa kéo dài. bị xay xát do đánh bắt hay vận chuyển. Môi trường nuôi quá bẩn. Triệu chứng: Trên cơ thể xuất hiện những vết loét lúc đầu nhỏ, dần dần to ra và ăn sâu vào xương, bệnh nặng vết loét ăn sâu vào đầu, bỏ ăn và chết hàng loạt. Bệnh trắng da: Bệnh thường xuất hiện khi nhiệt độ môi trường thấp, bị đánh bắt, lọc, vận chuyển làm xay xát làm bệnh dễ dàng xâm nhập. Bệnh thường xảy ra ở giống. Triệu chứng: Trên da xuất hiện vài điểm trắng lớn nhỏ khác nhau, hoặc cả thân có màu trắng nhợt nhạt, gan có những đốm trắng nhỏ li ti, mất nhớt, râu quéo lại hoặc bị ăn cụt, treo mình ngày càng nhiều và sau đó chết hàng loạt trong thời gian ngắn. Ngoài ra còn một số bệnh khác như bệnh do nhiễm nấm thủy my, ký sinh trùng bám. 2.2. Sơ lược về đa bội thể Việc vận dụng kỷ thuật nhiễm sắc thể để sản xuất đa bội được tiến hành nghiên cứu từ giữa những năm 1970 (Thorgaard 1983, 1986). 2.2.1 Khái niệm đa bội thể Đa bội thể được dùng để chỉ thể có thừa bộ nhiễm sắc thể. Bình thường bộ nhiễm sắc thể hoàn chỉnh là lưỡng bội (2N). Và thể đa bội (3N) và tứ bội (4N). Đa bội thì có khả năng sống sót và thường bất thụ do tuyến sinh dục không phát triển (Phạm Thanh Liêm & ctv, 2006). Đa bội thể là sự thay đổi số lượng nhiễm sắc thể. Sự thay đổi số lượng nhiễm sắc thể có nhiều kiểu gồm đa bội nguyên (euploidy), đa bội thể lai (alloploidy) và đa bội thể lệch (aneuploidy). 7 Đa bội thể nguyên: Sự tăng nguyên lần số nhiễm sắc thể đơn bội của một loài. Các dạng này gồm thể đơn bội (monoploid), thể đa bội (triploid) và thể tứ bội (tetraploidy). Đa bội thể lai: Là sự kết hợp của 2 bộ nhiễm sắc thể của 2 loài khác nhau cùng đứng chung trong một tế bào. Đa bội thể lệch: Là sự thay đổi số lượng nhiễm sắc thể của từng cặp (Phạm Thành Hổ, 2000). 2.2.2 Đặc điểm của thể đa bội Theo Phạm Thanh Liêm & ctv (2006), thì đa bội thường tăng trưởng nhanh hơn so với lưỡng bội bình thường, sự gia tăng này có được là do có thể là kết quả của việc tuyến sinh dục không phát triển, tốc độ tăng trưởng của các loài thường chậm lại khi chúng thành thục sinh dục hoặc là do sự gia tăng kích thước tế bào. 2.2.3 Thuận lợi của việc nuôi đa bội Tăng trưởng nhanh, gia tăng sản lượng, chất lượng thịt tăng. Sự bất thụ là một tính trạng mong muốn đạt được, đồng thời ngăn cản sự tạp lai trở lại với loài bố mẹ. Hạn chế được quá trình xác định các loài ngoại nhập có thể nuôi được hay không, cũng như hạn chế sự phân bố của chúng ở các vùng địa lý khác nhau. Nâng cao hiệu quả sử dụng thức ăn và thường áp dụng cho những loài lớn chậm (Jeff C. Dillon, 1988). 2.2.4 Nguyên lý tạo ra thể đa bội Phương pháp gây đa bội dựa trên nguyên lý kích thích mẫu sinh nhân tạo. Tiến hành thụ tinh trứng bình thường, rồi xử lý trứng để lưỡng bội hóa bộ nhiễm sắc thể cái ở thời điểm giảm phân II, kết quả là hình thành phôi đa bội. Ngoài ra, đa bội thể còn được tạo ra bằng cách lai giữa thể tứ bội (4n) và thể lưỡng bội (2n) (Nguyễn Tường Anh, 1999). Đa bội có thể tạo ra bằng một quá trình thụ tinh bình thường, sau đó là quá trình giữ lại thể cực thứ 2. Nếu con cái là đồng hợp XX , tất cả các thế hệ con sẽ nhận 2 nhiễm sắc thể X từ mẹ và hoặc là nhiễm sắc thể X hoặc Y từ bố. Khi đó XXX sẽ là con cái, XXY là con đực. Nếu con đực đồng hợp ZZ, thế hệ 8 con đa bội sẽ có 3 kiểu gen WWZ, WZZ và ZZZ, nhưng giới tính thì không xác định. Thể cực thứ 2 có thể giử lại bằng cách sốc nhiệt (lạnh hoặc nóng), áp suất thủy tỉnh, hoặc sốc hóa chất trong thời gian ngắn sau khi thụ tinh. Thời gian gây sốc khác nhau tùy loài. Gây sốc bằng áp suất thủy tỉnh thường có tỷ lệ sống, và tỷ lệ đa bội cao hơn so với sốc nhiệt. 2.3. Các phương pháp gây đa bội Theo Phan Cự Nhân và ctv (2003), thì hiện nay người ta đã sử dụng 7 phương pháp chính để gây đa bội thể ở thực vật và động vật (thực vật là chủ yếu). 2.3.1 Phương pháp ly tâm Người ta đặt cơ thể hoặc cơ quan có tế bào phân chia vào ly tâm, để ngăn cản sự hình thành sợi thoi vô sắc, hoặc ngăn cản các nhiễm sắc thể di chuyển về các cực của tế bào. 2.3.2 Phương pháp sốc nhiệt Nhiệt độ tăng hoặc giảm dần trong giới hạn ít ảnh hưởng tới tần số đột biến. Sốc nhiệt hoặc làm thay đổi nhiệt độ đột ngột, nhiệt độ cao hơn hoặc thấp hơn mức trung bình đột ngột có hiệu quả gây đột biến. Nguyên nhân do mỗi cơ thể sinh vật có cơ chế nội cân bằng, giữ cho hoạt động sinh lý của tế bào không bị thay đổi khi nhiệt độ thay đổi. Khi sốc nhiệt, khi nhiệt độ tăng hay giảm một cách bất bình thường thì cơ chế này bị phá vỡ, gây chấn thương bộ máy di truyền của tế bào. Và cản trở sự dịch chuyển của các nhiễm sắc thể từ mặt phẳng xích đạo của thoi vô sắc và các cực của tế bào tạo nên đột biến. 2.3.3 Phương pháp gây chấn thương Phương pháp này hiệu quả nhất đối với cây họ cà. Ở cây họ cà, chổ chấn thương do cắt hoặc ghép dễ hình thành mô sẹo. Từ mô sẹo, từ nách lá cắt ngang sẽ mộc chồi bất định có số lượng nhiễm sắc thể trong tế bào tăng gấp đôi. 9 2.3.4 Phương pháp đa phôi Sau khi thụ tinh, một số phôi đa bội có thể hình thành và từ đó có thể hình thành thể đa bội. 2.3.5 Phương pháp phóng xạ Khi tế bào sắp hoặc đang phân chia tiến hành chiếu xạ bằng bức xạ ion hóa sẽ ngăn cản hoặc làm đứt sợi thoi vô sắc. Nhiễm sắc thể ở lại mặt phẳng xích đạo của thoi vô sắc, tạo nên tế bào đa bội. 2.3.6 Phương pháp xử lý bằng các tác nhân hóa học Một số chất như Acenafen, Monoclobenzen, Paradiclorbenzen,… có thể ngăn cản sự hình thành thoi vô sắc, gây đứt sợi thoi vô sắc hoặc cản trở sự hình thành màng ngăn trong tế bào khi đang phân cắt. Kết quả tạo ra tế bào nhiều nhân, có số lượng nhiễm sắc thể tăng gấp bội. Nguyên nhân, do các tác nhân gây đột biến có khả năng thẩm thấu qua màng tế bào và màng nhân, đồng thời gây thay đổi trạng thái của DNA và nhiễm sắc thể (Khuất Hữu Thanh, 2005). 2.3.7 Xử lý Colchicine Đây là phương pháp cho hiệu quả cao nhất và đang được áp dụng phổ biến hiện nay. Colchicine có công thức hóa học là C 22 H 25 NO 6 , là một loại kiềm thực vật, có độc tính cao được chiết xuất từ cây Colchicum autumnale mọc ở Địa Trung Hải, dễ tan trong nước, rượu và benzen. Colchicine ngăn cản nhiễm sắc thể di chuyển từ mặt phẳng xích đạo về 2 cực của tế bào, làm tăng gấp đôi số lượng nhiễm sắc thể trong tế bào. Người ta còn sử dụng Colchicine ở nồng độ 0,1-0,2% để xử lý tế bào động vật nuôi cấy. 2.4. Sơ lược về hồng cầu 2.4.1 Hồng cầu Hồng cầu là một loại huyết cầu có số lượng nhiều nhất trong các tế bào máu. Huyết cầu ở các tế bào trưởng thành phần lớn hình bầu dục. Hồng cầu có nhân, hai bên lồi ra. Do có nhân nên hồng cầu có mức độ tiêu hao oxy lớn (Đỗ Thị Thanh Hương & ctv, 2000). 10 Kích thước: Biến động lớn tùy theo loại cá, to nhất là sụn, miệng tròn rồi đến xương. Kích cở hồng cầu càng nhỏ thì số lượng hồng cầu trên một đơn vị thể tích càng nhiều, và mức độ tiến hóa của loài càng cao. Kích thước hồng cầu được biểu thị là a*b, đơn vị tính µm. Trong đó, a: là đường kính lớn, b: đường kính nhỏ. 2.4.2 Số lượng hồng cầu Trong điều kiện bình thường thì số lượng hồng cầu của mỗi loài là ổn định, nó phản ánh tập tính sống của cá, sống tầng mặt thì có số lượng hồng cầu thấp do có đầy đủ oxy và càng xuống sâu thì số lượng hồng cầu càng nhiều (Đỗ Thị Thanh Hương & ctv, 2000). 2.4.3 Chức năng của hồng cầu Hồng cầu là tế bào chuyên biệt có chức năng là vận chuyển oxy và CO 2 . Tham gia duy trì thành phần các ion của máu, điều hòa pH máu. 2.5. Phương pháp xác định thể đa bội Theo Đặng Hữu Lanh và ctv (1999), thì việc xác định thể đa bội có những phương pháp sau: Những nghiên cứu cho thấy kích thước của nhân và tế bào là phương tiện đáng tin cậy để phân biệt thể đa bội và lưỡng bội. Loại tế bào sử dụng phổ biến là tế bào hồng cầu. Việc xác định thể đa bội bằng tế bào hồng cầu thực sự thuận lợi với người nghiên cứu. Phương pháp đơn giản là nhuộm tiểu hạch (nucleoli), số lượng của chúng tỷ lệ thuận phản ánh số lượng nhiễm sắc thể trong tế bào. Phương pháp đơn giản hơn là so sánh giải phẩu hình thái giữa con lai đa bội và bố mẹ lưỡng bội bằng cách đếm số lượng sắc tố ấu trùng. Một cách trực tiếp là kiểm tra số lượng nhiễm sắc thể. Phương pháp này chính xác, nhưng gặp khó khăn trong chuẩn bị tiêu bản. Ngoài ra, có thể dựa vào hàm lượng DNA, tuy phức tạp trong ứng dụng thực tế nhưng rất được chú ý trong nghiên cứu. [...]... vào kích cỡ và mật độ tế bào hồng cầu để xác định tỷ lệ thể đa bội xuất hiện trong các nghiệm thức sốc nhiệt Phương pháp kiểm tra đa bội Do thể đa bội lớn nhanh hơn thể lưỡng bội, nên một cách đơn giản là so sánh tốc độ tăng trưởng giữa thể lưỡng bội thể đa bội từ đó ta có thể xác định được tỷ lệ đa bội xuất hiện trong từng nghiệm thức sốc nhiệt (Thorgaard, 1983) Nhuộm tế bào máu... (µm) 19 Công thức tính tỷ lệ đa bội Tỷ lệ đa bội (%) = Số thể đa bội * 100 Số thể quan sát 3.3 Xử lý số liệu Số liệu về kích thích sinh sản, biến động môi trường và đa bội được xử lý bằng phần mềm Excel 2007 và SPSS để kiểm định sự khác biệt về tăng trưởng và tỷ lệ sống giữa cá trê vàng đa bội (3n) và trê vàng bình thường (2n) 20 Chương IV KẾT QUẢ-THẢO LUẬN 4.1 Các yếu tố môi trường 4.1.1... tỷ lệ thụ tinh và tỷ lệ nở, và tỷ lệ dị hình và các kết quả về tăng trưởng thì ở nghiệm thức NTI và NTII cho kết quả tốt nhất A B Hình 20: Hồng cầu lưỡng bội (A) và đa bội (B) Tóm lại, kết quả nghiên cứu về thử nghiệm sản xuất giống trê vàng đa bội cũng phù hợp với các nghiên cứu trước đây Theo A.A GHEYAS et al (2002), thì khi tiến hành đa bội Heteropneustes fossilis bằng sốc lạnh ở 4oC... của sau 45 ngày ương thì nghiệm thức sốc nhiệt trong 20 phút (NTII) là cao nhất (90,3%) và thấp nhất là nghiệm thức đối chứng (NTDC) (40%) Tỷ lệ cá trê vàng đa bội xuất hiện trong các nghiệm thức sốc nhiệt, thì nghiệm thức sốc nhiệt trong 30 phút (NTIII) là thấp nhất (60%), và nghiệm thức sốc nhiệt trong 20 phút (NTI) và 30 phút (NTII) là (76,67%) Đề xuất Tiếp tục nghiên cứu sản xuất giống trê vàng. .. bội 34 Bảng 16: Số lượng hồng cầu của ở các nghiệm thức NTDC NTI NTII a bc 1829000±285136 1212667±191454 1364000±205671cd NTIII 1459500±143114de Các giá tri của mỗi chỉ số trong cùng một hàng có chữ cái giống nhau thì khác biệt không có ý nghĩa thống kê (P>0,05) 4.5 Tỷ lệ đa bội xuất hiện trong các nghiệm thức sốc nhiệt Bảng 17: Tỷ lệ đa bội xuất hiện trong các nghiệm thức sốc nhiệt NTDC 8,9±1,1a... lượng hồng cầu ở các nghiệm thức khác biệt có ý nghĩa (p0,05) Qua bảng 17, tỷ lệ đa bội xuất hiện trong các nghiệm thức có sốc nhiệt thì ở nghiệm thức NTI và NTII có tỷ lệ thể đa bội là cao nhất (76,67%), thấp nhất là NTIII (60%) Ở nghiệm thức NTIII, mặc dù có thời gian sốc nhiệt lâu nhất nhưng tỷ lệ đa bội ít nhất Do vậy,... ương thì ở nghiệm thức NTI là lớn nhất (0,41 g) và nghiệm thức NTDC (0,15g) là nhỏ nhất Tuy nhiên, sau 30 ngày và 45 ngày thì khối lượng nghiệm thức NTIII là lớn nhất lần lượt là 8,28 g và 14,96 g Theo Jeff C D, 1988 đa bội thì hiệu quả sử dụng thức ăn tốt hơn lưỡng bội, do vậy những thể ở các nghiệm thức sốc nhiệt nhìn chung tăng trưởng về trọng lượng cao hơn so với nghiệm thức... phân tích đa bội ở Bảng 18 thì cả 3 nghiệm thức sốc nhiệt đều xuất hiện đa bội, do vậy mà chiều dài ương sau 15, 30 và 45 ngày ở các nghiệm thức sốc nhiệt đều dài hơn so với nghiệm thức NTDC (Bảng 9) Bảng 10: Khối lượng thí nghiệm qua các lần thu mẫu Trọng lượng (g) 15 ngày 30 ngày 45 ngày NTDC 0.15 1.90 6.63 NTI 0.41 4.79 7.81 NTII 0.34 2.47 8.56 NTIII 0.39 8.28 14.96 Trọng lượng sau 15 ngày... NTI NTII NTIII Nghiệm thức Hình 19: Số lượng hồng cầu của thí nghiệm Trung bình số lượng hồng cầu ở NTDC cao nhất (1829000tb/mL), NTI thấp nhất (1212667tb/mL) (Hình 19) Theo Swarup (1959), Beck and Biggers (1983) và Purdom (1972) nhận định rằng số lượng hồng cầu ở lưỡng bội nhiều hơn so với đa bội Kết quả thí nghiệm, số lượng hồng cầu của nghiệm thức đối chứng nhiều hơn các nghiệm thức còn . ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA THỦY SẢN HUỲNH TẤN HỒNG THỬ NGHIỆM SẢN XUẤT GIỐNG CÁ TRÊ VÀNG ĐA BỘI (Clarias macrocephalus Gunther) LUẬN VĂN TỐT. sống giữa cá trê vàng đa bội (3n) và cá trê vàng bình thường (2n). Tỷ lệ đa bội (%) = Số cá thể đa bội Số cá thể quan

Ngày đăng: 22/02/2014, 13:32

Từ khóa liên quan

Tài liệu cùng người dùng

  • Đang cập nhật ...

Tài liệu liên quan