Trung tâm Học liệu ĐH Cần Thơ @ Tài liệu học tập và nghiên cứu TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA THỦY SẢN BỘ MÔN SINH HỌC VÀ BỆNH THỦY SẢN NGUYỄN MẠNH HÙNG KHẢO SÁT MẬT ĐỘ VI KHUẨN TỔNG CỘNG TRONG NƯỚC VÀ VI KHUẨN COLIFORMS TRONG CƠ CÁ TRA (Pangasianodon hypophthalmus) NUÔI AO LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH NUÔI TRỒNG THỦY SẢN CHUYÊN NGÀNH BỆNH HỌC THỦY SẢN Cần Thơ, 7/2008 Trung tâm Học liệu ĐH Cần Thơ @ Tài liệu học tập và nghiên cứu TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA THỦY SẢN BỘ MÔN SINH HỌC VÀ BỆNH THỦY SẢN NGUYỄN MẠNH HÙNG KHẢO SÁT MẬT ĐỘ VI KHUẨN TỔNG CỘNG TRONG NƯỚC VÀ VI KHUẨN COLIFORMS TRONG CƠ CÁ TRA (Pangasianodon hypophthalmus) NUÔI AO LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH NUÔI TRỒNG THỦY SẢN CHUYÊN NGÀNH BỆNH HỌC THỦY SẢN CÁN BỘ HƯỚNG DẪN ThS. NGUYỄN THỊ THU HẰNG Ts. ĐẶNG THỊ HOÀNG OANH Cần Thơ, 7/2008 Trung tâm Học liệu ĐH Cần Thơ @ Tài liệu học tập và nghiên cứu i LỜI CẢM TẠ Kính gửi lời cảm ơn sâu sắc đến những người thân của tôi đó là: mẹ, dì và anh chị em trong gia đình đã nuôi nấng, dạy dỗ và luôn động viên, giúp đỡ cho tôi trong suốt thời gian học tập tại trường và trong quá trình thực hiện đề tài. Em xin ghi nhớ và bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đối với cô Nguyễn Thị Thu Hằng đã tận tình chỉ bảo và giúp đỡ em rất nhiều trong suốt quá trình làm đề tài luận văn tốt nghiệp. Em xin chân thành cảm ơn toàn thể quý thầy cô, anh chị trong Bộ môn Sinh Học và Bệnh Thủy Sản – Khoa Thủy Sản, Trường Đại Học Cần Thơ đã giúp đỡ và tạo mọi điều kiện thuận lợi cho em hoàn thành tốt đề tài luận văn tốt nghiệp. Xin chân thành cảm ơn tất cả các thầy cô trường Đại Học Cần Thơ đã tận tình truyền đạt kiến thức cho em trong suốt những năm trên giảng đường Đại Học. Chân thành cám ơn các bạn lớp Bệnh Học Thủy Sản và Nuôi Trồng Thủy Sản K30 đã gắn bó, chia sẻ và giúp đỡ tôi trong suốt thời gian học tập cũng như khi thực hiện đề tài luận văn tốt nghiệp. Kính chúc quý thầy cô và các bạn luôn thành công trong công việc cũng như trong cuộc sống. Chân thành cảm ơn! Cần Thơ, ngày 07 tháng 7 năm 2008 Nguyễn Mạnh Hùng Trung tâm Học liệu ĐH Cần Thơ @ Tài liệu học tập và nghiên cứu ii MỤC LỤC Trang LỜI CẢM TẠ ……………………………………………………………i MỤC LỤC……………………………………………………………….ii DANH SÁCH BẢNG iv DANH SÁCH HÌNH v TÓM TẮT vi Chương 1: GIỚI THIỆU 1 Chương 2: LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 3 2.1. Sơ lược đặc điểm sinh học của cá tra 3 2.2. Vi khuẩn tổng cộng trong nước 4 2.2.1. Định nghĩa và đặc điểm 4 2.2.2. Vai trò của vi sinh vật trong hệ thống nuôi trồng thủy sản 5 2.2.3. Một số kết quả khảo sát, thử nghiệm mật độ vi khuẩn tổng cộng trong môi trường nước nuôi thủy sản. 6 2.3. Đặc điểm và khả năng gây bệnh của nhóm Coliforms 7 2.3.1. Định nghĩa, đặc điểm của Coliforms 7 2.3.2. Khả năng gây bệnh của nhóm vi sinh vật Coliforms 9 2.3.3. Một số nghiên cứu, phân tích về Coliforms 12 2.4. Các mối nguy gây mất an toàn cho sản phẩm thủy sản nuôi 14 Chương 3: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 3.1. Thời gian và địa điểm nghiên cứu 17 3.1.1.Thời gian nghiên cứu 17 3.1.2. Địa điểm nghiên cứu 17 3.2. Vật liệu nghiên cứu 18 3.2.1. Dụng cụ thu, trữ và phân tích mẫu 18 3.2.2. Hóa chất 18 3.3. Phương pháp nghiên cứu…………………………………………… 19 3.3.1. Phương pháp phân tích mẫu nước……………………………… 19 3.3.1.1. Cách thu và bảo quản mẫu nước 19 3.3.1.2. Phương pháp phân tích mẫu 19 3.3.1.3. Cách tính và ghi nhận kết quả 20 3.3.2. Phương pháp xác định Coliforms 20 3.3.2.1. Phạm vi áp dụng 20 3.3.2.2. Nguyên tắc xác định 20 3.3.2.3. Quy trình 20 3.3.3. Tách dòng và phân loại các giống thuộc nhóm Coliforms 22 3.4. Phương pháp xử lý số liệu 23 Trung tâm Học liệu ĐH Cần Thơ @ Tài liệu học tập và nghiên cứu iii Chương 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 24 4.1. Kết quả khảo sát mật độ vi khuẩn tổng cộng trong nước……… 24 4.1.1. Phụng Hiệp - Hậu Giang 24 4.1.2. Thốt Nốt - Cần Thơ 26 4.1.3. Châu Phú - An Giang 27 4.2. Kết quả phân tích mật độ Coliforms trong cơ cá tra nuôi ao 29 4.2.1. Kết quả phân tích Coliforms của các mẫu cá thu tại ao nuôi 29 4.2.1.1. Đợt 1 29 4.2.1.2. Đợt 2 30 4.2.2. Kết quả phân tích Coliforms trong các mẫu thu mua ở chợ 32 4.3. Kết quả thử nghiệm IMViC các chủng Coliforms phân lập được 34 Chương 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 38 5.1. Kết luận 38 5.2. Đề xuất 38 TÀI LIỆU THAM KHẢO 39 Phụ lục 1: Kết quả phân tích vi khuẩn tổng cộng trong nước (đợt 1) 42 Phụ lục 2: Kết quả phân tích vi khuẩn tổng cộng trong nước (đợt 2) 43 Phụ lục 3: Kết quả phân tích Coliforms tổng số trong cơ cá thu (đợt 1) 44 Phụ lục 4: Kết quả phân tích Coliforms tổng số trong cơ cá thu (đợt 2) 45 Phụ lục 5: Kết quả phân tích Coliforms tổng số trong cơ cá thu tại một số chợ của Tp Cần Thơ 46 Phụ lục 6: Kết quả thử nghiệm IMViC đối với các chủng Coliforms phân lập được 47 Trung tâm Học liệu ĐH Cần Thơ @ Tài liệu học tập và nghiên cứu iv DANH SÁCH BẢNG Bảng 2.1: Một số tính chất sinh hóa của nhóm Coliforms Bảng 2.2: Tiêu chuẩn Việt Nam (TCVN) và tiêu chuẩn ngành (TCN, Bộ Thủy Sản) về vi sinh trên thủy hải sản. Bảng 2.3: Phân loại nước theo chỉ số E. coli Bảng 2.4: Giới hạn ô nhiễm vi sinh trong thực phẩm đối với nhóm cá và thủy sản. Bảng 2.5: Phân tích các mối nguy trong công đoạn nuôi trồng thủy sản. Bảng 4.1: Mật độ vi khuẩn tổng cộng (CFU/ml) trong hệ thống nuôi tại Phụng Hiệp - Hậu Giang. Bảng 4.2: Mật độ vi khuẩn tổng cộng (CFU/ml) trong hệ thống ao nuôi tại Thốt Nốt - Cần Thơ. Bảng 4.3: Mật độ vi khuẩn tổng cộng (CFU/ml) trong hệ thống ao nuôi tại Châu Phú - An Giang. Bảng 4.4: Mật độ vi khuẩn tổng cộng (CFU/ml) trong hệ thống nuôi ở Phụng Hiệp, Thốt Nốt và Châu Phú. Bảng 4.5: Kết quả phân tích Coliforms trong đợt 1. Bảng 4.6: Kết quả phân tích Coliforms trong đợt 2. Bảng 4.7: Biến động Coliforms trong cơ cá tra thu ở 3 tỉnh Hậu Giang, Cần Thơ và An Giang. Bảng 4.8: Biến động Coliforms theo kích cỡ cá thu tại đợt 2. Bảng 4.9: Kết quả phân tích Coliforms trong các mẫu thu mua ở chợ. Bảng 4.10: Biến động Coliforms theo kích cỡ cá thu ở đợt 2 và tại các chợ. Bảng 4.11: Kết quả thử nghiệm IMViC và phân loại các chủng Coliforms phân lập được từ các mẫu thu ở đợt 2. Bảng 4.12: Kết quả thử nghiệm IMViC và phân loại các chủng Coliforms phân lập được từ các mẫu thu tại chợ. Trung tâm Học liệu ĐH Cần Thơ @ Tài liệu học tập và nghiên cứu v DANH SÁCH HÌNH Hình 1.1: Cá tra (Pangasianodon hypophthalmus). Hình 2.1: Sơ đồ các mối nguy tác động và ảnh hưởng đến chất lượng và an toàn vệ sinh sản phẩm (nguyên liệu) trong nuôi trồng thủy sản. Hình 3.1: Sơ đồ các địa điểm thu mẫu nước và mẫu cá tra theo dự án SFP Hình 3.2: Quy trình định lượng Coliforms theo phương pháp đếm khuẩn lạc. Hình 4.1: Sự biến động mật độ vi khuẩn tổng cộng trong hệ thống nuôi tại Phụng Hiệp - Hậu Giang. Hình 4.2: Sự biến động mật độ vi khuẩn tổng cộng trong hệ thống nuôi tại Thốt Nốt - Cần Thơ. Hình 4.3: Sự biến động mật độ vi khuẩn tổng cộng trong hệ thống nuôi tại Châu Phú - An Giang. Hình 4.4: Lượng thức ăn được đưa vào ao nuôi là rất lớn. Hình 4.5: Khuẩn lạc Coliforms phát triển trên môi trường VRBL. Hình 4.6: Đĩa tách ròng Coliforms trên môi trường thạch VRBL. Hình 4.7: Chủng chuẩn E. coli LMG 8223 nuôi cấy trên môi trường VRB. Hình 4.8: Coliforms cho phản ứng dương tính trong môi truờng canh BGBL. Hình 4.9: Thử nghiệm khả năng sinh Indol. Hình 4.10: Thử nghiệm Voges – Proskauer. Hình 4.11: Thử nghiệm khả năng sử dụng Citrate. Hình 4.12: Thử nghiệm Methyl Red. Trung tâm Học liệu ĐH Cần Thơ @ Tài liệu học tập và nghiên cứu vi TÓM TẮT Đề tài được thực hiện với mục tiêu đánh giá mức độ nhiễm khuẩn nguồn nước trong hệ thống nuôi cá tra và mức độ nhiễm Coliforms trong cơ cá tra nuôi ao. Có 9 điểm thu mẫu nước, được chia ra làm 2 đợt thu. Đối với mẫu cá phân tích Coliforms thu được tổng cộng 43 mẫu, trong đó có 19 mẫu được thu ở ao và 24 mẫu thu mua ở chợ. Kết quả phân tích mẫu nước cho thấy mật độ vi khuẩn tổng cộng trong nguồn nước nuôi cá tra ở các điểm khảo sát đều nhiễm ở mức thấp và nằm trong khoảng cho phép của Bộ Thủy Sản (≤10 6 CFU/ml). Mức độ nhiễm Coliforms trong cơ cá tra tương đối cao đặc biệt là cá nuôi ở giai đoạn từ 500-800 g/con (biến động ở mức 361 ± 260 CFU/g). Coliforms phân lập được trên cá tra chủ yếu thuộc 2 giống Klebsiella và Enterobacter. Trung tâm Học liệu ĐH Cần Thơ @ Tài liệu học tập và nghiên cứu 1 Chương 1 GIỚI THIỆU Nhận biết được xu hướng chung của người tiêu dùng trên thế giới là ngày càng ăn nhiều các sản phẩm có nguồn gốc thủy sản. Vì vậy trong những năm gần đây, Việt Nam cùng với một số nước đã và đang đẩy mạnh phong trào nuôi trồng thủy sản nhằm đáp ứng nhu cầu ngày càng tăng của người tiêu dùng và thủy sản đã trở thành một ngành quan trọng trong phát triển kinh tế đất nước. Riêng ở nước ta, đặc biệt là khu vực Đồng Bằng Sông Cửu Long với nhiều điều kiện thuận lợi đã phát triển nhanh chóng nghề nuôi thủy sản và đóng góp rất lớn vào tổng sản lượng thủy sản của cả nước, đưa Việt Nam trở thành một trong mười cường quốc xuất khẩu thủy sản trên thế giới với kim ngạch xuất khẩu thủy sản đạt 2,4 tỉ USD năm 2004 (Bộ thủy sản, 2005). Một trong những đối tượng đã góp phần quan trọng trong việc tăng sản lượng nuôi trồng có thể kể đến là cá tra (Pangasianodon hypophthalmus). Nghề nuôi cá tra phát triển rất nhanh cả về diện tích và sản lượng. Trong vòng 10 năm, từ năm 1997 đến 2006, diện tích nuôi cá tra đã tăng lên 7 lần, năng suất tăng 36 lần, từ 22.500 tấn lên 825.000 tấn. Theo Bộ thủy sản, trong nửa đầu năm 2007, sản lượng cá tra, basa tăng đột biến ước đạt 400.000 tấn, tăng 100% so với cùng kỳ năm 2006 (www.fistenet.gov.vn). Tuy nhiên, cùng với sự phát triển đó là vấn đề ô nhiễm nguồn nước trong các hệ thống nuôi. Các chỉ tiêu về môi trường, vi sinh vật luôn vượt mức cho phép làm ảnh hưởng không nhỏ đến chất lượng sản phẩm cũng như sức khỏe người tiêu dùng. Việc xác định tổng số vi sinh vật hiếu khí trong môi trường nước nuôi cá tra là một việc làm cần thiết để giúp người nuôi hạn chế được tác hại do vi khuẩn gây ra và có những giải pháp cải thiện môi trường ao nuôi. Ngoài ra còn có nhiều chỉ tiêu vi sinh để đánh giá chất lượng sản phẩm thủy sản nuôi, trong đó Coliforms tổng số là một chỉ tiêu thông dụng được dùng để đánh giá mức độ an toàn vệ sinh thực phẩm. Coliforms là nhóm những trực khuẩn đường ruột Gram âm, không sinh bào tử, hiếu khí hoặc kỵ khí tùy nghi, có khả năng sinh acid, sinh hơi do lên men lactose ở 37 ± 1 o C trong vòng 24 - 48 giờ. Chúng có nguồn gốc từ các nguồn nước giàu chất hữu cơ như nước thải công nghiệp, đất hoặc xác thực vật phân hủy. Sự hiện diện một lượng lớn Coliforms là điều không mong muốn, tuy nhiên không thể loại bỏ hoàn toàn khỏi thực phẩm tươi sống, vấn đề là số lượng Coliforms trong thực phẩm đến mức nào được xem là không an toàn. Trên cơ sở đó, đề tài “Khảo sát mật độ vi khuẩn tổng cộng trong nước và vi khuẩn Coliforms trong cơ cá tra (Pangasianodon hypophthalmus) nuôi ao” được thực hiện. Trung tâm Học liệu ĐH Cần Thơ @ Tài liệu học tập và nghiên cứu 2 Mục tiêu của đề tài Đánh giá mức độ nhiễm khuẩn nguồn nước nuôi cá tra trong hệ thống ao lắng, ao nuôi, ao thải và mức độ nhiễm Coliforms trong cơ cá tra. Nội dung nghiên cứu - Xác định mật độ vi khuẩn tổng cộng trong các hệ thống ao lắng, ao nuôi và ao thải. - Xác định mật độ vi khuẩn Coliforms tổng số trong cơ cá tra. - Phân lập và kiểm tra một số chỉ tiêu sinh hóa đặc trưng của nhóm vi khuẩn Coliforms. [...]... 2.2.3 Một số kết quả khảo sát, thử nghiệm mật độ vi khuẩn tổng cộng trong môi trường nước nuôi thủy sản Trần Anh Dũng, 2005 đã khảo sát mật độ vi khuẩn tổng cộng trong nước của các mô hình nuôi cá tra thâm canh tại tỉnh An Giang Kết quả phân tích cho thấy, mật độ vi khuẩn tổng cộng trong mô hình nuôi đăng quầng dao động từ 9,3 x 10 3 đến 7,5 x 10 5 (CFU/ml) và trong mô hình nuôi ao là 7,7 x 10 3 đến... carbon dồi dào Tùy thuộc vào thời gian nuôi, mật độ vi khuẩn trong hệ thống nuôi có thể đạt đến mật độ 104-107 CFU/ml (Rombaut et al, 2001) Theo Anderson (1993) nước nuôi thủy sản được coi là sạch khi mật độ vi khuẩn tổng cộng nhỏ hơn 103 CFU/ml, nếu mật độ vi khuẩn tổng cộng vượt 107 CFU/ml sẽ có hại cho tôm cá nuôi và môi trường nuôi trở nên bẩn Mật độ vi khuẩn tổng cộng trong nước nuôi thủy sản theo tiêu... sản, vi c khảo sát mật độ vi khuẩn tổng cộng trong nước là một vi c làm cần thiết để giúp người nuôi hạn chế được tác hại do vi khuẩn gây ra và có những giải pháp cải thiện môi trường ao nuôi Vi sinh vật trong nước bao gồm các vi khuẩn, tảo, nấm men, virus…, chủ yếu là vi khuẩn Phần lớn nước bị nhiễm khuẩn từ các nguồn nước thải (công nghiệp, chế biến nông lâm thủy sản, sinh hoạt, nông nghiệp) và phân... Hình 4.1: Sự biến động mật độ vi khuẩn tổng cộng trong hệ thống nuôi tại Phụng Hiệp - Hậu Giang Nếu so sánh mật độ vi khuẩn tại các điểm thu ta thấy, các ao trong hệ thống nuôi của điểm 1.2 có mật độ vi khuẩn tương đối thấp (35x103 CFU/ml) và không ổn định Qua đó cho thấy nguồn nước nuôi tại điểm 1.2... sánh với kết quả khảo sát của Trần Anh Dũng (2005) về mật độ vi khuẩn tổng cộng trong nước ao nuôi cá tra thâm canh tại tỉnh An Giang (dao động từ 7,7 – 98,5x103 CFU/ml) và của Tô Công Tâm (2002) về mật độ vi khuẩn tổng cộng trong nước ao nuôi cá tra ở những tháng mùa lũ tại An Giang (trung bình khoảng 360x103 CFU/ml) thì mật độ vi khuẩn trong nguồn nước 28 ... tích được trong ao lắng 19,1x103 CFU/ml (đợt 1) và 32,5x103 CFU/ml (đợt 2) trong khi mật độ vi khuẩn tổng cộng trong ao nuôi lại nhỏ khá nhiều ở mức 17,1x103 CFU/ml (đợt 1) và 4,1x103 CFU/ml (đợt 2) 27 Mặt khác, mật độ vi khuẩn trong cả ao nuôi và ao thải đều nhỏ hơn nhiều so với nguồn nước trước khi lấy vào ao nuôi (đợt 2) Điều này cho thấy nước trong ao nuôi được quản lý tốt hơn do hộ nuôi thường... cộng trong nước ao nuôi cá tra tại những tháng mùa lũ ở Cần Thơ của Tô Công Tâm, 2002 (mật độ vi khuẩn 26 Mật độ vi khuẩn (103 cfu/ml) tổng cộng phân tích được tại các tháng 8, 10, 11 và 12 tương ứng là: 42,75x103, 44,9x103, 896,3x103, 136x103 (CFU/ml) thì mật độ vi khuẩn trong nguồn nước nuôi của các điểm thu tại thời điểm khảo sát là nhỏ hơn rất nhiều Từ đó có thể kết luận nguồn nước nuôi cá tra của... 37oC trong 24 – 48 giờ Đếm số ống BGBL sinh hơi (+) Tính tỉ lệ khẳng định Coliforms Xác định mật độ Coliforms Hình 3.2: Quy trình định lượng Coliforms theo phương pháp đếm khuẩn lạc 3.4 Phương pháp xử lý số liệu Sử dụng phần mềm Excel để tính toán và xử lý các số liệu thu được 23 Chương 4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Kết quả khảo sát mật độ vi khuẩn tổng cộng trong nước Khảo sát mật độ vi khuẩn tổng cộng trong. .. sự biến động về mật độ vi khuẩn là không đáng kể Lớn nhất cũng chỉ dao động trong khoảng 3,2 – 15,4x10 3 CFU/ml (tại ao nuôi của điểm 2.2), còn lại phần lớn là tương đương nhau hoặc chênh lệch nhau khoảng 2 lần Nếu so sánh mật độ vi khuẩn giữa các điểm thu ta thấy, các ao trong hệ thống nuôi của điểm 2.1 có mật độ vi khuẩn tương đối thấp ( . toàn. Trên cơ sở đó, đề tài Khảo sát mật độ vi khuẩn tổng cộng trong nước và vi khuẩn Coliforms trong cơ cá tra (Pangasianodon hypophthalmus) nuôi ao được. Coliforms trong cơ cá tra. Nội dung nghiên cứu - Xác định mật độ vi khuẩn tổng cộng trong các hệ thống ao lắng, ao nuôi và ao thải. - Xác định mật độ vi khuẩn