1 Nghiên cứu sử dụng nấm LECANICILLIUM Kí sinh côn trùng để kiểm soát rệp hại rau Vũ Xuân Đạt Trƣờng Đại học Khoa học Tự nhiên, Khoa Sinh học Chuyên ngành: Vi sinh vật học; Mã số: 60.42.40 NNgƣời hƣớng dẫn: PGS TS Quyền Đình Thi Năm bảo vệ: 2011 Abstract. Tổng quan về rệp hại cây trồng; thuốc diệt côn trùng hóa học; thuốc diệt côn trùng nguồn gốc sinh học; sản xuất bào tử nấm kí sinh côn trùng. Nghiên cứu ảnh hƣởng của môi trƣờng lên sự sinh bảo tử của nấm Lecanicillium: nguồn carbon; nguồn nitơ; nhiệt độ môi trƣờng; độ ẩm không khí và độ ẩm cơ chất. Trình bày vật liệu, hóa chất và thiết bị: chủng giống và plasmid, hóa chất, dung dịch và đệm, môi trƣờng nuôi cấy. Trình bày phƣơng pháp nghiên cứu: sàng lọc chủng nấm có độc lực diệt rệp cao; các phƣơng pháp sinh học phân tử; xác định ảnh hƣởng của điều kiện môi trƣờng lên sự sinh bào tử của chủng nấm 485. Đƣa ra kết quả và thảo luận: sàng lọc chủng nấm có độc lực cao; định tên chủng nấm 485; ảnh hƣởng của điều kiện môi trƣờng lên sự sinh bào tử của L. lecanii 485. Keywords: Vi sinh vật học; Rệp; Ký sinh trùng; Nấm Content Rệp (Aphidoidae) là nhóm côn trùng chích hút nhựa cây phổ biến nhất trên thế giới, kí sinh trên hơn 11000 loài cây thuộc 243 họ khác nhau, trong đó có nhiều cây trồng quan trọng nhƣ bông, cải, cải dầu, các loại đậu, cà chua, khoai tây, ngũ cốc. Hàng năm, rệp cùng với các côn trùng khác gây thiệt hại 15% sản lƣợng cây trồng trên toàn thế giới. Do tính chất nguy hại của rệp, việc sử dụng các biện pháp phòng trừ rệp là cần thiết. Biện pháp phòng trừ rệp phổ biến nhất cho đến nay vẫn là sử dụng thuốc diệt côn trùng hóa học. Mặc dù có ƣu điểm là phổ tác dụng rộng và hiệu quả tác dụng nhanh, nhƣng thuốc hóa học ngày càng bộc lộ rõ những nhƣợc điểm nhƣ nhanh bị kháng bởi côn trùng sau một thời gian sử dụng, gây ô nhiễm môi trƣờng, ảnh hƣởng xấu đến sức khỏe con ngƣời. Với ƣu điểm vƣợt trội về độ thân thiện với môi trƣờng, hệ sinh thái và sức khỏe con ngƣời, thuốc diệt côn trùng sinh học đƣợc coi là sự lựa chọn có tiềm năng lớn trong xu hƣớng phát triển nền nông nghiệp bền vững. Lecanicillium là chi nấm có khả năng kí sinh tự nhiên trên rệp và nhiều loài côn trùng khác. Từ những năm 1960, trên thế giới đã có nhiều công trình nghiên cứu ứng dụng Lecanicillium để diệt rệp bảo vệ cây trồng, nhiều sản phẩm đã đƣợc sản xuất và thƣơng mại hóa. Tuy nhiên, kết quả đạt đƣợc trong nghiên cứu và sử dụng thuốc diệt côn trùng sinh học còn hạn chế. Từ những lí do trên, việc tăng cƣờng nghiên cứu phát triển các chế phẩm diệt rệp từ nấm Lecanicillium là cần thiết. Do vậy, tôi thực hiện đề tài: "Nghiên cứu sử dụng nấm Lecanicillium kí sinh côn trùng để kiểm soát rệp hại rau". 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU Rệp hại cây trồng Rệp là nhóm côn trùng chích hút nhựa cây phổ biến nhất thế giới, phân bố tập trung nhất ở các vùng ôn đới, rệp cũng phân bố khá phổ biến ở các vùng nhiệt đới và cận nhiệt với độ đa dạng thấp hơn. Khoảng 3700 loài rệp đã đƣợc biết đến trên thế giới, trong đó có 250 loài rệp là côn trùng phá hoại nguy hiểm đối với nông, lâm nghiệp cần đƣợc kiểm soát. Tuy nhiên, đứng trên quan điểm động vật học, rệp là nhóm động vật thích nghi tốt với môi trƣờng nhờ khả năng sinh sản vô tính. Rệp là tác nhân chính gây hại ở nhiều loại cây trồng quan trọng nhƣ bông, đậu tƣơng, hƣớng dƣơng, củ cải đƣờng, khoai tây, ngô, ngũ cốc và rau cải. Nhiều loài rệp có khả năng kí sinh trên nhiều loại cây khác nhau nhƣ Aphis gossypii, Myzus persicae và Aphis craccivora. Với nguy cơ làm giảm năng suất cây trồng của rệp, yêu cầu phải có biện pháp kiểm soát rệp để bảo vệ mùa màng là cấp thiết. Biện pháp kiểm soát rệp và các loại côn trùng khác đƣợc áp dụng chủ yếu trong nhiều thập kỷ qua là sử dụng hóa chất diệt côn trùng tổng hợp. Thuốc diệt côn trùng hóa học Thuốc diệt côn trùng (thuốc trừ sâu) chiếm tỉ lệ lớn trong thuốc bảo vệ thực vật. Chúng có nguồn gốc tự nhiên hoặc đƣợc tổng hợp hoàn toàn trong các nhà máy hóa chất, đƣợc sử dụng trong nông nghiệp để bảo vệ cây trồng, hoặc phi nông nghiệp để tiêu diệt các vectơ truyền bệnh cho ngƣời và vật nuôi nhƣ ruồi, muỗi. Ƣu điểm của thuốc diệt côn trùng hóa học là dễ sản xuất ở quy mô lớn với giá thành rẻ, phổ tác dụng rộng với độc lực mạnh và hiệu quả tác dụng nhanh. Tuy nhiên, chúng ngày càng bộc lộ rõ những nhƣợc điểm nhƣ nhanh bị kháng bởi côn trùng, gây ô nhiễm đất, nguồn nƣớc và không khí, ảnh hƣởng xấu đến sức khỏe con ngƣời. Vì những nhƣợc điểm của thuốc diệt côn trùng hóa học, xu hƣớng chung trên thế giới hiện nay là không sử dụng thuốc diệt côn trùng hoặc sử dụng thuốc có nguồn gốc sinh học để thay thế dần nhằm phát triển nền nông nghiệp bền vững. Thuốc diệt côn trùng nguồn gốc sinh học Mặc dù có một số nhƣợc điểm nhƣ giá thành sản xuất còn cao, hoạt lực không mạnh bằng hóa chất tổng hợp, hiệu lực tác dụng chậm, hiệu quả bị ảnh hƣởng nhiều bởi các điều kiện ngoại cảnh, nhƣng với các ƣu điểm vƣợt trội so với hóa chất tổng hợp về độ thân thiện với môi trƣờng, hệ sinh thái và sức khỏe con ngƣời, các chế phẩm sinh học ngày càng đƣợc nhận đƣợc nhiều sự quan tâm trong nghiên cứu và sản xuất để sử dụng trong nông nghiệp. Lecanicillium là chi nấm kí sinh côn trùng thuộc ngành nấm túi Ascomycota, lớp Sordariomycetes, bộ Hypocreales, họ Clavicipitaceae. Lecanicillium có khả năng kí sinh tự nhiên và giết chết nhiều loại côn trùng nhƣ rệp, ruồi trắng, bộ cánh đều, bộ cánh cứng, bộ cánh thẳng, bƣớm. Cơ chế diệt côn trùng của Lecanicillium dựa trên sự tiếp xúc trực tiếp của bào tử với côn trùng. Sau khi bám trên vỏ côn trùng (chitin), các bào tử nảy mầm rồi tiết enzyme (chitinase, proteinase) phân hủy lớp biểu bì, kết hợp với áp lực nảy mầm của bào tử nấm giúp sợi nấm đâm sâu vào các khoang trong cơ thể. Tại đây, sợi nấm tiết các enzyme (proteinase, lipase, chitinase) thủy phân các mô, tiết các độc tố nấm gây độc thần kinh cho côn trùng. Kết quả là côn trùng bị tổn thƣơng, bị đa nhiễm bởi Lecanicillium và các vi sinh vật gây bệnh khác. Sau khi côn trùng chết, nấm tiếp tục phát triển và sinh bào tử bên ngoài cơ thể côn trùng và có thể lây truyền bệnh cho côn trùng khác. 3 Mặc dù tiềm năng kiểm soát các côn trùng gây hại cây trồng của nấm Lecanicillium rất lớn, nhƣng việc nghiên cứu ứng dụng Lecanicillium để bảo vệ cây trồng cũng nhƣ kết quả đạt đƣợc còn hạn chế, nhất là ở Việt Nam. Hiệu quả diệt côn trùng của chế phẩm Lecanicillium cũng nhƣ các chế phẩm sinh học khác còn kém, khối lƣợng chế phẩm diệt côn trùng sinh học đƣợc sử dụng mới chỉ chiếm tỉ trọng thấp trong tổng khối lƣợng các loại thuốc diệt côn trùng. Do vậy, việc tăng cƣờng nghiên cứu phát triển chế phẩm diệt côn trùng từ nấm Lecanicillium là cần thiết. Sản xuất bào tử nấm kí sinh côn trùng Để sản xuất chế phẩm diệt côn trùng trƣớc tiên phải có bào tử nấm kí sinh côn trùng. Việc lựa chọn phƣơng pháp lên men và tối ƣu các điều kiện lên men là cần thiết để sản xuất đƣợc nhiều bào tử với hiệu quả kinh tế cao. Hiện nay có hai phƣơng pháp lên men phổ biến nhất là lên men lỏng và lên men rắn. Phƣơng pháp lên men rắn mặc dù có một số nhƣợc điểm là khó khăn trộn môi trƣờng lên men, môi trƣờng lên men có độ đồng nhất không cao, khó tiếp giống và phải tiếp giống theo từng đợt, việc kiểm soát pH khá phức tạp, độ ẩm cơ chất liên tục thay đổi trong quá trình lên men, khả năng truyền nhiệt của cơ chất kém. Nhƣng nó có nhiều ƣu điểm quan trọng nhƣ yêu cầu thiết bị và vận hành đơn giản, có thể tận dụng các nguồn cơ chất không tan trong nƣớc và sản phẩm phụ của nông nghiệp với chi phí thấp (tinh bột, cellulose, lignin, pectin), bề mặt lên men rộng nên dễ trao đổi nhiệt và không khí, không đòi hỏi kiểm soát nghiêm ngặt các thông số trong quá trình lên men, tiêu thụ ít nƣớc và năng lƣợng, ít nƣớc thải, dễ dàng kiểm soát sự tạp nhiễm, chi phí đầu tƣ thiết bị và vận hành rẻ. Sự sinh bào tử của nấm chịu ảnh hƣởng chủ yếu của các yếu tố nhƣ nguồn carbon, nguồn nitơ, nguồn khoáng, độ ẩm, nhiệt độ, độ thoáng khí và một số yếu tố khác. VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP Vật liệu, hóa chất và thiết bị Bảy chủng nấm Lecanicillium L18, L43, L85, 85k, 485, 8514 và L1185 do Phòng Công nghệ Sinh học Enzyme, Viện Công nghệ Sinh học, Viện KH và CN Việt Nam cung cấp. Rệp hại rau lấy trên rau cải ngoài đồng ruộng sau đó đƣợc nuôi trên cải thảo trong phòng thí nghiệm. Các hóa chất đƣợc sử dụng có độ tinh khiết cao, đƣợc cung cấp bởi các hãng có uy tín nhƣ Invitrogen, Fermentas… Các thiết bị đƣợc sử dụng thuộc phòng Công nghệ Sinh học Enzyme, đƣợc cung cấp bởi các hãng có uy ín về thiết bị sinh học nhƣ Eppendorf, Pharmacia… Phƣơng pháp nghiên cứu Phƣơng pháp sàng lọc đƣợc sử dụng để lựa chọn chủng nấm có độc lực diệt rệp cải cao. Phƣơng pháp sinh học phân tử, xác định và so sánh trình tự gen 28S rRNA để xác định tên nấm. Phƣơng pháp tối ƣu đƣợc sử dụng để lựa chọn môi trƣờng phù hợp để lên men nấm thu bào tử cao nhất. 4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Sàng lọc chủng nấm có độc lực cao Sau 7 ngày phun, chủng 485 có khả năng diệt rệp cải cao nhất với 67 ± 7% rệp bị diệt. Chủng L18 hầu nhƣ không diệt đƣợc rệp, là chủng có độc lực yếu nhất. 0 10 20 30 40 50 60 70 80 0 1 2 3 4 5 6 7 Thời gian sau phun (ngày) Tỉ lệ rệp chết (%) Đối chứng L18 L43 L85 85k 485 8514 41185 Độc lực diệt rệp của 7 chủng Lecanicillium spp. Định tên chủng nấm 485 Chủng 485 đƣợc định tên bằng phƣơng pháp đọc và so sánh trình tự gene 28S rRNA với trình tự của các chủng đã đƣợc công bố trên GenBank. Trình tự gene 28S rRNA của chủng 485 có độ tƣơng đồng 99,8% với các chủng L. lecanii trong GenBank. Từ kết quả trên bƣớc đầu có thể kết luận chủng 485 thuộc loài Lecanicillium lecanii. Cây phân loại Chủng 485 và các chủng từ GenBank Ảnh hƣởng của điều kiện môi trƣờng lên sự sinh bào tử của L. lecanii 485 Ảnh hưởng của nguồn cơ chất Trong tám môi trƣờng đã khảo sát, môi trƣờng bột lõi ngô/bột ngô (1:1, w/w) cho sự sinh bào tử cao nhất với (5,02 ± 0,26)×10 9 bào tử/g cơ chất. EF026004 Lecanicillium fusisporum HM057107 Verticillium sp. AY312604 Verticillium sp. EF026003 Lecanicillium lecanii EF026005 Lecanicillium lecanii Lecanicillium sp. 485 80 70 60 50 40 30 20 10 0 82,7 L1185 5 0 1 2 3 4 5 6 G BG CG BN LG LN MG MN Các nguồn cơ chất Số lượng bào tử (x10 9 /g cơ chất) Ảnh hƣởng của nguồn cơ chất lên sự sinh bào tử của chủng L. lecanii 485 G: gạo, BG: bột gạo, CG: cám gạo, BN: bột ngô, LG: bột lõi ngô/bột gạo, LN: bột lõi ngô/bột ngô, MG: bột bã mía/bột gạo, MN: bột bã mía/bột ngô. Ảnh hưởng của tỉ lệ các thành phần cơ chất Môi trƣờng gồm bột lõi ngô/bột ngô sau khi đƣợc lựa chọn, ảnh hƣởng của tỉ lệ hai thành phần này lên sự sinh bào tử của chủng nấm L. lecanii 485 đã đƣợc khảo sát. Tỉ lệ bột lõi ngô/bột ngô bằng 1:1 (w/w) cho sự sinh bào tử cao nhất với (5,37 ± 0,95)×10 9 bào tử/g cơ chất. 0 1 2 3 4 5 6 7 8:2 7:3 6:4 5:5 4:6 3:7 2:8 Tỉ lệ lõi ngô/bột ngô Số lượng bào tử (x10 9 /g cơ chất ) Ảnh hƣởng của tỉ lệ bột lõi ngô/bột ngô trong môi trƣờng lên sự sinh bào tử của chủng L. lecanii 485 Ảnh hưởng của độ dày cơ chất Độ dày cơ chất 27,5 mm thích hợp nhất cho sự sinh bào tử của chủng L. lecanii 485 với số lƣợng bào tử đạt đƣợc (1,032 ± 0,032)×10 10 bào tử/g cơ chất. 6 3 6 9 12 8 12 16 20 24 28 32 Độ dày cơ chất (mm) Số lượng bào tử (x10 9 /g cơ chất) Ảnh hƣởng của độ dày cơ chất lên sự sinh bào tử của chủng L. lecanii 485 Ảnh hưởng của độ ẩm cơ chất Khi lƣợng nƣớc đƣợc bổ sung bằng 70% cơ chất (tƣơng đƣơng với độ ẩm môi trƣờng cơ chất 41%), chủng L. lecanii 485 sinh bào tử cao nhất, đạt đƣợc (5,43 ± 1,08)×10 9 bào tử/g cơ chất. 1 2 3 4 5 6 7 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 Lượng nước bổ sung so với cơ chất khô (%) Số lượng bào tử (x10 9 /g cơ chất) Ảnh hƣởng của độ ẩm cơ chất lên sự sinh bào tử của chủng L. lecanii 485 Ảnh hưởng của nhiệt độ Sự sinh bào tử của chủng L. lecanii 485 tốt nhất ở 30°C, đạt đƣợc (7,88 ± 0,64)×10 9 bào tử/g cơ chất. 7 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 20 25 30 35 40 Nhiệt độ ( o C) Số lượng bào tử (x10 9 /g cơ chất) Ảnh hƣởng của nhiệt độ lên sự sinh bào tử của chủng L. lecanii 485 Ảnh hưởng của một số nguồn nitơ vô cơ Sự sinh bào tử của chủng L. lecanii 485 cao nhất với nguồn (NH 4 ) 2 SO 4 , số lƣợng bào tử đạt đƣợc (1,159 ± 0,050)×10 10 Ảnh hƣởng của một số nguồn nitơ vô cơ lên sự sinh bào tử của chủng L. lecanii 485 KBS: không bổ sung nguồn nitơ vô cơ Ảnh hưởng của nồng độ (NH 4 ) 2 SO 4 Sau khi đƣợc xác định là nguồn nitơ vô cơ phù hợp, ảnh hƣởng của (NH 4 ) 2 SO 4 ở các nồng độ khác nhau lên sự sinh bào tử của chủng L. lecanii 485 đã đƣợc khảo sát. Kết quả nồng độ (NH 4 ) 2 SO 4 tƣơng đƣơng 0,1 mol N/1000g cơ chất cho sự sinh bào tử cao nhất với (1,071 ± 0,028)×10 10 bào tử/g cơ chất. 0 2 4 6 8 10 12 14 KBS NaNO3 KNO3 NH4NO3 (NH4)2SO4 (NH4)2HPO4 Một số nguồn nitơ vô cơ Số lượng bào tử (x10 9 /g cơ chất) KBS NaNO 3 KNO 3 NH 4 NO 3 (NH 4 ) 2 SO 4 (NH 4 ) 2 HPO 4 8 0 2 4 6 8 10 12 0,00 0,10 0,20 0,30 0,40 0,50 0,60 Nồng độ (NH 4 ) 2 SO 4 (mol N/1000 g cơ chất) Số lượng bào tử (x10 9 /g cơ chất) Ảnh hƣởng của nồng độ (NH 4 ) 2 SO 4 lên sự sinh bào tử của chủng L. lecanii 485 Ảnh hưởng của nồng độ MgSO 4 Ảnh hƣởng của MgSO 4 lên sự sinh bào tử của chủng L. lecanii 485 ở các nồng độ khác nhau đã đƣợc khảo sát. Kết quả cho thấy nồng độ MgSO 4 tối ƣu là 0,035% với số lƣợng bào tử đạt đƣợc (1,304 ± 0,018)×10 10 bào tử/g cơ chất. 8 9 10 11 12 13 14 0,00 0,01 0,02 0,03 0,04 0,05 0,06 Nồng độ MgSO 4 (%) Số lượng bào tử (x10 9 /g cơ chất) Ảnh hƣởng của nồng độ MgSO 4 lên sự sinh bào tử của chủng L. lecanii 485 Ảnh hưởng của nồng độ KH 2 PO 4 Sự sinh bào tử của chủng L. lecanii 485 cao nhất khi bổ sung KH 2 PO 4 ở nồng độ 0,1% và 0,25%, với số lƣợng bào tử đạt đƣợc lần lƣợt là (1,156 ± 0,043)×10 10 và (1,159 ± 0,008)×10 10 bào tử/g cơ chất. Tuy nhiên, với các nồng độ KH 2 PO 4 đã đƣợc khảo sát, sự khác biệt về sự sinh bào tử của chủng L. lecanii 485 trong môi trƣờng đƣợc bổ sung và không đƣợc bổ sung KH 2 PO 4 không có ý nghĩa thống kê. 9 9 10 11 12 13 0,00 0,05 0,10 0,15 0,20 0,25 0,30 0,35 Nồng độ KH 2 PO 4 (%) Số lượng bào tử (x10 9 /g cơ chất) Ảnh hƣởng của nồng độ KH 2 PO 4 lên sự sinh bào tử của chủng L. lecanii 485 Ảnh hưởng của thời gian chiếu sáng Trong ba chế độ chiếu sáng đã đƣợc khảo sát, chủng L. lecanii 485 sinh bào tử cao nhất ở chế độ chiếu đáng thông thƣờng (12 giờ/ngày) với số lƣợng bào tử đạt đƣợc lần lƣợt là (1,326 ± 0,050)×10 10 . 8 10 12 14 0 12 24 Thời gian chiếu sáng (giờ/ngày) Số lượng bào tử (x10 9 /g cơ chất) Ảnh hƣởng của thời gian chiếu sáng lên sự sinh bào tử của chủng L. lecanii 485 Ảnh hưởng của thời gian lên men Sau 8 ngày lên men, số lƣợng bào tử của nấm L. lecanii 485 đạt đƣợc tối đa với (1,353 ± 0,019)×10 10 bào tử/g cơ chất. 10 9 10 11 12 13 14 15 4 6 8 10 12 14 Thời gian lên men (ngày) Số lượng bào tử (x10 9 /g cơ chất) Ảnh hƣởng của thời gian lên men lên sự sinh bào tử của chủng L. lecanii 485 Nhƣ vậy, sau khi lên men chủng nấm L. lecanii 485 với các điều kiện tối ƣu, cụ thể: 8 ngày lên men ở 30°C, chế độ chiếu sáng 12 giờ/ngày với cơ chất bột lõi ngô/bột ngô (1:1, w/w) có độ dày 27,5 mm (tƣơng đƣơng 22g cơ chất/bình lên men 250 ml), đƣợc bổ sung lƣợng nƣớc bổ sung bằng 70% cơ chất (tƣơng đƣơng độ ẩm môi trƣờng cơ chất là 41%), nồng độ (NH 4 ) 2 SO 4 tƣơng đƣơng 0,1 mol N/1000 g cơ chất, MgSO 4 bằng 0,035% cơ chất, KH 2 PO 4 bằng 0,1% cơ chất, đã đạt đƣợc số lƣợng (1,353 ± 0,019)×10 10 bào tử/g cơ chất. KẾT LUẬN 1. Chủng 485 có độc lực cao nhất đối với rệp cải trong số 7 chủng nấm đƣợc nghiên cứu. Trong điều kiện 21-25°C và độ ẩm không khí 75-80%, dung dịch bào tử của chủng 485 có mật độ 3×10 8 /ml trong Tween 80 nồng độ 0,05% sau 7 ngày đƣợc phun lên rệp cải đã diệt đƣợc 67% rệp. 2. Chủng 485 thuộc loài Lecanicillium lecanii theo phân tích và so sánh trình tự gene 28S rRNA. 3. Điều kiện cho sự sinh bào tử tối đa của chủng L. lecanii 485 trong môi trƣờng rắn là: lên men 8 ngày ở 30°C, chế độ chiếu sáng 12 giờ/ngày với cơ chất bột lõi ngô/bột ngô (1:1, w/w) có độ dày 27,5 mm, độ ẩm môi trƣờng cơ chất 41%, nồng độ (NH 4 ) 2 SO 4 tƣơng đƣơng 0,1 mol N/1000 g cơ chất, MgSO 4 bằng 0,035% cơ chất, KH 2 PO 4 bằng 0,1% cơ chất. Chủng L. lecanii 485 khi lên men trong điều kiện tối ƣu, đạt đƣợc số lƣợng bào tử (1,353 ± 0,019)×10 10 /g cơ chất. [...]... Dƣơng Khuê (2005), Sử dụng nấm Metarhizium anisopliae Sorok phòng trừ mối nhà (Coptotetrmes formosanus Shiraki) theo phương pháp lây nhiễm, Hội nghị côn trùng học toàn quốc lần thứ 5, Hà Nội 2 Võ Thị Thu Oanh, Lê Đình Đôn, Bùi Cách Tuyến (2007), “Đặc điểm sinh học và khả năng gây bệnh của nấm Metarhizium anisopliae (METSCH.) Sorokin đối với sâu khoang (Spodoptera litura F.) hại rau cải xanh (Brassica... L.)”, Tạp chí khoa học kỹ thuật Nông Lâm nghiệp, 1&2, pp 58-63 3 Phạm Thị Thuỳ, Trần Văn Huy, Nguyễn Duy Mạn (2005), Nghiên cứu hoàn thiện công nghệ sản xuất thuốc trừ sâu vi nấm Beauveria và Metarhizium để phòng trừ sâu hại đậu tương và đậu xanh ở Hà Tĩnh năm 2003-2004, Hội nghị công nghệ sinh học toàn quốc, Hà Nội Tài liệu tiếng Anh: 4 Abbott W S (1925), “A method of computing the effectiveness of an... P., Terra A L., Bittencourt V R (2010), “Efficiency of Lecanicillium lecanii to control the tick 11 Rhipicephalus microplus”, Vet Parasitol, 172(3-4), pp 317-322 10 Arevalo J., Hidalgo-Díaz L., Martins I., Souza J F., Castro J M C., Carneiro R M D G., Tigano M S (2009), “Cultural and morphological characterization of Pochonia chlamydosporia and Lecanicillium psalliotae isolated from Meloidogyne mayaguensis... Scientific Detective Story, Dutton, New York 12 21 Cuthbertson A G S., Blackburn L F., Northing P., Luo W., Cannon R J C., Walters K F A (2010), “Chemical compatibility testing of the entomopathogenic fungus Lecanicillium muscarium to control Bemisia tabaci in glasshouse environment”, Int J Environ Sci Tech, 7(2), pp 405-409 22 Damalas C A (2009), “Understanding benefits and risks of pesticide use”, Sci Res... coverage and international classification of formulation types”, Biol Control, 43, pp 237-256 24 Diaz B M., Oggerin M., Lopez Lastra C C., Rubio V., Fereres A (2009), “Characterization and virulence of Lecanicillium lecanii against different aphid species”, Bio Control, 54, pp 825–835 25 El-Defrawi G M., El-Harty E H (2009), Injury levels and yield loss model for the cowpea aphid (Aphis craccivora Koch)... Wu L (2011), Pesticides industry sales and usage, 2006 and 2007 market estimates, United States EPA 13 32 Guclu S., Ak K., Eken C., Akyol H., Sekban R., Beytut B., Yildirim R (2010), “Pathogenicity of Lecanicillium muscarium against Ricania simulans”, Bull Insectol, 63(2), pp 243-246 33 Hall R A (1981), “A new insecticide against greenhouse aphids and whitefly: the fungus Verticillium lecanii”, Ohio... A (2004), Pesticides industry sales and usage, 2000 and 2001 market estimates, United States EPA 46 Kim H Y., Lee H B., Kim U C., Kim I S (2008), “Laboratory and field evaluations of entomopathogenic Lecanicillium attenuatum CNU-23 for control of green peach aphid (Myzus persicae)”, J Microbiol Biotechnol, 18(12), pp 1915-1918 47 Kim J J., Lee M H., Yoon C S., Kim H S., Yoo J K., Kim K C (2001), “Control... strains of Metarhizium anisopliae (Metch.) Sorok In submerged culture”, Biocontrol Sci Technol, 2, pp 127-135 49 Kope H H., Alfaro R I., Lavallée R (2008), “Effects of temperature and water activity on Lecanicillium spp conidia germination and growth, and mycosis of Pissodes strobi”, BioControl, 53, pp 489-500 50 Le V V., Nguyen D D., Le K A., Pham K S., Tetsu A (2011), “Sex pheromone components and... 80 Vu V H., Hong S I., Kim K (2007), “Selection of entomopathogenic fungi for aphid control”, J Biosci Bioeng, 104(6), pp 498-505 81 Vu V H., Hong S I., Kim K (2008), “Production of aerial conidia of Lecanicillium lecanii 41185 by solid-state fermentation for use as mycoinsecticide”, Mycobiology, 36(3), pp 183-189 17 82 Weiner B P., Worth R M (1972), “Insecticides: household use and respiratory impairment”, . " ;Nghiên cứu sử dụng nấm Lecanicillium kí sinh côn trùng để kiểm soát rệp hại rau& quot;. 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU Rệp hại cây trồng Rệp là nhóm côn. 1 Nghiên cứu sử dụng nấm LECANICILLIUM Kí sinh côn trùng để kiểm soát rệp hại rau Vũ Xuân Đạt Trƣờng Đại học Khoa học Tự nhiên, Khoa Sinh học