... làm mẫu dò
E
E
-
Eco
RI
- chèn
-
- -
quang
-
Cố định DNA
trên màng lai
-
- Trung hòa
-
-
Eco
RI
-
Công nghệ DNA tái tổ hợp
104
1 5- 2 3 kb), cosmid ( 45 kb) hay BAC (>100 ... 79,8
o
C + 18 ,5 (log
10
M) + 0 ,58 (%G + C) - 11,8 (%G + C)
2
- 0 ,56 (%f ) - 820/n (2)
hóa
+
)
(%f
n (theo base).
C...
... chính
+ 5 pN
OH
5 P
3’ OH
5 P
Mg
2+
enzyme
5 P
3’ OH
5 P
3’ OH
3’ OH
enzyme
3’ P
+ 2P
i
3’ P
5
5
3’ OH
3’ OH
5
5
Công nghệ DNA tái tổ hợp
14
- . nuclease 5
3’ ... gen xác định.
Bên cạnh các giáo trình như: sinh học phân tử, nhập môn công nghệ
sinh học, công nghệ tế bào, công nghệ chuyển gen… giáo trình công nghệ
DNA tái...
...
(complementary DNA)
tổng hợp cDNA do
.
. Q
cDNA qua ba enzyme
reverse transcriptase. (2) Biến tính và c -cDNA
Công nghệ DNA tái tổ hợp
153
hóa
0 ,5
.
- Vector gt10.
E. coli
.
- Vector ... (DNA
E. coli.
- c đoạn nối (synthetic linkers) c
DNA cùng một
enzyme.
1.1. Đuôi dA:dT
deoxyrinucleotide triphosphate -
Công nghệ DNA tái...
... nóng chảy nó.
- -
t - -
- -
.
Công nghệ DNA tái tổ hợp
42
- -tube (eppendorf tube)
.
- 1-2 th
(0 ,5 M ammonium acetate, 10 mM magnesium acetate, 1
-tube.
- 37
o
(< - -
.
... đoạn DNA có kích thước lớn hơn 2 kb thì
đ áp
chứ
(Hình 2 .5) .
0 ,5 -
Công nghệ DNA tái tổ hợp
41
-
.
- -
-...
... PCR
-
+
+
+
+
58
0,1
20-mer) trong 25
-
.
: gia
DNA
- . Thông thường,
nồng độ DNA khuôn mẫu được sử dụng trong khoảng từ 1 0-1 00 ng/ 25 L
dung dịch phản ứng.
-
0 ,5 ... các primer đặc hiệu
60
- : 94
o
C/30 giây, 54
o
72
o
C/1 phút.
- 72
o
C/10 phút
- 4
o
C
- Chạy đi
- -2 0
o
C
T
m
(non-specific).
-
(primi...
...
2. Tạo dòng trong bacteriophage M13
-
.
-
tru
:
- E. coli
-
galactosidase (Z -
) gen -
-
-thiogalactoside (IPTG)
-gal.
-
-
- -
Công nghệ DNA tái tổ hợp
97
...
- (ori)
.
- -
khởi đầu
.
- (promoter) để tiến hành
lai.
-
.
- chỉ thị thể tái tổ
hợp.
như là:
- được
.
- tách
goạ...
... thể được kiểm soát
bằng những thay đổi trong hoạt tính của β-galactosidase.
Công nghệ DNA tái tổ hợp
155
Chương 7
gen tái tổ hợp trong
Escherichia coli
V
Escherichia coli
E. coli hoặc ...
trong phức
hợp kháng
nguyên-
kháng thể
bắt màu với
cơ chất
Đĩa ELISA (microtiter plate) có 96 giếng
Công nghệ DNA tái tổ hợp
166
:
- 16S rRNA....
... điện di thích hợp cho DNA sợi đôi thường được dùng là Tris-acetate-
EDTA (TAE), Tris-borate-EDTA (TBE) và Tris-phosphate-EDTA (TPE) ở nồng độ khoảng
50 mM và pH 7, 5- 7 ,8 (Bảng 2.2). Thường ... sau:
- Hoạt tính polymerase 5 →3’. Tổng hợp DNA theo chiều 5 →3’. Cơ chất của nó
là RNA hay DNA (sợi đơn hoặc sợi đôi):
- Hoạt tính RNase H. Bao gồm hai hoạt ti...
... viện cDNA (cDNA library).
DNA khuôn mẫu (template DNA) .
(sao chép) hoặc khuếch đại DNA (PCR)
.
DNA polymerase. mẫu
.
Công nghệ DNA tái tổ hợp
184
(palindrome). Đoạn DNA mạch kép có
trình ... Southern blot )
Công nghệ DNA tái tổ hợp
180
) phương pháp
như …
, gen công nghệ DNA
ta thích hợp hơn, có thể
bằng công nghệ sinh học
trước...