KỸ THUẬT CƠ BẢN TRONG SINH HỌC PHÂN TỬ part 3 ppsx

... đánh dấu DNABan đầu, trong kỹ thuật sinh học phân tử việc đánh dấu DNA và RNA để có các mẫu dò (hay dò, probe) dùng để xác nhận sự hiện diện của yếu tố đặc hiệu của sinh vật đích, thường bằng ... các kỹ thuật đánh dấu phi phóng xạ đã phát triển giúp cho việc ứng dụng mẫu dò rộng rải hơn mà không cần các phòng thí nghiệm chuyên biệt cho riêng kỹ thuật phóng xạ. Dưới đây mô tả kỹ thuật ... MgSO4 10mM trong 3 giờ.11) Nếu tổng lượng là 1 ml thì cho vào đó 10 µl SDS 10%, 100 µl NaCl 5M, 500 µl phenol và 500 µl chloroform, trộn đảo từ từ trong 30 phút.12) Li tâm 3. 000 v/ph trong 10...

KỸ THUẬT CƠ BẢN TRONG SINH HỌC PHÂN TỬ part 10 pdf

... dung khuẩn 33 2.2. Điều chế lượng nhỏ DNA phage 33 3. Điều chế lượng lớn DNA phage 34 3. 1. Phương pháp chế dịch phage dung khuẩn 34 3. 2. Điều chế DNA 35 III. Điều chế DNA tế bào động vật 37 IV. Phương ... 130 2.1. Chế tác gel SDS-polyacrylamide 131 2.2. Điều chế mẫu, điện di và nhuộm 131 3. Phương pháp thẩm Western 133 3. 1. Blotting 133 3. 2. Nhuộm bằng kháng thể 134 XI. Tinh chế protein kết hợp DNA ... X. Phân tích điều tiết phiên mã nhờ thử nghiệm CAT (CAT assay) 811. Thí nghiệm chính: di nạp gen vào tế bào eukaryota 812. CAT assay 82Chương 3. Kỹ thuật phân tích xác nhận phân tử 84I. Kỹ...

KỸ THUẬT CƠ BẢN TRONG SINH HỌC PHÂN TỬ part 9 potx

... biết.Có thể nói đây không chỉ là một kỹ thuật mà là một chiến lược tổng quát bao gồm việc vận dụng nhiều kỹ thuật cơ bản trong sinh học phân tử nhằm phân lập ra được đoạn DNA nằm kề đoạn DNA ... biết.12 3 4567XIII. Phương pháp tạo thể đột biến nhân tạoĐể phân tích và xác định các miền cơ năng trong phân tử DNA như promoter, enhancer cũng như các miền cơ năng trong phân tử protein ... enzyme B; 7) Điện di phân tách; 8) Di nạp DNA đích vào plasmid mới.A BABA BXV. Phương pháp "vân tay DNA" (DNA finger print) Các kỹ thuật sinh vật học phân tử cũng ảnh hưởng nhiều...

KỸ THUẬT CƠ BẢN TRONG SINH HỌC PHÂN TỬ part 8 pptx

... 0 ,35 M.Cụ thể là trong 100 µl dịch phản ứng chứa khoảng 1 ng dịch phân đoạn DNA đánh dấu (5 - 20×10 3 cpm) (bước 1.), 0, 03 mg protein chiết xuất từ dịch toàn tế bào của tế bào FM 3A (pha trong ... là kỹ thuật tinh chế protein, xác định phân tử lượng protein, phân tích sự thể hiện gen tổng hợp protein trong E. coli và xác nhận protein được tổng hợp in vitro. Phần này chỉ giới hạn trong ... 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0Dung dịch acrylamide 30 % 3, 3 5 ,3 6,7 8,0 10,0SDS 10% 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2Ammonium persulfate (AP) 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2Nước 11 ,3 9 ,3 7,9 6,6 4,62) Thêm 10 µl TEMED, rót dịch...

KỸ THUẬT CƠ BẢN TRONG SINH HỌC PHÂN TỬ part 7 docx

... [α- 32 P]UTP 100μCi (3. 000 Ci/mM).2) Thêm DNase I cho đạt 20 µg/ml rồi để 10 phút ở 30 ºC cho phản ứng (phân giải DNA) xảy ra. 3) Thêm 200 µl (lượng tương đương) dung dịch dừng phản ứng, ủ 30 ... nhất hai vị trí trong 50 µl NaOH 1 2 3 nối dài mồi được nhận thấy trong gel là DNA sợi đơn, vì vậy cần lưu ý khi so sánh phân tử lượng sản phẩm này với DNA MW marker sợi đôi. 3. Mapping bằng ... thực hiện phân tích được RNA. Trong S1 mapping mẫu dò DNA chỉ được đánh dấu ở đầu mút, nhưng trong trường hợp riboprobe mapping thì RNA mẫu dò được đánh dấu suốt chiều dài phân tử trong quá...

KỸ THUẬT CƠ BẢN TRONG SINH HỌC PHÂN TỬ part 6 pdf

... Mix, - 3 - 6 µl Template DNA, - 3, 2 pmol Primer và - nước cất q.s. 20 µl. Trong đó, Template DNA có thể là ssDNA 0,1 µg hoặc dsDNA 0 ,3 - 0,5 µg, hay sản phẩm PCR (10 - 30 ng/µl) 3 - 6 µl.1 ... thực:ATGCGGTACTTCCGTACGTATAGGCCCGTATGCAAATCGGCCTTCGTT Trong đó, các đoạn lặp là các trình tự giúp ta đọc được toàn bộ độ dài của phân tử DNA. Kỹ thuật giải trình tiến bộ nhất cũng chỉ cho phép xác ... gel trong nước 5 phút, khi đó thay nước một số lần.6) Ngâm gel trong dịch chứa NaOH 50mM và NaCl 10mM trong 10 phút.7) Ngâm gel 10 phút trong Tris-HCl 0,1M pH 7,5.8) Ngâm gel 20 phút trong...

KỸ THUẬT CƠ BẢN TRONG SINH HỌC PHÂN TỬ part 5 potx

... khuẩn E. coli là một trong nhưng kỹ thuật trọng yếu và cơ bản của công nghệ DNA tái tổ hợp hay kỹ thuật di truyền học phân tử. Các loại vi khuẩn E. coli có năng lực tăng cao trong thu nhận DNA ... rộng kỹ, sau đó thêm mấy giọt chloroform.2) Ủ 1 đêm ở 4 °C. 3) Dùng pipet hút SM trên mặt thạch, quay li tâm, lấy nước mặt, cho vào 72Chương 3 KỸ THUẬT PHÂN TÍCH XÁC NHẬN PHÂN TỬI. Kỹ thuật ... diện của DNA tương đồng trong mẫu nghiệm, là một trong những phương pháp hữu ích áp dụng trong nghiên sinh học phân tử. DNA mẫu nghiệm có thể là nguyên vẹn. Thêm vào đó, trong nhiều trường hợp,...

KỸ THUẬT CƠ BẢN TRONG SINH HỌC PHÂN TỬ part 4 doc

... 1,5M trong khoảng 30 - 60 giây, 2) Tris-HCl (pH 7,5) 0,5M và NaCl 1,5M trong 3 - 5 phút, và 3) SSC 2× trong 3 - 5 phút. Do sau khi xử lý dung dịch thứ nhất (trên giấy thấm) tế bào đã phân giải ... của arm-DNA (DNA đã tổ hợp có khối lượng phân tử bằng tổng khối lượng phân tử của arm-DNA và cDNA còn sót lại). 3. 10. in vitro packaging (lắp ráp phage trong ống nghiệm)Phương pháp in vitro packaging ... đoạn, mỗi phân đoạn 0,4 ml, sang ống Eppendorf (được khoảng 30 phân đoạn).8) Thêm vào mỗi phân đoạn 40 µl sodium acetate (pH 5,1) 3M và một lượng ethanol bằng hai lần dung lượng mẫu (mỗi phân đoạn),...

KỸ THUẬT CƠ BẢN TRONG SINH HỌC PHÂN TỬ part 2 docx

... với DNA đã biết nồng độ được pha loãng 26Chương 2KỸ THUẬT CƠ BẢN TRONG TÁI TỔ HỢP DNAI. Điều chế DNA plasmid Trong các thí nghiệm như phân tích gen thường cần lượng lớn plasmid nhưng với ... nước (v/v) thì phenol ở dạng nhũ tương gồm các phân tử phenol ở giữa với các phân tử nước vây quanh. Khi pha hỗn hợp này vào dịch tế bào, các phân tử phenol có tính kị thủy nên có khuynh hướng ... (ống) thẩm tích bị khô nước.24 3. 1. Phương pháp sử dụng giấy DEAE (DE 81)1) Trong khi điện di DNA trong gel agarose (có ethidium bromide trong gel hoặc pha trong dịch đệm điện di), quan sát...

KỸ THUẬT CƠ BẢN TRONG SINH HỌC PHÂN TỬ part 1 pdf

... cao áp tiệt trùng. 3) EDTA 0,5M (pH 8,0): pha 93, 05 g Na2EDTA.2H2O vào trong khoảng 5TS. PHẠM HỒNG SƠNGiáo trìnhKỸ THUẬT CƠ BẢN TRONG SINH HỌC PHÂN TỬNhà xuất bản Đại học HuếNăm 2006400 ... HỒNG SƠNGiáo trìnhKỸ THUẬT CƠ BẢN TRONG SINH HỌC PHÂN TỬNhà xuất bản Đại học Huế2006II. Điện di Phương pháp điện di trong gel (keo) thường được sử dụng để phân li (phân đoạn) DNA, RNA, ... thực hiện trong sinh học phân tử. Nhưng quan trọng hơn vẫn là thông qua các bước kỹ thuật cụ thể giúp người học nắm được những điểm cơ bản về nghiên cứu phát triển sinh học phân tử được các nhà...

Xem thêm